检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法

摘要

本发明提出了检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)将所述活菌型乳酸菌饮料与乙腈混合后进行离心处理，并收集上清液；以及(2)对所述上清液进行色谱法检测，并基于所得到的检测结果确定所述活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。本发明的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

权利要求

1.一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法，其特征在于，包括：第一步，吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，5000rpm的转速下离心5分钟，收集上清液，过0.22μm有机滤膜，得到待测液；

第二步，对待检测液进行气相色谱检测：

(1)确定气相色谱检出限

通过3倍信噪比可以对乙醇进行定性，10倍信噪比能够对乙醇进行定量；在含量为2mg/

100mL时，峰高信号为2146.8，噪音为70，此时的信噪比为30.7，基于10倍信噪比，确定仪器的定量检出限为0.65mg/100mL，由于待测液是根据样品进行5倍稀释得到的，进而算出样品的检出限为3.25mg/100mL；其中，信噪比＝峰高信号/噪音；定量检出限＝(10×乙醇浓度×噪音)/峰高信号；

(2)标准曲线的绘制

用气相色谱仪对标准溶液中乙醇进行检测，以峰面积Y对其浓度X得到乙醇的标准曲线Y＝50.19385*X，r2＝0.9999，其相关系数大于0.99，说明线性关系良好；

(3)待测液中乙醇浓度

用气相色谱仪对待测液中乙醇进行检测，峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中乙醇的含量；

(4)待测样本中乙醇浓度

根据待测液中乙醇的含量乘以稀释倍数计算得到待测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量；

气相色谱检测条件：

检测器为氢火焰离子化检测器，色谱柱为CD-2560柱，尺寸为Φ100米×0.25毫米，0.2微米；进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；

载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。

说明书

检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。

背景技术

[0002] 活菌型乳酸菌饮料生产过程中容易被酵母菌污染，导致产品出现胀包，影响产品质量。利用酵母菌发酵产生乙醇的代谢特点，通过检测乙醇的含量，可以判断产品是否被酵母菌污染。

[0003] 然而，目前检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法仍有待改进。

发明内容

[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法，该方法操作简便、快速、精密度高或者准确性强。

[0005] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

[0006] 目前，检测饮料中乙醇的方法主要包括比重计法和重铬酸钾-硫酸亚铁铵氧化还原滴定法。当比重计浮在液体中时，其本身的重力跟它排开的液体的重力相等，比重量计法主要是利用该原理进行检测。然而，比重计法一般无法准确测出低含量乙醇。重铬酸钾-硫酸亚铁铵氧化还原滴定法是在硫酸介质中用重铬酸钾氧化试样中的乙醇，邻菲啰啉铁指示液作为指示剂的存在下，用硫酸亚铁铵滴定过量的重铬酸钾，根据重铬酸钾的加入量和硫酸亚铁铵的消耗量计算试样中的乙醇含量。然而，此方法过于繁琐，且准确度相对较低。

[0007] 本发明的发明人经过大量实验发现，将活菌型乳酸菌饮料与乙腈混合后进行离心处理，并收集上清液，对上清液进行色谱法检测，并基于所得到的检测结果确定活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。由此，检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

[0008] 在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)将所述活菌型乳酸菌饮料与乙腈混合后进行离心处理，并收集上清液；以及(2)对所述上清液进行色谱法检测，并基于所得到的检测结果确定所述活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。利用活菌型乳酸菌饮料中乙醇能够溶于乙腈相而蛋白质等杂质不溶于乙腈相的特点，将乙腈与待测的活菌型乳酸菌饮料混合，提取出乙醇，减少了其他杂质对后续检测的干扰。由此，检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

[0009] 根据本发明的实施例，上述检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法还可以具有下列附加技术特征：

[0010] 根据本发明的实施例，基于1毫升所述活菌型乳酸菌饮料，乙腈的用量为1～10毫升。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0011] 根据本发明的实施例，所述离心是按照3000rpm～8000rpm的转速进行3～10分钟。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0012] 根据本发明的实施例，在进行步骤(2)之前，预先对所述上清液进行过滤，并将所得到的滤液进行所述色谱法检测。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0013] 根据本发明的实施例，所述过滤采用0.22微米的滤膜。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0014] 根据本发明的实施例，所述活菌型乳酸菌饮料为酸奶。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0015] 根据本发明的实施例，在进行所述色谱法检测之前，预先将所述上清液中乙醇的浓度调节至1mg/100mL～32mg/100mL。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0016] 根据本发明的实施例，所述色谱法检测为气相色谱法检测，所述气相色谱法检测是按照下列条件进行的：色谱柱：CD-2560柱；进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0017] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：第一步，吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，5000rpm的转速下离心5分钟，收集上清液，过0.22μm有机滤膜，得到待测液。第二步，对待检测液进行气相色谱检测：(1)确定气相色谱检出限：通过3倍信噪比(S/N＝3)可以对乙醇进行定性，10倍信噪比(S/N＝10)能够对乙醇进行定量。在含量为2mg/100mL时，峰高信号为2146.8，噪音为70，此时的信噪比为30.7，基于10倍信噪比，确定仪器的定量检出限为0.65mg/100mL，由于待测液是根据样品进行5倍稀释得到的，进而算出样品的检出限为3.25mg/100mL。其中，信噪比＝峰高信号/噪音；定量检出限＝(10×乙醇浓度×噪音)/峰高信号。(2)标准曲线的绘制：用气相色谱仪对标准溶液中乙醇进行检测，以峰面积Y对其浓度X(mg/100mL)得到乙醇的标准曲线Y＝50.19385*X，r2＝0.9999，其相关系数大于0.99，说明线性关系良好。(3)待测液中乙醇浓度：用气相色谱仪对待测液中乙醇进行检测，峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中乙醇的含量。(4)待测样本中乙醇浓度：根据待测液中乙醇的含量乘以稀释倍数计算得到待测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。气相色谱检测条件：检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，色谱柱为CD-2560柱(Φ
100米×0.25毫米，0.2微米)，进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0018] 此外，根据本发明的实施例，本发明检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：

[0019] 1、根据本发明的实施例，利用活菌型乳酸菌饮料中乙醇能够溶于乙腈相而蛋白质等杂质不溶于乙腈相的特点，将乙腈与待测的活菌型乳酸菌饮料混合，提取出乙醇，减少了其他杂质对后续检测的干扰。

[0020] 2、根据本发明的实施例，利用气相色谱法对活菌型乳酸菌饮料中乙醇进行检测，能够较精确地测定乙醇含量，并且检测时间短、回收率高。

[0021] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

[0022] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

[0023] 图1显示了根据本发明一个实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法的流程示意图；

[0024] 图2显示了根据本发明另一个实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法的流程示意图；以及

[0025] 图3显示了根据本发明一个实施例的活菌型乳酸菌饮料中乙醇的气相色谱图。

具体实施方式

[0026] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

[0027] 需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

[0028] 需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

[0029] 目前，检测饮料中乙醇的方法主要包括比重计法和重铬酸钾-硫酸亚铁铵氧化还原滴定法。当比重计浮在液体中时，其本身的重力跟它排开的液体的重力相等，比重量计法主要是利用该原理进行检测。然而，比重计法一般无法准确测出低含量乙醇。重铬酸钾-硫酸亚铁铵氧化还原滴定法是在硫酸介质中用重铬酸钾氧化试样中的乙醇，邻菲啰啉铁指示液作为指示剂的存在下，用硫酸亚铁铵滴定过量的重铬酸钾，根据重铬酸钾的加入量和硫酸亚铁铵的消耗量计算试样中的乙醇含量。然而，此方法过于繁琐，且准确度相对较低。

[0030] 本发明的发明人经过大量实验发现，将活菌型乳酸菌饮料与乙腈混合后进行离心处理，并收集上清液，对上清液进行色谱法检测，并基于所得到的检测结果确定活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。由此，检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

[0031] 由此，本发明提出了一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法，下面将进行详细描述。

[0032] 在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。参考图1，根据本发明的实施例，该检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以包括下列步骤，由此，最终的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

[0033] S100混合，离心，收集上清液

[0034] 将活菌型乳酸菌饮料与乙腈混合后进行离心处理，并收集上清液。由于活菌型乳酸菌饮料中乙醇含量较低，且含有很多杂质。若离心后直接进行色谱检测，检测结果有误差，还会对色谱柱造成破坏。发明人经过大量实验筛选得到乙腈作为萃取剂。活菌型乳酸菌饮料中含有大量的蛋白质等物质，有些萃取剂会将乙醇和蛋白质等杂质一同提取出来，而蛋白质等杂质会使后续气相色谱检测产生误差，此外，蛋白质等杂质还会对气相色谱仪器造成损伤。由于蛋白质不溶于乙腈，使萃取过程中蛋白质沉淀到非乙腈相中，乙醇完全溶解到乙腈中。由此，检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、精密度高以及准确性强。

[0035] 根据本发明的实施例，基于1毫升活菌型乳酸菌饮料，乙腈的用量为1～10毫升。发明人经过大量实验优化得到最优乙腈用量。乙腈用量过少，不能完全萃取到乙醇。此外，基于乙腈和活菌型乳酸菌饮料两者的总体积不变，若乙腈用量过少，则活菌型乳酸菌饮料的用量需要相应的增多，然而活菌型乳酸菌饮料中含有大量的水，由于水具有较大的蒸发膨胀体积，将导致气相色谱检测过程中样品气化膨胀溢出衬管，气化的样品返入载气和吹扫气路，由于载气的吹扫气路的温度较气化室低许多，样品会凝结于此，在后来的分析中被气体吹入分析系统形成鬼峰，对检测结果造成不良影响。乙腈用量过多将稀释乙醇的浓度，使检测结果不准确。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0036] 根据本发明的实施例，离心是在室温下按照3000rpm～8000rpm的转速进行3～10分钟。离心的转速过低或者时间过短会使乙醇不能完全溶解于乙腈中，且会有过多的杂质溶解于乙腈相中。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0037] 根据本发明的实施例，活菌型乳酸菌饮料为酸奶。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0038] S200色谱检测

[0039] 对上清液进行色谱法检测，并基于所得到的检测结果确定活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。

[0040] 参见图2，根据本发明的实施例，在进行步骤S200之前，预先对上清液进行过滤S110，并将所得到的滤液进行色谱法检测S200。

[0041] 根据本发明的实施例，过滤采用0.22微米的滤膜。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0042] 本发明所使用的术语“滤膜”为本领域技术人员所公知。对于滤膜的材料，本发明不作严格限定，凡是能起到过滤作用，又不影响乙醇含量变化的滤膜都可以用于本发明中。根据本发明的具体示例，本发明所用滤膜为有机滤膜，型号为13mm×0.22μm，孔径为0.22μm。

[0043] 根据本发明的实施例，活菌型乳酸菌饮料为酸奶。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0044] 根据本发明的实施例，在进行色谱法检测S200之前，预先将上清液中乙醇的浓度调节至1mg/100mL～32mg/100mL。气相色谱对不同物质具有不同的检测限，乙醇浓度过高，导致峰面积过大，结果会有偏差，乙醇浓度过低，峰面积过小，也会使结果产生偏差。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0045] 根据本发明的实施例，色谱法检测为气相色谱法检测，所述气相色谱法检测是按照下列条件进行的：色谱柱：CD-2560柱；进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。根据本发明的具体示例，色谱柱CD-2530柱的尺寸为100米×0.25毫米×0.2微米。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0046] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：第一步，吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，5000rpm的转速下离心5分钟，收集上清液，过0.22μm有机滤膜，得到待测液。第二步，对待检测液进行气相色谱检测：(1)确定气相色谱检出限：通过3倍信噪比(S/N＝3)可以对乙醇进行定性，10倍信噪比(S/N＝10)能够对乙醇进行定量。在含量为2mg/100mL时，峰高信号为2146.8，噪音为70，此时的信噪比为30.7，基于10倍信噪比，确定仪器的定量检出限为0.65mg/100mL，由于待测液是根据样品进行5倍稀释得到的，进而算出样品的检出限为3.25mg/100mL。其中，信噪比＝峰高信号/噪音；定量检出限＝(10×乙醇浓度×噪音)/峰高信号。(2)标准曲线的绘制：用气相色谱仪对标准溶液中乙醇进行检测，以峰面积Y对其浓度X(mg/100mL)得到乙醇的标准曲线Y＝50.19385*X，r2＝0.9999，其相关系数大于0.99，说明线性关系良好。(3)待测液中乙醇浓度：用气相色谱仪对待测液中乙醇进行检测，峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中乙醇的含量。(4)待测样本中乙醇浓度：根据待测液中乙醇的含量乘以稀释倍数计算得到待测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。气相色谱检测条件：检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，色谱柱为CD-2560柱(Φ
100米×0.25毫米，0.2微米)，进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。由此，根据本发明实施例的检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的精密度或者较强的准确性。

[0047] 综上，根据本发明的实施例，本发明检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的方法具有下列优点的至少之一：

[0048] 1、根据本发明的实施例，利用活菌型乳酸菌饮料中乙醇能够溶于乙腈相而蛋白质等杂质不溶于乙腈相的特点，将乙腈与待测的活菌型乳酸菌饮料混合，提取出乙醇，减少了其他杂质对后续检测的干扰。

[0049] 2、根据本发明的实施例，利用气相色谱法对活菌型乳酸菌饮料中乙醇进行检测，能够较精确地测定乙醇含量，并且检测时间短、回收率高。

[0050] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

[0051] 在下面的实施例中，如果没有明确说明，则采用的试验仪器和试剂为：

[0052] 无甲醇乙醇：色谱纯，密度0.789g/mL；乙腈：色谱纯，纯度为99.9％。

[0053] 标准溶液的配制：准确吸取无甲醇乙醇316.9μL于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成乙醇含量为10mg/mL中间标准液。使用时分别吸取10mg/mL中间液0.02mL、0.04mL、0.08mL、0.16mL、0.32mL于10mL容量瓶中，分别用乙腈定容至刻度，摇匀，得乙醇含量为2mg/
100mL、4mg/100mL、8mg/100mL、16mg/100mL、32mg/100mL五个浓度梯度的标准工作液。

[0054] 实施例1

[0055] 在该实施例中，通过下列步骤对活菌型乳酸菌饮料中的乙醇进行检测：

[0056] 第一步，吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，5000rpm的转速下离心5分钟，收集上清液，过0.22μm有机滤膜，得到待测液。

[0057] 第二步，对待检测液进行气相色谱检测：

[0058] (1)确定气相色谱检出限

[0059] 通过3倍信噪比(S/N＝3)可以对乙醇进行定性，10倍信噪比(S/N＝10)能够对乙醇进行定量。在含量为2mg/100mL时，峰高信号为2146.8，噪音为70，此时的信噪比为30.7，基于10倍信噪比，确定仪器的定量检出限为0.65mg/100mL，由于待测液是根据样品进行5倍稀释得到的，进而算出样品的检出限为3.25mg/100mL。其中，信噪比＝峰高信号/噪音；定量检出限＝(10×乙醇浓度×噪音)/峰高信号。

[0060] (2)标准曲线的绘制

[0061] 用气相色谱仪对标准溶液中乙醇进行检测，以峰面积Y对其浓度X(mg/100mL)得到乙醇的标准曲线Y＝50.19385*X，r2＝0.9999，其相关系数大于0.99，说明线性关系良好。

[0062] (3)待测液中乙醇浓度

[0063] 用气相色谱仪对待测液中乙醇进行检测，峰面积在标准曲线上对应的浓度即为待测液中乙醇的含量。

[0064] (4)待测样本中乙醇浓度

[0065] 根据待测液中乙醇的含量乘以稀释倍数计算得到待测活菌型乳酸菌饮料中乙醇的含量。

[0066] 气相色谱检测条件：

[0067] 检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，色谱柱为CD-2560柱(Φ100米×0.25毫米，0.2微米)，进样口温度：180℃；检测器温度：200℃；进样体积：1微升；载气流速：2.0毫升/分钟；载气为高纯氮气，纯度99.999％；分流比为20：1；升温程序：初始温度80℃，保持1分钟；
以10℃/分钟升至150℃，保持2分钟；总时间10分钟。

[0068] 实施例2

[0069] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第一步中，[0070] 吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于10mL容量瓶中；

[0071] 离心是按照3000r/min的转速下进行10分钟。

[0072] 实施例3

[0073] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第一步中，[0074] 吸取5mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于50mL容量瓶中；

[0075] 离心是按照8000r/min的转速下进行3分钟。

[0076] 对比例1

[0077] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第一步中，[0078] 吸取3mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于50mL容量瓶中。

[0079] 对比例2

[0080] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第一步中，[0081] 吸取7mL活菌型乳酸菌饮料待测样本于10mL容量瓶中。

[0082] 对比例3

[0083] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第二步中，[0084] 色谱柱为CP Sil 19CB(Φ30米×0.32毫米，0.25微米)。

[0085] 对比例4

[0086] 按照实施例1的方法检测活菌型乳酸菌饮料中乙醇，区别在于，在第二步中，[0087] 气相色谱条件：

[0088] 检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，色谱柱为CD-2560柱(Φ100米×0.25毫米，0.2微米)；

[0089] 进样口温度：160℃；

[0090] 检测器温度：200℃；

[0091] 进样体积：1微升；

[0092] 载气流速：1.0毫升/分钟，载气为高纯氮气，纯度99.999％；

[0093] 分流比为20：1；

[0094] 升温程序：恒温120℃保持18分钟。

[0095] 活菌型乳酸菌饮料中乙醇的检测结果分析

[0096] 1、乙醇浓度的测定

[0097] 根据实施例1～3以及对比例1～4检测得到的乙醇浓度如表1所示，结果表明实施例1～3、对比例1和对比例4均能较准确的检测出样品中乙醇含量，但如图3所示，对比例3使用色谱柱CP Sil 19CB进行检测，所得到的图谱拖尾严重，

[0098] 无法进行定量实验；对比例2中由于稀释倍数较小，无法使蛋白质完全沉淀，样液浑浊，无法进行定量实验。

[0099] 表1乙醇浓度的检测结果

[0100]

[0101] 2、回收率验证

[0102] 向活菌型乳酸菌饮料样品中添加乙醇得到加标样品，乙醇的添加浓度为4mg/100mL、8mg/100mL、40mg/100mL。按照实施例1的方法检测加标样品和未加标的活菌型乳酸菌饮料中乙醇的浓度，并根据检测结果计算回收率，其中回收率(％)＝100×(加标样品中乙醇浓度-未加标的样品中乙醇浓度)/加标样品中乙醇理论浓度，结果如表2所示。结果表明，实施例1～3得到的乙醇最终回收率在89.5％～108％之间，方法回收率可以满足检测的需要，而对于对比例1～4，对比例1回收率在99.6％～100.2％之间，但由于稀释倍数较大，响应信号较小，低浓度点时需要手动积分，增加了工作量；对比例2中由于稀释倍数较小，无法使蛋白质完全沉淀，样液浑浊，无法进行定量实验；对比例3中所使用色谱柱拖尾严重，无法进行定量实验；对比例4回收率在86.8％～103.9％之间，回收率稍低于实施例1～3且分析时间较长。

[0103] 表2回收率验证

[0104]

[0105] 3、精密度验证

[0106] 对不同添加浓度的加标样品分别用实施例1～3以及对比例1～4重复检测6次，计算6次检测结果的相对标准偏差(RSD％)，结果如表3所示。结果表明，实施例1～3的相对标准偏差均不超过15％，方法精密度可以满足检测的需要，而对比例1～4中，对比例1精密度在4.8％～5.4％之间，对比例2中由于稀释倍数较小，无法使蛋白质完全沉淀，样液浑浊，无法进行精密度测试；对比例3中所使用色谱柱拖尾严重，无法进行精密度测试；对比例4回收率在2.3％～4.2％之间。

[0107] 表3精密度验证

[0108]

[0109] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“另一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

[0110] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。