一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法

摘要

本发明属于高分子材料和生物医学工程领域，具体涉及一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法。利用星型引发剂以环酯类单体为原料进行开环聚合制备星型聚酯类高分子材料，再与二溴异丁酰溴反应制备星型大分子引发剂。通过原子转移自由基聚合，在大分子引发剂上引入具有温度响应性的亲水性单体，制备两亲性的温度响应性嵌段共聚物，再利用原子转移自由基聚合引入甲基丙烯酸羟乙酯单体来提供羟基。利用羟基与荧光小分子的化学反应，制备具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料。该材料能够在水溶液中自组装成荧光标记的纳米载药胶束，在癌症化疗、药物运输与分布监测等领域都具有良好的应用前景。

权利要求

1.一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)将含有羟基官能团的星型引发剂A和环酯类单体B按照1：20～1000的摩尔比计量加入到反应瓶中，按照环酯类单体B总摩尔量的0.01～1%加入催化剂辛酸亚锡，在氮气或氩气保护下反应，控制反应温度为100～140℃，反应时间为12～36小时，待反应产物冷却到室温，加入二氯甲烷使其溶解，将溶液加入到甲醇中沉淀，抽滤，再重复3次溶解-沉淀循环，将过滤产物在40℃下真空烘干至恒重，得到产物I星型聚酯类高分子材料；

(2)将步骤(1)制备的星型聚酯类高分子材料和三乙胺按照1：4～50的摩尔比计量加入到二氯甲烷中，随后将反应体系冷却到0℃，并向体系中逐滴滴加2-溴异丁酰溴/二氯甲烷溶液，其中2-溴异丁酰溴的用量为星型聚酯类高分子材料中羟基总摩尔数的1～30倍，0℃搅拌2小时再室温反应12 72小时；反应结束后依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水反复洗涤~多次，用无水硫酸镁除水后过滤、旋蒸浓缩，将溶液滴加到甲醇中沉淀并抽滤，重复3次溶解-沉淀循环，将过滤产物在40℃下真空烘干至恒重，得到产物II用于原子转移自由基聚合(ATRP)的星型大分子引发剂；

(3)将步骤(2)得到的星型大分子引发剂、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA和温度响应性单体C按照1：(4～20)：(4～20)：(10～400)的摩尔比计量加入到四氢呋喃中，在氮气或氩气保护下反应，控制反应温度为40～80℃，反应时间为5～10小时，待反应产物冷却到室温，用四氢呋喃稀释后过中性氧化铝柱子以除去铜盐，旋蒸浓缩后透析除去未反应的单体，最后冷冻干燥得到产物III温度响应性嵌段共聚物；

(4)将步骤(3)得到的温度响应性嵌段共聚物、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA和甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)单体按照1：(4～20)：(4～20)：(10～200)的摩尔比计量加入到四氢呋喃中，在氮气或氩气保护下反应，控制反应温度为40～80℃，反应时间为5～10小时，待反应产物冷却到室温，用四氢呋喃稀释后过中性氧化铝柱子以除去铜盐，旋蒸浓缩后透析除去未反应的单体，最后冷冻干燥得到产物IV具有多羟基的温度响应性嵌段共聚物；

(5)将步骤(4)得到的具有多羟基的温度响应性嵌段共聚物、含荧光效应的小分子物质D、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)按照

1：(1.5 3)：(5 10)：(1 2)的摩尔比计量加入到无水二甲基亚砜中，在避光条件下反应，控~ ~ ~

制反应温度为70 90℃，反应时间为2 6小时，待反应产物冷却到室温，再加入2倍体积的二~ ~

甲基亚砜稀释，并将其转移至透析袋中，在避光条件下透析以除去未反应的荧光物质D和催化剂，最终冷冻干燥得到目标产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料。

2.根据权利要求1所述的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的含有羟基官能团的星型引发剂A为三羟甲基丙烷、

1,3,5-苯三甲醇、季戊四醇、双季戊四醇或多羟基笼型倍半硅氧烷中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中的所述环酯类单体B为ε-己内酯、L-丙交酯、D-丙交酯、D,L-丙交酯、乙交酯或丁内酯中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的温度响应性单体C为2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯或甲基丙烯酸二乙氨基乙酯中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述的含荧光效应的小分子物质D为罗丹明B、异硫氰酸荧光素、花菁类染料Cyanine 3、Cyanine 3.5、Cyanine 5、Cyanine 5.5、Cyanine 7或Cyanine 7.5中的一种或几种。

说明书

一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材

料的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于高分子材料和生物医学工程领域，具体涉及一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法。

背景技术

[0002] 恶性肿瘤（又名癌症）是目前严重威胁人类健康的致命性疾病之一。化学药物治疗作为癌症治疗的三大基本手段之一已经得到了广泛的应用。传统的化学药物治疗采用直接给药的方式虽然能够在一定程度上抑制肿瘤组织的扩散，但由于化疗药物并不具有特异性选择功能，在杀灭癌细胞的同时也会对人体正常细胞产生毒副作用，因此需要研究制备出具有优良性能的药物载体材料，以实现化疗药物的可控释放，降低其对正常组织的损伤。

[0003] 近年来，有关具有温度响应性的两亲性聚合物的研究报道受到了广泛关注，被认为是一种良好的药物载体材料，该类聚合物的两亲性属性使其能够在水溶液中自组装成纳米级的药物载体。当环境温度发生变化时，温度响应性聚合物的某些链段会发生相转变，由亲水性链段转变成疏水性链段，造成纳米级药物载体结构的破坏，从而达到药物响应性可控释放的目的。其中2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(MEO2MA)、寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯(OEGMA)、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DMAEMA)等作为具有良好生物相容性的温度响应型单体材料已经在药物载体领域得到了一定的推广应用。Lutz等（Journal of the American Chemical Society，2006，128，13046-13047）研究分析了MEO2MA和OEGMA无规共聚物的的最低临界共溶温度（LCST），指出可以通过改变两者的比例制备出具有不同LCST的温度响应性无规共聚物。Zhong等（Biomaterials，2010，31，2408-2416）制备出PDMAEMA-PCL-PDMAEMA三嵌段共聚物，利用其自组装成的胶束同时搭载siRNA和紫杉醇药物，证明了复合药物载体在生物医药领域中的潜在应用性。此外，与线性聚合物构成的纳米组装体相比，星型聚合物自组装成的药物载体具有更好的热力学稳定性，在癌症化疗领域具有更好的发展前景。

[0004] 随着化学药物治疗技术和药物载体设计理念的发展，越来越多的研究人员开始关注负载药物后的药物载体在体内的运输、分布情况。荧光示踪技术已经被推广应用到药物载体领域中，通过化学键将荧光小分子物质与聚合物连接，为监测药物载体在体内的运输与分布提供了一个简单可行的途径。Zhang等（Macromolecular Bioscience，2013，13，789-798）将异硫氰酸荧光素（FITC）键接到聚乙二醇—聚己内酯嵌段共聚物上用于标记药物载体材料，并以FITC荧光强度为监测信号来研究细胞对聚合物胶束的吞噬作用及路径，但其所采用的聚合物并不具有温度响应性可控释药的功能。Liu等（Biomaterials，2014，35，
760-770）制备出mPEG-PLGA-PLL嵌段共聚物，并利用其自组装性能以物理包埋的方式搭载荧光探针Cyanine 5，用于进行活体成像研究纳米粒子的胞内运输和细胞吞噬机制，但物理包埋的方式搭载荧光探针会对载体材料的载药率产生影响。总体来说荧光示踪技术将会成为未来研究药物载体材料微观性能的一种重要手段。

[0005] 本发明利用星型引发剂以疏水性单体为原料进行开环聚合反应，同时结合酯化反应制备出星型大分子引发剂。随后先通过原子转移自由基聚合，在星型大分子引发剂上引入具有温度响应性的亲水性单体，制备出两亲性的温度响应性嵌段共聚物，再通过键接甲基丙烯酸羟乙酯引入活性羟基，并利用羟基与荧光小分子物质之间的化学反应，制备出具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料。这种两亲性的药物载体材料能够在水溶液中自组装成纳米级的荧光标记载药胶束，在恶性肿瘤化疗、药物运输与分布监测等领域都具有良好的应用前景。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法。

[0007] 本发明的目的是先将亲水性的温度响应性单体通过原子转移自由基聚合引入到疏水性的星型生物可降解聚酯类大分子链段上，并进一步键接引入甲基丙烯酸羟乙酯，再通过荧光小分子物质与甲基丙烯酸羟乙酯中羟基的反应实现聚合物的荧光标记，使获得的星型聚合物基药物载体材料具有良好的生物相容性、温度响应性和荧光示踪属性，同时能够在水溶液中组装成稳定的纳米胶束用于搭载化疗药物。本发明以具有良好生物相容性的环酯类单体、温度响应性单体、含荧光效应的小分子物质为原料，采用开环聚合反应、酯化反应和原子转移自由基聚合反应，制备一系列具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料。

[0008] 本发明提出的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的制备方法，具体步骤如下：

[0009] (1)将含有羟基官能团的星型引发剂A和环酯类单体B按照1：20～1000的摩尔比计量加入到反应瓶中，按照环酯类单体B总摩尔量的0.01～1%加入催化剂辛酸亚锡，在氮气或氩气保护下反应，控制反应温度为100～140℃，反应时间为12～36小时，待反应产物冷却到室温，加入二氯甲烷使其溶解，将溶液加入到甲醇中沉淀，抽滤，再重复3次溶解-沉淀循环，将过滤产物在40℃下真空烘干至恒重，得到产物I星型聚酯类高分子材料；

[0010] (2)将步骤(1)制备的星型聚酯类高分子材料和三乙胺按照1：4～50的摩尔比计量加入到二氯甲烷中，随后将反应体系冷却到0℃，并向体系中逐滴滴加2-溴异丁酰溴/二氯甲烷溶液，其中2-溴异丁酰溴的用量为星型聚酯类高分子材料中羟基总摩尔数的1～30倍，0℃搅拌2小时再室温反应12~72小时；反应结束后依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水反复洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤、旋蒸浓缩，将溶液滴加到甲醇中沉淀并抽滤，重复3次溶解-沉淀循环，将过滤产物在40℃下真空烘干至恒重，得到产物II用于原子转移自由基聚合(ATRP)的星型大分子引发剂；

[0011] (3)将步骤(2)得到的星型大分子引发剂、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA和温度响应性单体C按照1：(4～20)：(4～20)：(10～400)的摩尔比计量加入到四氢呋喃中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为40～80℃，反应时间为5～10小时，待反应产物冷却到室温，用四氢呋喃稀释后过中性氧化铝柱子以除去铜盐，旋蒸浓缩后透析除去未反应的单体，最后冷冻干燥得到产物III温度响应性嵌段共聚物；

[0012] (4)将步骤(3)得到的温度响应性嵌段共聚物、催化剂溴化亚铜、配体PMDETA和甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)单体按照1：(4～20)：(4～20)：(10～200)的摩尔比计量加入到四氢呋喃中，在氮气或氩气保护下反应，反应温度为40～80℃，反应时间为5～10小时，待反应产物冷却到室温，用四氢呋喃稀释后过中性氧化铝柱子以除去铜盐，旋蒸浓缩后透析除去未反应的单体，最后冷冻干燥得到产物IV具有多羟基的温度响应性嵌段共聚物；

[0013] (5)将步骤(4)得到的具有多羟基的温度响应性嵌段共聚物、含荧光效应的小分子物质D、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)按照1：(1.5 3)：(5 10)：(1 2)的摩尔比计量加入到无水二甲基亚砜中，在避光条件下反~ ~ ~应，反应温度为70 90℃，反应时间为2 6小时，待反应产物冷却到室温，再加入2倍体积的二~ ~
甲基亚砜稀释，并将其转移至透析袋中，在避光条件下透析以除去未反应的荧光物质D和催化剂，最终冷冻干燥得到目标产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料。

[0014] 本发明中，步骤(1)中所述的含有羟基官能团的星型引发剂A为三羟甲基丙烷、1,3,5-苯三甲醇、季戊四醇、双季戊四醇或多羟基笼型倍半硅氧烷(POSS-OH)中的一种或几种。

[0015] 本发明中，步骤(1)中的所述环酯类单体B为ε-己内酯、L-丙交酯、D-丙交酯、D,L-丙交酯、乙交酯或丁内酯中的一种或几种。

[0016] 本发明中，步骤(3)中所述的温度响应性单体C为2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(MEO2MA)、寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯(OEGMA)、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DMAEMA)或甲基丙烯酸二乙氨基乙酯(DEAEMA)中的一种或几种。

[0017] 本发明中，步骤(5)中所述的含荧光效应的小分子物质D为罗丹明B、异硫氰酸荧光素(FITC)、花菁类染料Cyanine 3、Cyanine 3.5、Cyanine 5、Cyanine 5.5、Cyanine 7或Cyanine 7.5中的一种或几种。

[0018] 本发明的有益效果在于：

[0019] （１）原料来源广泛，所用的开环聚合引发剂、环酯类单体、温度响应性单体、荧光小分子物质、溶剂、沉淀剂、催化剂等均可以工业化生产，合成方法简单可行。

[0020] （２）合成的星型聚合物基药物载体材料具有良好的生物相容性和温度响应性。

[0021] （３）合成的星型聚合物基药物载体材料键接有荧光小分子物质，具有良好的荧光示踪性能，有助于监测药物在体内的运输与分布。

[0022] （４）合成的星型聚合物基药物载体材料的最低临界共溶温度（LCST）可通过改变温度响应性单体的种类和用量比例来调节，从而满足实际治疗的需要。

[0023] （５）由于环酯类单体具有疏水性，温度响应性单体具有亲水性，所以该星型聚合物基药物载体材料能够在水溶液中自组装成纳米级荧光标记载药胶束，在恶性肿瘤化疗、药物运输与分布监测等领域都具有良好的应用前景。

附图说明

[0024] 图1：实施例1制备的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的结构式和氢核磁谱图。

[0025] 图2：实施例1制备的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料自组装所形成纳米胶束水溶液的荧光光谱图。

[0026] 图3：实施例1制备的具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料自组装所形成纳米胶束水溶液的透射电镜图。

具体实施方式

[0027] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明的范围。

[0028] 该具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物基药物载体材料的分子结构用核磁共振分析仪(NMR)、傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)测定。该材料的分子量用凝胶渗透色谱(GPC)测定，以四氢呋喃为淋洗剂。该材料的最低临界共溶温度(LCST)用带热台的紫外-可见分光光度计测定，LCST定义为透光率降至初始值的50%时所对应的温度。自组装成的纳米胶束形态用透射电镜(TEM)测定，胶束粒径用动态激光光散射仪(DLS)测定。

[0029] 实施例1

[0030] 将0.47g季戊四醇和39.4gε-己内酯加入到反应瓶中，并向其中注入400μmol辛酸亚锡，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下120℃反应24h，冷却后用二氯甲烷溶解经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物I星型聚己内酯(4sPCL)；将17.3g产物I和2.4g三乙胺溶解于100ml二氯甲烷中，待体系冷却至0℃，向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液(4.1g / 25ml CH2Cl2)，继续搅拌2h后移至室温反应48h。反应结束后旋蒸浓缩，依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物II星型大分子引发剂(4sPCL-Br)；将3.6g产物II、11.5g MEO2MA、5.1g OEGMA、0.2g CuBr和0.3g PMDETA加入到30ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下60℃反应5h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物III温度响应性星型嵌段共聚物4sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)；

[0031] 将7.9g产物III、0.8g HEMA、0.12g CuBr和0.15g PMDETA加入到40ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下60℃反应5h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物IV具有多羟基的温度响应性星型嵌段共聚物4sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)-b-PHEMA；将4.7g产物IV、0.8g FITC、0.4g EDC·HCl、0.05g DMAP加入到100ml无水二甲基亚砜中，在避光条件下90℃反应2小时，待体系冷却后加入二甲基亚砜稀释并在避光条件下透析，冻干得到最终产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物4sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)-b-P(HEMA-FITC)。

[0032] 实施例2

[0033] 将0.47g季戊四醇和49.9g L-丙交酯加入到反应瓶中，并向其中注入300μmol辛酸亚锡，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下110℃反应24h，冷却后用二氯甲烷溶解经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物I星型左旋聚乳酸(4sPLLA)；将21.8g产物I和3.1g三乙胺溶解于120ml二氯甲烷中，待体系冷却至0℃，向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液(5.5g / 30ml CH2Cl2)，继续搅拌2h后移至室温反应48h。反应结束后旋蒸浓缩，依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物II星型大分子引发剂(4sPLLA-Br)；将4.5g产物II、11.3g DMAEMA、0.2g CuBr和0.3g PMDETA加入到35ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下65℃反应6h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物III温度响应性星型嵌段共聚物4sPLLA-b-PDMAEMA；

[0034] 将6.4g产物III、1.0g HEMA、0.14g CuBr和0.17g PMDETA加入到45ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下60℃反应6h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物IV具有多羟基的温度响应性星型嵌段共聚物4sPLLA-b-PDMAEMA-b-PHEMA；将4.3g产物IV、0.9g FITC、0.5g EDC·HCl、0.07g DMAP加入到80ml无水二甲基亚砜中，在避光条件下90℃反应3小时，待体系冷却后加入二甲基亚砜稀释并在避光条件下透析，冻干得到最终产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物4sPLLA-b-PDMAEMA-b-P(HEMA-FITC)。

[0035] 实施例3

[0036] 将0.38g双季戊四醇和25.7gε-己内酯加入到反应瓶中，并向其中注入350μmol辛酸亚锡，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下120℃反应36h，冷却后用二氯甲烷溶解经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物I星型聚己内酯(6sPCL)；将17.4g产物I和3.1g三乙胺溶解于80ml二氯甲烷中，待体系冷却至0℃，向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液(6.9g / 40ml CH2Cl2)，继续搅拌2h后移至室温反应72h。反应结束后旋蒸浓缩，依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物II星型大分子引发剂(6sPCL-Br)；将2.9g产物II、10.3g MEO2MA、1.4g OEGMA、0.18g CuBr和0.22g PMDETA加入到40ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下55℃反应8h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物III温度响应性星型嵌段共聚物6sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)；

[0037] 将5.5g产物III、0.47g HEMA、0.07g CuBr和0.08g PMDETA加入到30ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下55℃反应6h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物IV具有多羟基的温度响应性星型嵌段共聚物6sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)-b-PHEMA；将4.8g产物IV、0.7g 罗丹明B、0.3g EDC·HCl、0.04g DMAP加入到100ml无水二甲基亚砜中，在避光条件下75℃反应4小时，待体系冷却后加入二甲基亚砜稀释并在避光条件下透析，冻干得到产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物6sPCL-b-P(MEO2MA-co-OEGMA)-b-P(HEMA-RhB)。

[0038] 实施例4

[0039] 将0.88g双季戊四醇和74.6g D-丙交酯加入到反应瓶中，并向其中注入500μmol辛酸亚锡，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下120℃反应24h，冷却后用二氯甲烷溶解经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物I星型右旋聚乳酸(6sPDLA)；将32.7g产物I和4.7g三乙胺溶解于160ml二氯甲烷中，待体系冷却至0℃，向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液(8.3g / 50ml CH2Cl2)，继续搅拌2h后移至室温反应48h。反应结束后旋蒸浓缩，依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物II星型大分子引发剂(6sPDLA-Br)；将5.4g产物II、10.3g DMAEMA、0.2g CuBr和0.3g PMDETA加入到35ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下60℃反应5h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物III温度响应性星型嵌段共聚物6sPDLA-b-PDMAEMA；

[0040] 将7.2g产物III、1.1g HEMA、0.18g CuBr和0.21g PMDETA加入到50ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下60℃反应6h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物IV具有多羟基的温度响应性星型嵌段共聚物6sPDLA-b-PDMAEMA-b-PHEMA；将5.7g产物IV、0.9g 罗丹明B、0.4g EDC·HCl、0.05g DMAP加入到120ml无水二甲基亚砜中，在避光条件下75℃反应4小时，待体系冷却后加入二甲基亚砜稀释并在避光条件下透析，冻干得到产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物6sPDLA-b-PDMAEMA-b-P(HEMA-RhB)。

[0041] 实施例5

[0042] 将0.71g季戊四醇和59.1g ε-己内酯加入到反应瓶中，并向其中注入600μmol辛酸亚锡，体系冷冻抽真空三次，在氩气保护下115℃反应24h，冷却后用二氯甲烷溶解经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物I星型聚己内酯(4sPCL)；将25.9g产物I和3.6g三乙胺溶解于150ml二氯甲烷中，待体系冷却至0℃，向其中逐滴滴加2-溴异丁酰溴溶液(6.2g / 35ml CH2Cl2)，继续搅拌2h后移至室温反应48h。反应结束后旋蒸浓缩，依次用饱和NaHCO3溶液和去离子水洗涤多次，用无水硫酸镁除水后过滤，经甲醇沉淀，抽滤后真空烘干得到产物II星型大分子引发剂(4sPCL-Br)；将6.7g产物II、16.5g DMAEMA、0.3g CuBr和0.5g PMDETA加入到50ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下60℃反应5h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物III温度响应性星型嵌段共聚物4sPCL-b-PDMAEMA；

[0043] 将7.7g产物III、1.2g HEMA、0.17g CuBr和0.21g PMDETA加入到55ml四氢呋喃中，体系冷冻抽真空三次，在氮气保护下60℃反应6h，冷却后过中性氧化铝柱，旋蒸浓缩后透析，冻干得产物IV具有多羟基的温度响应性星型嵌段共聚物4sPCL-b-PDMAEMA-b-PHEMA；将4.2g产物IV、0.7g Cyanine 5-COOH、0.4g EDC·HCl、0.05g DMAP加入到90ml无水二甲基亚砜中，在避光条件下75℃反应4小时，待体系冷却后加入二甲基亚砜稀释并在避光条件下透析，冻干得到最终产物V具有荧光标记和温度响应性的星型聚合物4sPCL-b-PDMAEMA-b-P(HEMA-Cy5)。