毛发中神经递质的检测方法

摘要

本发明涉及一种毛发中神经递质的检测方法，包括以下步骤：样品前处理：将毛发样品依次用十二烷基磺酸钠的水溶液、去离子水、丙酮溶液清洗；将清洗后的毛发干燥，加入提取溶液进行提取，得提取液；将提取液离心，取上清液干燥，再加入乙腈水溶液溶解，得待测样品溶液；所述提取溶液为乙腈、甲醇和18‑22mM甲酸铵水溶液的混合溶液；液相色谱分离：将待测样品溶液用液相色谱进行分离；质谱检测：将液相色谱分离后的样品进行质谱检测。与现有的利用脑脊液，血液与尿液进行神经递质测定的方法比较，本发明的方法取材非常方便，前处理过程简单，对医生与患者均无任何风险，费用更便宜，且灵敏度高，有更高的准确性和稳定性。

权利要求

1.一种毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：样品前处理：将毛发样品依次用十二烷基磺酸钠水溶液、去离子水、丙酮清洗；将清洗后的毛发干燥，加入提取溶液进行提取，得提取液；将提取液离心，取上清液干燥，再加入乙腈水溶液溶解，得待测样品溶液；所述提取溶液为乙腈、甲醇和18-22mM甲酸铵水溶液的混合溶液；

液相色谱分离：将待测样品溶液用液相色谱进行分离；

质谱检测：将液相色谱分离后的样品进行质谱检测。

2.根据权利要求1所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述液相色谱分离的条件包括：流动相：流动相A为甲酸体积浓度为0.1-0.2％的甲酸水溶液；流动相B为甲酸体积浓度为0.1-0.2％的甲酸乙腈溶液；采用梯度洗脱，流动相A的体积比为1-90％，流动相B的体积比为99-10％；

流速：0.1-0.5mL/min。

3.根据权利要求1所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述液相色谱分离的条件包括：进样量为4-6μL；及/或柱温为23-27℃。

4.根据权利要求1所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述质谱检测的条件包括：干燥气温度：320-330℃；干燥气流速：9-11L/min；毛细管电压：3950-

4050V；雾化电压：33-37psig；检测极性：正离子；扫描模式：多反应监测离子扫描。

5.根据权利要求1-4任一项所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述神经递质包括：谷氨酸、γ-氨基丁酸和5-羟色胺。

6.根据权利要求5所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述谷氨酸的质谱检测离子对为：148.1>130.1，148.1>84.0；所述γ-氨基丁酸的质谱检测离子对为：104.1>87.0，104.1>45.1；所述5-羟色胺的质谱检测离子对为：177.1>160.2，177.1>

115.0。

7.根据权利要求1-4任一项所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述十二烷基磺酸钠水溶液的质量浓度为0.15-0.25％。

8.根据权利要求1-4任一项所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述提取溶液中乙腈：甲醇：18-22mM甲酸铵水溶液的体积比为1:0.8-1.2:1.5-2.5，所述提取溶液与所述毛发样品的配比为1ml:8-12mg。

9.根据权利要求1-4任一项所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述提取的时间为1.5-2.5小时。

10.根据权利要求1-4任一项所述的毛发中神经递质的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述乙腈水溶液的体积浓度为2-4％。

说明书

毛发中神经递质的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物医药检测技术领域，特别是涉及一种毛发中神经递质的检测方法。

背景技术

[0002] 神经递质，是一类在神经元、肌细胞或感受器间的化学突触中充当信使作用的特殊分子。由突触前神经元合成并在末梢处释放，经突触间隙扩散，特异性地作用于突出后神经元或效应器细胞上的受体，引起信息从突触前向突触后传递，是突触化学传递的物质基础。神经递质在神经、肌肉和感觉系统的各个角落都有分布，维系着动物的正常生理功能。

[0003] 脑内神经递质分为四类，即生物原胺类、氨基酸类、肽类、其它类。生物原胺类神经递质包括：多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(A)、5-羟色胺(5-HT)。氨基酸类神经递质包括：γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸、谷氨酸(Glu)、组胺、乙酰胆碱(Ach)。肽类神经递质分为：内源性阿片肽、P物质、神经加压素、神经肽等。其中谷氨酸、γ-氨基丁酸与5-羟色胺备受关注。

[0004] 谷氨酸是脑和脊髓内的主要兴奋性神经递质，它对神经元突触强度和功能的维持起多方面的作用。早期大脑发育的突触形成、突触的维持与可塑性都受谷氨酸系统的影响。研究发现，精神分裂症患者的脑脊液中谷氨酸浓度显著降低，可引起异常的大脑发育、异常的突触可塑性与神经退化。目前，调控谷氨酸功能的药物已成为抗精神病药物研发的热点。

[0005] γ-氨基丁酸是中枢神经系统的抑制性传递物质,其作用是降低神经元活性，防止神经细胞过热，镇静神经、抗焦虑。研究发现，帕金森病人脊髓中GABA的浓度较低，癫痫病患者脊髓液中的GABA浓度也低于正常水平。另外，神经组织中GABA的降低也与Huntington疾病、老年痴呆等神经退行性疾病的形成有关。

[0006] 5-羟色胺在中枢神经系统中的主要功能是调节痛觉与镇痛、精神情绪、睡眠等功能活动。抑郁症患者大脑缺少5-羟色胺，故许多抗抑郁药都是通过抑制神经系统对5-羟色胺的再摄取，使得突触间隙5-羟色胺浓度增加而发挥抗抑郁作用。

[0007] 由于神经递质的浓度分布和浓度变化与人体生理功能直接相关，并且其含量变化可诱发如癫痫、舞蹈病、帕金森病等多种神经系统疾病。因此，测定体内神经递质的含量可判断机体某些器官的功能是否正常，配合临床症状对患者的疾病进行定性诊断和判断疾病的发展程度和治疗效果。因此，大脑神经递质的准确测定，是探索人类感知和思维的基础，同时也是预防、诊断和治疗脑神经疾病的基础，在基础研究和临床诊断上具有重要的意义。

[0008] 目前，中枢系统内神经递质的测定主要依靠腰椎穿刺抽取脑脊液，抽取血液与收集尿液进行分析。其中，脑脊液抽取是一项极高难度的检验技术，对医生有很高的要求，倘若有所偏差，后果往往可能危及患者的生命。腰椎穿刺可使患者感到疼痛和不安，应此需要配合使用局部麻醉药和使用全身镇静药和止痛药。腰椎穿刺的并发症包括脑疝、心肺功能受损、局部或牵涉痛、头痛、出血、感染、蛛网膜下表皮囊肿和脑脊液漏。其中最常见的并发症是头痛，其在腰穿后48小时内的发生率高达36.5％。因此这项技术给医生与患者均带来很多风险隐患和负担。此外，实行该项技术时对病人有许多要求，例如对于具有骨关节炎、强直性脊柱炎、脊柱后侧凸、腰部手术史、退行性椎间盘疾病的患者，腰椎穿刺较难完成。对于有此类疾病的精神疾病患者，可能需要请麻醉科医师或介入放射科医师会诊，以提高腰椎穿刺的成功率。并且再如腰椎穿刺时患者的体位可影响患者的心肺功能，因此有一定程度心肺功能障碍的患者应避免接受腰椎穿刺。除脑脊液分析外，无论是抽取血液或是收集尿液分析，或是对病人有所侵害，或是样品的储存以及分析的前处理极为麻烦。所以，能否采取其他生物检材来进行神经递质的检测成为研究热点。

发明内容

[0009] 基于此，本发明提供了一种毛发中神经递质的检测方法。

[0010] 具体技术方案如下：

[0011] 一种毛发中神经递质的检测方法，包括以下步骤：

[0012] 样品前处理：将毛发样品依次用十二烷基磺酸钠水溶液、去离子水、丙酮清洗；将清洗后的毛发干燥，加入提取溶液进行提取，得提取液；将提取液离心，取上清液干燥，再加入乙腈水溶液溶解，得待测样品溶液；所述提取溶液为乙腈、甲醇和18-22mM甲酸铵水溶液的混合溶液；

[0013] 液相色谱分离：将待测样品溶液用液相色谱进行分离；

[0014] 质谱检测：将液相色谱分离后的样品进行质谱检测。

[0015] 所述毛发包括人体毛发与动物毛发，人体毛发包括人不同生长期的头发、人体其他部位的毛发(比如腋毛、阴毛及男性胡须等)，动物毛发包括大鼠毛发等。

[0016] 在其中一些实施例中，所述液相色谱分离的条件包括：

[0017] 流动相：流动相A为甲酸体积浓度为0.1-0.2％的甲酸水溶液；流动相B为甲酸体积浓度为0.1-0.2％的甲酸乙腈溶液；采用梯度洗脱，流动相A的体积比为1-90％，流动相B的体积比为99-10％；

[0018] 流速：0.1-0.5mL/min。

[0019] 在其中一些实施例中，所述流速为0.15-0.25mL/min。

[0020] 在其中一些实施例中，所述液相色谱分离的条件包括：色谱柱为ACEC18-AR,1.8μm,2.1×100mm。

[0021] 在其中一些实施例中，所述液相色谱分离的条件包括：进样量为4-6μL；及/或柱温为23-27℃。

[0022] 在其中一些实施例中，所述质谱检测的条件包括：干燥气温度：320-330℃；干燥气流速：9-11L/min；毛细管电压：3950-4050V；雾化电压：33-37psig；检测极性：正离子；扫描模式：多反应监测离子扫描。

[0023] 在其中一些实施例中，所述神经递质包括：谷氨酸、γ-氨基丁酸和5-羟色胺。

[0024] 在其中一些实施例中，所述谷氨酸的质谱检测离子对为：148.1>130.1，148.1>84.0；所述γ-氨基丁酸的质谱检测离子对为：104.1>87.0，104.1>45.1；所述5-羟色胺的质谱检测离子对为：177.1>160.2，177.1>115.0。

[0025] 在其中一些实施例中，所述十二烷基磺酸钠水溶液的质量浓度为0.15-0.25％。

[0026] 在其中一些实施例中，所述提取溶液中乙腈：甲醇：18-22mM甲酸铵水溶液的体积比为1:0.8-1.2:1.5-2.5，所述提取溶液与所述毛发样品的配比为1ml:8-12mg。

[0027] 在其中一些实施例中，所述提取的时间为1.5-2.5小时。

[0028] 在其中一些实施例中，所述乙腈水溶液的体积浓度为2-4％。

[0029] 本发明的毛发中神经递质的检测方法具有以下优点和有益效果：

[0030] 本发明首次采用毛发为生物检材来进行神经递质的检测，创造性的建立了检测人体或动物体中神经递质的新方法。本发明采用液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法检测人与大鼠毛发中的神经递质以反应人体或大鼠体内的神经递质的含量，与现有的利用脑脊液，血液与尿液进行神经递质测定的方法比较，本发明的方法取材非常方便，前处理过程简单，对医生与患者均无任何风险，费用更便宜。且本明的检测方法灵敏度高，有更高的准确性和稳定性。本发明提供的HPLC-MS/MS检测方法可适用于不同层次的神经递质检测需要，可供医院、检验部门及科研院所做快速诊断及研究应用。同时，本发明还建立了大鼠毛发中的神经递质测定方法，由于大鼠常用来构建动物模型，用于神经系统疾病的病理研究与药物评价开发，因此本发明对于神经科学的动物研究也具有重要的意义。

附图说明

[0031] 图1为HPLC-MS/MS方法检测人体头发中谷氨酸的检测结果图；其中A为谷氨酸的二级质谱图；B为人体头发中添加谷氨酸标准品的检测图谱；C为实施例1的人体头发样品中谷氨酸的实际检测结果图；

[0032] 图2为HPLC-MS/MS方法检测人体头发中γ-氨基丁酸的检测结果图；其中A为γ-氨基丁酸的二级质谱图；B为人体头发中添加γ-氨基丁酸标准品的检测图谱；C为实施例2的人体头发样品中γ-氨基丁酸的实际检测结果图；

[0033] 图3为HPLC-MS/MS方法检测人体头发中5-羟色胺的检测结果图；其中A为5-羟色胺的二级质谱图；B为人体头发中添加5-羟色胺标准品的检测图谱；C为实施例3的人体头发样品中5-羟色胺的实际检测结果图；

[0034] 图4为HPLC-MS/MS方法检测正常人的头发中神经递质的含量分布图；

[0035] 图5为HPLC-MS/MS方法检测人体头发不同分段中神经递质含量分布图；

[0036] 图6为HPLC-MS/MS方法检测大鼠毛发中谷氨酸的检测结果图；其中A为大鼠毛发中添加谷氨酸标准品的检测图谱；B为实施例7的大鼠毛发样品中谷氨酸的实际检测结果图；

[0037] 图7为HPLC-MS/MS方法检测大鼠毛发中γ-氨基丁酸的检测结果图；其中A为大鼠毛发中添加γ-氨基丁酸标准品的检测图谱；B为实施例8的大鼠毛发样品中γ-氨基丁酸的实际检测结果图；

[0038] 图8为HPLC-MS/MS方法检测大鼠毛发中5-羟色胺的检测结果图；其中A为大鼠毛发中添加5-羟色胺标准品的检测图谱；B为实施例9的大鼠毛发样品中5-羟色胺的实际检测结果图；

[0039] 图9为慢性应激压力抑郁症大鼠模型构建示意图；其中A为慢性应激压力施加的种类与实施方法示意图；B为糖水倾向性实验测试结果图；

[0040] 图10为HPLC-MS/MS方法检测各组大鼠全脑与毛发中神经递质含量分布图。

具体实施方式

[0041] 以下通过具体实施例以及附图对本发明的毛发中神经递质的检测方法进行进一步详细的说明。

[0042] 实施例1：HPLC-MS/MS检测人头发中的谷氨酸

[0043] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测人体头发中谷氨酸的方法，包括以下步骤：

[0044] (1)样品前处理

[0045] ①将5mg人体头发样品依次用质量分数为0.2％的十二烷基磺酸钠水溶液5mL、去离子水5mL、丙酮5mL超声清洗，吹干后，加入0.5mL提取溶液(25％v/v乙腈，25％v/v甲醇，50％v/v20mM甲酸铵水溶液)超声提取2小时，得提取液。

[0046] ②将提取液离心，取所有上清液吹干，再加入50μl体积分数为3％的乙腈水溶液溶解，得待测样品溶液。

[0047] (2)液相色谱分离

[0048] 将前处理后的待测样品溶液用液相色谱进行分离，液相色谱的条件如下：

[0049] ①仪器：Agilent 1290Series LC；色谱柱：ACE C18-AR,1.8μm,2.1×100mm；

[0050] ②层析条件：进样量：5μL，柱温：25℃；流动相A：甲酸体积浓度为0.1％的甲酸水溶液，流动相B：甲酸体积浓度为0.1％的甲酸乙腈溶液；流速0.2ml/min；采用梯度洗脱，梯度洗脱的条件如下表所示：

[0051]时间(min) 流动相A(v/v％) 流动相B(v/v％)
0.0–2.0 99 1
2.0–6.0 99-10 1-90
6.0-10.0 10 90

[0052] (3)质谱检测

[0053] 将液相色谱分离后的样品进行质谱检测，质谱检测的条件如下：

[0054] 仪器(Apparatus):Agilent QQQ 6410A；电洒游离(Electrospray Ionization,ESI)；干燥气温度(Drying gas temperature)：325℃；干燥气流速(Drying gas flow):10L/min；毛细管电压(Vcap):4000V；雾化电压(Nebulizer)：35psig；检测极性(Polarity):
正离子(Positive)；扫描模式(Scan mode)：多反应监测离子扫描(MRM)；检测离子对(Ion pairs detection)：148.1>130.1，148.1>84.0。

[0055] 本实施例的人体头发中谷氨酸的HPLC-MS/MS检测结果见图1。图1是应用实施例1的方法检测人体头发中谷氨酸的检测图谱，其中，图A为谷氨酸的二级质谱图，图B为人体头发中添加谷氨酸标准品的检测图谱，图C为本实施例的人体头发样品中谷氨酸的检测结果图，结果显示，在人体头发样品中出现了谷氨酸的色谱峰，说明人体头发中存在谷氨酸。

[0056] 实施例2：HPLC-MS/MS检测人头发中的γ-氨基丁酸

[0057] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测人体头发中γ-氨基丁酸的方法，包括以下步骤：(1)样品前处理、(2)液相色谱分离、(3)质谱检测，各步骤的条件除了(3)质谱检测时的检测离子对外，其它均与实施例1相同，本实施例的检测离子对(Ion pairs detection)为：
104.1>87.0，104.1>45.1。

[0058] 本实施例的人体头发中γ-氨基丁酸的HPLC-MS/MS检测结果见图2。图2是应用实施例1方法检测人体头发毛发中γ-氨基丁酸的检测图谱，其中，图A为γ-氨基丁酸的二级质谱图，图B为人体头发中添加γ-氨基丁酸标准品的检测结果图，图C为本实施例的人体头发中γ-氨基丁酸的检测结果图，结果显示，在人体头发样品中出现了γ-氨基丁酸的色谱峰，说明人体头发中存在γ-氨基丁酸。

[0059] 实施例3：HPLC-MS/MS检测人头发中的5-羟色胺

[0060] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测人体头发中5-羟色胺的方法，包括以下步骤：(1)样品前处理、(2)液相色谱分离、(3)质谱检测，各步骤的条件除了(3)质谱检测时的检测离子对外，其它均与实施例1相同，本实施例的检测离子对(Ion pairs detection)为：177.1>160.2，177.1>115.0。

[0061] 本实施例的人体头发中5-羟色胺的HPLC-MS/MS检测结果见图3。图3是应用实施例1方法检测人体头发毛发中5-羟色胺的检测图谱，其中，图A为5-羟色胺的二级质谱图，图B为人体头发中添加5-羟色胺标准品的检测结果图，图C为本实施例的人体头发中5-羟色胺的检测结果图，结果显示，在人体头发样品中出现了5-羟色胺的色谱峰，说明人体头发中存在5-羟色胺。

[0062] 实施例4

[0063] 对实施例1-3的毛发中神经递质的检测方法进行方法学验证实验：HPLC-MS/MS检测谷氨酸、γ-氨基丁酸及5-羟色胺的标准曲线是在空白样品中添加谷氨酸、γ-氨基丁酸及5-羟色胺，制作了谷氨酸、γ-氨基丁酸及5-羟色胺的标准曲线，校准曲线以峰面积对应的样品浓度绘制，共6点浓度，重复数为6；测定了空白样品中添加谷氨酸、γ-氨基丁酸及5-羟色胺的定量下限(LOQ)和最低检测限(LOD)。

[0064] 结果如下表所示：

[0065]

[0066]

[0067] a校准曲线以峰面积对应的样品浓度绘制(共6点，重复数为6)。

[0068] 实施例5：正常人体头发中神经递质的含量分布分析

[0069] 用实施例1-3的神经递质的检测方法测定正常人的头发中神经递质的含量，选取10个正常人，取其头发进行测定，男女各5人，于同一时间段，连续采集了三年，测定结果见图4。经计算，谷氨酸在男子头发中的平均含量为66.957±36.958ng/mg，在女子头发中的平均含量为40.965±28.319ng/mg；γ-氨基丁酸在男子头发中的平均含量为0.298±
0.183ng/mg，在女子头发中的平均含量为0.309±0.244ng/mg；5-羟色胺在男子头发中的平均含量为12.957±6.289pg/mg，在女子头发中的平均含量为7.782±1.948pg/mg。图中显示，神经递质的含量存在着个体差异与时间差异，该差异与精神状态相关，[0070] 实施例6：人体(女性)头发分段中神经递质含量的分布分析

[0071] 用实施例1-3的神经递质的检测方法测定女性头发不同分段中的神经递质的含量，选取五位女子的头发，按4厘米为一段，截取了六段进行分析(男子因头发较短，未能进行该项检测)。人体头发的生长速度约为1厘米/月，六段头发大致可以反映两年中神经递质水平的变化情况。检测结果如图5所示，由图5可以看出，谷氨酸的含量在离头皮最近的一段中含量最高；γ-氨基丁酸含量的变化趋势则较为稳定；5-羟色胺的含量变化较大。这些结果提示毛发中神经递质水平的变化可能与人不同时间段的精神状态与健康状况密切相关。

[0072] 实施例7：HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中的谷氨酸

[0073] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中谷氨酸的方法，将实施例1中的人体头发样品改为大鼠毛发样品，其它检测步骤与条件均与实施例1相同。

[0074] 本实施例的大鼠毛发中谷氨酸的HPLC-MS/MS检测结果见图6。图6是应用实施例6的方法检测大鼠毛发中谷氨酸的检测图谱，其中，图A为大鼠毛发中头添加谷氨酸标准品的检测结果图，图B为本实施例的大鼠毛发中谷氨酸的检测结果图，结果显示，在大鼠毛发样品中出现了谷氨酸的色谱峰，说明大鼠毛发中存在谷氨酸。

[0075] 实施例8：HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中的γ-氨基丁酸

[0076] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中γ-氨基丁酸的方法，除了质谱检测时的检测离子对外，其它检测步骤与条件均与实施例6相同，本实施例的检测离子对为：104.1>87.0，104.1>45.1。

[0077] 本实施例的大鼠毛发中γ-氨基丁酸的HPLC-MS/MS检测结果见图7。图7是应用实施例6方法检测大鼠毛发中γ-氨基丁酸的检测图谱，其中，图A为大鼠毛发中头添加γ-氨基丁酸标准品的检测结果图，图B为本实施例的大鼠毛发中γ-氨基丁酸的检测结果图，结果显示，在大鼠毛发样品中出现了γ-氨基丁酸的色谱峰，说明大鼠毛发中存在γ-氨基丁酸。

[0078] 实施例9：HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中5-羟色胺

[0079] 本实施例利用HPLC-MS/MS检测大鼠毛发中5-羟色胺的方法，除了质谱检测时的检测离子对外，其它检测步骤与条件均与实施例6相同，本实施例的检测离子对(Ion pairs detection)为：177.1>160.2，177.1>115.0。

[0080] 本实施例的大鼠毛发中5-羟色胺的HPLC-MS/MS检测结果见图8。图8是应用实施例6的方法检测大鼠毛发中5-羟色胺的检测图谱，其中，图A为大鼠毛发中头添加5-羟色胺标准品的检测结果图，图B为本实施例的大鼠毛发中5-羟色胺的检测结果图，结果显示，在大鼠毛发样品中出现了5-羟色胺的色谱峰，说明大鼠毛发中存在5-羟色胺。

[0081] 实施例10：慢性应激压力抑郁症模型大鼠脑与毛发中神经递质含量与精神状态的关联分析

[0082] 为揭示毛发中神经递质含量与精神状态之间的关系，构建了慢性应激压力抑郁症模型大鼠，并分析了脑中神经递质的含量与毛发中的神经递质含量与抑郁状态的关系。

[0083] 慢性应激压力抑郁症模型构建如图9所示，其中，图A为慢性应激压力抑郁症模型造模示意图，图B为糖水倾向性实验测试结果。图A中显示的是对模型组大鼠以及丙咪嗪组大鼠慢性应激压力施加的种类与实施方法，共四周，每周重复图A所示的过程，四周后进行糖水消耗实验。如图B显示，模型组大鼠与正常组大鼠比较，糖水消耗量减少(p<0.05)，可模拟抑郁症病人快感缺失的病理特征。此减少的趋势可为丙咪嗪——常用抗抑郁西药所逆转(p<0.05)，与正常组及模型组比较可表明，慢性应激压力抑郁症模型大鼠造模成功。

[0084] 取正常组、模型组以及丙咪嗪组大鼠的全脑组织，对各组大鼠脑中的神经递质进行测定，测定方法如下：于0.5M甲酸水溶液中匀浆化(5mL/g)，加入内标(谷氨酸25μg/g；γ-氨基丁酸25μg/g；5-羟色胺500ng/g)，以15,000×g于4℃离心30分钟，取上清液分析，谷氨酸及γ-氨基丁酸以0.5M甲酸水溶液稀释50倍，进样量为5μL，液相色谱分离、质谱检测分析条件与实施例7-9相同。

[0085] 取正常组、模型组以及丙咪嗪组大鼠的毛发，对各组大鼠毛发中的神经递质进行测定，测定方法同实施例7-9。

[0086] 测定结果如图10所示，其中图A为各组大鼠脑中神经递质含量示意图，图B为各组大鼠毛发中的神经递质含量示意图。图A显示，模型组大鼠与正常组大鼠以及丙咪嗪组大鼠比较，脑中谷氨酸与γ-氨基丁酸的含量未见明显差异；但是模型组大鼠脑中5-羟色胺的含量较正常组降低，并且此降低的趋势可被丙咪嗪所逆转，这与已经报道过的抑郁症的发病机理与药物评价(抑郁大鼠模型，脑中5-羟色胺含量减低，应用抗抑郁药物丙咪嗪后，可升高脑内5-羟色胺的含量)相符。与之相对应的图B显示，对于谷氨酸的含量，模型组与正常组有显著性差异；γ-氨基丁酸，丙咪嗪组与模型组及正常组有显著性差异；5-羟色胺在模型组大鼠毛发中的含量比正常组高，具有显著性差异(p<0.05)，此升高的趋势恰好被丙咪嗪所逆转(p<0.05)。可见，就5-羟色胺而言，大鼠毛发中的含量变化趋势恰与脑组织中的含量变化趋势相反。这样亦表明大鼠毛发中的神经递质变化与精神状态密切相关。

[0087] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

[0088] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。