NAMPT抑制剂和方法

摘要

本发明的特征在于，如本申请公开的式(I)、式(I)‑A和式(I)‑B的化合物,以及合成、治疗、诊断和测定方法。

权利要求

1.式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

Y1为-CR14-或N，

Y2为-CR15-或N，

Y3为–C(O)-，

Y4为–CH2-或–N(R16)-，或Y3和Y4一起为–C(R17)＝C(R18)-，X为杂芳基烷基，

Z为C2-C6烷基或C1-C3烷氧基-C1-C6烷基，R为H或C1-C6烷基，

R1-R18独立地为–H或C1-C6烷基，和Q为CH或N，

其中所述杂芳基为5至10元C1-9杂芳基，其为单环或双环且具有1、2、3或4个独立选自氮、硫和氧的杂原子环成员。

2.权利要求1的化合物，其中R为H。

3.权利要求1的化合物，其中X为杂芳基烷基，其中所述杂芳基为异噁唑基或噻唑基，且所述烷基为甲基。

4.权利要求1的化合物，其中Y1为CH。

5.权利要求1的化合物，其中Y1为N。

6.权利要求1的化合物，其中Y2为CH。

7.权利要求1的化合物，其中Y2为N。

8.权利要求1的化合物，其中Y4为–CH2-。

9.权利要求1的化合物，其中Y3和Y4一起为–C(R17)＝C(R18)-。

10.权利要求1的化合物，其中Z为C2-C4烷基。

11.权利要求1的化合物，其中Z为丙基。

12.权利要求11的化合物，其中Z为异丙基。

13.权利要求1的化合物，其中Z为C1-C3烷氧基-C1-C6烷基。

14.权利要求1的化合物，其中Z为环丁基甲基。

15.权利要求1的化合物，其中R1–R18各自为–H。

16.权利要求1的化合物，其中R17和R18各自为–H。

17.化合物，其具有下式：

或其药学上可接受的盐。

18.化合物，其具有下式：

或其药学上可接受的盐。

19.化合物，选自

或其药学上可接受的盐。

20.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制活化和/或增殖B细胞用于治疗性调节免疫性疾病的药物中的用途。

21.权利要求20的用途，其中所述免疫性疾病为狼疮、类风湿关节炎、硬皮病、银屑病、舍格伦综合征、I型糖尿病或多发性硬化。

22.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于对移植物进行诱导、调节或维持免疫抑制的药物中的用途。

23.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制或调节对治疗用生物制品的免疫应答的药物中的用途。

24.权利要求23的用途，其中所述治疗用生物制品为重组蛋白、核酸、抗体或肽。

25.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制肿瘤细胞生长的药物中的用途。

26.权利要求25的用途，其中所述肿瘤细胞缺乏NAPRT。

27.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗白血病和淋巴瘤的药物中的用途。

28.权利要求27的用途，其中所述白血病为急性淋巴细胞白血病。

29.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗病毒感染的药物中的用途。

30.权利要求29的用途，其中所述病毒感染选自流行性感冒、RSV、HSV、HCV、HBV、HPV、HIV、CMV、EBOV或EBV。

31.权利要求1-19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制B细胞分化为浆细胞的药物中的用途。

32.一种药物组合物，其包含权利要求1-19中任一项的化合物和药学上可接受的载体。

说明书

NAMPT抑制剂和方法

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2014年5月22日提交的美国临时申请号No.62/001,905的优先权，将其整个公开内容并入本申请中。

技术领域

[0003] 本发明一般地涉及对各种疾病的治疗和处理，所述各种疾病包括但不限制于肿瘤疾病、免疫疾病、病毒感染以及与烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)相关的疾病。

背景技术

[0004] 两种NAMPT抑制剂(FK866和CHS828)已进入临床试验。通常参见Galli等人，“Medicinal Chemistry of Nicotinamide Phosphoribosetransferase(NAMPT)
Inhibitors”,J.Med.Chem.2013(56(16),pp 6279-6296。

发明内容

[0005] 本发明尤其提供式(I)化合物：

[0006]

[0007] 或其药学上可接受的盐，其中：

[0008] Y1为-CR14-或N，

[0009] Y2为CR15或N，

[0010] Y3为–C(O)-，

[0011] Y4为–CH2或–N(R16)-，

[0012] 或Y3和Y4一起为–C(R17)＝C(R18)-，

[0013] X为芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基或酰胺，

[0014] Z为C2或更大的烷基或烷氧基烷基，

[0015] R为H或C1-C6烷基，

[0016] R1-R18独立地为–H或C1-C6烷基，和

[0017] Q为C或N；条件是当Q为N和R为H时，X不为

[0018] 优选地，X为苯基或取代的苯基，例如氟苯基；R为H；X为吡啶基或取代的吡啶基，例如氟吡啶基或甲基吡啶基。此外优选地，Y1为C；Y1为N；Y2为C；Y2为N；Y3为-C(O)-；Y4为-C(H)＝。此外优选Z为C2-C4烷基或丙基，例如异丙基。此外优选地，Z为烷氧基烷基或环丁基甲基。此外优选地，R17和R18，并且最优选R1-R16也为–H。

[0019] 在其他优选的实施方式中，所述化合物具有下式(I)-A或(I)-B中的一种：

[0020]

[0021] 上述化合物可以通过向有此需要的患者给药包含所述化合物的组合物用来抑制活化和/或增殖B细胞从而治疗性调节免疫性疾病。例如，免疫性疾病可以为狼疮、类风湿关节炎、硬皮病、银屑病、舍格伦综合征(Sjogren’s syndrome)、I型糖尿病或多发性硬化。所述化合物可以通过向有此需要的患者给药包含所述化合物的组合物用于对移植物进行诱
导、调节或维持免疫抑制。其他医疗用途包括：抑制或调节对治疗用生物制品的免疫应答，所述治疗用生物制品例如重组蛋白、核酸、抗体或肽；抑制肿瘤细胞生长，特别是抑制缺乏NAPRT的肿瘤细胞的肿瘤细胞生长；治疗白血病(例如急性淋巴细胞白血病)和淋巴瘤；治疗病毒感染，例如流行性感冒、呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒
(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人乳头瘤病毒(HPV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、人巨细胞病毒
(CMV)、埃博拉病毒(EBOV)以及埃巴病毒(EBV)。所述化合物的其他用途包括通过使所述B细胞与所述化合物接触，抑制B细胞(例如体内或体外)分化为浆细胞。可以通过如下进行检测在样本(例如怀疑含有所述化合物的样本)中存在根据本发明的化合物：使所述样本与结合
剂接触，所述结合剂结合至所述化合物，并且检测所述结合剂至所述化合物的结合。所述化合物可以进一步包含可检测标记，例如以便于进行所述检测。

[0022] 在另一方面，本发明的特征在于，通过使苯甲酸衍生物与羰酰二咪唑和甲胺衍生物反应，合成所述化合物。

[0023] 这些化合物具有治疗多种免疫疾病和肿瘤疾病的应用，所述免疫疾病和肿瘤疾病包括但不限于，狼疮、类风湿关节炎、舍格伦综合征、I型糖尿病、多发性硬化、移植诱导与维持、硬皮病、急性淋巴细胞白血病以及恶性肿瘤，特别是缺乏NAPRT的固体或液体肿瘤。此外，这些化合物治疗需要NAD的病毒感染，其包括但不限于，流行性感冒、RSV、HSV、HCV、HBV、HPV、HIV、CMV、EBOV以及EBV。

[0024] 本发明也提供通过向患者给药治疗有效量的该类化合物或其药学上可接受的盐治疗上述病症的方法。本发明也提供所述化合物或其药学上可接受的盐用于治疗的用途或
制品。本发明也提供该类化合物或其药学上可接受的盐用于治疗本申请所述的疾病。

[0025] 尽管不希望本身束缚于特定的作用机制，但所述化合物选择性地抑制人初级B细胞同时保留T细胞。通常，所述化合物靶向NAMPT并且抑制初级人B细胞活化和增殖同时选择性地保留初级人T细胞，所述化合物用于治疗B细胞介导的增生性疾病，包括各种免疫介导
性疾病和恶性肿瘤(特别是B细胞恶性肿瘤、缺乏NAPRT的固体或液体肿瘤)，以及NAD病毒感染，所述NAD病毒感染包括但不限于，流行性感冒、RSV、HSV、HCV、HBV、HPV、HIV、CMV、EBOV以及EBV。

[0026] 在下面的附图和说明书中阐述本发明中一个或多个实施方式的详细内容。从说明书、附图以及权利要求中，本发明的其他特征、目的和优点将是显然的。

附图说明

[0027] 图1为表明本申请所述化合物的作用机制的图示。

[0028] 图2为显示对大鼠静脉内给药或口服给药之后，1'-异丙基-3-甲基-6-(4-(3-(噻唑-5-基)丙酰基)苯基)螺-[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-4(3H)-酮的平均血浆浓度随
时间变化的图示。

[0029] 图3为显示对大鼠静脉内给药或口服给药之后，4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的平均血浆浓度随时间变化的
图示。

[0030] 图4为显示对小鼠静脉内给药或口服给药之后，4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的平均血浆浓度随时间变化的
图示。

[0031] 图5为显示在NALM6白血病模型中4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的体内试验结果的图示。

[0032] 图6为显示在HCT116肿瘤模型中4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的体内试验结果的图示。

[0033] 图7为显示在另一个HCT116肿瘤模型中4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的体内试验结果的图示。

具体实施方式

[0034] I.化合物

[0035] 本申请尤其涉及上述式(I)、式(I)-A以及式(I)-B的化合物。

[0036] 一般定义

[0037] 理解的是，为清楚起见，在单独实施方式的上下文中描述的本发明某些特征也可在单个实施方式中以组合的方式提供。相反，为简洁起见，在单个实施方式的上下文中描述的各个特征也可以单独形式或以任何适宜的亚组合形式提供。

[0038] 对于术语"例如(e.g.)"和"例如(such as)"以及它们在语法上等同的术语，短语"不限制"理解为遵照，除非另外明确指明。如本申请中使用的，单数形式"一个"、"一种"以及"这个或这种"包括复数形式，除非上下文中另外明确指明。如本申请中使用的，术语"约"是指"近似地"(例如指示值的约±10％)。

[0039] 如本申请中使用的，短语"任选取代的"是指未取代的或取代的。如本申请中使用的，术语"取代的"是指除去氢原子并且被取代基替代。通常，所有的部分可以被取代，除非另外指明。要理解的是，给定原子上的取代受价态的限制。在整个定义中，术语"Cn-m"是指包括端点的范围，其中n和m为整数并且表示碳数。实例包括C1-4、C1-6等。

[0040] 术语"n元"(其中n为整数)通常描述在成环原子个数为n的部分中的成环原子个数。例如，哌啶基为6元杂环烷基环的例子，吡唑基为5元杂芳环的例子，吡啶基为6元杂芳环的例子，以及1,2,3,4-四氢-萘为10元环烷基的例子。

[0041] 如本申请中使用的，术语"Cn-m烷基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指饱和烃基，所述饱和烃基可以为直链或支链，具有n到m个碳。在一些实施方式中，烷基含有1到6个碳原子或1到4个碳原子或1到3个碳原子。烷基部分的例子包括但不限于化学基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基以及叔丁基。

[0042] 如本申请中使用的，术语"Cn-m烷氧基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指式-O-烷基的基团，其中烷基具有n到m个碳。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基以及丙氧基(例如正丙氧基以及异丙氧基)。在一些实施方式中，烷基具有1到3个碳原子。

[0043] 如本申请中使用的，"Cn-m烯基"是指具有一个或多个碳碳双键并且具有n到m个碳的烷基。在一些实施方式中，烯基部分含有2到6或2到4个碳原子。烯基的例子包括但不限
于，乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基等。

[0044] 如本申请中使用的，"Cn-m炔基"是指具有一个或多个碳碳三键并且具有n到m个碳的烷基。炔基的例子包括但不限于，乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。在一些实施方式中，炔基部分含有2到6或2到4个碳原子。

[0045] 如本申请中使用的，术语"Cn-m烷氨基"是指式-NH(烷基)的基团，其中烷基具有n到m个碳原子。在一些实施方式中，烷基具有1到6或1到4个碳原子。

[0046] 如本申请中使用的，术语"二-Cn-m-烷氨基"是指式-N(烷基)2的基团，其中两个烷基中的每一个独立地具有n到m个碳原子。在一些实施方式中，每个烷基独立地具有1到6或1到4个碳原子。

[0047] 如本申请中使用的，术语"Cn-m烷硫基"是指式-S-烷基的基团，其中烷基具有n到m个碳原子。在一些实施方式中，烷基具有1到6或1到4个碳原子。

[0048] 如本申请中使用的，术语"氨基"是指式–NH2的基团。

[0049] 如本申请中使用的，术语"芳基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)芳香环，例如但不限于，苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基、菲基等。在一些实施方式中，芳基为C6-10芳基。在一些实施方式中，芳基为萘环或苯环。在一些实施方式中，芳基为苯基。

[0050] 如本申请中使用的，术语"羰基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指-C(O)-基团。

[0051] 如本申请中使用的，术语"环烷基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指非芳香族的环状烃部分，其可以任选包含一个或多个亚烯基作为环结构的部分。环烷基可包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)的环体系。环烷基的定义中也包括具有一个或多个芳香环的部分，所述芳香环稠合(即具有共同的键)到环烷基环，例如环戊烷、环戊烯、环己烯等的苯并衍生物。环烷基中的一个或多个成环碳原子可氧化成羰基键。在一些实施方式
中，环烷基为单环或双环的C3-7环烷基。示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降冰片基、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烷基(norcarnyl)等。在一些实施方式中，环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

[0052] 如本申请中使用的，"Cn-m卤代烷氧基"是指式–O-卤代烷基的基团，其具有n到m个碳原子。卤代烷氧基的实例为OCF3。卤代烷氧基的另外例子为OCHF2。在一些实施方式中，卤代烷氧基仅为氟代的。在一些实施方式中，烷基具有1到6或1到4个碳原子。

[0053] 如本申请中使用的，术语"卤代"是指选自F、Cl、I或Br的卤素原子。在一些实施方式中，"卤代"是指选自F、Cl或Br的卤素原子。在一些实施方式中，示例性卤素基团为F。

[0054] 如本申请中使用的，术语"Cn-m卤代烷基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指具有一个卤素原子到2s+1个卤素原子的烷基，其可以相同或不同，其中"s"为烷基中的碳原子个数，其中烷基具有n到m个碳原子。在一些实施方式中，卤代烷基仅为氟代的。在一些实施方式中，卤代烷基为氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。在一些实施方式中，卤代烷基为三氟甲基。在一些实施方式中，烷基具有1到6或1到4个碳原子。

[0055] 如本申请中使用的，术语"杂芳基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)芳香烃部分，具有一个或多个选自氮、硫和氧的杂原子环成员。在一些实施方式中，杂芳基为5元到10元C1-9杂芳基，其为单环或双环并且具有1、2、3或4个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。当杂芳基含有多于一个杂原子环成员时，杂原子可以相同或不同。杂芳基的环中的氮原子可氧化成N-氧化物。杂芳基的实例包括但不
限于，吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、吡咯基(azolyl)、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、呋喃、噻吩、三唑、四唑、噻二唑、喹啉、异喹啉、吲哚、苯并噻吩、苯并呋喃、苯并异噁唑、咪唑并[1,2-b]噻唑、嘌呤或三嗪等。

[0056] 5元杂芳基为具有五个环原子的杂芳基，所述环原子包含碳和一个或多个(例如1、2或3)独立地选自N、O和S的环原子。示例性五元环杂芳基为噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、
1,2,3-噁二唑基、1、2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基以及1,3,4-噁二唑基。

[0057] 6元杂芳基为具有六个环原子的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子为氮。示例性六元环杂芳基为吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和哒嗪基。

[0058] 如本申请中使用的，术语"杂环烷基"，其单独使用或与其他术语组合使用，均是指非芳香环体系，其可以任选地含有一个或多个亚烯基或亚炔基作为环结构的部分，并且具有至少一个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。当杂环烷基含有多于一个杂原子时，杂原子可以相同或不同。杂环烷基可包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)环体系，包括螺环体系。杂环烷基的定义中也包括具有一个或多个稠合(即具有共同的键)到非芳香环的
芳香环的部分，例如1,2,3,4-四氢-喹啉和二氢苯并呋喃等。杂环烷基的环中的碳原子或杂原子可氧化成羰基或磺酰基(或其他氧化的连接基)或氮原子可季铵化。在一些实施方式
中，杂环烷基为5元到10元C2-9杂环烷基，其为单环或双环并且具有1、2、3或4个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。杂环烷基的例子包括1,2,3,4-四氢-喹啉、二氢苯并呋喃、氮杂环丁烷、六亚甲基亚胺(azepane)、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉以及吡喃。

[0059] 本申请所述化合物可为不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。预想到所有的立体异构体，例如对映异构体和非对映异构体，除非另外指明。本发明中含有不对称取代碳原子的化合物可以旋光或外消旋的形式进行分离。本领域中已知如何由不旋光的原料制备
旋光形式的方法，例如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择合成。许多烯烃、C＝N双键等的立体异构体也可存在于本申请所述化合物中，并且本发明中预想到所有这种稳定的异构
体。描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体并且可以分离为异构体的混合物或单独
的异构体形式。

[0060] 当本发明的化合物含有手性中心时，所述化合物可为可能的立体异构体中的任一种。在具有单一手性中心的化合物中，手性中心的立体化学可为(R)或(S)。在具有两个手性中心的化合物中，手性中心的立体化学可各自独立地为(R)或(S)，因此手性中心的构型可
为(R)和(R)、(R)和(S)；(S)和(R)或(S)和(S)。在具有三个手性中心的化合物中，三个手性中心各自的立体化学可各自独立地为(R)或(S)，因此手性中心的构型可为(R)、(R)和(R)；
(R)、(R)和(S)；(R)、(S)和(R)；(R)、(S)和(S)；(S)、(R)和(R)；(S)、(R)和(S)；(S)、(S)和(R)；或(S)、(S)和(S)。

[0061] 可通过本领域中已知许多方法中的任一种进行拆分化合物的外消旋混合物。实例方法包括使用手性拆分酸进行分级重结晶，所述手性拆分酸为旋光的成盐有机酸。适宜的
分级重结晶方法的拆分剂为例如光学活性酸，例如D和L型的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸，或各种光学活性樟脑磺酸例如D-樟脑磺酸。适于分级结晶方法的其他拆分剂包括纯立体异构型的α-甲基苄胺(例如S和R型或纯非对映异构体形式)、
2-苯甘氨醇、降麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。

[0062] 也可通过在填充有光学活性拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯甘氨酸)的柱上洗脱，进行拆分外消旋混合物。可通过本领域技术人员确定适宜的洗脱溶剂组合物。

[0063] 本发明的化合物也包括互变异构形式。通过伴随质子迁移一起进行单键与邻近双键的交换得到互变异构形式。互变异构形式包括质子移变互变异构体，其为同分异构体的
质子化状态，具有相同的经验式和总电荷。质子移变互变异构体的例子包括酮–烯醇对、酰胺–亚氨酸对、内酰胺–内酰亚胺对、酰胺–亚氨酸对、烯胺–亚胺对，以及其中质子可占据杂环体系的两个或更多个位置的多元环化物(annular)形式，例如1H-和3H-咪唑，1H-、2H-和4H-
1,2,4-三唑，1H-和2H-异吲哚，以及1H-和2H-吡唑。互变异构形式可为平衡态形式或通过适宜替换在空间上锁定为一种形式。

[0064] 本发明的化合物也可包括中间体或最终化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。

[0065] 本申请中使用的术语"化合物"，是指包括所有立体异构体、几何异构体、互变异构体以及所述同位素结构。本申请中由名称或结构确定为一个特定互变异构形式的化合物意在包括其他互变异构形式，除非另外指定(例如在嘌呤环的情况下，除非另外指明，当化合物的名称或结构具有9H互变异构体时，理解的是也包含7H互变异构体)。

[0066] 可得到与其他物质例如水和溶剂(例如水合物和溶剂化物)在一起的所有化合物以及其药学上可接受的盐，或可将所有化合物以及其药学上可接受的盐与其他物质例如水
和溶剂(例如水合物和溶剂化物)进行分离。

[0067] 在一些实施方式中，基本上分离本发明的化合物或其盐。"基本上分离"意指将化合物至少部分或基本上与其中形成该化合物或检测该化合物的环境分离。部分分离可包
括，例如本发明化合物中富含的组成。基本上分离可包括包含按本发明化合物或其盐的重
量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约
97％或至少约99％的组成。化合物以及它们的盐的分离方法在本领域中是常规的。

[0068] 短语"药学上可接受的"在本申请中是指如下的那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内，适用于与人和动物的组织接触而无过度毒性、刺激作用、变应性应答或其他问题或并发症，与合理的效益-风险比相匹配。

[0069] 在本领域中理解如本申请中使用的表述"环境温度"和"室温"，通常是指这样的温度，例如反应温度，其接近于例如在约20℃到约30℃温度进行反应的室内温度。

[0070] 本发明也包括本申请所述化合物的药学上可接受的盐。如本申请中使用的，"药学上可接受的盐"是指所披露化合物的衍生物，其中通过将现有的酸或碱部分转化为它的盐
形式将母体化合物进行改性。药学上可接受的盐的实例包括但不限于，碱性残基例如胺的
无机酸或有机酸盐；以及酸性残基例如羧酸的碱或有机盐等。本发明药学上可接受的盐包
括例如由无毒无机酸或有机酸形成母体化合物的常规无毒盐。本发明药学上可接受的盐可
由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，该盐可通过如下制备：
在水中或在有机溶剂中或在水和有机溶剂的混合物中，将这些化合物的游离酸或碱形式与
化学计量的适宜碱或酸反应；通常，优选非水介质如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(MeCN)。在如下文献中得到适宜盐的列举：Remington's Pharmaceutical Sciences,17th Ed.,(Mack Publishing Company,Easton,1985),p.1418,Berge等人，
J.Pharm.Sci.,1977,66(1),1-19；Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts:
Properties,Selection,and Use(Wiley,2002)。在一些实施方式中，本申请所述化合物包
括N-氧化物形式。

[0071] 本申请中可以使用以下缩写：AcOH(乙酸)；Ac2O(乙酸酐)；aq.(含水)；atm.(大气压)；Boc(叔丁氧羰基)；br(宽)；Cbz(羧基苄基)；calc.(计算的)；d(双峰)；dd(双二重峰)；DCM(二氯甲烷)；DIAD(偶氮二甲酸N,N’-二异丙酯)；DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；g(克)；h(小时)；HATU(N,N,N',N'-四甲基O-(7-氮苯并三氮唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐)；HCl(盐酸)；HPLC(高效液相色谱法)；Hz(赫兹)；
J(偶合常数)；LCMS(液相色谱-质谱)；m(多重峰)；M(摩尔)；mCPBA(3-氯过氧苯甲酸)；MgSO4(硫酸镁)；MS(质谱)；Me(甲基)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；mg(毫克)；min.(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；N(当量)；NaHCO3(碳酸氢钠)；NaOH(氢氧化钠)；Na2SO4(硫酸钠)；NH4Cl(氯化铵)；NH4OH(氢氧化铵)；nM(纳摩尔)；NMR(核磁共振波谱法)；OTf(三氟甲磺酸酯)；Pd(钯)；Ph(苯基)；pM(皮摩尔)；POCl3(磷酰氯)；RP-HPLC(反相高效液相色谱法)；s(单峰)；t(三重峰或叔)；TBS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；tert(叔)；tt(三重的三重峰)；t-Bu(叔丁
基)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；μg(微克)；μL(微升)；μM(微摩尔)；wt％(重量百分比)。

[0072] II.合成

[0073] 本发明的化合物(包括其盐)，可使用已知有机合成技术制备并且可根据许多可能合成路线中的任一种进行合成。

[0074] 可在适宜溶剂中进行制备本发明化合物的反应，有机合成领域中的本领域技术人员可容易地选择所述溶剂。适宜溶剂可在反应进行时的温度基本上与原料(反应物)、中间
体或产物不反应，所述温度例如范围可为溶剂的冻结温度到溶剂沸点的温度。可在一种溶
剂或多于一种溶剂的混合物中进行给定反应。取决于特定的反应步骤，本领域技术人员可
选择适于特定反应步骤的溶剂。

[0075] 制备本发明的化合物可涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可容易地确定是否需要保护和脱保护，并且选择适宜保护基团。可例如在如下中得到保护基团
化学：P.G.M.Wuts和T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis,4th Ed.,
Wiley&Sons,Inc.,New York(2006)，将其整体内容并入本申请中以作参考。

[0076] 可根据本领域中已知的任何适宜方法监控反应。例如，可通过如下监控产物的生成：光谱手段例如核磁共振波谱法(例如1H或13C)、红外光谱法、分光光度测定法(例如紫外-可见)、质谱法，或色谱方法例如高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱
(TLC)。本领域技术人员可通过各种方法纯化化合物，所述方法包括高效液相色谱法(HPLC)("Preparative  LC-MS Purification:Improved Compound Specific Method 
Optimization"Karl F.Blom,Brian  Glass,Richard Sparks,Andrew P.Combs 
J.Combi.Chem.2004,6(6),874-883，将其整个内容并入本申请中以作参考)和正相硅胶色
谱法。

[0077] III.具体实施例

[0078] 将通过具体实施例的方式更详细描述本发明。提供以下实施例用于说明的目的，而并不意在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可改变或修改的各种
非临界参数，从而得到基本相同的结果。

[0079] 实施例1：合成方法

[0080] 实施例1-1：4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺

[0081]

[0082] 向4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酸(100mg)在DMF(2mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(64mg，1.5eq)和(3-甲基异噁唑-5-基)甲胺(44mg，
1.5eq)。在室温将混合物搅拌过夜。然后将混合物用AcOEt稀释并且用NaHCO3的饱和溶液淬灭。将有机相用盐水洗涤并且经MgSO4干燥。过滤后，在真空下将残余物蒸发，得到粗制的黄色泡沫。将该物质在硅胶柱上使用溶剂梯度为0-20％在DCM中的MeOH纯化。得到黄色泡沫的
4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰
胺(71.5mg，79％)，LCMS RT＝3.34min。

[0083] 实施例1-2：N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺

[0084]

[0085] 将4-(1'-异丙基-2-甲基-1-氧代-2,4-二氢-1H-螺[异喹啉-3,4'-哌啶]-7-基)苯甲酸-氯化锂盐(100mg，0.263mmol)和HATU(100mg，0.263mmol)合并到2mL DMF中。向溶液中加入DIEA(0.09mL)。在室温将混合物搅拌5分钟后，加入(5-氟吡啶-3-基)甲胺
(0.289mmol)。在室温将混合物搅拌过夜，然后将混合物使用NaHCO3饱和溶液淬灭并且用
AcOEt稀释。用AcOEt萃取水相后，将合并的有机相使用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱使用梯度0-20％在DCM中的MeOH纯化。反应得到110mg N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-
哌啶]-6-基)苯甲酰胺。

[0086] 实施例1-3：3-氟-4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺

[0087]

[0088] 使用实施例1-1所述相同的方法，得到3-氟-4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝2.65min，MH+251.4，m＝
30mg，收率＝21％)。

[0089] 实施例1-4：6-(4-氧代-1'-丙基螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺

[0090]

[0091] 将6-(4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺(150mg，0.345mmol)与碳酸铯(135mg，0.41mmol)和1-碘丙烷(58.6mg，0.345mmol)在3mL DMF中混
合。在室温将反应混合物搅拌72小时。然后将混合物用水淬灭并且用AcOEt稀释。使用AcOEt萃取后，将合并的有机相用盐水洗涤并且使用MgSO4干燥。过滤后，在真空中除去溶剂，得到棕色半固体。将粗制物质在硅胶柱上使用梯度0-15％在DCM中的MeOH纯化。将需要的级分合并并且蒸发，得到褐色固体(LCMS RT＝3.07min，49mg，29％)。

[0092] 实施例1-5：6-(1'-丁基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺

[0093]

[0094] 使用实施例1-4所述相同的方法，得到6-(1'-丁基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺。(LCMS RT＝3.25min，MH+490.8，m＝78mg的褐色固体，收率＝48.4％)。

[0095] 实施例1-6：N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)-4-(4-氧代-1'-丙基螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺

[0096]

[0097] 使用实施例1-1所述相同的方法，得到N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)-4-(4-氧代-1'-丙基螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝3.27min，m＝11mg，收率＝
12％)。

[0098] 实施例1-7：N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)-6-(1'-丙基螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)烟酰胺

[0099]

[0100] 将N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)-6-(4-氧代-1'-丙基螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)烟酰胺(66mg，0.14mmol)溶解在1.5mL MeOH中。向反应混合物中一次性加入硼氢化钠
(33mg，0.87mmol)。进行脱气几分钟，然后淡黄色混合物变为无色。在室温3小时后，反应完全。将混合物用水淬灭并且用AcOEt稀释。用AcOEt萃取水相，将合并的有机相用盐水洗涤两次。然后将有机相使用MgSO4干燥并且在真空下浓缩。

[0101] 然后向粗制物质中加入8mL水和2mL浓H2SO4。将混合物剧烈搅拌并且在80℃加热，在该温度48小时后，将混合物用水稀释，使用固体Na2CO3碱化。用AcOEt萃取水相，将合并的有机相用盐水洗涤两次。过滤和蒸发后，将粗制残余物在硅胶柱上使用20％在DCM中的MeOH纯化。将需要的级分合并并且在真空下浓缩。得到白色固体的N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲
基)-6-(1'-丙基螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)烟酰胺(21mg，33.3％,LCMS RT＝3.30min，MH+
459.3)。

[0102] 实施例1-8：6-(1'-(3-甲氧基丙基)螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺

[0103]

[0104] 使用实施例1-7所述相同的方法，得到6-(1'-(3-甲氧基丙基)螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺。

[0105] 实施例1-9：6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)烟酰胺

[0106]

[0107] 使用实施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)烟酰胺。

[0108] 实施例1-10：6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺

[0109]

[0110] 使用实施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)烟酰胺。

[0111] 实施例1-11：4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((5-甲基异噁唑-3-基)甲基)苯甲酰胺

[0112]

[0113] 使用实施例1-1所述相同的方法，得到4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((5-甲基异噁唑-3-基)甲基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝3.35min，m＝49.7mg，收率＝39％)。

[0114] 实施例1-12：6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)烟酰胺

[0115]

[0116] 使用实施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-异丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)烟酰胺。

[0117] 实施例1-13：另外的式(I)化合物

[0118] 根据与上述那些类似的方法合成另外的式(I)化合物，这对于本领域技术人员来说容易是显然的。这些化合物总结于下表1中。

[0119] 表1：另外的式(I)化合物

[0120]

[0121] 表1：另外的式(I)化合物

[0122]

[0123] 表1：另外的式(I)化合物

[0124]

[0125] 表1：另外的式(I)化合物

[0126]

[0127] 表1：另外的式(I)化合物

[0128]

[0129] 实施例2：体外实验

[0130] 实施例2-1：抑制NAMPT酶活性

[0131] 在不存在抑制剂或存在抑制剂下简单预培养重组NAMPT酶(MBL)，然后加入烟酰胺。允许在37℃进行酶促反应6小时。反应终止，使用如下所述的方法检测NMN反应产物：
Zhang RY,Qin Y,Lv XQ,Wang P,Xu TY,Zhang L,Miao CY.,Anal.Biochem.2011May 1；412
(1):18-25。

[0132] 50％抑制浓度(IC50)为抑制50％的最大活性时的浓度。

[0133] 对代表性化合物的所述分析结果显示于下表2中。

[0134] 实施例2-2：对B细胞的抗增殖活性

[0135] 在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指导说明进行生存力测定之前，将由分析生物服务(Wilmington,DE)得到的新鲜原代人B细胞在AIM-V培养基(Invitrogen)中
稀释为1×106个细胞每毫升，并且在37℃/5％CO2在不存在抑制剂或存在抑制剂下用抗IgM
(10ug/ml)(KPL)刺激72小时。

[0136] 50％抑制浓度(IC50)为抑制50％的最大活性时的浓度。

[0137] 对代表性化合物的所述分析结果显示于下表2中。

[0138] 实施例2-3：对T细胞的抗增殖活性

[0139] 在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指导说明进行生存力测定之前，将由分析生物服务(Wilmington,DE)得到的新鲜原代人T细胞在AIM-V培养基(Invitrogen)中
稀释为1×106个细胞每毫升，并且在37℃/5％CO2在不存在抑制剂或存在抑制剂下用CD3/
CD28磁珠(Invitrogen)刺激72小时。

[0140] 50％抑制浓度(IC50)为抑制50％的最大活性时的浓度。

[0141] 对代表性化合物的所述分析结果显示于下表2中。

[0142] 表2：选择的化合物的NAMPT、B细胞和T细胞的IC50

[0143]

[0144] 表2：选择的化合物的NAMPT、B细胞和T细胞的IC50

[0145]

[0146] 表2：选择的化合物的NAMPT、B细胞和T细胞的IC50

[0147]

[0148] 表2：选择的化合物的NAMPT、B细胞和T细胞的IC50

[0149]

[0150] 实施例2-4：对各种细胞系的活性

[0151] 在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指导说明进行生存力测定之前，将白血病/淋巴瘤细胞系(ATCC)在销售商推荐的培养基中稀释，并且在37℃/5％CO2在不存在
抑制剂或存在抑制剂下培养72小时。研究的人细胞系包括急性T细胞白血病(JURKAT)、慢性髓系白血病(K562)以及B细胞急性淋巴细胞白血病(NALM6和SUP-B15)。

[0152] 选择的化合物对这些细胞系的抗增殖活性显示于下

[0153] 表3中。

[0154] 表3：选择的化合物对各种细胞系活性的抗增殖活性

[0155]

[0156] 表3：选择的化合物对各种细胞系活性的抗增殖活性

[0157]

[0158] 表3：选择的化合物对各种细胞系活性的抗增殖活性

[0159]

[0160] 表3：选择的化合物对各种细胞系活性的抗增殖活性

[0161]

[0162] 实施例2-5：作用机制

[0163] 在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指导说明进行生存力测定之前，在37℃/5％CO2在不存在抑制剂或存在抑制剂下将sup-B15细胞(ATCC)在缺乏或含有200μM烟
酰胺单核苷酸(NMN)(Sigma)培养基中培养72小时。

[0164] 化学蛋白质组学。将sup-B15细胞提取物用4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的生物素化衍生物进行培养，然后
用链霉亲和素磁珠(Invitrogen)收集化合物/蛋白质复合物。大量洗涤后，使用游离的(非
生物素化)4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲
基)苯甲酰胺或惰性类似物，洗脱结合蛋白质。SDS-PAGE之后，将一条突出的条带切下并且通过LC/MS确认为NAMPT。

[0165] 4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的分子靶标为烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)，其为烟酰胺单核苷酸(NMN)的
产物。4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)
苯甲酰胺的抗增殖活性通过NMN抵消，并且4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-
基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺有效抑制NAMPT酶活性。在整个药物化学运动
中保持靶向选择性抗增殖活性，因为式(I)的45个系列的所有成员可由NMN拯救(图1)。

[0166] 实施例2-6：对流行性感冒和呼吸道合胞病毒感染细胞的活性

[0167] 为了确定呼吸道合胞病毒(RSV)抑制，将非洲绿猴肾细胞(Vero cells)在96孔板中培养至汇合率为80％。按半对数稀度加入化合物，开始为10uM然后降至3nM，重复三次，并且允许培养细胞一小时。将病毒在MOI为10时加入到孔中，并且允许复制72小时。使用荧光活性染料检测免受病毒诱导的致细胞病变效应(CPE)的活细胞。使用鲁棒拟合方法(robust fit methodology)确定抑制CPE的EC50。

[0168] 为了确定流行性感冒病毒抑制，将mDCK细胞在96孔板中培养至汇合率为80％。按半对数稀度加入化合物，开始为10μM然后降至3nM，重复三次，并且允许培养细胞一小时。将病毒在MOI为10时加入到孔中，并且允许复制72小时。使用荧光活性染料检测活细胞免受病毒诱导的致细胞病变效应(CPE)。使用鲁棒拟合方法确定抑制CPE的EC50。

[0169] 实施例3：体内实验

[0170] 实施例3-1：药代动力学研究

[0171] 实施例3-1-a：斯普拉-道来大鼠(Sprague-Dawley Rats)中的口服和静脉内药代动力学

[0172] 评价在雄性斯普拉-道来大鼠中的试验化合物的口服(PO)和静脉内(IV)药代动力学，所述试验化合物为1'-异丙基-3-甲基-6-(4-(3-(噻唑-5-基)丙酰基)苯基)螺[苯并[e]
[1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-4(3H)-酮以及4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-
N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。研究设计概述显示于下表4中。在试验化合物给
药之前采集血样。在T0对动物给药；在给药后的2、5、15和30分钟以及1、2、4、6、8和24小时，采集随后的血样。经由颈静脉插管采集血样。将样本在4℃以13,000rpm离心5分钟。离心血浆样本后，将血浆样本采集到96孔板中。通过LC-MS/MS分析试验化合物的血浆浓度。

[0173] 表4：大鼠药代动力学研究设计

[0174]

[0175] 进行静脉内给药和口服给药两者的试验化合物耐受良好。未观察到不良生理异常。图2和图3显示试验化合物随时间变化测量的口服血浆浓度与静脉内血浆浓度的图解比
较。

[0176] 实施例3-1-b：小鼠中的口服和静脉内药代动力学

[0177] 评价在雌性NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtm1WJI/SzJ鼠中的试验化合物的口服和静脉内药代动力学，所述试验化合物为4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。研究设计概述显示于下表5中。在试验化合物给药之前、在给药后的特定时间点以及在动物处死后，采集血样。通过尾巴剪断或面静脉采集活体血样；
在吸入麻醉后经由心脏穿刺采集濒死期的血样。将样本采集到K2EDTA管中并且储存在湿冰
上，直到在5℃通过离心在1小时内进行采集血浆3000g。离心和在-80℃储存后，将血浆样本采集到96孔板中。通过LC-MS/MS分析试验化合物的血浆浓度。

[0178] 表5：小鼠药代动力学研究设计

[0179]

[0180] 在研究过程中未观察到明显临床症状。图4显示试验化合物随时间变化测量的口服血浆浓度与静脉内血浆浓度的图解比较。

[0181] 实施例3-2：药效学研究

[0182] 实施例3-2-a：NALM6白血病研究

[0183] 在NALM6白血病模型中试验4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。如图6中所示，IP给药4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色
满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺(也称为GENZ-682945)，在
该异种移植模型中产生了显著的生存效益，超过了护理标准(氯法拉滨(clofarabine))。将
5×106NALM-6细胞经由尾静脉注射到雌性CB17SCID/Crl小鼠(Charles River)中。一周后，
通过i.p.注射给药4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-
5-基)甲基)苯甲酰胺，一天两次，共计35天。通过i.p.一天一次地注射给药氯法拉滨，连续5天共四周(for 5days for four weeks)。研究终点为生存时间，并且出现严重疾病的系统
体征例如麻痹或恶病质时处死小鼠。结果示于图5中。

[0184] 实施例3-2-b：HCT116肿瘤生长研究

[0185] 肿瘤生长研究：雌性无胸腺裸小鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles River)(n＝10/group)注射有5×106HCT116细胞，并且在平均肿瘤大小为100mm3时开始治疗。口服给药
4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰
胺以及媒介物对照，一天两次，共计8天。用弯脚规测量肿瘤大小，每周两次。

[0186] 肿瘤NAD测量：雌性无胸腺裸小鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles River)(n＝3/group)注射有5×106HCT116细胞，并且在肿瘤大小为250-400mm3时开始治疗。口服给药4-
(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺
以及媒介物对照，一天两次，共计1.5天(3个剂量)。最后一个剂量后的六小时，将肿瘤切除、洗净、切片、称重以及速冻。在通过LC/MS分析NAD含量之前，在乙醇/PBS(90:10)中通过三个循环的快速冷冻/解冻/超声处理提取肿瘤部分。数据显示于图6中。

[0187] 也在HCT116实体瘤模型中试验4-(1'-异丙基-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。每天两次地口服给药4-(1'-异丙基-4-氧代
螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺，产生明显的肿瘤生
长延迟(图7)，由于治疗组死亡率为10％，所述明显的肿瘤生长延迟在停止给药后持续至少一周。

[0188] IV.制剂、剂型和给药

[0189] 当用作药物时，可以药物组合物的形式给药本发明的化合物。因此，本申请提供组合物，其包含式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、或其实施方式中的任一种以及至少一种药学上可接受的载体。这些组合物可以药物领域中公知的方式制备，并且可通过各种途径给药，这取决于指示是局部治疗还是全身治疗以及待治疗的区域。给药可以为局部的(包括经皮、表皮、眼以及粘膜包括鼻内、阴道和直肠递送)，肺的(例如通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)，口服或肠胃外。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或注射或灌输；或颅内(例如鞘内或室内)给药。肠胃外给药可为单次剂量的形式，或可以为例如通过连续灌注泵。局部给药的药物组合物和制剂可以包括透皮贴
剂、软膏、洗剂、乳剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规药物载体以及含水、粉末或基础油、增稠剂等可以是必要的或期望的。

[0190] 本发明也包括药物组合物，其包含作为活性成分的本发明化合物或其药学上可接受的盐，与一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)的组合。在一些实施方式中，所述组合物适于局部给药。制备本发明的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合、通过赋形剂稀释或以例如胶囊、囊剂、纸或其他容器的形式封装在该类载体中。当赋形剂用作稀释剂时，其可为固体、半固体或液体材料，用作活性成分的媒介物、载体或培养基。因此，所述组合物可为如下形式：片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体的形式或在液体培养基中)、含有例如至多10重量％的活性化合物的软膏、软胶
囊和硬胶囊、栓剂、注射用无菌溶液以及无菌包装的粉末。

[0191] 制备制剂时，在与其他成分组合之前，可将活性化合物研磨以得到适宜粒径。如果活性化合物基本上不溶，则可将其研磨为小于200筛目的粒径。如果活性化合物基本上为水可溶性的，则可通过研磨调节粒径以得到在制剂中基本上均匀分布，例如约40筛目。

[0192] 本发明的化合物可以使用已知的研磨工序例如湿磨法进行研磨，以得到适于片剂制剂和其他制剂类型的粒径。可通过本领域中已知的方法制备本发明化合物的细粒状(纳
米颗粒)制剂，所述方法参见例如WO 2002/000196。

[0193] 适宜赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇；甘露醇、淀粉、树胶、磷酸钙、海藻酸盐、西黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。所述制剂可另外包括：润滑剂例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如苯甲酸甲酯和苯甲酸丙羟酯；以及甜味剂和调味剂。可配制本发明组合物，从而在通过本领域中已知的程序给药至患者后得到快速、持续或延迟释放的活性成分。

[0194] 在一些实施方式中，药物组合物包含硅化微晶纤维素(SMCC)和至少一种本申请所述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，硅化微晶纤维素包含约98％的微
晶纤维素以及约2％的二氧化硅w/w。

[0195] 在一些实施方式中，所述组合物为持续释放组合物，其包含至少一种本申请所述化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体。在一些实施方式中，所
述组合物包含至少一种本申请所述化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种选自以下
的成分：微晶纤维素、乳糖一水合物、羟丙基甲基纤维素以及聚环氧乙烷。在一些实施方式中，所述组合物包含至少一种本申请所述化合物或其药学上可接受的盐，以及微晶纤维素、乳糖一水合物和羟丙基甲基纤维素。在一些实施方式中，所述组合物包含至少一种本申请
所述化合物或其药学上可接受的盐，以及微晶纤维素、乳糖一水合物和聚环氧乙烷。在一些实施方式中，所述组合物进一步包含硬脂酸镁或二氧化硅。在一些实施方式中，微晶纤维素为Avicel PH102TM。在一些实施方式中，乳糖一水合物为Fast-flo 316TM。在一些实施方式中，羟丙基甲基纤维素为羟丙基甲基纤维素2208K4M(例如Methocel K4M PremierTM)和/或
羟丙基甲基纤维素2208K100LV(例如Methocel K00LVTM)。在一些实施方式中，聚环氧乙烷为聚环氧乙烷WSR 1105(例如Polyox WSR1105TM)。

[0196] 在一些实施方式中，湿法造粒方法用于制备所述组合物。

[0197] 在一些实施方式中，干法造粒方法用于制备所述组合物。所述组合物可配制为单位剂型的形式，每个剂量含有约5至约1,000mg(1g)、更通常为约100mg至约500mg的活性成
分。在一些实施方式中，每个剂量含有约10mg的活性成分。在一些实施方式中，每个剂量含有约50mg的活性成分。

[0198] 在一些实施方式中，每个剂量含有约25mg的活性成分。术语"单位剂型"是指物理上独立的单元，适宜作为人患者和其他哺乳动物的单一剂量，每个单位含有经计算预定量
的活性物质，其与适宜的药物赋形剂联合产生预期的治疗效果。

[0199] 用于配制药物组合物的成分纯度高，并且基本上不含潜在的有害污染物(例如至少国家食品级，通常至少分析等级，并且更通常至少药物级)。

[0200] 特别是对人类的消费，优选在根据美国食品药品监督管理局有关规定的优良生产操作规程下制备或配制所述组合物。例如，适宜的制剂可以为无菌的和/或基本上等渗的
和/或完全符合美国食品药品监督管理局的所有良好生产规范。

[0201] 活性化合物可以在宽的剂量范围内是有效的，并且通常以治疗有效量给药。但是，将会理解的是，化合物的实际给药量将会通常由医生根据相关情况来确定，所述相关情况包括：待治疗的条件，选择的给药途径，给药的实际化合物，个体患者的年龄、重量和反应，以及患者症状的严重程度等。

[0202] 本发明化合物的治疗剂量可根据例如如下情况而变化：进行治疗的特定用途、化合物的给药方式、患者的健康状况以及处方医师的判断。在药物组合物中本发明化合物的
比例或浓度可取决于许多因素而变化，所述因素包括剂量、化学特性(例如疏水性)以及给
药途径。例如，可以含水生理缓冲液含有约0.1至约10％w/v化合物的形式提供本发明的化
合物用于肠胃外给药。一些通常剂量为每天约1μg/kg至约1g/kg的体重。在一些实施方式
中，剂量为每天约0.01mg/kg至约100mg/kg的体重。剂量可能取决于如下的可变因素：疾病或病症进展的类型和程度、特定患者的整体健康状况、所选化合物的相对生物有效性、赋形剂的制剂以及其给药途径。可从体外或动物模型试验系统所得到的剂量-反应曲线进行外
推有效剂量。

[0203] 为了制备固体组合物例如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成固体预制剂组合物，所述固体预制剂组合物含有本发明化合物的均匀混合物。当提及这些预制剂
组合物为均匀的组合物时，活性成分通常均匀分布在整个所述组合物中，使得所述组合物
可容易细分到同等有效的单位剂型中，例如片剂、丸剂和胶囊。然后将该固体预制剂细分到上述类型的单位剂型中，所述单位剂型含有例如约0.1至约1000mg本发明的活性成分。

[0204] 本发明的片剂或丸剂可进行包覆或在其他情况下配制以得到提供长效的优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内剂量成分和外剂量成分，外剂量成分为在内剂量成分上的包膜形式。两种成分可通过肠溶层进行分离，肠溶层用于抵抗在胃中的崩解并且允许内成
分完整进入到十二指肠中或延迟释放。各种物质可用于所述肠溶层或包衣，所述物质包括
许多高分子酸以及高分子酸与如下物质的混合物：虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素。

[0205] 其中可并入本发明的化合物和组合物从而口服给药或注射给药的液体形式包括：水溶液，适当调味的糖浆剂,含水或油悬浮剂，以及用食用油调味的乳剂，所述食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油，和酏剂与类似的药物媒介物。

[0206] 吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的含水或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮剂、以及粉末。液体或固体组合物可以包含适宜的如上所述药学上可接受的赋形
剂。在一些实施方式中，所述组合物通过口服或鼻呼吸途径进行给药用于局部或系统性作
用。可通过使用惰性气体使组合物雾化。可以直接从雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可与面具、帐篷状物(tent)或间歇式正压呼吸机连接。可从装置口服给药或经鼻给药溶液、悬浮液或粉末组合物，所述装置以适宜方式递送制剂。局部制剂可包含一种或多种常规载体。
在一些实施方式中，软膏可包含水和一种或多种疏水性载体，所述一种或多种疏水性载体
选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇以及白色 (石油膏)等。乳剂的载体
组合物可基于水与甘油和一种或多种其他成分的组合，所述一种或多种其他成分例如甘油
单硬酸酯、PEG-甘油单硬酸酯和鲸蜡硬脂醇。凝胶可使用异丙醇和水适宜地与其他成分例
如甘油和羟乙基纤维素等组合配制。在一些实施方式中，局部制剂包含至少约0.1、至少约
0.25、至少约0.5、至少约1、至少约2或至少约5wt％的本发明化合物。局部制剂可适宜地封装在管内例如100g，其任选地与指导说明相关联地用于治疗选择适应症，例如牛皮癣或其
他皮肤病症。

[0207] 向患者给药化合物或组合物的量将取决于如下而变化：给药的药物、给药目的(例如预防或治疗)、患者状况以及给药方式等。在治疗应用中，可向已经患有疾病的患者以足以治愈或至少部分抑制疾病的症状及其并发症的量给药组合物。有效剂量将取决于治疗的
病情以及根据主治医生来判断，这取决于例如疾病严重程度以及患者的年龄、重量和一般
情况等因素。

[0208] 向患者给药的组合物可为上述药物组合物的形式。这些组合物可通过常规灭菌技术进行灭菌或可以无菌过滤。水溶液可按原样或冻干包装使用，在给药之前，冻干制剂与无菌含水载体组合。化合物制剂的pH通常将为3到11、更优选5到9以及最优选7到8。将会理解的是，使用某些前述赋形剂,载体或稳定剂将导致形成药物盐。

[0209] 本发明化合物的治疗剂量可根据例如如下而变化：进行治疗的特定用途、化合物的给药方式、患者的健康状况以及处方医师的判断。药物组合物中本发明化合物的比例或
浓度可取决于许多因素而变化，包括剂量、化学特性(例如疏水性)以及给药途径。例如，本发明的化合物可提供为含有约0.1至约10％w/v化合物的含水生理缓冲液用于肠胃外给药。
一些通常剂量为每天约1μg/kg至约1g/kg的体重。在一些实施方式中，剂量为每天约
0.01mg/kg至约100mg/kg的体重。剂量可能取决于如下的可变因素：疾病或病症进展的类型和程度、特定患者的整体健康状况、所选化合物的相对生物有效性、赋形剂的制剂以及其给药途径。可从体外或动物模型试验系统所得到的剂量-反应曲线外推有效剂量。

[0210] V.标记化合物和测定方法

[0211] 本发明的化合物可进一步用于研究如实施例2：体外实验和实施例3：体内实验中所述的生物过程。因此，本发明的另一方面涉及本发明的标记化合物(放射性标记、荧光标记等)，其会不仅用于成像技术而且用于体外和体内两者的测定，用于定位和定量包括人在内的组织样本中的NAMPT，并且通过抑制结合标记化合物用于识别NAMPT配体。因此，本发明包括进行包含所述标记化合物的NAMPT测定。

[0212] 本发明进一步包括本发明的同位素标记化合物。"同位素标记"或"放射性标记"化合物为本发明的化合物，其中一个或多个原子由具有与通常在自然界发现(即天然存在)的
原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子所替代或取代。适宜的可以并入本发明
化合物中的放射性核素(即放射性同位素)包括但不限于，3H(也写为T，氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。并入本申请放射性标记化合物中的放射性核素将取决于此放射性标记化合物的特定应用。例如，对于体外Pim激酶标记和竞争分析，并入3H、14C、82Br、125I、131I或35S的化合物将通常是最有用的。对于放射成像应用，11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br将通常是最有用的。

[0213] 要理解的是，"放射性标记"或"标记化合物"为已经并入至少一种放射性核素的化合物。在一些实施方式中，放射性核素选自以下：3H、14C、125I、35S和82Br。在一些实施方式中，化合物并入1、2或3个氘原子。本领域中已知放射性同位素并入到有机化合物中的合成方
法。

[0214] 具体地，本发明的标记化合物可用于筛选试验以鉴定和/或评价化合物。例如，可通过跟踪标记来监测标记的新合成或鉴定的化合物(即试验化合物)与NAMPT接触时的浓度
变化，进行评价其结合NAMPT的能力。例如，可评价试验化合物(标记)降低结合另一化合物的能力，所述另一化合物已知结合NAMPT(即标准化合物)。因此，试验化合物与标准化合物进行竞争结合NAMPT的能力直接关联到其亲合力。相反，在一些其他筛选试验中，标准化合物为标记的，试验化合物为未标记的。因此，监测标记标准化合物的浓度从而评价标准化合物与试验化合物之间的竞争，并且因此确定试验化合物的相对亲合力。

[0215] VI.试剂盒

[0216] 本申请也包括药物试剂盒，其用于例如治疗或预防NAMPT相关的疾病或病症，例如恶性肿瘤，所述药物试剂盒包括一个或多个容器，所述一个或多个容器容纳包含治疗有效
量的式(I)化合物或其实施方式中的任一种的药物组合物。所述试剂盒可进一步包括各种
常规药物试剂盒组件中的一个或多个，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、
另外的容器等，如对于本领域技术人员将会容易想到的。试剂盒中也可包括说明书，作为插入物或标签的形式，从而表明待给药成分的量、给药规范和/或混合成分的规范。

[0217] 已经描述了本发明的许多实施方式。但是，将会理解的是，在不脱离本发明的精神和范围的前提下可以进行各种修改，因此，其他实施方式在以下权利要求的范围内。