一种萱草的种质创新的方法

摘要

本发明公开了一种萱草的种质创新的方法，包括种子采收冷藏，叠氮化钠溶液药剂配制，种子处理，播种步骤，可以在较短时间内，实现大批量新鲜种子诱变，获得突变株，从而可以从中筛选优异种质，丰富了萱草育种亲本的方法。

权利要求

1.一种萱草的种质创新的方法，其特征在于，包括如下几个步骤：

1）种子采收冷藏：当年成熟的种子，采收后去杂去瘪，立即放置于4-8℃冰箱内冷藏30-

60天，期间每周翻动一次；

2）药剂配制：冷藏处理完毕，种子即将进行药剂处理之前，配制新鲜的叠氮化钠溶液，现配现用，浓度为15mmol/L的叠氮化钠磷酸缓冲溶液；

3）种子处理：冷藏完毕的种子，于水浴锅内20-22℃浸泡8-10小时，使种子充分吸胀，恢复活力，然后，将种子浸泡于叠氮化钠溶液中，处理16-20小时；

4）播种：叠氮化钠处理完毕的种子，用清水冲洗3次，每次15分钟，使残留的药剂被充分洗净，然后播种于128孔穴盘内，基质配比为细泥炭：珍珠岩：蛭石=10:4:3，浇透水，15-30℃促进发芽，生长15-20天后根据幼苗生长表现，筛选变异株系。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，所述叠氮化钠的溶液的配制使用市售pH值为3.0的磷酸缓冲液。

说明书

一种萱草的种质创新的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及园林地被植物，特别是通过化学诱变创制萱草新优种质资源的领域。

背景技术

[0002] 萱草，按照传统的分类学属于百合科萱草属植物，原产中国，东亚，中亚等地区。经过欧美等国家园艺工作者百余年的杂交育种，已经有近9万个品种面世。然而，我国萱草属植物有报道的只有不到一千种，究其原因，就在于育种亲本的匮乏。化学诱变育种是一种非常有效的创制新优种质资源的技术手段，在水稻、玉米、小麦、拟南芥等大田作物和基础研究植物中均有成熟的技术体系。其中应用最多的诱变剂为秋水仙素和甲基磺酸乙酯。秋水仙素在萱草多倍体诱导中的应用已经为世界各地贡献了非常多的大花类型，然而，秋水仙素的诱变主要在倍性育种，对其他性状基本无影响。甲基磺酸乙酯也是很好的诱变剂，目前也有少量关于其在萱草种质创新中的应用。但是作为高效、非定向诱变剂叠氮化钠在萱草种质创新中的应用，尚未见到任何报道。

发明内容

[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种萱草的种质创新的方法。

[0004] 一种萱草的种质创新的方法，包括如下几个步骤：

[0005] 1）种子采收冷藏：当年成熟的种子，采收后去杂去瘪，立即放置于4-8℃冰箱内冷藏30-60天，期间每周翻动一次；

[0006] 2）药剂配制：冷藏处理完毕，种子即将药剂处理之前，配制新鲜的叠氮化钠溶液，现配现用，浓度为9-18mmol/L的磷酸缓冲溶液；

[0007] 3）种子处理：冷藏完毕的种子，于水浴锅内20-22℃浸泡8-10小时，使种子充分吸胀，恢复活力，然后，将种子浸泡于叠氮化钠溶液中，处理8-20小时；

[0008] 4）播种：叠氮化钠处理完毕的种子，用清水冲洗3次，每次15分钟，使残留的药剂被充分洗净，然后播种于128孔穴盘内，基质配比为细泥炭：珍珠岩：蛭石=10:4:3，浇透水，15-30℃促进发芽，生长15-20天后根据幼苗生长表现，筛选变异株系。

[0009] 所述叠氮化钠的溶液的配制使用市售pH值为3.0的磷酸缓冲液

[0010] 本发明有益效果：

[0011] 可以在较短时间内，实现大批量新鲜种子诱变，获得突变株，从而可以从中筛选优异种质，叠氮化钠处理的诱变，往往在株形、叶色、叶形、花色、花型等方面表现突出，这对丰富国内外萱草亲本资源，促进萱草杂交育种工作具有十分重要的意义。

附图说明

[0012] 图1 是萱草种子在15 mmol/L叠氮化钠溶液处理16-20小时所获得的变异株实例图。

具体实施方式

[0013] 本发明采用如下具体实施方式，以下实施例旨在说明本发明，而不是对本发明做限制。

[0014] （1）取材：2016年，选取生长健壮的大花萱草品种“边境警察”和“阿帕奇”两个品种，前者做母本，后者做父本，盛花期，进行杂交，于当年8月20号采收成熟的杂交种子1000余粒，采收后立即置于4-8℃的冰箱中，冷藏30天，备用。期间每周翻动一次，防止种子呼吸不畅和感染霉菌。

[0015] 萱草种子采收之后应立即进行冷藏处理，萱草种子即采即播和次年播种，都会大大降低发芽率和整齐度，冰箱4-8℃冷藏30-60天，均可以达到出苗整齐、出苗速度快的目的。

[0016] （2）配制叠氮化钠溶液：称取叠氮化钠干粉，溶于pH值为3.0的磷酸缓冲液(市售，购自于北京鼎国生物公司，PBS磷酸盐缓冲剂）中，配成终浓度分别为9mmol/l, 12mmol/l, 15mmol/l, 18mmol/l的溶液，备用，低于或者超过这个浓度都会降低种子的诱变效果。

[0017] （3）将上述冷处理好的萱草种子置于20-23℃水浴中，浸泡10小时，使其充分吸胀，激活种子。

[0018] （4）将上述种子分成16份，每份100粒，每个浓度梯度按照8小时，12小时，16小时和20小时进行处理，共计16个处理，所有处理都置于22℃摇床中70-80转/小时摇床内完成。处理完毕，用清水将每个处理的种子清洗3遍，每一遍大约15分钟，清洗好的种子等待育苗。

[0019] （5）将细泥炭、珍珠岩、蛭石按照10:4:3的比例配成混合基质。配好的基质填充于128孔穴盘，将所有处理好的种子一一播种至穴盘中，浇透水，20-25℃条件下促进种子发芽，并于第20天时统计出苗率和变异率。出苗率=出苗数/种子总数×100%，变异率=表型变异数/成苗总数×100%，变异表型按照叶片叶绿素含量变化、叶形变化、彩色叶变异、株形变异来统计分析。播种后一般在15-20天内进行发芽情况统计，少于15天，部分种子因为药剂处理难以发芽，超过20天，种子极易霉烂或丧失活力。经过处理的种子播种于人工控温的大棚内，棚内温度控制在15-30℃之间。低于这个范围导致幼苗生长迟缓，甚至叶片黄化休眠，高于这个温度导致植株徒长，容易感染各种病虫害。在该温度范围内，经过处理的萱草幼苗会在翌年5月份之前完成开花所需要的生长量，部分早花类型可以开花，这比露地种植和非控温大棚种植提早6-10个月完成营养生长。

[0020] （6）诱变种苗在穴盘生长30天后转移至口径15 cm，深12 cm的塑料盆中，以同样的基质定植。并观察生长表现。

[0021] 本实施例的结果如表1所示，按照上述方法进行的萱草叠氮化钠诱变处理，15 mmol/L的诱变剂浓度处理种子16-20 小时，既可以获得较高的出苗率，又能获得较高的变异率，是进行萱草种质创新推荐使用的较佳浓度和时间配合。图1 是萱草种子在15 mmol/L叠氮化钠溶液处理16-20小时所获得的变异株实例图。

[0022]