皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离及定性、定量方法

摘要

本发明涉及检测领域，具体公开了一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，至少包括以下步骤：(1)提供皮肤类用品作为待分离样品，提供分离膜；(2)将样品溶于第一溶剂中，分离出上层清液；(3)将分离膜加入到上层清液中，搅拌，并从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯；所述分离膜为壳聚糖‑氧化石墨烯‑介孔二氧化硅多孔膜。所述皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，至少包括以下步骤：(1)采用上述分离方法得到对羟基苯甲酸酯；(2)将步骤(1)中的对羟基苯甲酸酯采用高效液相色谱法检测，得到定量结果。

权利要求

1.一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，至少包括以下步骤：(1)提供皮肤类用品作为待分离样品，提供分离膜；

(2)将样品溶于第一溶剂中，分离出上层清液；

(3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯；

所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

2.如权利要求1所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，所述第一溶剂选自：甲醇或乙腈中的任意一种。

3.如权利要求1所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，所述分离膜的孔径为5～11nm。

4.如权利要求1所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为

80：(3～10)：100。

5.如权利要求4所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为

80：7：100。

6.如权利要求4或5所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，其特征在于，所述氧化石墨烯为磺化氧化石墨烯。

7.一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，其特征在于，至少包括以下步骤：(a)采用权利要求1～6所述的分离方法得到对羟基苯甲酸酯；

(b)将步骤(1)中的对羟基苯甲酸酯采用高效液相色谱法检测，得到定量结果。

8.如权利要求7所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，其特征在于，所述高效液相色谱法所采用的固定相填料为硅胶类填料。

9.如权利要求8所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，其特征在于，所述硅胶类填料为壳聚糖改性硅胶。

10.如权利要求7所述的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，其特征在于，所述高效液相色谱所使用的检测条件为：柱温40℃；检测波长254nm；进样量50μL；流动相：乙酸铵溶液-甲醇-水，其中，乙酸铵溶液-甲醇-水的体积比为1：1：18；流速0.3mL/min。

说明书

皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离及定性、定量方法

技术领域

[0001] 本发明涉及检测领域，具体涉及一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离及定性、定量方法。

背景技术

[0002] 皮肤类用品是指以涂擦、喷洒或者其它类似的方法，散布于人体表面任何部位(皮肤、毛发、指甲、口唇等)以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的日用化学工业产品。皮肤类用品中最常用的就是皮肤用化妆品以及皮肤用药膏，由于这两类物质中会添
加各种营养物质，容易导致微生物的生长和繁殖，因而必需在配方中加入防腐剂。近年来毒理学研究表明，过量频繁接触防腐剂会导致人体产生过敏等反应，羟基苯甲酸酯类还具有
雌激素活性，因此我国《化妆品卫生规范》把防腐剂作为限用物质，并规定了56种(类)防腐剂的最大允许使用浓度、使用范围和限制条件。因而，非常有必要快速准确的检测羟基苯甲酸酯类防腐剂的含量的分离方法和定性、定量的方法。

发明内容

[0003] 本发明第一个方面提供了一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，至少包括以下步骤：

[0004] (1)提供皮肤类用品作为待分离样品，提供分离膜；

[0005] (2)将样品溶于第一溶剂中，分离出上层清液；

[0006] (3)将分离膜加入到上层清液中，搅拌，并从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯；

[0007] 所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0008] 在一种优选的实施方式中，所述第一溶剂选自：甲醇或乙腈中的任意一种。

[0009] 在一种优选的实施方式中，所述分离膜的孔径为5～11nm。

[0010] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：(3～10)：100。

[0011] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：7：100。

[0012] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，氧化石墨烯为磺化氧化石墨烯。

[0013] 本发明第二个方面提供了一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，至少包括以下步骤：

[0014] (1)按上述分离方法得到对羟基苯甲酸酯；

[0015] (2)将得到的对羟基苯甲酸酯采用高效液相色谱法检测，得到定量结果。

[0016] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱法的固定相填料为硅胶类填料。

[0017] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱法的固定相填料为壳聚糖改性硅胶。

[0018] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱所使用的检测条件为：柱温40℃；检测波长254nm；进样量50μL；流动相：乙酸铵溶液-甲醇-水，其中，乙酸铵溶液-甲醇-水的体积比为1：1：18；流速0.3mL/min。

具体实施方式

[0019] 除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

[0020] 质量、浓度、温度、时间，或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。
例如，1-50的范围应理解为包括选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、
19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、
44、45、46、47、48、49、或50的任何数字、数字的组合、或子范围、以及所有介于上述整数之间的小数值，例如，1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、和1.9。关于子范围，具体考虑从范围内的任意端点开始延伸的“嵌套的子范围”。例如，示例性范围1-50的嵌套子范围可以包括一个方向上的1-10、1-20、1-30和1-40，或在另一方向上的50-40、50-30、50-20和50-10。

[0021] 为了解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，至少包括以下步骤：

[0022] (1)提供皮肤类用品作为待分离样品，提供分离膜；

[0023] (2)将样品溶于第一溶剂中，分离出上层清液；

[0024] (3)将分离膜加入到上层清液中，搅拌，并从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯；

[0025] 所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0026] 皮肤类用品

[0027] 本发明中，所述的皮肤类用品既可以包括皮肤用化妆品也可以包括皮肤用药膏。

[0028] 所述的皮肤用化妆品包括但不限于，化妆水、润肤乳、调理液、保湿乳液、滋养乳液、按摩霜、滋养霜、保湿霜、护手霜、粉底霜、精华液、滋养精华液、防晒乳液、防晒霜、面膜、洁面乳、洁面霜、洁面啫喱、身体乳、沐浴乳、美容液、洗发香波、护发素、剃须膏、染发剂、焗油膏、粉底液、粉底霜、粉底膏、眼影、粉饼、唇彩、唇蜜、唇膏、睫毛膏、眼线笔、眼线液、眼线膏、蜜粉、散粉、腮红、遮瑕笔、遮瑕膏、眉笔、眉粉、眉饼等。

[0029] 所述皮肤用药膏包括但不限于，洗剂、软膏、霜剂、酊剂、硬膏等。

[0030] 当然本发明的分离方法并不限于皮肤类制品中，使用对羟基苯甲酸酯防腐剂的食品或者其他物质均可使用本发明的分离方法。

[0031] 对羟基苯甲酸酯

[0032] 本发明中使用的对羟基苯甲酸酯，没有特别的限制，主要包括对羟基苯甲酸甲酯(methylparaben,MeP)、对羟基苯甲酸乙酯(ethylparaben,EtP)、对羟基苯甲酸丙酯(n-
propylparaben,PrP)、对羟基苯甲酸丁酯(n-butylparaben,BuP)等，其中，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，又名尼泊金酯。由于其在世界上具有应用频率最高、用量最大、用途最广而被国际公认成高效广谱防腐剂，它具有低
毒、高效、稳定、易配伍、广谱等优点，且其不易随pH值的变化而变化的防腐效果，因而广泛应用于医药、日化、食品及各种工业防腐领域包括饮料、酒类、食品果蔬保鲜、医疗器械的清洗消毒剂、化妆品，及热记录材料里的染料和新型酯类有机液晶等有机合成中间体等方面。
另外，因具有非挥发性、低毒、稳定性和良好的杀菌能力，对羟基苯甲酸酯类化合物表现出对抑制真菌效果明显；而其比山梨酸、苯甲酸等效果都要强的抗细菌性能则得益于对羟基
苯甲酸酯类化合物具有的酚羟基结构。

[0033] 分离膜

[0034] 本发明中，所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜为以介孔二氧化硅为基材，壳聚糖与氧化石墨烯共同表
面改性介孔二氧化硅而得。

[0035] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜的制备方法为：

[0036] 将介孔二氧化硅溶于乙醇溶液中，室温下超声分散30min后，并加入硅烷偶联剂，室温下搅拌5h，得到混合溶液1；将壳聚糖溶于醋酸溶液中，室温下搅拌4h，得到混合溶液2；
将氧化石墨烯溶于水中，室温下超声分散2h后，得到混合溶液3；将混合溶液3加入到混合溶液1中，搅拌1h后，再加入混合溶液2，搅拌15h后，离心水洗3次，乙醇洗涤2次，60℃下真空干燥24h后，获得壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0037] 本发明中，所述的壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅均为市售获得；

[0038] 所述的壳聚糖为工业级壳聚糖，购于潍坊市东兴甲壳制品厂。

[0039] 所述的氧化石墨烯购于苏州恒球石墨烯有限公司。

[0040] 所述的介孔二氧化硅购于南京先丰纳米材料科技有限公司。

[0041] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：(3～10)：100。

[0042] 在一种更优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：7：100。

[0043] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜中，所述氧化石墨烯为磺化氧化石墨烯。

[0044] 所述“磺化氧化石墨烯”可以市售获得，也可以通过本领域技术人员所知的合成方法合成得到。

[0045] 在一种优选的实施方式中，所述磺化氧化石墨烯的制备方法为：

[0046] (1)将10重量份的氧化石墨烯溶于乙醇溶液中，并进行超声分30min，然后加入10重量份的乙烯基三氯硅烷，在50℃下搅拌反应20小时，离心洗涤干燥后，得到处理后的氧化石墨烯。然后将处理后的氧化石墨烯溶于乙腈中，再加入苯乙烯磺酸钠和引发剂2，2′-偶氮二异丁腈，在100℃下，反应2h后，将产物水洗3次后，得到磺化氧化石墨烯。

[0047] 在一种优选的实施方式中，所述磺化氧化石墨烯的磺化度为3％～10％。

[0048] 在一种更优选的实施方式中，所述磺化氧化石墨烯的磺化度为5％～8％。

[0049] 在一种最优选的实施方式中，所述磺化氧化石墨烯的磺化度为6％。

[0050] 所述磺化氧化石墨烯的磺化度的测试方法可以采用元素分析法、电导滴定法、气相色谱法、比色法、薄层分析法。

[0051] 在一种优选的实施方式中，所述分离膜的孔径为5～11nm；优选为6～10nm；最优选为8nm。

[0052] 第一溶剂

[0053] 本发明中所使用的第一溶剂并没有特别的限制，能够把皮肤类用品溶解，且对本发明的技术方案没有影响皆可。

[0054] 可以列举的有：甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、戊烷、辛烷、环己烷、环己酮、甲苯环己酮、氯苯、二氯苯、二氯甲烷、乙醚、环氧丙烷、醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、丙酮、甲基丁酮、甲基异丁酮、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚、吡啶、苯酚、二甲基亚砜等。

[0055] 在一种优选的实施方式中，所述第一溶剂选自：甲醇或乙腈中的任意一种。

[0056] 本发明中，采用自制的分离膜，意外的发现，该分离膜对对羟基苯甲酸酯具有非常好的吸附效果，进而达到分离的目的。本发明人猜测可能的原因在于，分离膜上含有丰富的极性基团可以与对羟基苯甲酸酯形成氢键以及部分静电吸附，过滤掉其他杂质，进而实现分离的目的。

[0057] 本发明第二个方面提供了一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，至少包括以下步骤：

[0058] (1)按上述分离方法得到对羟基苯甲酸酯；

[0059] (2)将得到的对羟基苯甲酸酯采用高效液相色谱法检测，得到定量结果。

[0060] 高效液相色谱

[0061] 本发明中所述的高效液相色谱又称高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱、近代柱色谱等。

[0062] 其中，高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

[0063] 高效液相色谱具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广；与气相色谱法相比具有的优点：不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般在室温下分析即可，不需高柱温。

[0064] 固定相

[0065] 本发明，所使用的固定相为硅胶类填料。

[0066] 其中，所述硅胶类填料的化学成分是二氧化硅，物理化学性质极其稳定。硅胶颗粒可以分为球型和无定型两种。球型硅胶由于其可渗透性强，比无定型硅胶更有利于传质，且可减小操作压力，因而更适合用作高相液相色谱填料。考虑到柱效的问题，硅胶颗粒的孔结构是非常重要的参数。因为孔结构不仅影响到孔径的计算，而且影响到孔径分布、孔容及表面积等重要参数，正是这些参数决定着其作为正、反相乃至其它高效液相色谱用填料的性能，且对其作为基质进行化学键合反应以及分离过程与机理等均有不可忽视的影响。孔结
构有几个重要表征参数：平均孔径，比表面积，比孔容和孔径分布等。多孔硅胶可以分为微孔、中孔和大孔硅胶。一般将小于2nm的称为微孔硅胶，对于大于2nm而小于50nm的称为中孔硅胶，超过50nm的称为大孔硅胶。本发明中优选中孔硅胶。

[0067] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱法的固定相填料为硅胶类填料。

[0068] 在一种优选的实施方式中，所述的硅胶类填料可以列举的有：十八烷基硅胶(简称C18柱)、八烷基硅胶(简称C8柱)等。

[0069] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱法的固定相填料为壳聚糖改性硅胶填料。

[0070] 壳聚糖改性硅胶填料中，所使用的壳聚糖为食品级壳聚糖，购于西安大丰收生物科技有限公司。

[0071] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖改性硅胶填料的制备方法为：

[0072] (1)将盐酸浸泡C18硅胶，并进行回流，然后用二次蒸馏水洗至中性，用丙酮洗三次，烘烤除水活化，冷却后保存于干燥器中备用。取经活化的干燥硅胶，加入无水干燥甲苯，搅拌下加入KH-560和三乙胺催化剂。在N2保护下加热回流，冷却，用甲苯抽提，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，真空干燥，得到偶联剂键合硅胶物质，制备得到硅胶前体。

[0073] (2)称取硅胶前体，加热搅拌下，并加入壳聚糖，乙酸、甲苯。滴加高氯酸用作催化剂，在N2保护下加热回流，冷却，调节PH至中性，析出固体，即得壳聚糖改性硅胶填料。

[0074] 在一种优选的实施方式中，所述壳聚糖改性硅胶填料中，壳聚糖与硅胶的重量比为(1～3)：100。

[0075] 色谱柱的填充

[0076] 本发明中，所述色谱柱的填充为将硅胶类填料装填在色谱柱中。

[0077] 在一种优选的实施方式中，色谱柱的填充的方法为：

[0078] (1)将空柱子采用乙醇或丙酮清洗干净，用表面活性剂和去离子水依次清洗干净，留柱备用。

[0079] (2)将清洁的柱管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。配置四氢呋喃：异丙醇＝95％：5％的溶液20mL，称取3g上述自制填料倒入上述溶液中摇动或搅拌均匀后，超声处理。

[0080] (3)使用RPL-ZD10装柱机进行装柱，首先以2Hz排除气泡。色谱柱为4.6mm×150mm的柱子，取20mL丙酮装入匀浆罐中打底，接着快速倒入准备好的匀浆液，如匀浆罐不满用丙酮填满，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，迅速加压到40MPa，直至流出液体为80mL左右，缓慢减小压力直至停泵，停泵30min后再卸柱。拆下己填装好的柱子并装配上带有筛板的柱头，即得。

[0081] 在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱的检测条件为：

[0082] 柱温40℃；检测波长254nm；进样量50μL；流动相：乙酸铵溶液-甲醇-水，其中，乙酸铵溶液-甲醇-水的体积比为1：1：18；流速0.3mL/min。

[0083] 本发明中，皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法并不限于液相色谱，本领域人员所知的其他测试方法均可以使用。可以列举的有：气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、核磁共振法、红外光谱法、液体紫外光谱法、元素分析法、荧光光谱法、热重分析法、差热分析法等。

[0084] 本发明中皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，采用独特的固定相填料，可以快速的分离出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，且不受杂质峰的影响，达到准确定量的效果。

[0085] 在下文中，通过实施例对本发明进行更详细地描述，但应理解，这些实施例仅仅是例示的而非限制性的。如果没有其它说明，所用原料都是市售的。

[0086] 实施例1

[0087] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0088] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0089] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0090] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0091] 所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0092] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、含防腐剂对羟基苯甲酸甲酯
0.5％、其余为去离子水。

[0093] 所述分离膜的制备方法为：

[0094] 将100g介孔二氧化硅溶于500g乙醇中，室温下超声分散30min后，并加入硅烷偶联剂KH550，室温下搅拌5h，得到混合溶液1；将80g壳聚糖溶于200g醋酸溶液中，室温下搅拌
4h，得到混合溶液2；将3g氧化石墨烯溶于20g水中，室温下超声分散2h后，得到混合溶液3；
将混合溶液3加入到混合溶液1中，搅拌1h后，再加入混合溶液2，搅拌15h后，离心水洗3次，乙醇洗涤2次，60℃下真空干燥24h后，获得壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。得到分离膜的孔径为8nm。

[0095] 其中，所述的壳聚糖为工业级壳聚糖，购于潍坊市东兴甲壳制品厂。

[0096] 所述的氧化石墨烯购于苏州恒球石墨烯有限公司。

[0097] 所述的介孔二氧化硅购于南京先丰纳米材料科技有限公司。

[0098] 一种皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法，包括以下步骤：

[0099] (a)采用上述步骤(3)得到的对羟基苯甲酸酯；

[0100] (b)将步骤(1)中的对羟基苯甲酸酯采用高效液相色谱法检测，得到定量结果。

[0101] 所述高效液相色谱的检测条件为：柱温40℃；检测波长254nm；进样量50μL；流动相：乙酸铵溶液-甲醇-水，其中，乙酸铵溶液-甲醇-水的体积比为1：1：18；流速0.3mL/min；固定相为C18柱子。

[0102] 所述高效液相色谱采用外标法，并配制标准溶液；进行线性回归后得到标准曲线方程如下：

[0103] 对羟基苯甲酸甲酯：y＝55.19x-14.15,R＝0.9999；

[0104] 对羟基苯甲酸乙酯：y＝76.52x-9.98,R＝0.9999；

[0105] 对羟基苯甲酸丙酯：y＝30.84x-4.58,R＝0.9999；

[0106] 对羟基苯甲酸丁酯：y＝57.21x-19.60,R＝0.9999。

[0107] 实验测得：样品中仅含有对羟基苯甲酸甲酯，且对羟基苯甲酸甲酯保留时间为1.345min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.475％。

[0108] 实施例2

[0109] 实施例2同实施例1，不同点为所使用的固定相为壳聚糖改性硅胶。

[0110] 壳聚糖改性硅胶的制备方法为：

[0111] (1)将盐酸浸泡100g的C18硅胶，并进行回流，然后用二次蒸馏水洗至中性，用丙酮洗三次，烘烤除水活化，冷却后保存于干燥器中备用。取经活化的干燥硅胶，加入10.24g无水干燥甲苯，室温下搅拌加入30.24g KH-560和1.50g三乙胺催化剂。在N2保护下加热回流，冷却，用甲苯抽提，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，真空干燥，得到偶联剂键合硅胶物质，制备得到硅胶前体。

[0112] (2)称取步骤(1)中硅胶前体，加热搅拌下，并加入1g壳聚糖，10.25g乙酸、20.32g甲苯。滴加1.5g高氯酸用作催化剂，在N2保护下加热回流，冷却，调节pH至中性，析出固体，即得壳聚糖改性硅胶填料。

[0113] 色谱柱的填充的方法为：

[0114] (1)将空柱子采用乙醇或丙酮清洗干净，用表面活性剂和去离子水依次清洗干净，留柱备用。

[0115] (2)将清洁的柱管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。配置四氢呋喃：异丙醇＝95％：5％的溶液20mL，称取3g上述自制填料倒入上述溶液中摇动或搅拌均匀后，超声处理。

[0116] (3)使用RPL-ZD10装柱机进行装柱，首先以2Hz排除气泡。色谱柱为4.6mm×150mm的柱子，取20mL丙酮装入匀浆罐中打底，接着快速倒入准备好的匀浆液，如匀浆罐不满用丙酮填满，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，迅速加压到40MPa，直至流出液体为80mL左右，缓慢减小压力直至停泵，停泵30min后再卸柱。拆下己填装好的柱子并装配上带有筛板的柱头，即得。

[0117] 实验测得：样品中仅含有对羟基苯甲酸甲酯，且对羟基苯甲酸甲酯保留时间为1.140min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.480％。

[0118] 实施例3

[0119] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0120] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0121] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0122] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0123] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、含防腐剂对羟基苯甲酸甲酯
0.5％、其余为去离子水。

[0124] 所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0125] 所述分离膜的制备方法同实施例2，不同点在于，所述壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为8：1：10。得到分离膜的孔径为8nm。

[0126] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0127] 实验测得：样品中仅含有对羟基苯甲酸甲酯，且对羟基苯甲酸甲酯保留时间为1.140min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.482％。

[0128] 实施例4

[0129] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0130] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0131] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0132] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0133] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、含防腐剂对羟基苯甲酸甲酯
0.5％、其余为去离子水。

[0134] 所述分离膜为壳聚糖-氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0135] 所述分离膜的制备方法同实施例3，不同点在于，所述壳聚糖、氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：7：100。得到分离膜的孔径为8nm。

[0136] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0137] 实验测得：样品中仅含有对羟基苯甲酸甲酯，且对羟基苯甲酸甲酯保留时间为1.140min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.485％。

[0138] 实施例5

[0139] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0140] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0141] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0142] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0143] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、含防腐剂对羟基苯甲酸甲酯
0.5％、其余为去离子水。

[0144] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0145] 所述分离膜的制备方法同实施例4，不同点在于，所述壳聚糖、磺化氧化石墨烯、介孔二氧化硅的重量比为80：7：100。

[0146] 所述磺化氧化石墨烯的制备方法为：

[0147] 将10重量份的氧化石墨烯溶于乙醇溶液中，并进行超声分30min，然后加入10重量份的乙烯基三氯硅烷，在50℃下搅拌反应20小时，离心洗涤干燥后，得到处理后的氧化石墨烯。然后将处理后的氧化石墨烯溶于乙腈中，再加入0.5重量份的苯乙烯磺酸钠和引发剂2，
2′-偶氮二异丁腈，在100℃下，反应2h后，将产物水洗3次后，得到磺化氧化石墨烯。

[0148] 磺化氧化石墨烯的磺化度为6％。

[0149] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0150] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0151] 实验测得：样品中仅含有对羟基苯甲酸甲酯，且对羟基苯甲酸甲酯保留时间为1.140min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.50％。

[0152] 实施例6

[0153] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0154] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0155] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0156] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0157] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、防腐剂对羟基苯甲酸甲酯0.3％、防腐剂对羟基苯甲酸乙酯0.2％、其余为去离子水。

[0158] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0159] 所述分离膜的制备方法同实施例5。

[0160] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0161] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0162] 实验测得：样品中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯，其中，对羟基苯甲酸甲酯的保留时间为1.142min；对羟基苯甲酸乙酯的保留时间为2.145min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.3％；对羟基苯甲酸乙酯含量为0.2％。

[0163] 实施例7

[0164] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0165] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0166] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0167] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0168] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、防腐剂对羟基苯甲酸甲酯0.3％、防腐剂对羟基苯甲酸乙酯0.2％、防腐剂对羟基苯甲酸丙酯0.1％、其余为去离子水。

[0169] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0170] 所述分离膜的制备方法同实施例5。

[0171] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0172] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0173] 实验测得：样品中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，其中，对羟基苯甲酸甲酯的保留时间为1.141min；对羟基苯甲酸乙酯的保留时间为
2.138min；对羟基苯甲酸丙酯的保留时间为3.147min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲
酸甲酯含量为0.3％；对羟基苯甲酸乙酯含量为0.2％、对羟基苯甲酸丙酯0.1％。

[0174] 实施例8

[0175] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0176] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0177] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0178] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0179] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、防腐剂对羟基苯甲酸甲酯0.2％、防腐剂对羟基苯甲酸乙酯0.2％、防腐剂对羟基苯甲酸丙酯0.1％、防腐剂对羟基苯甲酸丁
酯0.1％，其余为去离子水。

[0180] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0181] 所述分离膜的制备方法同实施例5。

[0182] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0183] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0184] 实验测得：样品中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，其中，对羟基苯甲酸甲酯的保留时间为1.140min；对羟基苯甲酸乙酯的保留时间为2.140min；对羟基苯甲酸丙酯的保留时间为3.145min；对羟基苯甲酸丁酯
的保留时间为4.152min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.2％；对羟基苯甲酸乙酯含量为0.2％、对羟基苯甲酸丙酯0.1％、对羟基苯甲酸丁酯含量为0.1％。

[0185] 实施例9

[0186] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0187] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0188] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0189] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0190] 所述皮肤类用品为化妆品面霜，配方成分如下：蛇油5％、精制羊毛脂5％、甘油10％、维他命原B 4％、维他命E 5％、香精1％、抗氧剂3％、防腐剂对羟基苯甲酸甲酯
0.15％、防腐剂对羟基苯甲酸乙酯0.15％、防腐剂对羟基苯甲酸丙酯0.15％、防腐剂对羟基苯甲酸丁酯0.15％，其余为去离子水。

[0191] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0192] 所述分离膜的制备方法同实施例5。

[0193] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0194] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0195] 实验测得：样品中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，其中，对羟基苯甲酸甲酯的保留时间为1.145min；对羟基苯甲酸乙酯的保留时间为2.140min；对羟基苯甲酸丙酯的保留时间为3.143min；对羟基苯甲酸丁酯
的保留时间为4.148min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.15％；对羟基
苯甲酸乙酯含量为0.15％、对羟基苯甲酸丙酯0.15％、对羟基苯甲酸丁酯含量为0.15％。

[0196] 实施例10

[0197] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法，包括以下步骤：

[0198] (1)提供1g皮肤类用品作为样品，提供0.1g分离膜；

[0199] (2)将样品溶于100mL甲醇中，分离出上层清液；

[0200] (3)将分离膜加入到上层清液中，50℃下搅拌2h，过滤分离膜，将分离膜进行3次水洗后，并将分离膜置于甲醇溶液中，超声震荡30min，从分离膜上分离出对羟基苯甲酸酯。

[0201] 所述皮肤类用品为治疗皮肤病的白癜风药膏，配方与制备方法如下：将

[0202] 三份无花果叶与一份菟丝子共同榨汁，在该汁液中溶入0.4％的防腐剂(防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯0.10％、对羟基苯甲酸乙酯0.10％、对羟基苯甲酸丙酯0.10％、对羟基苯甲酸丁酯0.10％)，上述制品七份与白蒺藜粉三份放入搅合机中，制成均匀的膏状即为成品。

[0203] 所述分离膜为壳聚糖-磺化氧化石墨烯-介孔二氧化硅多孔膜。

[0204] 所述分离膜的制备方法同实施例5。

[0205] 得到分离膜的孔径为8nm。

[0206] 皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法同实施例2。

[0207] 实验测得：样品中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，其中，对羟基苯甲酸甲酯的保留时间为1.105min；对羟基苯甲酸乙酯的保留时间为2.108min；对羟基苯甲酸丙酯的保留时间为3.11min；对羟基苯甲酸丁酯的保留时间为4.101min。采用外标法测出样品中对羟基苯甲酸甲酯含量为0.10％；对羟基苯
甲酸乙酯含量为0.10％、对羟基苯甲酸丙酯0.10％、对羟基苯甲酸丁酯含量为0.10％。

[0208] 由上述实施例可以看出，本发明的第一个方面提供的皮肤类用品中对羟基苯甲酸酯的分离方法可以非常好的将对羟基苯甲酸酯从皮肤类用品中分离出来，例如本发明的实
施例5的技术方案可以做到完全的将对羟基苯甲酸甲酯从化妆品面霜中分离出来，进而达
到非常好的分离效果，分离出的对羟基苯甲酸甲酯既可以进行后续的液相色谱检测，又可
以进行干燥回收产品。本发明的第二个方面提供的对羟基苯甲酸酯的定性、定量方法可以
非常稳定将对羟基苯甲酸酯检测出来，且出峰时间能够保持稳定，排除了杂质的干扰。

[0209] 前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施
例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发
明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范
围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。