一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法

摘要

本发明为一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法，该方法包括以下步骤：（1）取含有人参或三七的中药组合物或中药制剂，制备供试品溶液；（2）取不含人参、三七的成品制备阴性样品溶液；（3）取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5‑2mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液；（4）检测；（5）结果分析。本发明可同时鉴别人参、三七两味药材，并对指标成分人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rf和人参皂苷Rg1同时进行鉴别。该检测方法具有简便、易行、专属性强、重复性好的特点。

权利要求

1.一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法, 其特征在于包括以下步骤：

（1）制备供试品溶液：取含有人参或三七的中药组合物或中药制剂，除去包衣，研细，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2-3ml使溶解，作为供试品溶液；

（2）制备阴性样品溶液：按中药组合物或中药制剂的制备工艺制备不含人参、三七的成品，研细，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2-3ml使溶解，作为阴性样品溶液；

（3）制备对照品溶液：取人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷 R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5-2mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液；

（4）检测：取步骤（3）所述的混合对照品溶液1-3μl、步骤（1）所述的供试品溶液0.3-3μl和步骤（2）所述的阴性样品溶液0.3-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：

6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度

40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光365nm下检视；

（5）结果分析：含有人参、三七的中药制剂的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；含有人参、不含三七的中药制剂的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；含有三七、不含人参的中药制剂的供试品色谱中，对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；不含人参、三七的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点。

说明书

一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药物制备技术领域，具体为一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法。

背景技术

[0002] 人参、三七均属补益药，在中药制剂中经常单用或合用，合用时多为君臣药，二者所含化学成分同属皂苷类，结构相似，薄层色谱行为也相近，给含有人参、三七药材的中药制剂制定标准带来困难。

[0003] 2015年《中国药典》中对含有人参、三七的中药制剂采用薄层色谱鉴别方法鉴定时，以人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rg1和三七皂苷 R1为对照品进行鉴别，但在实际工作中，由于三七皂苷R1和人参皂苷Re的Rf值极为接近，难以分离，以致于可能出现以人参替代三七或三七替代人参投料的假阳性结果，影响中药制剂中对人参、三七鉴别的专属性。

发明内容

[0004] 本发明正是针对以上技术问题，提供一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法。该检测方法具有简便、易行、专属性强、重复性好的特点，有利于完善含有人参或三七的中药制剂的质量标准，防止生产上出现以人参替代三七或三七替代人参投料的中药制剂，有助于提高该类中药制剂的临床使用安全性和稳定性。

[0005] 本发明的具体技术方案如下：

[0006] 一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法,包括以下步骤：

[0007] （1）制备供试品溶液：取含有人参或三七的中药组合物或中药制剂，除去包衣，研细，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2-3ml使溶解，作为供试品溶液；

[0008] （2）制备阴性样品溶液：按中药组合物或中药制剂的制备工艺制备不含人参、三七的成品，研细，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2-3ml使溶解，作为阴性样品溶液；

[0009] （3）制备对照品溶液：取人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷 R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5-2mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液；

[0010] （4）检测：取步骤（3）所述的混合对照品溶液1-3μl、步骤（1）所述的供试品溶液（可制备3批，分别为1批、2批、3批）0.3-3μl和步骤（2）所述的阴性样品溶液0.3-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光365nm下检视；（10%硫酸乙醇溶液的配置:是指用10ml的浓硫酸加入到90ml的无水乙醇中，即得。采用的浓硫酸的质量分数在95%-98%。

[0011] （5）结果分析：含有人参、三七的中药制剂的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；含有人参、不含三七的中药制剂的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；含有三七、不含人参的中药制剂的供试品色谱中，对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点；不含人参、三七的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点。

[0012] 以上所有的%，如无特殊说明，均表示为其质量百分含量。

[0013] 本发明的积极效果体现在：

[0014] （一）、该检测方法具有简便、易行、毒性低（该检测方法展开系统中所用试剂均比中国药典提供的有关人参、三七检测方法中所用试剂毒性低，主要是本检测方法用二氯甲烷替代三氯甲烷，避免了三氯甲烷的致癌性）、专属性强、重复性好的特点。

[0015] （二）、有利于完善含有人参或三七的中药制剂的质量标准，防止生产上出现以人参替代三七或三七替代人参投料的中药制剂，有助于提高该类中药制剂的临床使用安全性和稳定性。

[0016] 附图说明：

[0017] 图1-1-1为展开系统Ⅰ展开的薄层色谱图；

[0018] 图1-1-2为展开系统Ⅱ展开的薄层色谱图；

[0019] 图1-1-3为展开系统Ⅲ展开的薄层色谱图；

[0020] 图1-1-4为展开系统Ⅳ展开的薄层色谱图，

[0021] 其中，1为混合对照品1μl；2为供试品点样0.5μl；3为供试品点样0.5μl；4为供试品点样0.5μl；5为阴性样品0.5μl。

[0022] 图1-2-1为点状点样方式点样后展开的薄层色谱图；

[0023] 图1-2-2为带状点样方式点样后展开的薄层色谱图；

[0024] 其中，1为混合对照品1μl；2为供试品点样0.2μl；3为供试品点样0.3μl；4为供试品点样0.4μl；5为供试品点样0.5μl。

[0025] 图1-3供试品溶液薄层鉴别点样量的薄层色谱图；

[0026] 其中，1为混合对照品1μl；2为供试品点样0.2μl；3为供试品点样0.3μl；4为供试品点样0.4μl；5为供试品点样0.5μl。

[0027] 图1-4-1为采用天津思利达科技有限公司——可裁剪板展开的薄层色谱图；

[0028] 图1-4-2为采用天津思利达科技有限公司——高效板展开的薄层色谱图；

[0029] 图1-4-3为采用青岛裕民源硅胶试剂厂——玻璃板展开的薄层色谱图；

[0030] 图1-4-4为采用青岛海洋化工厂分厂——玻璃板展开的薄层色谱图；

[0031] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品0.3μl。

[0032] 图1-5-1为温度35℃环境中展开的薄层色谱图；

[0033] 图1-5-2为温度30℃环境中展开的薄层色谱图；

[0034] 图1-5-3为温度25℃环境中展开的薄层色谱图；

[0035] 图1-5-4为温度20℃环境中展开的薄层色谱图；

[0036] 图1-5-5为温度5℃环境中展开的薄层色谱图；

[0037] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0038] 图1-6-1为相对湿度40%的湿度环境中展开的薄层色谱图；

[0039] 图1-6-2为相对湿度88%的湿度环境中展开的薄层色谱图；

[0040] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试[0041] 品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0042] 图1-7-1专属性考察的薄层色谱图；

[0043] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0044] 图2-1 康尔心胶囊中人参、三七供试品溶液点样量的薄层鉴别色谱图；

[0045] 其中，1：混合对照品1.5μl；2：供试品点样0.2μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.4μl；5：供试品点样0.5μl；6：供试品点样0.6μl。

[0046] 图2-2康尔心胶囊中人参、三七专属性考察的薄层色谱图，

[0047] 其中，1：混合对照品1.5μl；2：供试品1点样0.5μl；3：供试品2点样0.5μl；4：供试品3点样0.5μl；5：阴性样品点样0.5μl

[0048] 图3-1益心舒片中人参供试品溶液点样量的薄层鉴别色谱图;

[0049] 其中，1：混合对照品2μl; 2：供试品点样1μl; 3：供试品点样2μl; 4：供试品点样3μl; 5：供试品点样4μl; 6：供试品点样5μl

[0050] 图4益心舒片中人参专属性考察的薄层色谱图；

[0051] 其中，1：混合对照品2μl；2：供试品1点样3μl；3：供试品2点样3μl；4：供试品3点样3μl；5：阴性样品点样3μl。

[0052] 图4-1 羊藿三七胶囊中三七供试品溶液点样量的薄层鉴别色谱图；

[0053] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.2μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.4μl；5：供试品点样0.5μl；6：供试品点样0.6μl。

[0054] 图4-2为羊藿三七胶囊中三七专属性考察的薄层色谱图。

[0055] 其中，1：混合对照品1μl；2：供试品1点样0.3μl；3：供试品2点样0.3μl；4：供试品3点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

具体实施方式

[0056] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

[0057] 1 仪器和试药：

[0058] KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DK-98-Ⅱ电热恒温水浴（天津市秦斯特仪器有限公司）、硅胶G薄层板（天津思利达科技有限公司，可裁剪板，批号：160122），硅胶60A（天津思利达科技有限公司，可裁剪型高效板，批号：16025），硅胶G薄层板（青岛海浪硅胶干燥剂有限公司，玻璃板，批号：20150502），硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，玻璃板，批号：20160611），薄层色谱扫描仪（CAMAG，made in Switzerland）、自动点样仪（CAMAG，made in Switzerland）、人参皂苷Rf（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111719-201104）、人参皂苷Rg（1 中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110703-201529）、人参皂苷Re（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110754-201525）、人参皂苷Rb1（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110704-201424）、三七皂苷R（1 中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110745-201318）；甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇均为分析纯。

[0059] 防痴丹，其中药组合物的配方组成为：人参181.1g、川芎 181.1g、三七90.5g、水蛭90.5g、冰片5.434g、麝香 1.811g。

[0060] 防痴丹的具体制备方法如下：按比例称取以上六味原料药，水蛭粉碎成粗粉，加10倍质量水微微沸腾煎煮，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，滤过，浓缩至相对密度为1.0，加乙醇至浓度为60wt%，静置24小时，滤过，取药渣备用；人参、川芎、三七三味药加总质量6倍60wt%的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至适量，将上述药渣与浓缩液混溶，喷雾干燥，制成干膏粉；冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和适量辅料，混匀，制成颗粒，压制1000片，包薄膜衣，即得。

[0061] 实验例1：一种中药组合物即防痴丹中人参、三七的薄层色谱鉴别

[0062] 1. 供试品溶液的制备：取防痴丹20片，除去包衣，研细，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液。

[0063] 2. 制备阴性样品溶液：按防痴丹的制备工艺制备不含人参、三七的成品，研细，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1.5ml使溶解，作为阴性样品溶液。

[0064] 3. 对照品溶液的制备：取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品、人参皂苷Rg1对照品及三七皂苷R1对照品加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。

[0065] 4. 薄层方法选择

[0066] 4.1展开系统的选择

[0067] 展开系统Ⅰ：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（体积比为15:40:22:10，10℃以下放置的下层溶液）

[0068] 展开系统Ⅱ：氯仿-甲醇-水（体积比为13:7:2，10℃以下放置的下层溶液）[0069] 展开系统Ⅲ：正丁醇-乙酸乙酯-水（体积比为4:1:5，10℃以下放置的上层溶液）[0070] 展开系统Ⅳ：二氯甲烷：无水乙醇：水（体积比为90：45：6.5）

[0071] 吸取上述对照品溶液1μl、供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c和阴性样品各0.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别用展开系统Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。测试结果见图1-1-1至图1-1-4不同展开系统展开的薄层色谱图，具体为：
图1-1-1展开系统Ⅰ展开的薄层色谱图；图1-1-2展开系统Ⅱ展开的薄层色谱图；图1-1-3展开系统Ⅲ展开的薄层色谱图；图1-1-4展开系统Ⅳ展开的薄层色谱图，其中，1为混合对照品
1μl；2为供试品点样0.5μl；3为供试品点样0.5μl；4为供试品点样0.5μl；5为阴性样品0.5μl。

[0072] 结论：经分析四种不同展开系统的薄层色谱图可知，展开系统Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的薄层色谱图只能显出四个斑点，说明此三种系统均不能分离五种对照品，而展开系统Ⅳ能将五种对照品分离，并且展开系统Ⅳ相比展开系统Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，配置方法更简便，系统所用试剂毒性较低，故选择展开系统Ⅳ作为本品薄层鉴别的展开系统。

[0073] 4.2点样方式选择

[0074] 由于展开系统Ⅳ展开的薄层色谱图中三七皂苷R1和人参皂苷Re的斑点距离较近，分离度较差，故考察点状点样和带状点样，以期使此二种成分更好地分离。具体测试结果见图1-2-1和图1-2-2，不同点样方式点样后展开的薄层色谱图，具体为：图1-2-1为点状点样展开的薄层色谱图；图1-2-2为带状点样展开的薄层色谱图，其中，1为混合对照品1μl；2为供试品点样0.3μl；3为供试品点样0.3μl；4为供试品点样0.3μl；5为阴性样品0.3μ。

[0075] 结论：比较不同点样方式点样后展开的薄层色谱图可见，带状点样后展开的薄层色谱图斑点更清晰，分离度较好，故选用带状点样。

[0076] 4.3点样量考察

[0077] 按照选定的薄层鉴别方法，取对照品溶液1μl，供试品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光和紫外光灯（365nm）下检视。测试结果见图1-3 供试品溶液点样量的薄层鉴别色谱图，其中，1为混合对照品1μl；2为供试品点样0.2μl；3为供试品点样0.3μl；
4为供试品点样0.4μl；5为供试品点样0.5μl。

[0078] 结论：分析供试品溶液不同点样量的薄层色谱图可得，点样0.3μl时主斑点显色较清晰，且分离度较好，故确定本品供试品溶液的点样量为0.3μl。

[0079] 5.耐用性考察

[0080] 5.1不同薄层板的考察

[0081] 选取四个不同厂家的硅胶G薄层板，分别取混合对照品溶液1μl，和供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c和阴性样品溶液各0.3μl，点于同一硅胶G薄层板上，按照已选定的薄层色谱条件展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光和紫外光灯（365nm）下检视。测试不同薄层板展开的效果，图1-4-1为天津思利达科技有限公司——可裁剪板；图1-4-2为天津思利达科技有限公司——高效板；图1-4-3为青岛裕民源硅胶试剂厂——玻璃板；图1-4-4为青岛海洋化工厂分厂——玻璃板。其中，1：混合对照品1μl 2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品0.3μl。

[0082] 结论：分析比较不同薄层板展开的薄层色谱图，结果表明在已选定的薄层色谱条件下，不同薄层板均能达到鉴别目的。

[0083] 5.2温度考察

[0084] 在相对湿度固定为60%的条件下，分别改变薄层展开环境的温度，取点好样的薄层板，置5℃和35℃环境中展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光和紫外光灯（365nm）下检视。测试不同相对温度环境中展开的薄层色谱图，图1-5-1为温度35℃环境中展开的薄层色谱图；图1-5-2为温度30℃环境中展开的薄层色谱图；
图1-5-3为温度25℃环境中展开的薄层色谱图；图1-5-4为温度20℃环境中展开的薄层色谱图；图1-5-5为温度5℃环境中展开的薄层色谱图。其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样
0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0085] 结论：在5℃环境中展开的薄层色谱图各主斑点清晰，且分离度较好；在35℃环境中展开的薄层色谱图斑点模糊，且分离度较差，表明高温对本品薄层色谱鉴别影响较大。另考察室温30℃、25℃和20℃环境中该鉴别方法的可行性，可见30℃、25℃环境中展开的薄层色谱图斑点仍不清晰，分离度较差，20℃时可达到鉴别目的，故该薄层鉴别方法在5℃～20℃耐用性良好。

[0086] 5.3湿度考察

[0087] 在温度固定为5℃的条件下，分别改变薄层展开环境的相对湿度，取点好样的薄层板，分别置相对湿度为40%和88%的环境中展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光和紫外光灯（365nm）下检视。测定不同相对湿度环境中展开的薄层色谱图，图1-6-1为相对湿度40%的湿度环境中展开的薄层色谱图；图1-6-2为相对湿度88%的湿度环境中展开的薄层色谱图。其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0088] 结论：该薄层展开在相对湿度40%和88%环境中主斑点清晰，分离度好，故该法在相对湿度40%～88%环境中耐用性良好。

[0089] 6.专属性考察

[0090] 取步骤3所述的混合对照品溶液1μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.3μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视，观察阴性有无干扰。具体见图图1-7-1，专属性考察的薄层色谱图，其中， 1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.3μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0091] 结论：不含人参、三七的供试品在皂苷类对照品斑点相应的位置上无干扰，表明该薄层鉴别方法的专属性良好。

[0092] 综合以上实验结果，同时鉴别该中药组合物制剂中人参、三七的检测方法如下：取步骤3所述的混合对照品溶液1μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.3μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：
6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度
40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。该中药组合物的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点，说明该中药组合物同时含有人参、三七；不含人参、三七的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点，说明该检测方法专属性强，阴性无干扰。

[0093] 实验例2：市售康尔心胶囊或根据中国药典处方制备康尔心胶囊浸膏中人参、三七的薄层色谱鉴别

[0094] 1. 制备供试品溶液：取康尔心胶囊浸膏，研细，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

[0095] 2. 制备阴性样品溶液：按康尔心胶囊的制备工艺制备不含人参、三七的成品，研细，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为阴性样品溶液。

[0096] 3. 制备对照品溶液：取人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷 R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液。

[0097] 4. 点样量考察

[0098] 取步骤3中混合对照品溶液1μl，步骤2中供试品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl、0.6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水10℃为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。见图2-1 供试品溶液薄层鉴别点样量的考察，其中，1：混合对照品1.5μl；2：供试品点样0.2μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.4μl；5：供试品点样0.5μl；6：供试品点样0.6μl。

[0099] 结论：分析供试品溶液不同点样量的薄层色谱图可得，点样0.5μl时主斑点显色较清晰，且分离度较好，故确定本品供试品溶液的点样量为0.5μl。

[0100] 5.专属性考察

[0101] 取步骤3所述的混合对照品溶液1.5μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.5μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视，观察阴性有无干扰。见图2-2专属性考察的薄层色谱图，其中，1：混合对照品1.5μl；2：供试品1点样0.5μl；3：供试品2点样0.5μl；4：供试品3点样0.5μl；5：阴性样品点样0.5μl。

[0102] 结论：不含人参、三七的供试品在皂苷类对照品色谱斑点相应的位置上无干扰，表明该薄层鉴别方法的专属性良好。

[0103] 综合以上实验结果，同时鉴别康尔心胶囊中人参、三七的检测方法如下：取步骤3所述的混合对照品溶液1.5μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.5μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以
10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。康尔心胶囊的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1、对照品人参皂苷Rf和对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点，说明康尔心胶囊中同时含有人参、三七；不含人参、三七的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点，说明该检测方法专属性强，阴性无干扰。

[0104] 实验例3：市售益心舒片或根据中国药典处方制备益心舒片浸膏中人参的薄层色谱鉴别

[0105] 1. 制备供试品溶液：取益心舒片浸膏，研细，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

[0106] 2. 制备阴性样品溶液：按益心舒片的制备工艺制备不含人参的成品，研细，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为阴性样品溶液。

[0107] 3. 制备对照品溶液：取人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷 R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液。

[0108] 4. 点样量考察

[0109] 取步骤3中混合对照品溶液2μl，步骤2中供试品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。见图3-1 供试品溶液薄层鉴别点样量的考察，其中，1：混合对照品2μl；2：供试品点样1μl；3：供试品点样2μl；4：供试品点样3μl；5：供试品点样4μl；6：供试品点样5μl。

[0110] 结论：分析供试品溶液不同点样量的薄层色谱图可得，点样3μl时主斑点显色较清晰，且分离度较好，故确定本品供试品溶液的点样量为3μl。

[0111] 5.专属性考察

[0112] 取步骤3所述的混合对照品溶液2μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各3μl和步骤2所述的阴性样品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度
40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以
10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视，观察阴性有无干扰。见图4专属性考察的薄层色谱图，其中，1：混合对照品2μl；2：供试品
1点样3μl；3：供试品2点样3μl；4：供试品3点样3μl； 5：阴性样品点样3μl。

[0113] 结论：不含人参的供试品在皂苷类对照品色谱斑点相应的位置上无干扰，表明该薄层鉴别方法的专属性良好。

[0114] 综合以上实验结果，鉴别益心舒片中人参的检测方法如下：取步骤3所述的混合对照品溶液2μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各3μl和步骤2所述的阴性样品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。益心舒片的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品人参皂苷Rf、对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点，在和对照品三七皂苷 R1的色谱相应位置上，日光下无相同颜色的斑点，紫外光下无相同颜色的荧光斑点，说明益心舒片中含有人参，不含三七，并且不存在用三七替代人参的现象；
不含人参的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点，说明该检测方法专属性强，阴性无干扰。

[0115] 实验例4：市售羊藿三七胶囊或根据中国药典处方制备羊藿三七胶囊浸膏中三七的薄层色谱鉴别

[0116] 1. 制备供试品溶液：取羊藿三七胶囊浸膏，研细，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

[0117] 2. 制备阴性样品溶液：按羊藿三七胶囊的制备工艺制备不含三七的成品，研细，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为阴性样品溶液。

[0118] 3. 制备对照品溶液：取人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷Rf对照和三七皂苷 R1对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含1mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液。

[0119] 4. 点样量考察

[0120] 取步骤3中混合对照品溶液1μl，步骤2中供试品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl、0.6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。见图4-1 供试品溶液薄层鉴别点样量的考察，其中，1：混合对照品1μl；2：供试品点样0.2μl；3：供试品点样0.3μl；4：供试品点样0.4μl；5：供试品点样0.5μl；6：供试品点样0.6μl。

[0121] 结论：分析供试品溶液不同点样量的薄层色谱图可得，点样0.3μl时主斑点显色较清晰，且分离度较好，故确定本品供试品溶液的点样量为0.3μl。

[0122] 5.专属性考察

[0123] 取步骤3所述的混合对照品溶液1μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.3μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水10℃为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃、相对湿度40%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视，观察阴性有无干扰。见图4-2，专属性考察的薄层色谱图，其中，1：混合对照品1μl；2：供试品1点样0.3μl；3：供试品2点样0.3μl；4：供试品3点样0.3μl；5：阴性样品点样0.3μl。

[0124] 结论：不含人参、三七的供试品在皂苷类对照品色谱斑点相应的位置上无干扰，表明该薄层鉴别方法的专属性良好。

[0125] 综合以上实验结果，鉴别羊藿三七胶囊中三七的检测方法如下：取步骤3所述的混合对照品溶液1μl、步骤1所述的供试品溶液a、供试品溶液b、供试品溶液c各0.3μl和步骤2所述的阴性样品溶液0.3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90：45：6.5的二氯甲烷-无水乙醇-水为展开剂，展开剂置于层析缸中，于温度5℃-20℃、相对湿度40%-80%的环境中饱和20分钟，然后放入薄层板，继续预饱和30分钟后，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰，分别在日光及紫外光（365nm）下检视。羊藿三七胶囊的供试品色谱中，在和对照品人参皂苷 Rb1、对照品人参皂苷Re、对照品三七皂苷 R1、对照品人参皂苷 Rg1的色谱相应位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点，在和对照品人参皂苷Rf的色谱相应位置上，日光下无相同颜色的斑点，紫外光下无相同颜色的荧光斑点，说明羊藿三七胶囊中含有三七，不含人参，并且不存在用人参替代三七的现象；不含三七的阴性样品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上，日光下不显斑点，紫外光下不显荧光斑点，说明该检测方法专属性强，阴性无干扰。

[0126] 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。