一种稳定的血清铁检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种血清铁亚铁嗪法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过将试剂R1与试剂R2的缓冲液更换为60mM pH为4.2的Tris缓冲液，同时将试剂R1的表面活性剂更换为TritonX‑100，提高了试剂盒的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好，有利于在市场中进一步的推广使用。

权利要求

1.一种血清铁检测试剂盒，其特征在于包含试剂R1和试剂R2；试剂组成如下：试剂R1组成为：60mmol/LpH 4.2的Tris缓冲液、100mmol/L抗坏血酸、10mmol/L叠氮钠、1％TritonX-

100；试剂R2组成为：60mmol/LpH 4.2的Tris缓冲液、50mmol/L亚铁嗪、10mmol/L叠氮钠；

所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1:R2＝200:50。

2.根据权利要求1所述的血清铁检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为

4.2的Tris缓冲液。

3.根据权利要求1所述的血清铁检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为

4.2的Tris缓冲液。

4.根据权利要求1所述的血清铁检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为570nm。

说明书

一种稳定的血清铁检测试剂盒

技术领域

[0001] 本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种血清铁免疫比浊法检测试剂盒。

背景技术

[0002] 铁是人体内的主要微量元素之一，常以三价铁离子的形式与转铁蛋白结合并进行运输。铁在细胞代谢的过程中具有重要作用，适量的铁在生物机体氧转运、细胞生物氧化、细菌致病性、氧自由基的控制、细胞中DNA复制及细胞繁殖等方面都有重要作用。此外，铁离子还可以参与血红蛋白、肌红蛋白以及人体必需酶的合成，在人体代谢及各种生理活动过程中具有至关重要的作用。

[0003] 正常情况下，人体每天由尿液、汗液等排出的铁与吸收的铁含量保持平衡。在正常生理状态下，约5%的铁由肠道吸收来满足人体的正常生理需求，约95%的铁来源于巨噬细胞，红细胞衰老裂解后被巨噬细胞吞噬，其解离出的铁离子泵回血液再利用。人体的铁主要分为两大部分，第一部分是功能铁，含量为35 45mg/kg，主要是血红蛋白，还有少量的肌红~蛋白及细胞代谢、生长、分化所需的含铁酶。另一部分为储存铁，主要分布在肝脏、脾脏及骨髓的单核巨噬细胞，以铁蛋白及含铁血黄素的形式存在。

[0004] 人体内储存铁的含量波动较大，为0 20mg/kg，超过此值则为铁过载。过多的铁沉~积在肝脏、脾脏、胰腺、骨髓、心肌、肾脏、肠粘膜、关节软骨及内分泌器官等部位，其中肝脏和心肌损伤可能出现严重的临床并发症。人体内铁缺乏可引起缺铁性贫血等疾病，但铁过多也会对人体产生毒害作用，引起肝炎、肝细胞坏死等疾病。肝脏是铁储存的主要器官，尤其是肝实质细胞中含量最多，铁含量过多时肝脏是最主要的受损器官。研究表明，铁超载致使肝细胞损伤加重，同时促进肝细胞癌及肝纤维化的发生。

[0005] 机体的铁代谢是相对封闭的，主要是循环再利用。人体对铁的排泄是持续的、强制性的、有一定限度的，不会因为铁的超负荷而增加铁的排泄。巨噬细胞释放铁主要是以转铁蛋白的形式，其次还存在有毒性的非转铁蛋白结合铁的形式。细胞外与铁蛋白结合的铁会通过细胞内吞作用进入细胞内的不稳定铁库，此种形式的铁有很高的毒性。细胞内暂时无用的铁与载脂蛋白结合进行储存，这种铁蛋白是没有毒性的。当这种铁蛋白的含量超过不稳定铁库容量时，铁蛋白就会变性，形成含铁血黄素，这种形式的铁毒性更高。不稳定铁库中有二价铁，也有三价铁，二价铁可以与脂质过氧化物反应，产生羟基自由基和脂质过氧化物，损害细胞膜、蛋白质和核酸，进而致使细胞死亡及器官功能障碍。含铁血黄素的慢性沉积，引发肝细胞坏死、肝硬化，少数还会发展为肝癌。

[0006] 血清铁是临床上常测的微量元素之一，是鉴别诊断贫血，辅助诊断肝病和肿瘤的指标，其测定在临床上愈来愈受到人们的重视。在临床上，血清铁降低见于缺铁饮食、吸收不良、慢性失血、妊娠，或婴幼儿生长发育需铁量增高所致缺铁性贫血及慢性感染、肝硬化、尿毒症、肾病综合症。血清铁升高见于铁剂治疗过量、溶血性贫血、再生障碍性贫血、巨幼细胞贫血、血红蛋白生成障碍性贫血及急性肝炎、肝细胞坏死等。

[0007] 血清铁的检测方法有：亚铁嗪法比色法、火焰原子吸收光谱法光法、干化学法等，这些方法在灵敏度、特异度、准确性方面都有很大差异。在酸性条件下，血清铁从与其结合的转铁蛋白上游离出来，同时三价铁被还原为亚铁离子（二价铁），亚铁离子与亚铁嗪反应形成紫色复合物。在570 nm处测其吸光度变化，与标本中的铁离子浓度成正比。测定血清中的铁对临床许多疾病的诊断和疗效观察都有非常重要的临床意义。

[0008] 鉴于此，本发明在亚铁嗪比色法的基础上，优化反应体系，选用Tris缓冲液及表面活性剂TritonX-100，显著改善了试剂的稳定性，发现了一种更稳定的血清铁检测试剂。

发明内容

[0009] 本发明的目的是提供一种稳定的用于检测血清铁的试剂盒，该试剂盒采用亚铁嗪比色法。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性和线性相关性比常规的检测试剂盒要好，有利于试剂在临床上的推广应用。

[0010] 基本原理：

[0011] 在酸性条件下，血清铁从与其结合的转铁蛋白上游离出来。同时，三价铁被还原为亚铁离子（二价铁），亚铁离子与亚铁嗪反应形成紫色复合物。在570 nm处测得的吸光度变化，与标本中的铁离子浓度成正比。

[0012] 本发明是通过以下步骤得到的：

[0013] 一种血清铁检测试剂盒，它包含试剂R1和试剂R2。其特征在于，试剂组成如下：试剂R1为60mmol/L pH 4.2的Tris缓冲液、100mmol/L抗坏血酸、10mmol/L叠氮钠、1% TritonX-100；试剂R2为60mmol/L pH 4.2的Tris缓冲液、50mmol/L亚铁嗪、10mmol/L叠氮钠。

[0014] 所述的血清铁检测试剂盒，其特征在于所述表面活性剂为TritonX-100。

[0015] 所述的血清铁检测试剂来检测血清铁的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为570nm。

[0016] 所述的血清铁检测试剂，试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1:R2=200: 50。

[0017] 本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法见附图3：

[0018] 加入生理盐水、样本或校准品20μl，再加入200μl 的R1试剂预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入100μl的R2试剂反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。

[0019] 本发明的有益效果：

[0020] 1）试剂R1和试剂R2采用新的缓冲体系，改善了试剂的稳定性；

[0021] 2）试剂R1采用新的表面活性剂TritonX-100，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂的准确度产生影响；

[0022] 3）试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步的推广。

附图说明

[0023] 图1为两种试剂的相关性曲线图；

[0024] 图2为两种试剂效期稳定性曲线图；

[0025] 图3为本发明试剂盒使用方法流程图，

[0026] 图中R1:试剂1，R2:试剂2，S:校准品，U:样本。

具体实施方式

[0027] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

[0028] 实施例1

[0029] 一种常规的血清铁检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。

[0030] 其中试剂R1组成为：

[0031] pH 4.2 Tris缓冲液                    60mmol/L

[0032] 抗坏血酸                             100mmol/L

[0033] 叠氮钠                               10mmol/L

[0034] 表面活性剂TritonX-100                1%

[0035] 试剂R2组成为：

[0036] pH 4.2 Tris缓冲液                    60mmol/L

[0037] 亚铁嗪                               50mmol/L

[0038] 叠氮钠                               10mmol/L

[0039] 本实施例所述试剂R1和试剂R2，配置时需先加入缓冲物质Tris，用盐酸调到适当pH值后，再添加其它物质。本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用终点法进行测定，操作如下：

[0040] 加入生理盐水、样本或校准品20μl，再加入200μl 的R1试剂预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入100μl的R2试剂反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。

[0041] ΔA＝A2- A1

[0042] 血清铁含量（μmol/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准

[0043] 测定：检测样本   ∆A标准：标准品

[0044] 实施例2

[0045] 准确度验证试验：将实施例1的血清铁检测试剂作为实验组，市场上获得认可的一种准确度好、稳定性好的血清铁检测试剂盒作为对照组进行检测，对20个临床血清样本进行检测，检测结果如表1所示。获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示），结果表明，两组试剂盒的相关系数为0.9989，说明两者相关性比较好。证明本发明试剂盒添加及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。

[0046] 表1实施例1试剂与市场认可的血清铁检测试剂盒对比检测结果

[0047]

[0048] 实施例3

[0049] 线性相关性验证试验：配制铁含量为180μmol/L的高值样本，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，浓度依次为180μmol/L、144μmol/L、108μmol/L、72μmol/L、36μmol/L、0μmol/L。分别利用实施例1试剂及对照组试剂进行检测，每个浓度的样本分别测定三次，分别取平均值，检测结果如表2所示。

[0050] 表2 实施例1试剂线性相关验证实验检测结果

[0051]

[0052] 如上表所示，实施例1与对照组试剂检测结果相关系数均大于0.990，且实施例1试剂检测结果的相关系数略大于对照组试剂检测结果的相关系数，这表明本发明试剂具有更好的线性相关性。

[0053] 实施例4

[0054] 稳定性验证实验：在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1及对照组试剂的稳定性。两组试剂每月选取同一样本测定质控品（靶值19.2μmol/L），测定三次取平均值，检测数据如表3所示。

[0055] 表3 实施例1试剂稳定性验证实验检测结果

[0056]

[0057] 实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而对照组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存10个月后开始不稳定，说明本发明试剂更换缓冲液及表面活性剂后稳定性增强。

[0058] 综上所述，本发明提供的血清铁亚铁嗪法检测试剂盒，试剂R1与试剂R2中的缓冲液更换为60 mmol/L pH为4.2的Tris缓冲液中，同时将试剂R1中的表面活性剂更换为TritonX-100 ，提高了试剂盒的稳定性，线性相关性好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的血清铁亚铁嗪法检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。