一种HPLC结合UPLC‑MS检测PQQ对乳酸作用的方法，属于生物分析技术领域。本发明采用UPLC方法研究了PQQ与乳酸的反应，优化了分离条件，使PQQ与多个反应产物达到分离。并采用UPLC‑MS对其反应产物进行了定性分析。本发明首次研究PQQ与乳酸的反应行为，在反应液中发现了3种产物，其准分子离子【M+H】+分别为403，475及547。PQQ分别与一分子乳酸、二分子乳酸、三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1、PQQLa2及PQQLa3。通过不同反应时间各生成物的峰面积发现主要以PQQLa1存在，酯化后的产物透过血脑屏障进入细胞外液，由此降低了细胞外液乳酸的含量。对研究PQQ在神经保护作用机制，尤其与衰老有关的疾病研究方面具有极为重要的研究价值。
1.一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法，其特征在于步骤为：（1）UPLC分析条件
ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column 2.1×100mm,1.7μm，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；
5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A；检测波长322nm；
称取一定量的PQQ及乳酸，分别用0.1M盐酸溶液溶解，配制成1mM 的PQQ溶液及1mM 的乳酸溶液，按v/v为1︰5混合，避光，于37℃水浴孵育24h，冰浴终止反应；紫外扫描图显示
322nm紫外吸收较高；选择322nm 作为检测波长；
在流动相中分别添加三氟乙酸TFA质量百分比为：0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.3 %TFA试验，当TFA含量为0.2%时，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A；各组份峰型对称性较好，PQQ与3种生成物都能达到基线分离；
（4）UPLC-MS 对PQQ与乳酸的反应产物的定性分析采用ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column 2.1×100mm,1.7μm，质谱检测器SQ Detector 2及PDA检测器，优化质谱参数：脱溶剂气温度：400℃；
质谱采用电喷雾正离子模式ESI+，质量扫描范围为m/z 50～800；
流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20min梯度洗脱至75/25 B/A；进样
10μL，反应液的ESI-MS谱图中，主要离子为m/z 403, 475, 547三个峰；通过产物的准分子离子峰及碎片离子分析PQQ分别与一分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1，403，M+1峰，
330，M-72 乳酸峰；与二分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa2，475，M+1峰，402，M-72 乳酸峰；与三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa3，547，M+1峰；
三种产物的积分面积比值PQQLa1/PQQLa2/PQQLa3为9.6/1.6/1；
将PQQ与乳酸分别配制以摩尔比为1︰5混合反应，避光，充分搅拌，置于37℃水浴孵育，于4、8、16、24、32、48h各时间点抽取反应液，甲醇稀释直接进样进行UPLC-MS分析；采集【M+
1】+分别为403，475，547的积分面积AUS，用AUS对时间作图，反应24h后基本处于稳定；
（6）PQQ对D-半乳糖D-gal诱导大鼠衰老模型生物样本中乳酸含量的影响测定采用荧光增强试剂4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑NBD-COCl反应生成响应值较大的荧光物质，来检测生物样本中含量极低的La，最低检测浓度达10nM；
色谱条件：美国WATERS 600高效液相色谱仪，2175荧光检测器，色谱柱Amethyst C18-H
4.6×250mm、5µm，流动相15%乙腈-H2O 含0.05%TFA，流速1mL/min，荧光检测激发波长
血浆或细胞外液处理：10µL血浆/细胞外液+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，
15000rpm/4℃离心5min，10µL上清液冷冻干燥，干燥物溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应；
脑组织处理：脑组织称重取0.1g，加入0.9mL预冷的生理盐水，电动匀浆，15000rpm/4℃离心15min，取10µL上清液+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，15000rpm/4℃离心5min，
10µL上清液冷冻干燥，干燥物溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应；
衍生反应：10µL样本+10µL 50mM N-甲基吗啉+5 µL 20mM NBD-COCl，60℃反应15min，加150µL 2%TFA终止反应，取10µL直接进行HPLC分析；
线性关系与检测限测定：精密称取乳酸对照品，加去离子水配成0.1，0.5，1，5，10，20，
30，40，50mmol/L的对照溶液，按上述衍生反应方法反应后进行HPLC分析；所得积分面积对浓度进行线性回归，得方程式y =1602534x + 18831，R2 = 0.9999；在0.1～50mmol/L范围内线性良好，最小检出浓度为10nM，X为浓度mmol/L，Y为峰面积；
重复性和精确度的测定：在确定的色谱条件下于同一天内连续进样6次测定，根据峰面积计算所得相对标准偏差为3.8%，n=6，保留时间的相对标准偏差为0.84%，n=6；
生物样本中乳酸含量的测定：各组样本按上述方法处理后按上述反应条件衍生反应后进行HPLC分析，外标法计算得到乳酸的含量，结果为：D-gal诱导衰老模型鼠血浆、脑组织和细胞外液中乳酸含量显著升高，PQQ给药组乳酸含量显著下降。
一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法
技术领域
[0001] 一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法，属于生物分析技术领域。
背景技术
[0002] 中枢神经系统中的能量供应主要依赖外周血中的葡萄糖。血脑屏障中的主要成份星形胶质细胞摄取葡萄糖，经糖酵解产生乳酸释放至细胞外液，细胞外液反映神经细胞的生存环境。乳酸作为糖酵解的代谢产物，一直被认为对神经细胞有损害作用。因此，乳酸在神经系统中的作用一直为科学家所重视。已有报道急性脑外伤病人脑脊液乳酸含量升高；正常人脑脊液乳酸含量很低，报道发现恶性胶质瘤中乳酸含量明显升高；血清乳酸已作为脑损伤的生物标志物。美国科学院院刊PANS也报道了乳酸浓度的上升与衰老有关，这可能是线粒体DNA机能障碍引发小鼠大脑的代谢变化，由此改变控制乳酸形成的特定基因的表达，这种变化导致了大脑乳酸浓度增加。因此，检测乳酸浓度对探测中枢神经系统中与衰老有关的疾病具有重要意义，加速脑内乳酸代谢、降低乳酸的含量维持乳酸低浓度是治疗中枢神经系统疾病的一个重要手段。
[0003] 吡咯并喹呤醌(PQQ)是一种氧化还原酶辅基，其结构式为：
[0004]
[0005] 其能够减少神经细胞死亡，在脑中能够促进神经因子的产生对神经细胞具有神经保护作用。PQQ在神经系统方面的重要功能可能与其特殊的化学结构有关，具有多羰基和多羧基的官能团，能够与多种活性基团发生反应。比如能够与多种氨基酸发生反应因而对氨基酸神经递质具有调节作用。而是否对与衰老基因有关的重要因素乳酸具有调节作用，至今无相关报道。
[0006] 本发明采用UPLC方法研究了PQQ与乳酸的反应，优化了分离条件，使PQQ与多个反应产物达到分离。并采用UPLC-MS对其反应产物进行了定性分析。以往的研究显示PQQ结构中的两个羰基与氨基酸参与缩合反应生成恶唑类化合物，本文首次研究PQQ与乳酸的反应行为，在反应液中发现了3种产物，其准分子离子【M+H】+分别为403，475和547。通过产物的准分子离子峰及碎片离子初步分析PQQ分别与一分子乳酸、二分子乳酸、三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1、PQQLa2及PQQLa3。通过不同反应时间各生成物的峰面积发现主要以一分子酯化产物PQQLa1存在，酯化后的产物透过血脑屏障进入细胞外液，由此降低了细胞外液乳酸的含量。对研究PQQ在神经保护作用机制，尤其与衰老有关的疾病研究方面具有极为重要的研究价值。
[0007] 乳酸含量的测定有比色法、EDTA滴定法、HPLC分析法、酶法、GC分析法，比色法及EDTA方法简单、快速，但灵敏度及精密度差；酶法对实验条件要求苛刻而且费用高；气相色谱法中乳酸易发生分解，影响其测定准确性。脑组织中乳酸含量极低，乳酸的紫外吸收极低，文献报道的HPLC法大多采用210nm检测，干扰因素较多，报道的最低检测浓度5µM，对于脑组织生物样本检测灵敏度太低。本发明采用荧光增强试剂NBD-COCl（4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑），与乳酸反应生成响应值较大的荧光物质，测定了PQQ对D-gal（D-半乳糖）诱导大鼠衰老模型生物样本中乳酸含量的影响，最低检测浓度达10nM。测定结果显示PQQ能降低因D-gal引起的衰老模型大鼠血浆、脑组织及细胞外液乳酸含量的升高，对PQQ抗衰老的机理研究具有重要意义。
发明内容
[0008] 本发明的目的是提供一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法，对PQQ抗衰老的机理研究具有重要意义。
[0009] 本发明的技术方案：一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法，步骤为：
[0010] （1）UPLC分析条件
[0011] ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column (2.1×100mm,1.7μm)，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A。检测波长322nm。
[0012] （2）波长的确定
[0013] 称取一定量的PQQ及乳酸，分别用0.1M盐酸溶液溶解，配制成1mM 的PQQ溶液及1mM 的乳酸溶液，按v/v为1︰5混合，避光，于37℃水浴孵育24h，冰浴终止反应。紫外扫描图显示322nm紫外吸收较高；选择322nm 作为检测波长。
[0014] （3）流动相组分对分离的影响
[0015] 在流动相中分别添加质量百分为：0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.3 %TFA（三氟乙酸）试验，当TFA含量为0.2%时，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A。各组份峰型对称性较好，PQQ与3种生成物都能达到基线分离。
[0016] （4）UPLC-MS 对PQQ与乳酸的反应产物的定性分析
[0017] 采用ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column (2.1×100mm,1.7μm)，质谱检测器SQ Detector 2及PDA检测器。优化质谱参数：
[0018] 脱溶剂气温度(Desolvation Temp)：400℃；
[0019] 脱溶剂气流量(Desolvation Gas Flow)：600 L/h；
[0020] 离子源温度（source temperature）：110℃；
[0021] 锥孔气流量(Cone Gas Flow)：50L/h；
[0022] 毛细管电压（capillary voltage）：3000 V；
[0023] 锥孔电压（cone voltage）：30V。
[0024] 质谱采用电喷雾正离子模式(ESI+)，质量扫描范围为m/z 50～800。
[0025] 流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20min梯度洗脱至75/25 B/A。进样10μL。反应液的ESI-MS谱图中，主要离子为m/z 403, 475, 547三个峰。通过产物的准分子离子峰及碎片离子初步分析PQQ分别与一分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1，403，M+1峰，330，M-72（乳酸）峰；与二分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa2，475，M+1峰，402，M-72（乳酸）峰；与三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa3，547，M+1峰。质谱图分别见图3、图4、图5。PQQLa3含量较低，图5b为图5a局部放大图。其化学反应式见图6。从三种产物的积分面积比值PQQLa1/PQQLa2/PQQLa3为9.6/1.6/1。三种产物的积分面积见图7。
[0026] （5）3种产物峰面积（AUS）随反应时间的变化曲线
[0027] 将PQQ与乳酸分别配制以摩尔比为1︰5混合反应，避光，充分搅拌，置于37℃水浴孵育，于4、8、16、24、32、48h各时间点抽取反应液，甲醇稀释直接进样进行UPLC-MS分析。采集【M+1】+分别为403，475，547的积分面积AUS，用AUS对时间作图，见图8。反应24h后基本处于稳定。
[0028] （6）PQQ对D-gal（D-半乳糖）诱导大鼠衰老模型生物样本中乳酸含量的影响测定[0029] 脑组织中La含量极低，La的紫外吸收极低，文献报道的HPLC法大多采用210nm检测，干扰因素较多，报道的最低检测浓度5µM，对于脑组织生物样本检测灵敏度太低。我们采用荧光增强试剂NBD-COCl（4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑）反应生成响应值较大的荧光物质（衍生反应见图9），来检测生物样本中含量极低的La，最低检测浓度达10nM。
[0030] 色谱条件：美国WATERS 600高效液相色谱仪，2175荧光检测器，色谱柱Amethyst C18-H（4.6×250mm，5µm），流动相15%乙腈-H2O含0.05%TFA，流速1ml/min，荧光检测激发波长483nm，发射波长530nm。
[0031] 血浆或细胞外液处理：10µL血浆（细胞外液）+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，15000rpm/4℃离心5min，10µL上清液冷冻干燥，干燥残渣溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应。
[0032] 脑组织处理：脑组织称重取0.1g，加入0.9mL预冷的生理盐水，电动匀浆，15000rpm/4℃离心15min，取10µL上清液+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，15000rpm/4℃离心5min，10µL上清液冷冻干燥，干燥残渣溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应。
[0033] 衍生反应：10µL样本+10µL 50mM N-甲基吗啉+5 µL20mM NBD-COCl，60℃反应15min。加150µL 2%TFA终止反应，取10µL直接进行HPLC分析。
[0034] 线性关系与检测限测定：精密称取乳酸对照品，加去离子水配成0.1，0.5，1，5，10，20，30，40，50mmol/L的对照溶液，按上述衍生反应方法反应后进行HPLC分析。所得积分面积对浓度进行线性回归，得方程式y = 1602534x+18831，R2 = 0.9999。在0.1～50mmol/L范围内线性良好（图15）。生物样本中乳酸的含量测定结果见表1。最小检出浓度为10nM（S/N≥
3）。X为浓度mmol/L，Y为峰面积。
[0035] 重复性和精确度的测定：在确定的色谱条件下于同一天内连续进样6次测定，根据峰面积计算所得相对标准偏差约为3.8%(n=6)，保留时间的相对标准偏差约为0.84% （n=6）。
[0036] 表1 乳酸浓度的测定结果
[0037]组别 血浆(mmol/L) 细胞外液 脑组织(mmol/g)
正常组 1.56±0.85 4.82±0.98 0.38±0.02
D-gal 衰老模型组 3.87±0.28* 7.25±1.32* 0.66±0.05*
D-gal+PQQ给药组 2.05±0.06﹟ 5.03±1.18﹟ 0.42±0.09﹟
[0038] *p<0.01与对照组相比,﹟p<0.01 与模型组相比
[0039] 发现正常组细胞外液乳酸浓度是血浆的3.08倍。D-gal诱导衰老模型鼠血浆、脑组织和细胞外液中乳酸含量显著升高，PQQ给药组乳酸含量显著下降。可能由于PQQ与乳酸发生酯化反应生成PQQLa，为中枢神经系统疾病的治疗靶点提供了新的理论依据。
[0040] 本发明的有益效果：本发明采用UPLC方法研究了PQQ与乳酸的反应，优化了分离条件，使PQQ与多个反应产物达到分离。并采用UPLC-MS对其反应产物进行了定性分析。本发明首次研究PQQ与乳酸的反应行为，在反应液中发现了3种产物，其准分子离子【M+H】+分别为403，475及 547。通过产物的准分子离子峰及碎片离子初步分析PQQ分别与一分子乳酸、二分子乳酸、三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1、PQQLa2及PQQLa3。通过不同反应时间各生成物的峰面积发现主要以一分子酯化产物PQQLa1存在，酯化后的产物透过血脑屏障进入细胞外液，由此降低了细胞外液乳酸的含量。对研究PQQ在神经保护作用机制，尤其与衰老有关的疾病机理研究方面具有极为重要的研究价值。
附图说明
[0041] 图1PQQ与乳酸产物的紫外扫描图谱。
[0042] 图2 PQQ与乳酸反应液的色谱图。
[0043] 图3产物PQQLa1质谱图。
[0044] 图4产物PQQLa2质谱图。
[0045] 图5产物PQQLa3质谱图，图5b为图5a局部放大图。
[0046] 图6 PQQ与乳酸化学反应式。
[0047] 图7三种产物PQQLa1/PQQLa2/PQQLa3的积分面积图谱。
[0048] 图8三种产物PQQLa1/PQQLa2/PQQLa3的积分面积随反应时间的变化图。
[0049] 图9 乳酸衍生反应。
[0050] 图10 空白衍生试剂HPLC色谱图。
[0051] 图11 乳酸对照衍生反应后的HPLC色谱图。
[0052] 图12 血浆衍生反应HPLC色谱图。
[0053] 图13 脑组织衍生反应HPLC色谱图。
[0054] 图14 细胞外液衍生反应HPLC色谱图。
[0055] 图15 标准曲线图。
具体实施方式
[0056] 实施例1
[0057] 一种HPLC结合UPLC-MS检测PQQ对乳酸作用的方法，步骤为：
[0058] （1）UPLC分析条件：
[0059] ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column (2.1×100mm,1.7μm)，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A；检测波长322nm；
[0060] （2）波长的确定
[0061] 称取一定量的PQQ，乳酸，分别用0.1M盐酸溶液溶解，配制成1mM 的PQQ溶液和乳酸溶液，按v/v为1︰5混合，避光，于37℃水浴孵育24h，冰浴终止反应；紫外扫描图显示322nm紫外吸收较高；选择322nm 作为检测波长；
[0062] （3）流动相组分对分离的影响
[0063] 在流动相中分别添加0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.3 %TFA（三氟乙酸）试验，当TFA含量为0.2%时，流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20 min梯度洗脱至75/25 B/A；各组份峰型对称性较好，PQQ与3种生成物都能达到基线分离；
[0064] （4）UPLC-MS 对PQQ与乳酸的反应产物的定性分析
[0065] 采用ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column (2.1×100mm,1.7um)，质谱检测器SQ Detector 2及PDA检测器，优化质谱参数：
[0066] 脱溶剂气温度(Desolvation Temp)：400℃；
[0067] 脱溶剂气流量(Desolvation Gas Flow)：600 L/h；
[0068] 离子源温度（source temperature）：110℃；
[0069] 锥孔气流量(Cone Gas Flow)：50L/h；
[0070] 毛细管电压（capillary voltage）：3000 V；
[0071] 锥孔电压（cone voltage）：30V；
[0072] 质谱采用电喷雾正离子模式(ESI+)，质量扫描范围为m/z 50～800。
[0073] 流动相A：H2O+0.2%TFA，B：甲醇；5/95 B/A洗脱5min，20min梯度洗脱至75/25 B/A，进样10μL，反应液的ESI-MS谱图中，主要离子为m/z 403, 475, 547三个峰；通过产物的准分子离子峰及碎片离子初步分析PQQ分别与一分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa1，403，M+1峰；330，M-72（乳酸）峰；与二分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa2，475，M+1峰，402，M-72（乳酸）峰；与三分子乳酸发生酯化反应得产物PQQLa3，547，M+1峰；质谱图分别见图3、图4、图5。PQQLa3含量较低，图5b为图5a局部放大图。其化学反应式见图6。 从三种产物的积分面积比值PQQLa1/PQQLa2/PQQLa3为9.6/1.6/1；三种产物的积分面积见图7。
[0074] （5）3种产物峰面积（AUS）随反应时间的变化曲线
[0075] 将PQQ与乳酸分别配制摩尔比为1︰5混合反应，避光，充分搅拌，置于37℃水浴孵育，于4、8、15、24、32、48h各时间点抽取反应液，甲醇稀释直接进样进行UPLC-MS分析；采集【M+1】+分别为403，475，547的积分面积AUS，用AUS对时间作图，见图8；反应24h后基本处于稳定；
[0076] （6）PQQ对D-gal（D-半乳糖）诱导大鼠衰老模型生物样本中乳酸含量的影响测定[0077] 采用荧光增强试剂NBD-COCl（4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑）反应生成响应值较大的荧光物质（衍生反应见图9），来检测生物样本中含量极低的La，最低检测浓度达10nM。
[0078] 色谱条件：美国WATERS 600高效液相色谱仪，2175荧光检测器，色谱柱Amethyst C18-H（4.6×250mm，5µm），流动相15%乙腈-H2O 含0.05%TFA，流速1ml/min，荧光检测激发波长483nm，发射波长530nm。
[0079] 血浆或细胞外液处理：10µL血浆（细胞外液）+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，15000rpm/4℃离心5min，10µL上清液冷冻干燥，干燥残渣溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应。
[0080] 脑组织处理：脑组织称重取0.1g，加入0.9mL预冷的生理盐水，电动匀浆，15000rpm/4℃离心15min，取10µL上清液+10µL去离子水+180µL甲醇，充分混匀，15000rpm/4℃离心5min，10µL上清液冷冻干燥，干燥残渣溶解在10µL去离子水中直接用于衍生反应。
[0081] 衍生反应：10µL样本+10µL 50mM N-甲基吗啉+5 µL20mM NBD-COCl，60℃ 反应15min。加150µL 2%TFA终止反应，取10µL直接进行HPLC分析。
[0082] 线性关系与检测限测定：精密称取乳酸对照品，加去离子水配成0.1，0.5，1，5，10，20，30，40，50mmol/L的对照溶液，按上述衍生反应方法反应后进行HPLC分析。所得积分面积对浓度进行线性回归，得方程式y = 1602534+ 18831，R2 = 0.9999。在0.1～50mmol/L范围内线性良好（图15）。生物样本中乳酸的含量测定结果见表1。最小检出浓度为10nM（S/N≥
3）。X为浓度mmol/L，Y为峰面积。
[0083] 重复性和精确度的测定：在确定的色谱条件下于同一天内连续进样6次测定，根据峰面积计算所得相对标准偏差约为3.8%(n=6)，保留时间的相对标准偏差约为0.84% （n=6）。
[0084] 生物样本中乳酸含量的测定：各组样本按上述方法处理后按上述反应条件衍生反应后进行HPLC分析，外标法计算得到乳酸的含量，结果见表1。
[0085] 表1 乳酸浓度的测定结果
[0086]组别 血浆(mmol/L) 细胞外液 脑组织(mmol/g)
正常组 1.56±0.85 4.82±0.98 0.38±0.02
D-gal 衰老模型组 3.87±0.28* 7.25±1.32* 0.66±0.05*
D-gal+PQQ给药组 2.05±0.06﹟ 5.03±1.18﹟ 0.42±0.09﹟
[0087] *p<0.01与对照组相比,﹟p<0.01 与模型组相比
[0088] 发现正常组细胞外液乳酸浓度是血浆的3.08倍。D-gal诱导衰老模型鼠血浆、脑组织和细胞外液中乳酸含量显著升高，PQQ给药组乳酸含量显著下降。可能由于PQQ与乳酸发生酯化反应生成PQQLa，为中枢神经系统疾病的治疗靶点提供了新的理论依据。
