一种医用纤维结肠镜及其制备方法

摘要

本发明涉及一种医用纤维结肠镜及其制备方法。在该纤维结肠镜的表面涂有一层具有杀菌作用抗菌肽层，所述的抗菌肽具有较好的杀死肠道致病菌的功能。所述的纤维结肠镜制备简单，成本低廉，具有较好的杀菌效果，适宜于大规模的推广，能够有效的降低患者对于交叉感染风险，防止了医疗事故的发生。

权利要求

1.一种医用纤维结肠镜，包括纤维结肠镜本体，其特征在于：所述纤维结肠镜的内外表面均包覆有抗菌肽缓释层，所述抗菌肽缓释层中的抗菌肽的序列为SEQ ID NO：1-7任一所示。

2.一种抗菌肽，其特征在于：其序列如SEQ ID NO：1-7任一所示。

3.权利要求2所述的抗菌肽在作为抗菌肽缓释层用于制备医用纤维结肠镜中的应用。

说明书

一种医用纤维结肠镜及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于医疗器材领域，具体的说，涉及一种医用纤维结肠镜及其制备方法。

背景技术

[0002] 纤维结肠镜是结肠镜的一种。由光学玻璃纤维和内镜体及附件构成，可对全结肠进行直视观察。适用于检查结肠内疑有息肉、肿瘤、溃疡、炎症、不明原因出血灶等病变。配合X线钡灌肠或钡气双重造影，可提高结肠病变的诊断水平。检查的主要并发症为肠穿孔。纤维结肠镜的适用：作直肠，盲肠，升结肠，横结肠，乙状结肠，结肠，及回盲部等的观察诊断治疗，由于能直接用肉眼看到上述各部分的病变，从而诊断正确、可靠。内窥镜具有活体取样机构。

[0003] 由于检查过程中，纤维结肠镜通过肛门进入直肠，直到大肠，医务人员观察结肠和大肠的内部情况，因而纤维结肠镜在诊断治疗中不可避免地接触肠道中的各种细菌及患处的病变组织，对管道造成感染，故在检查完毕后有必要对其进行针对性的彻底清洁，以保证每次诊断治疗的清洁安全，避免发生交叉感染。目前的清洗方法是将纤维结肠镜放入清洗池或清洗消毒机内清洗消毒，但是镜体内部角落仍然可能存在残余的患者体内的病原菌并不能够起到彻底的杀灭作用。

[0004] CN 104498228 A中公开了一种纤维结肠镜的洗涤剂，由以下重量份配比的原料制备而成：水78份，四(3，5-二叔丁基-4-羟基)苯丙酸季戊四醇酯25-27份，0,0-二甲基-S-(甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯20-22份，3-(2，4_二甲基苯基)-2-丙烯酸26-28份，2,2-二甲基-1-丙醇16-18份，2,2_二甲基-1-丙醇丁二酸二异辛酯磺酸钠12-15份，(S)-N-叔丁氧羰基-2-苯甘氨醇6-8份，4-乙酰氨基-2-羟基苯甲酸8-10份，1-(4-氟苯基)-4-[4-(4-氯苯基)-4-轻基-1-哌啶基]-1-丁酮4-6份。该洗涤剂虽然在去渍和杀菌双方面上保证纤维结肠镜的清洁效果，但是仍然存在着杀菌效果不好的缺陷。

[0005] 抗菌肽是一类对细菌具有很强杀菌效果的小多肽，自上世纪80年代以来，抗菌肽作为生物天然免疫的组成成分之一开始为人们所发现和认识，其后不断有新的抗菌肽在各种生物中发现并被认为是抗感染治疗的未来药物。它具有携带正电荷、极少耐药、杀菌谱广、种类繁多、对哺乳动物细胞毒性低等特点。抗菌肽的作用机制不同于传统的抗生素，病原菌不易对其产生耐药性，一些抗菌肽对其有很强的杀菌活性，因此有望利用抗菌肽杀灭细菌特别是肠道致病菌的感染。而将该抗菌肽用于纤维结肠镜的表面膜的涂覆，即可实现纤维结肠镜的表面杀菌的效果。

发明内容

[0006] 本发明的目的就是针对现有技术存在的缺陷，提供一种结构简单，设计合理，防止在纤维结肠镜检查过程中残余致病菌的交叉感染，防止纤维结肠镜携带病菌的交叉感染。

[0007] 本发明的目的之一在于提供一种强力抗感染和抑制细菌形成的载缓释抗菌肽涂层医用纤维结肠镜。

[0008] 本发明的目的之二在于提供一种载缓释抗菌肽涂层医用纤维结肠镜的制造方法。

[0009] 本发明是这样实现的：一种载缓释抗菌肽涂层医用纤维结肠镜，包括纤维结肠镜本体，其特征在于：所述纤维结肠镜的内外表面均包覆有抗菌肽缓释层，所述抗菌肽缓释层为结合有抗菌肽聚合物涂层。

[0010] 上述抗菌素缓释层厚度为5-30μm。

[0011] 本发明的其中一个技术方案提供一种纤维结肠镜抗菌肽表面涂层的制备方法，将纤维结肠镜的本体浸入聚乙烯亚胺的水溶液，该水溶液中聚乙烯亚胺的浓度为5-10mg/ml，含0.14mol/LNaCl中往复振荡浸泡40分钟，会在纤维结肠镜的内外表面形成聚合物底层；然后置于100mL质量百分比浓度为0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反应5小时，反应后的纤维结肠镜经甲醇充分浸洗后真空干燥，与抗菌肽分别在辣根过氧化物酶和过氧化氢作用下反应，得到表面键合抗菌多肽的纤维结肠镜。当纤维结肠镜与细菌细胞接触时，管子表面的二硫键断裂，还原释放多肽，发挥杀菌作用。

[0012] 所述的抗菌肽为申请人前期筛选获得，其序列如下：

[0013] KJT1：NTIWIPRRPHWQYWSQHWNTSPMTGLR

[0014] KJT2：QFFLQCGGGWVCSAHAWWMTRWWSQQR；

[0015] KJT3：WKHWGTIILNYEFRMNIAECFSGHDS；

[0016] KJT4：RLTWYPIYPMCHWCASAMYQYHHWLHQ；

[0017] KJT5：LSQVPGFIPMTHTRLQWLPVGPDQTRS；

[0018] KJT6：DRQHAATAQSLSLQYARFLVSWEQNNQ；

[0019] KJT7：RIEYHHNQYVTDVCSWQHKWDERGPWP；

[0020] 本发明的有益效果在于：本方法制备的带有抗菌肽涂层的纤维结肠镜，具有防止纤维结肠镜在体内使用后携带了患者体内的病菌，进而导致其他患者交叉感染导致炎症发生的风险，具有极大的应用前景和重要的社会价值价值。可以大面积的推广，可以节省消毒的成本，以及降低医疗风险。

具体实施方式

[0021] 实施例1纤维结肠镜涂覆层的制备

[0022] 将纤维结肠镜分别依次在蒸馏水、丙酮、70％乙醇、超纯水中超声清洗5分钟、10分钟、10分钟、5分钟后，再用过氧乙烷熏蒸灭菌处理后，浸入聚乙烯亚胺的水溶液，该水溶液中聚乙烯亚胺的浓度为10mg/ml，含0.14mol/L NaCl中往复振荡浸泡40分钟，会在胃镜管子的内外表面形成聚合物底层；然后置于100mL质量百分比浓度为0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反应5小时，反应后的管子经甲醇充分浸洗后真空干燥，与KJT-1抗菌肽在辣根过氧化物酶和过氧化氢作用下反应，得到表面键合抗菌多肽的纤维结肠镜，命名为KJT-1纤维结肠镜。

[0023] 按照上述方法，分别制备KJT-2～7纤维结肠镜。

[0024] 实施例2抗菌肽的效果验证

[0025] 将KJT-1～7多肽用蒸馏水溶解成浓度为2mg/ml，采用琼脂糖扩散法进行抗菌活性检测。琼脂糖扩散法中使用的菌株为单核增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、变形杆菌、布鲁氏菌、肠出血性大肠杆菌0157:H7、耶尔森氏菌和霍乱弧菌的组合。菌株培养后，分别取50微升菌液涂布于LB固体培养基。静置带菌液吸收后，分别加入浓度为200ppm的多肽溶液。37℃培养1小时后，观察抑菌圈的有无和大小。结果见表1。

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[0028] 表1多肽抗菌活性分析结果

[0029] 所述的7个多肽都具有较大的抑菌圈。在短时间内具有好的抑制肠道致病菌的效果。

[0030] 实施例3抗菌肽的溶血活性

[0031] 采集人或者兔的新鲜血液lmL，肝素抗凝后溶解到PBS溶液中，I000g离心5min,收集红细胞；用PBS洗涤3遍，再用I0ml PBS重悬；取100μL红细胞悬液与100μL用PBS溶解的不同浓度的抗菌肽溶液混合均匀，在37℃培养箱内恒温孵育Ih；Ih后取出，4℃1000g离心5min；取出上清液用酶标仪在540nm处测光吸收值；每组取平均值，并比较分析。其中100μ
1PBS作为阴性对照；100μ10.2％Tritonx-100作为阳性对照。结果发现，7个抗菌肽分别在
2000微克/ml的浓度下均没有发生溶血想象，具有极大的应用空间。

[0032] 实施例4含有多肽涂层的纤维结肠镜的抗菌性检测

[0033] 将实施例1制备得到的7种纤维结肠镜以及没有多肽涂层的纤维结肠镜，分别给予具有肠出血性大肠杆菌0157:H7阳性的肠道疾病患者使用，使用后，通过常规的清洗杀菌方式进行清洗。之后，在无菌的环境中，将纤维结肠镜内外表面分别置于PBS水环境中震荡、冲洗30min，然后通过滤菌膜过滤水体，将滤菌膜表面用培养基冲洗，37摄氏度培养24h，之后检测发现，采用实施例1制备得到的7种胃镜中均没有检测到肠出血性大肠杆菌0157:H7细菌的存在，而没有多肽涂层的纤维结肠镜中检测到肠出血性大肠杆菌0157:H7的存在，总致病菌菌数共计35个。这也说明，多肽涂层具有较好的抑制细菌在普通纤维结肠镜中残留的功能。

[0034] 其它几种菌制备的涂层采用其他几种病原菌：耶尔森氏菌和霍乱弧菌进行上述同样的检验，结果显示含有抗菌肽涂层的纤维结肠镜中均没有检测到病原菌的存在。

[0035] 以上为本发明的具体实施例，其作用在于对本发明的内容做进一步详细的说明，使阅读者更易理解，但不构成对本发明所要求的保护。