循环肿瘤细胞分选仪及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种循环肿瘤细胞分选仪，该分选仪兼容了阳性分选与阴性分选的目的，可在一台仪器上实现CTC的阳性和阴性分选，使两种分选结果得以相互验证和取长补短，从而获得更精确的检测结果；阳性富集可提高CTC捕获特异性，提供纯度更高的CTC样本；阴性分选可扩大CTC的捕获范围，提供了更多的研究对象，本发明提供的分选仪具有合理的布局和紧凑的结构；进一步本发明还提供应用于该分选仪的试剂盒，该分选仪结合该试剂盒通过最佳的操作流程，从而使分选过程更流畅和高效。

权利要求

1.一种循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于包括：

离心平台，用于阳性和/或阴性分选中的离心步骤；

试剂储存平台，用于存放阳性和/或阴性分选中所用到的各种试剂；

废料收集平台，用于收集阳性和/或阴性分选过程中的废弃物；

转运部件，用于转运样品、废弃液、CTC捕获相关试剂、染色相关试剂以及缓冲液；

转运头储存平台，用于存放转运中所用到的转运头耗材；

磁收集部件，用于在阳性分选中吸附纳米磁颗粒；

光感识别部件，用于在阴性分选中光感识别CTC细胞所在层。

2.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于所述磁收集部件为磁棒，所述转运部件还用于磁棒的转运。

3.如权利要求2所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于还包括磁棒储存平台，用于存放磁棒。

4.如权利要求2所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于还包括磁棒染色平台，所述磁棒染色平台包括：磁棒支撑架，用于保持所述磁棒竖直摆放；

染色架，用于摆放染色试剂；以及

清洗架，用于摆放清洗试剂；

三者被设置在同一条直线轨道上，其中所述染色架和所述清洗架可沿所述直线轨道移动，所述磁棒支撑架离所述直线轨道的高度可调；或所述磁棒支撑架可沿所述直线轨道移动且离所述直线轨道的高度可调；又或三者均可沿所述直线轨道移动且离所述直线轨道的高度可调。

5.如权利要求4所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于所述转运部件包括试剂转运部件和磁棒转运部件。

6.如权利要求4所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于所述转运部件包括：第一转运部件，用于转运样品管中的废弃液；第二转运部件，用于转运包含带抗体的纳米磁颗粒的CTC捕获试剂及与CTC捕获步骤相关的其它试剂；第三转运部件，用于转运和移动磁棒；第四转运部件，用于转运染色试剂及与染色步骤相关的其它试剂。

7.如权利要求1、2或4所述的循环肿瘤细胞分选仪，其特征在于还包括细胞计数部件、样品条码扫描部件。

8.一种用于如权利要求1、2或4所述的循环肿瘤细胞分选仪的试剂盒，其特征在于包括：循环肿瘤细胞捕获试剂、阴性富集多联抗体试剂、密度梯度离心液、免疫荧光染色剂、细胞固定剂和缓冲液。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于所述循环肿瘤细胞捕获试剂为至少能够与循环肿瘤细胞的一种生物标志物特异性结合的免疫磁珠。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于所述阴性富集多联抗体为具有含至少两种抗体的多联结构。

说明书

循环肿瘤细胞分选仪及其试剂盒

技术领域

[0001] 本发明涉及一种循环肿瘤细胞分选仪及其试剂盒。

背景技术

[0002] 脱离原发肿瘤部位的癌细胞被称为“循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)”。根据文献报道，CTC在恶性肿瘤形成早期即可释放入血，CTC由原发灶释放进入血液循环，是恶性肿瘤复发和转移的关键步骤。在过去二十年中，CTC已成为检测早期癌转移、预测患者预后以及检测疾病进展和癌症治疗效果的新兴“生物标志物”。然而，由于CTC在含有大量血细胞(109个细胞/mL)的血液中的含量极低(几个至几百个每毫升)，因此对CTC的分选在技术上存在一定的难度，从外周血中快速、高效的分离CTC是后续对CTC细胞计数，以及研究分析的前提。

[0003] CTC富集技术主要分为以形态学为基础的富集和以免疫学为基础的富集。前者，主要依靠细胞密度梯度进行分离，但是密度相近的细胞会产生干扰，因此该方法缺乏特异性。后者，是基于细胞表面抗原分子与免疫磁珠的特异性结合，在外加磁场的作用下，滞留在磁场中，从而与不带磁性的其它组分分离。较具代表性的方法是磁性活化细胞分选系统(magnetic activated cell sorting system,MACS)，采用胞膜或胞内染色，然后通过免疫磁性标记的微球来捕获CTC。该方法具有特异性强的优点，但是其无法识别未表达目标标记的未知细胞，而这些细胞也很可能是CTC，也就是我们研究的重点之一。

[0004] 目前唯一获得FDA批准的CTC检测设备是CellSearch系统，该系统是基于免疫磁珠分离技术而开发出的检测设备，它利用标记有针对上皮细胞黏着分子(Epithelial Cell Adhesion Molecule,EpCAM)抗体的磁性颗粒进行CTC的捕获，但是其捕获效率还是较低，且白细胞的干扰较大。另外，目前的一些CTC检测设备和技术尚没有实现检测过程的全自动化控制，即没有实现血液检测样品和试剂的自动化进样，细胞的自动化捕获及鉴定分析，因此CTC的检测存在过多的人为干预，使得CTC的检测准确性低，检测成本过高。

[0005] CellSearch系统的基本流程是：先使用EpCAM抗体磁珠对上皮细胞进行富集，然后将细胞固定，用DAPI荧光核染料、CD45荧光抗体和CK8、CK18以及CK19荧光抗体标记细胞，再用四色荧光显微镜Cell Spotter Analyzer进行分析，检测CK阳性、CD45阴性的上皮细胞，此即为CTC。该系统包括一个捕获和染色装置Autoprep、一个带磁场的样本盒装置MagNest以及一个进行细胞计数的装置Analyzer，可见该系统并未实现样品从前处理至细胞捕获、染色、分析的全程自动化，其操作依然相对繁琐。

[0006] 细胞分选技术可分为阳性分选和阴性分选，阳性分选即是将所需的细胞从未标记或不需要的组分中分离出来，阴性分选即是将不需要的细胞移除出去，通过阳性和阴性分选的结合可保留尽可能多的CTC，从而获得更全面的分析结果。

[0007] 因此，本领域的技术人员致力于开发一种可将阳性分选和阴性分选相结合的CTC分选和检测系统，以满足研究中的不同需求。

发明内容

[0008] 有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种从血液样品前处理至细胞分选、染色和计数全程自动化的CTC分选仪，同时该分选仪还结合了阳性和阴性两种分选技术，可对样品进行全面的分选以便进一步的分析研究。

[0009] 本发明中所述阳性分选的一般步骤包括：

[0010] A)离心，去除样品中的血浆，收集沉淀的细胞；

[0011] B)加入CTC捕获试剂捕获目标CTC，该捕获试剂包含带抗体的纳米磁颗粒；

[0012] C)用磁收集部件吸附结合了目标CTC的纳米磁颗粒；

[0013] D)清洗吸附的结合了目标CTC的纳米磁颗粒；

[0014] E)荧光染色目标CTC并清洗多余染色剂；

[0015] F)将目标CTC固定，以便计数和下一步的分析。

[0016] 阳性分选可采用特异性捕获试剂，从而获得特定的靶细胞，一种优选的捕获试剂为包含有抗EpCAM纳米磁颗粒。

[0017] 本发明中所述阴性分选的一般步骤包括：

[0018] a)加入阴性富集多联抗体，该多联抗体用于结合干扰细胞，优选为可结合血液中的白细胞和红细胞；

[0019] b)加入密度梯度离心液离心，使干扰细胞沉淀；

[0020] c)通过光感识别部件来判断目标CTC所在密度层，并收集该层；

[0021] d)离心，收集沉淀的目标细胞；

[0022] e)荧光染色并清洗多余染色剂；

[0023] f)将目标细胞固定，以便计数和下一步的分析。

[0024] 阴性分选中最大的干扰是白细胞和红细胞，上述分选方法中采用多联抗体将白细胞与红细胞结合起来；在本发明的一种优选实施方式中，所述结合体的密度较大，经密度梯度离心而沉淀，而作为目标的CTC位于中间层，该层中除了目标CTC以外，还可能有与其密度相类似的其它细胞，这些其它细胞可能也是CTC，或是值得进一步分析研究的非CTC细胞。

[0025] 因此，为了兼容阳性分选与阴性分选的目的，本发明提供了一种循环肿瘤细胞分选仪，所述分选仪包括：

[0026] 离心平台，用于阳性和/或阴性分选中的离心步骤；

[0027] 试剂储存平台，用于存放阳性和/或阴性分选中所用到的各种试剂；

[0028] 废料收集平台，用于收集阳性和/或阴性分选过程中的废弃物；

[0029] 转运部件，用于转运样品、废弃液及各种试剂；

[0030] 转运头储存平台，用于存放转运中所用到的转运头耗材；

[0031] 磁收集部件，用于在阳性分选中吸附纳米磁颗粒；

[0032] 光感识别部件，用于在阴性分选中光感识别CTC细胞所在层；

[0033] 该分选仪具有合理的布局和紧凑的结构。

[0034] 在本发明的一种优选实施方式中，所述磁收集部件为磁棒，在此种情况下所述转运部件还可用于磁棒的转运，且所述循环肿瘤细胞分选仪还包括磁棒储存平台，用于存放磁棒以供使用。如本领域技术人员所知，所述磁棒通过插入样品中孵育来吸附结合有目标CTC的纳米磁颗粒，通常对吸附后的磁棒有两种处理方式：一是先收集被吸附的目标CTC，然后对CTC染色；二是先对磁棒上的目标CTC染色，然后收集细胞；在本发明的一种优选实施方式中采用后者，进而，该循环肿瘤细胞分选仪还包括磁棒染色平台，该磁棒染色平台包括：

[0035] 磁棒支撑架，用于保持所述磁棒竖直摆放；

[0036] 染色架，用于摆放染色试剂；以及

[0037] 清洗架，用于摆放清洗试剂；

[0038] 三者被设置在同一条直线轨道上，其中所述染色架和所述清洗架可沿所述直线轨道移动，所述磁棒支撑架离所述直线轨道的高度可调；或所述磁棒支撑架可沿所述直线轨道移动且离所述直线轨道的高度可调；又或三者均可沿所述直线轨道移动且离所述直线轨道的高度可调。

[0039] 进一步，所述磁棒支撑架上设置有多个插孔，用于磁棒的插放；且所述磁棒的上部设置有卡位部件，用于将所述磁棒在竖直方向上固定在所述磁棒支撑架上。

[0040] 进一步，所述染色试剂的试剂瓶/管在工作时为敞口设置；所述清洗试剂的试剂瓶/管在工作时也为敞口设置。

[0041] 在本发明的一种实施方式中，所述磁棒的染色步骤为：

[0042] 1)将吸附有结合了目标CTC的纳米磁颗粒的磁棒插入磁棒支撑架；此时该支撑架远离所述直线轨道；

[0043] 2)移动所述清洗架至磁棒支撑架下方；

[0044] 3)下调磁棒支撑架的高度，使磁棒的吸附部位浸没入清洗试剂中；

[0045] 4)上下移动并不断旋转磁棒以清洗杂质；

[0046] 5)清洗完成，上调磁棒支撑架的高度；

[0047] 6)移开所述清洗架，同时移动所述染色架至磁棒支撑架下方；

[0048] 7)下调磁棒支撑架的高度，使磁棒的吸附部位浸没入染色试剂中孵育一段时间；

[0049] 8)孵育过程中不断旋转磁棒以充分染色；

[0050] 9)孵育完成，上调磁棒支撑架的高度；

[0051] 10)移开所述染色架，染色完成。

[0052] 染色前，上述2)-5)的清洗步骤可根据情况有所取舍，染色完成后，也可采用上述2)-5)的清洗步骤进行清洗，且根据需要可重复多次，以彻底清洗杂质或清除多余的染色剂；此外步骤6)-10)的染色步骤也可重复进行多次。

[0053] 染色后按常规的方法，可以将被吸附的目标CTC洗脱下来，再进行固定和计数等后续操作。

[0054] 优选地，所述磁套具有捕获窗，该捕获窗由透磁材料制成，磁芯产生的磁场可透过该窗口吸附磁性颗粒，除捕获窗以外的部分由拒磁材料制成，该材料可屏蔽磁芯产生的磁场，从而使磁性颗粒聚集在捕获窗的位置便于后续操作。

[0055] 本发明提供了一种更佳的方案，即在本发明的磁棒结构中增加磁套的设置，所述磁套套在所述磁棒的外部，类似于笔套，其本身不具有磁性，该磁套可在细胞染色后取下，并直接用于细胞的固定和计数等操作。

[0056] 优选地，所述磁套由透明或半透明材料制成，便于后续的观察。

[0057] 在本发明的一种优选实施方式中，所述转运部件包括：第一转运部件，用于转运样品管中的废弃液，该转运部件也可被称为样品转运部件；第二转运部件，用于转运包含带抗体的纳米磁颗粒的CTC捕获试剂及与CTC捕获步骤相关的其它试剂，该转运部件也可被称为捕获转运部件；第三转运部件，用于转运和移动磁棒，该转运部件也可被称为磁棒转运部件；第四转运部件，用于转运染色试剂及与染色步骤相关的其它试剂，该转运部件也可被称为染色转运部件。

[0058] 进一步，所述转运部件可以是旋转式或滑动式的；优选地，各个所述转运部件具有不同的移动平面，这样可错开各转运部件，使该分选仪的平面面积尽可能地减小。在本发明的一种优选实施方式中，第一转运部件和第二转运部件为旋转式，第三转运部件和第四转运部件为滑动式，其中所述第三转运部件和第四转运部件的移动平面高于所述第一转运部件和所述第二转运部件的移动平面。在本发明的另一优选实施方式中，所述第一、第二、第三、第四转运部件均为滑动式；在更进一步的优选实施方式中所述第一、第二、第四转运部件合而为一，成为试剂转运部件，它和磁棒转运部件一起设置在一个滑动轨道上，该轨道使试剂转运部件和磁棒转运部件可在X-Y-Z空间内运动。

[0059] 在本发明的一种优选实施方式中，所述磁棒储存平台的位置被设置在所述磁棒染色平台与所述离心平台之间，所述磁棒转运部件可方便地带动磁棒在所述磁棒储存平台、所述离心平台和所述磁棒染色平台之间移动，并带动磁棒进行旋转；这种设计可兼顾磁棒在离心平台中的捕获过程和在磁棒染色平台中的染色过程，且该设计占据较小的面积；该分选仪在进行样品的阳性分选过程中，样品离心步骤和染色平台的试剂准备工作可同时进行，节省了空间和时间。

[0060] 在上述优选实施方式中，所述试剂储存平台、废料收集平台、转运头储存平台的一种设置方式为共用一套，与磁棒储存平台的位置一样设置在所述磁棒染色平台与所述离心平台之间，此种设置可使分选仪的结构更紧凑；另一种设置方式为两套，分别供应于所述离心平台和所述磁棒染色平台，此种设置的优点是同时进行离心平台操作和染色平台操作时，各转运部件不会相互干扰。

[0061] 进一步，本发明所述循环肿瘤细胞分选仪还包括细胞计数部件、样品条码扫描部件。

[0062] 本发明还提供了用于上述循环肿瘤细胞分选仪的试剂盒，所述试剂盒包括：循环肿瘤细胞捕获试剂、阴性富集多联抗体试剂、密度梯度离心液、免疫荧光染色剂、细胞固定剂和缓冲液。

[0063] 进一步，上述试剂盒中的所述循环肿瘤细胞捕获试剂为至少能够与循环肿瘤细胞的一种生物标志物特异性结合的免疫磁珠，一个优选的实例为抗EpCAM纳米磁颗粒，除EpCAM外，所述循环肿瘤细胞的生物标志物还包括但不限于CD133、CD90、CD24、CD13、ICAM-1、SALL4、CD44、ALDH。

[0064] 进一步，上述试剂盒中的所述免疫荧光染色剂可包括荧光(如PE)标记的细胞角蛋白(CK)抗体、荧光(如APC)标记的CD45抗体、DAPI中的一种或多种；也可以包括荧光标记的对应于捕获试剂的抗体，如捕获试剂为抗EpCAM纳米磁颗粒，则可采用荧光标记的EpCAM抗体。

[0065] 进一步，上述试剂盒中的所述阴性富集多联抗体为具有含至少两种抗体的多联结构，所述至少两种抗体的连接方式可以是直接或间接连接，该阴性富集多联抗体与其抗原结合后可通过密度梯度离心法或沉淀法去除；在本发明的一种优选实施方式中，所述多联抗体具有可与红细胞相结合的抗体和可与白细胞相结合的抗体，且该两种抗体都不可与循环肿瘤细胞相结合。

[0066] 进一步，上述试剂盒中的所述密度梯度离心液可根据需要选用各种现有产品，如Ficoll分离液。

[0067] 进一步，上述试剂盒还包括样品储存管、条形码、捕获增强试剂、透化试剂中的一种或几种。

[0068] 本发明所述循环肿瘤细胞分选仪及其试剂盒具有以下有益技术效果：

[0069] 1、本发明实现了CTC细胞的阳性分选与阴性分选的结合，使两种分选的结果可同时应用于同一个样本，相互验证，取长补短，从而获得更精确的检测结果；

[0070] 2、阴性分选可获得不表达标志物的相似密度的CTC，从而扩大了研究的范围，提供了产生更丰富的研究成果的可能性；

[0071] 3、本发明提供的分选仪具有合理的布局和紧凑的结构，并提供了较佳的操作流程，从而使样品的分选过程尽可能地流畅和高效；

[0072] 4、本发明实现了从血液样品前处理至细胞分选、染色和计数全程自动化的过程；

[0073] 5、本发明的磁棒采用磁套的设计，使洗脱步骤得以省略，减少了细胞的损失，简化了流程，缩短了时间。

[0074] 以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

[0075] 图1是本发明分选仪的一个较佳实施例的平面结构示意图；

[0076] 图2是本发明分选仪的另一较佳实施例的平面结构示意图；

[0077] 图3是本发明中磁棒的一个较佳实施例的结构示意图；

[0078] 图4是本发明中磁棒的另一较佳实施例的结构示意图。

具体实施方式

[0079] 实施例1

[0080] 如图1所示为本发明的循环肿瘤细胞分选仪的一种较佳实施例的俯视结构示意图，该分选仪以中间的滑动轨道为界分为两个主体结构，其中左边为离心区，右边为染色和读数区，图中所示分选仪可同时进行12个样本的分选和检测。从图中可知，所述循环肿瘤细胞分选仪包括离心平台1、第一试剂储存平台2-1、第二试剂储存平台2-2、第一废料收集平台3-1、第二废料收集平台3-2、第一转运部件4-1、第二转运部件4-2、第三转运部件4-3、第四转运部件4-4、第一转运头储存平台5-1、第二转运头储存平台5-2、磁棒储存平台6、磁棒7、磁棒支撑架8、染色架9、清洗架10、直线轨道11、计数平台12；其中所述离心平台1内设置有光感识别部件(图中未示出)；所述第一转运部件4-1和第二转运部件4-2为旋转式，它们对应使用第一废料收集平台3-1和第一转运头储存平台5-1；所述第三转运部件4-3和第四转运部件4-4为滑动式，并共用同一套滑动轨道，它们对应使用第二废料收集平台3-2和第二转运头储存平台5-2；且所述第一转运头储存平台5-1、第二转运头储存平台5-2、磁棒储存平台6、计数平台12均设置在滑动轨道上，从而可沿轨道移动；所述第一试剂储存平台2-1内存放离心步骤试剂，所述第二试剂储存平台2-2内存放染色步骤试剂。本发明的部件排布方式不唯一，优选为将离心区与染色区分列在磁棒转运部件两侧的排布方式，但是其它能够使其结构紧凑的排布方式也是可行的。

[0081] 该分选仪由第一转运部件4-1吸取离心平台样品管中的废弃液，由第二转运部件4-2吸取第一试剂储存平台2-1内的CTC捕获试剂和缓冲液等，由第三转运部件4-3负责磁棒
7的转运、旋转和上下移动，该转运部件具有沿分选仪台面长轴的滑动轨道和沿分选仪台面短轴的滑动轨道，可实现分选仪台面面积的全覆盖，由第四转运部件4-4吸取第二试剂储存平台2-2内的染色试剂和缓冲液等，该转运部件与第三转运部件4-3共用滑动轨道。

[0082] 实施例2

[0083] 图2为本发明另一较佳实施例的俯视结构示意图，图中1为离心平台，2为试剂储存平台，3为废料收集平台，4-1为磁棒转运部件，4-2为试剂转运部件，5为转运头储存平台，6为磁棒储存平台，7为磁棒，8为磁棒支撑架，9为洗染架，11为直线轨道，12为计数平台，本实施例还包括搅拌棒储存平台13，所述搅拌棒可用于溶液的搅拌混匀。

[0084] 本实施例中将旋转转运部件的功能合并至滑动转运部件中，磁棒转运部件4-1和试剂转运部件4-2具有共同的滑动轨道，该滑动轨道可以在X-Y-Z的三维立体空间中移动，其移动面覆盖操作平面，本实施例中所有的储存平台均排列在仪器的中间部位，清洗架和染色架被设置在一起，离心平台和磁棒洗染平台被分别设置在储存平台的两边，使离心步骤和洗染步骤可同步进行，转运部件也减少为2个，其中试剂转运部件4-2承担了所有试剂的转运工作。本实施例中的分选仪结构更紧凑，可进一步节省空间。

[0085] 实施例3

[0086] 本实施例提供了一种磁棒，该磁棒7的结构如图3所示，其包括插杆71、磁芯72和磁套73，所述磁套73像笔套一样套在所述插杆71的外部，并将磁芯72包裹在其内，在磁套73上设置有捕获窗74，磁芯72对应捕获窗74的面为磁场发射面，磁场可透过该窗口向外发散，磁芯72的其它面均不向外发射磁场，即其它面均被软磁材料包裹，从而使捕获试剂中的纳米磁性颗粒聚集在捕获窗74内，当带有目标CTC的纳米磁性颗粒被捕获收集后，只需将插杆71从磁套73内抽出，即可直接对捕获窗74上的细胞进行下一步的研究，该捕获窗被设计为透明的，可便于进一步地固定和观察收集细胞。此外，插杆71的上端还设置有凸起75，作为卡位部件，用于将该磁棒固定悬挂于磁棒支撑架上。

[0087] 实施例4

[0088] 本实施例提供了另一种磁棒的设计，如图4所示，本实施例中的磁棒7也具有插杆71、磁芯72和磁套73，在磁套73上设置有捕获窗74，结构与实施例3中类似，所不同的是其捕获窗74是设置于磁棒的底端，该其磁芯释放磁场的面也为底面。

[0089] 实施例5

[0090] 由上述实施例1和3组成的CTC分选仪用于样品阳性分选的一种方法，包括步骤：

[0091] (1)样品经条形码扫描后被置入离心平台内，用第二转运部件4-2从第一转运头储存平台5-1内取得转运头，并从第一试剂储存平台2-1内的缓冲液瓶中吸取稀释用缓冲液加入样品管中，离心，由第一转运部件4-1从第一转运头储存平台5-1内取得转运头吸除样品中的上层血浆，废弃的血浆和转运头丢弃于第一废料收集平台3-1内；

[0092] (2)由第二转运部件4-2从第一试剂储存平台2-1内依次吸取缓冲液和CTC捕获试剂(如抗EpCAM纳米磁颗粒)，加入样品中，必要时还可加入捕获增强试剂，然后用第二转运部件4-2轻轻吹打样品，以重悬细胞；

[0093] (3)用第三转运部件4-3从磁棒储存平台6内取得磁棒7并插入离心平台内的细胞悬液中，并用第三转运部件4-3实现磁棒周期性的缓慢旋转、上下移动、退磁和进磁，以实现CTC的捕获和磁珠的收集，每个周期约1-2分钟，总的时长不少于15分钟；

[0094] (4)将磁棒7抽离，并用第一转运部件4-1吸除样品管中剩余的液体，然后用第二转运部件4-2加入缓冲液，将磁棒7再次插入样品管中，通过缓慢旋转和上下移动来清洗磁棒7；

[0095] (5)用第三转运部件4-3将磁棒7转运至磁棒支撑架8上，将装有染色试剂的染色架9移至磁棒支撑架8的下方，将磁棒支撑架8向下移动使磁棒7的捕获窗浸入染色试剂中，并缓慢旋转和上下移动以充分均匀染色；

[0096] (6)上移磁棒支撑架8，然后移开染色架9，并将清洗架10移动至磁棒支撑架8下，下移磁棒支撑架8使磁棒7的捕获窗浸入清洗缓冲液中，缓慢旋转和上下移动磁棒7以清洗多余的染色液；

[0097] (7)用第三转运部件4-3将磁棒7移至事先加有固定试剂的计数平台12内，将磁棒7的磁芯抽出，留下磁套进行CTC计数。

[0098] 上述(5)和(6)的染色和清洗步骤可分别根据需要进行多次。

[0099] 在步骤(1)-(4)进行的同时，由第四转运部件4-4进行染色平台和计数平台试剂的准备工作，包括步骤：

[0100] (A)由第四转运部件4-4从第二转运头储存平台5-2中取得转运头，从第二试剂储存平台2-2中吸取染色试剂，向染色架9的试管中加入染色试剂，所述染色试剂是多种免疫荧光染色剂的混合物，如CK-PE、CD45-APC、DAPI、透化试剂的混合，每一种试剂的添加需替换转运头，废弃的转运头丢弃至第二废料收集平台3-2；

[0101] (B)由第四转运部件4-4从第二转运头储存平台5-2中取得转运头，从第二试剂储存平台2-2中吸取缓冲液，向清洗架10的试管中加入缓冲液；

[0102] (C)由第四转运部件4-4从第二转运头储存平台5-2中取得转运头，从第二试剂储存平台2-2中吸取固定试剂，向计数平台的计数盒中加入固定试剂。

[0103] 以上方法不唯一，可根据实验需要设计相应的步骤。

[0104] 实施例4

[0105] 上述实施例1的CTC分选仪用于样品阴性分选的一种方法，包括步骤：

[0106] (1)样品经条形码扫描后被置入离心平台内，用第二转运部件4-2吸取阴性富集多联抗体试剂加入样品管中，震荡混匀或吹打混匀；

[0107] (2)用第二转运部件4-2加入缓冲液，轻柔混匀；

[0108] (3)用第二转运部件4-2在离心平台的离心管内加入密度梯度离心液，用第四转运部件4-4将样品管中的样品轻柔地加入离心管中后离心，离心后的液体分为四层，从管底向上一次为血细胞层(红细胞和白细胞)、Ficoll分离液层、CTC层和血浆层；

[0109] (4)用第一转运部件4-1吸除大部分的血浆层后，还是用第一转运部件4-1吸取血细胞层以上的液体，转移至新的离心管中；

[0110] (5)用第二转运部件4-2加入缓冲液后离心，用第一转运部件4-1吸除上清，用第四转运部件4-4从第二转运头储存平台5-2中取得转运头，从第二试剂储存平台2-2中吸取染色试剂，向离心管中加入染色试剂，所述染色试剂是多种免疫荧光染色剂的混合物，如CK-PE、CD45-APC、DAPI、透化试剂的混合；

[0111] (6)用第二转运部件4-2重悬细胞并加入缓冲液，静置后离心，用第一转运部件4-1吸除上清；

[0112] (7)由第四转运部件4-4从第二转运头储存平台5-2中取得转运头，从第二试剂储存平台2-2中吸取固定试剂，向离心管中加入固定试剂，用第二转运部件4-2重悬细胞后，用第四转运部件4-4将重悬细胞转移至计数平台12内。

[0113] 以上方法不唯一，可根据实验需要设计相应的步骤。

[0114] 以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。