一种以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的方法

摘要

本发明提供了一种以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的技术，其特点是以农业废物猪场废水为原料培养植物促生细菌，采用2013年6月24日保存于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为：CCTCC M 2013283的Bacillus amyloliquefaciens H47的解淀粉芽孢杆菌菌株、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌为植物促生菌剂，制备制备稀土尾矿改良菌剂。以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂，利用植物促生菌解铵增加土壤肥力，还可作为一种保水剂，促进土壤团粒结构形成，防止土壤板结；破坏土壤毛细现象，防止土壤水分蒸发。采用猪场废水为原料培养植物促生细菌，来源广泛价格低廉，菌种增殖速度快，而且还可作为肥料，为植物提供各种营养物质。工艺简单，生产成本低，易于推广。使得猪场废水得到合理利用，变废为宝。

权利要求

1.一种以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的方法，其特点是以农业废物猪场废水为原料培养植物促生细菌，采用2013年6月24日保存于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC  NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌为植物促生菌剂，制备稀土尾矿改良菌剂，其步骤为：

1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌活化并制备成植物促生菌剂：(1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养18小时；

(2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有LB液体培养基的三角瓶中，准备若干份，摇床培养，培养条件：转速200r/min，温度30℃，恒温培养30小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

2)猪场废水预处理：调节猪场废水含水量至50—70％，调节pH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

3)将上述发酵菌液混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水中，保持水分50—60％，在25—30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

说明书

一种以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良

菌剂的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及修复离子型稀土尾矿的技术，具体的说是一种以农业废物猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的方法。属于生物技术领域。

背景技术

[0002] 土壤的重金属污染大多是由人类的活动引起的。其中，重金属的开采及冶炼对周边土壤环境产生的危害较大。而重金属的开采冶炼过程中产生的尾矿，由于处理不及时、长期堆积及雨水浸泡，导致重金属向周边土壤迁移，对其所处的生态环境可造成十分严重的重金属污染。因受污染的土壤面积大，传统的物理和化学的修复方法均因经济或技术原因难以实施。近年来，植物修复技术普遍被认为具有物理化学修复方法所无法比拟的费用低廉、不破坏场地结构、不造成地下水的二次污染、美化环境等优点，受到有关方面的广泛重视。所以，超积累植物的筛选是植物修复技术的研究基础,具有现实意义。

[0003] 本专利涉及到的保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Baci llus amyloliquefaciens)H47，有很好的植物促生特性。根际植物促生细菌是能够定植在植物根系，并对植物生长发育有利的细菌。市售地衣芽孢杆菌和市售短小芽孢杆菌与Bacillus amyloliquefaciens H47组成混合菌剂可协助Bac illus amyloliquefaciens H47促进植物生长。目前培养植物促生细菌的原料成本高昂，不利于植物促生菌剂的大规模应用。因此研究和建立以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的方法有重要意义。

[0004] 猪场污水主要包括猪尿、部分猪粪和猪舍冲洗水，属高浓度有机污水，而且悬浮物和氨氮含量大。这种未经处理的污水进入自然水体后，使水中固体悬浮物、有机物和微生物含量升高，改变水体的物理、化学和生物群落组成，使水质变坏。污水中还含有大量的病原微生物将通过水体或通过水生动植物进行扩散传播，危害人畜健康。

[0005] 我国的绝大部分规模化养猪场是采用水冲式工艺。这种工艺比较方便快捷，但是同时会把猪粪、饲料残渣与猪排泄物等一起冲洗到废水中，因此废水中含有大量的固体悬浮物等，而其他的污染物浓度也很高。养猪废水是一种高氨氮、高有机物浓度、高固体悬浮物浓度的有机废水，规模化猪场废水的处理对于节能减排具有重大意义。

发明内容

[0006] 本发明以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备稀土尾矿改良菌剂的技术。以保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌和市售短小芽孢杆菌为植物促生菌剂，通过对猪场废水预处理后加入植物促生菌进行扩大培养，即得到大量具有改善土壤理化状况、促进植物生长的离子型稀土尾矿原位修复的植物促生菌剂。该方法对植物在离子型尾矿的生长有明显的促进作用。猪场废水得到合理利用，变废为宝，价格低廉且简便易行。

[0007] 本发明的技术方案：

[0008] 用2013年6月24日保存于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47，市售地衣芽孢杆菌，市售短小芽孢杆菌混合植物促生菌剂，以猪场废水为原料培养植物促生细菌，制备稀土尾矿改良菌剂的技术。工艺为：

[0009] 1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌等菌种活化并制备成植物促生菌剂：

[0010] (1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养18小时；

[0011] (2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有LB液体培养基的三角瓶中，准备若干份，摇床培养，培养条件：转速200r/min，温度30℃，恒温培养30小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

[0012] 2)猪场废水预处理：调节猪场废水含水量至50—70％，调节PH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

[0013] 3)将上述发酵菌液混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水培养基中，保持水分50—60％，在25—30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

[0014] 本发明的有益效果：

[0015] 1)本发明以猪场废水为原料培养植物促生细菌制备的稀土尾矿改良菌剂，可以利用植物促生菌解铵增加土壤肥力。还可作为一种保水剂，促进土壤团粒结构形成，防止土壤板结；破坏土壤毛细现象，防止土壤水分蒸发。

[0016] 2)本发明用猪场废水为原料培养植物促生细菌，来源广泛价格低廉，菌种增殖速度快，而且还可作为肥料，为植物提供各种营养物质。

[0017] 3)本发明使得猪场废水得到合理利用，变废为宝。

[0018] 4)本发明的工艺简单，生产成本低，易于推广。

具体实施方式

[0019] 下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完善地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0020] 实施例1

[0021] 1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌活化并制备成植物促生菌剂：

[0022] (1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养18小时；

[0023] (2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有50ml LB液体培养液的250ml三角瓶中，每个菌接种12个，摇床培养，培养条件：转速180r/min，温度28℃，恒温培养36小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

[0024] 2)猪场废水预处理：称取3千克猪场废水调节含水量至60％，调节PH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

[0025] 3)将上述发酵菌液按1:1:1混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水培养基中，保持水分65％，在30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

[0026] 实施例2

[0027] 1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌等菌种活化并制备成植物促生菌剂：

[0028] (1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养20小时；

[0029] (2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有50ml LB液体培养液的250ml三角瓶中，每个菌接种12个，摇床培养，培养条件：转速200r/min，温度26℃，恒温培养32小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

[0030] 2)猪场废水预处理：称取3千克猪场废水调节含水量至70％，调节PH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

[0031] 3)将上述发酵菌液按1:2:1混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水培养基中，保持水分65％，在30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

[0032] 实施例3

[0033] 1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌等菌种活化并制备成植物促生菌剂：

[0034] (1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养22小时；

[0035] (2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有50ml LB液体培养液的250ml三角瓶中，每个菌接种12个，摇床培养，培养条件：转速160r/min，温度32℃，恒温培养28小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

[0036] 2)猪场废水预处理：称取3千克猪场废水调节含水量至65％，调节PH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

[0037] 3)将上述发酵菌液按1:1:2混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水培养基中，保持水分60％，在30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

[0038] 实施例4

[0039] 1)将保藏编号为CCTCC NO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo liquefaciens)H47、市售地衣芽孢杆菌、市售短小芽孢杆菌等菌种活化并制备成植物促生菌剂：

[0040] (1)在三种菌种斜面分别取一环在PDA平板上划线接菌丝，在培养箱中30℃培养16小时；

[0041] (2)在PDA平板上挑取三种菌种单菌落分别接入装有50ml LB液体培养液的250ml三角瓶中，每个菌接种12个，摇床培养，培养条件：转速200r/min，温度25℃，恒温培养36小时，即得到植物促生菌剂扩大培养的种子；

[0042] 2)猪场废水预处理：称取3千克猪场废水调节含水量至65％，调节PH至7.0，装在耐高温的塑料袋中，121℃灭菌30分钟；

[0043] 3)将上述发酵菌液按2:1:1混合后按比例1:10接入处理好的猪场废水培养基中，保持水分55％，在30℃条件下增殖2—3天，即得扩大培养的稀土尾矿改良菌剂。

[0044] 本发明中，混合菌的比例、接种量、猪场废水培养基含水量等等不限于实施例所举的组合，可根据实际情况选择不同的组合。

[0045] 以上所述仅为本发明的较佳实例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的思路和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。