柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用

摘要

本发明涉及柚苷酶的医药新用途，具体涉及柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用。柚苷酶由α‑L‑鼠李糖苷酶和β‑D‑葡萄糖苷酶组成，目前主要应用于柑橘、葡萄等果汁的脱苦。本发明涉及柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用，该药物是体外能够起到灭活内毒素的作用的药物，开辟了柚苷酶的新用途，为抗内毒素的治疗提供了新的药物。

权利要求

1.柚苷酶在制备药物中的应用，其特征在于：所述柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的柚苷酶在制备药物中的应用，其特征在于：所述柚苷酶制备的具有抗内毒素活性的药物，是体外能够起到灭活内毒素的作用的药物。

3.根据权利要求1所述的柚苷酶在制备药物中的应用，其特征在于：所述柚苷酶制备的具有抗内毒素活性的药物，是起到降解内毒素的作用的药物。

说明书

柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及柚苷酶的新用途，具体涉及一种柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用。

背景技术

[0002] 内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上一种特定的复合物，其主要成分为脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS），脂多糖由类脂A、核心糖脂和特异的O 侧链组成，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。

[0003] 内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。

[0004] 柚苷酶是由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶组成，目前主要应用于柑橘、葡萄等果汁的脱苦。柚苷酶作用的最适pH值 3.5-5.0，最适温度 50-60℃。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用，开辟柚苷酶的新用途。

[0006] 本发明所采用的技术方案为：

[0007] 柚苷酶的药物应用，其特征在于：

[0008] 所述柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用。

[0009] 所述柚苷酶制备的具有抗内毒素活性的药物，是体外能够起到灭活内毒素的作用的药物。

[0010] 所述柚苷酶制备的具有抗内毒素活性的药物，是起到降解内毒素的作用的药物。

[0011] 本发明具有以下优点：

[0012] 本发明涉及柚苷酶在制备具有抗内毒素活性的药物中的应用，将仅应用于柑橘、葡萄等果汁脱苦的柚苷酶应用于医药领域，为抗内毒素的治疗提供新的药物。

附图说明

[0013] 图1为鲎试剂标准曲线。

具体实施方式

[0014] 下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明，下述实施例用于进一步说明但不限于本发明。

[0015] 实施例1：柚苷酶试管凝胶法抗内毒素

[0016] 1.1柚苷酶酶液的制备

[0017] 取新鲜的柚苷酶发酵液，用无热源的离心管取上清，12000rad/min离心10min，上清液待用。

[0018] 1.2 细菌内毒素工作标准品的稀释

[0019] 取细菌内毒素工作标准品（60EU/支）数支，每支准确加入内毒素检查用水1mL，充分涡旋混合15min  ,得到浓度为60EU/mL的细菌内毒素工作标准品，然后依次稀释成浓度为30、15、10、1、0.5、0.25EU/mL的内毒素溶液，每稀释一次涡旋30S。

[0020] 1.3 不同浓度的内毒素耐热试验，验证内毒素在一定温度下保温一定时间后的有效性。

[0021] 分别取上述各稀释浓度内毒素溶液0.2ml于无热源试管中，封口后置60℃水浴保温60min，取保温后的内毒素溶液0.1ml加入鲎试剂中，封口混匀后置内毒素测定仪37℃保温60min，观察内毒素于鲎试剂作用后凝胶生成情况，每个样品均设2个重复，同时设立内毒素阳性和阴性对照。

[0022] 1.4 内毒素耐热实验结果

[0023] 实验结果显示：内毒素浓度为0.5EU/mL以下保温60min，无凝胶产生，表明内毒素被破坏；内毒素浓度为1EU/mL以上保温60min，均有凝胶产生，表明内毒素在60℃保温60min无失活。（见表1）

[0024]

[0025] 1.5 柚苷酶试管凝胶法抗内毒素实验过程

[0026] 取不同浓度的内毒素标准品0.1ml，加入无热源的柚苷酶0.1ml，稀释后内毒素浓度依次为30、15、2、1EU/mL的混合液，封口混匀后置60℃酶解反应60min，取各混合液0.1mL加入鲎试剂中，封口混匀后置内毒素测定仪37℃保温60min，观察内毒素酶解液于鲎试剂作用后凝胶生成情况，每个样品均设2个重复，同时设立内毒素阳性和阴性对照，处理方法同样品。

[0027] 1.6柚苷酶试管凝胶法抗内毒素实验结果

[0028] 实验结果显示：柚苷酶与浓度为60、30、4、2EU/mL的内毒素溶液孵育后，均无凝胶产生，所以柚苷酶在体外能够起到灭活内毒素的作用。（见表2）

[0029]

[0030] 1.7 鲎试剂显色基质法实验过程，利用鲎试剂显色基质法测定柚苷酶作用不同时间对内毒素的降解率。

[0031] （1）标准曲线的建立

[0032] 取细菌内毒素工作标准品（15EU/mL）一支，加入内毒素检查用水1mL，涡旋15min，使其浓度为15EU/mL；并依次稀释成浓度为1、0.5、0.25、0.1EU/mL的内毒素标准溶液，配置好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2和偶氮化试剂3按试剂盒说明进行复溶，其中显色基质在无污染的条件下于4℃贮存8h以内，偶氮化试剂溶液可于4℃贮存1周。

[0033] （2）实验操作过程：分别取不同浓度内毒素标准溶液0.1mL加入鲎试剂中，混匀，置内毒素测定仪37℃保温10min，温育结束后，分别加入0.1mL显色基质溶液，混匀，37℃保温6min。温育结束后，分别加入0.5mL偶氮化试剂1，混匀；再分别加入0.5mL偶氮化试剂2，混匀；最后加入0.5mL偶氮化试剂3，混匀，同时做空白对照管，空白管除不加内毒素标准溶液外，其余加量和内毒素标准管相同，静置5min，于545 nm波长处读取吸光度值。为避免误差，每个样品均设2各重复。

[0034] （3）实验结果：建立标准曲线：Y = 1.536 X -0.0734，其中Y为545nm处吸光度值，X为内毒素的浓度，R2=0.9911。

[0035] 鲎试剂标准曲线见图1。

[0036] 实施例2：柚苷酶对内毒素的降解率的影响

[0037] 2.1 不同作用时间柚苷酶对内毒素降解率的影响

[0038] 内毒素与柚苷酶反应不同时间检测内毒素的含量

[0039] 实验结果显示，内毒素初含量为5EU/ml时，柚苷酶酶解作用不同时间，降解率呈递增趋势，截止到1h,降解率达到79.9%。

[0040]

[0041] 本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。