一种改良沙堡琼脂培养基及其制备方法

摘要

本发明公开了一种改良沙堡琼脂培养基及其制备方法，属于微生物培养领域。培养基具体以质量计算由蛋白胨0.5‑2份、葡萄糖2‑6份、甘草酸单铵盐1‑3份、琼脂粉1.5‑2.5份，蒸馏水87‑96份制备而成，本发明在沙堡琼脂培养基的基础上改良添加甘草酸单铵盐，有效延缓了培养基在40‑45℃时的凝固时间，提高了菌液与培养基中各物质的混合均匀程度，对使用倾注法培养真菌的试验有效避免由于混合均匀度不够导致的菌落成团结块、重叠、生长状态不良等不利用后期计算测定结果的现象发生。从而提高试验以及试验结果的准确性，避免多次重复试验，缩短试验时间、减少误差，有利于提高试验的精确程度。

权利要求

1.一种改良沙堡琼脂培养基，其特征在于在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨0.5-2份、葡萄糖2-6份、甘草酸单铵盐1-

3份、琼脂粉1.5-2.5份，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100份，采用1%氢氧化钠调节pH为5.4-5.8。

2.根据权利要求1所述的改良沙堡琼脂培养基，其特征在于：所述甘草酸单铵盐的量为

1-2份。

3.如权利要求1所述的改良沙堡琼脂培养基的制备方法，其特征在于包括如下步骤：A）培养基基液的配制：按配方中各原料所需比例称取各原料备用，将蛋白胨、葡萄糖用蒸馏水作为培养基配剂进行溶解，搅拌均匀调配得培养基基液；

B）pH调节：调节步骤A）配制的培养基基液pH为5.4-5.8；

C）培养基的配制：向已经调节好pH的培养基基液中加入甘草酸单铵盐和琼脂粉，加热搅拌至完全溶解得到目的培养基；

D）后处理：将目的培养基进行分装，灭菌处理后60℃保温待用，得到所需改良沙煲琼脂培养基成品。

4.根据权利要求3所述的改良沙堡琼脂培养基的制备方法，其特征在于：所述灭菌处理具体方式为湿热灭菌和干热灭菌中的一种。

5.根据权利要求4所述的改良沙堡琼脂培养基的制备方法，其特征在于：所述灭菌处理具体方式为121℃下湿热灭菌20-40min。

说明书

一种改良沙堡琼脂培养基及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及微生物培养领域，尤其涉及一种改良沙堡琼脂培养基及其制备方法。

背景技术

[0002] 培养基是微生物发酵过程或动植物细胞培养过程中供微生物或动、植物细胞生长、繁殖或累积代谢产物所必需的营养基质。一般培养基的成分包括:碳源、氮源、矿物质，以及其他必需物质，如某些生物自身不能合成的物质，如某些氨基酸、维生素或核苷酸等。此外，培养基中还常加入pH缓冲剂以维持稳定的pH。

[0003] 培养基按其化学成分可分为天然培养基、复合培养基和合成培养基。天然培养基的成分全由天然产物组成，如动、植物或微生物体包括其提取物等。复合培养基是由部分天然产物和部分已知成分的化合物组成。合成培养基由已知成分的化合物所组成，如各种纯的化合物的组合。

[0004] 培养基按其物理形态又可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基等。培养基按其用途还可以分为基础培养基、丰富培养基、鉴别培养基和选择培养基。基础培养基提供最基础的营养成分。丰富培养基是在基础培养基中添加了更多量的营养物质，以实现培养的微生物或动植物细胞快速生长。鉴别培养基是在培养基中加入某些试剂，从而在培养过程中表现出一些特殊反应，可用作鉴别不同类型的微生物或动植物细胞。选择培养基是根据某些生物体的特殊营养要求或对某些化学物质具有抗性而设计的培养基。

[0005] 现有技术中细菌培养基大部分以琼脂为基质，并添加一些细菌生长所需的营养物，然后在无菌实验室中按照严格的无菌操作程序对细菌进行培养、观察与测定。但是由于琼脂的特性在40℃-45℃时的凝固速度过快，凝固时间过短导致培养基与菌液混合不均匀，菌液分布密集，培养生长会出现菌落成团结块、重叠、生长状态不良等不利用后期计算测定结果的缺点。从而导致试验的准确性不高，试验结果不可行，需要多次重复试验，浪费时间。

发明内容

[0006] 发明目的：为了克服现有技术中存在的问题，本发明提出了一种有效延缓凝固时间，提高菌液与培养基的混合均匀度的改良沙堡琼脂培养基及其制备方法。

[0007] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨0.5-2份、葡萄糖2-6份、甘草酸单铵盐1-3份、琼脂粉1.5-2.5份，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100份，pH调节为5.4-5.8。

[0008] 更为优选的，所述甘草酸单铵盐的量为1-2份。

[0009] 更为优选的，所述甘草酸单铵盐在在除培养基配剂蒸馏水外的质量百分比含量高于73％。

[0010] 更为优选的，所述pH调节采用1％氢氧化钠进行调节。

[0011] 本发明还公开了上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法，包括如下步骤：

[0012] A)培养基基液的配制：按配方中各原料所需比例称取各原料备用，将蛋白胨、葡萄糖用蒸馏水作为培养基配剂进行溶解，搅拌均匀调配得培养基基液；

[0013] B)pH调节：调节步骤A)配制的培养基基液pH为5.4-5.8；

[0014] C)培养基的配制：向已经调节好pH的培养基基液中加入甘草酸单铵盐和琼脂粉，加热搅拌至完全溶解得到目的培养基；

[0015] D)后处理：将目的培养基进行分装，灭菌处理后60℃保温待用，得到所需改良沙煲琼脂培养基成品。

[0016] 更为优选的，所述灭菌处理具体方式为湿热灭菌和干热灭菌中的一种。

[0017] 更进一步的，所述灭菌处理具体方式为121℃下湿热灭菌20-40min。

[0018] 有益效果：本发明提供的一种改良沙堡琼脂培养基及其制备方法，属于微生物培养领域。培养基具体以质量计算由蛋白胨0.5-2份、葡萄糖2-6份、甘草酸单铵盐1-3份、琼脂粉1.5-2.5份，蒸馏水87-96份制备而成，本发明在沙堡琼脂培养基的基础上改良添加甘草酸单铵盐，有效延缓了培养基在40-45℃时的凝固时间，提高了菌液与培养基中各物质的混合均匀程度，对使用倾注法培养真菌的试验有效避免由于混合均匀度不够导致的菌落成团结块、重叠、生长状态不良等不利用后期计算测定结果的现象发生。从而提高试验以及试验结果的准确性，避免多次重复试验，缩短试验时间、减少误差，有利于提高试验的精确程度，此外，本发明的制备方法设计合理，操作简单方便。

具体实施方式

[0019] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：

[0020] 实施例1：

[0021] 一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨2g、葡萄糖4g、甘草酸单铵盐1g、琼脂粉2g，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100mL，用1％的氢氧化钠pH调节为5.52。

[0022] 上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法，包括如下步骤：

[0023] A)培养基基液的配制：按配方中各原料所需比例称取各原料备用，将蛋白胨、葡萄糖用蒸馏水作为培养基配剂进行溶解，搅拌均匀调配得培养基基液；

[0024] B)pH调节：调节步骤A)配制的培养基基液pH为规定值；

[0025] C)培养基的配制：向已经调节好pH的培养基基液中加入甘草酸单铵盐和琼脂粉，加热搅拌至完全溶解得到目的培养基；

[0026] D)后处理：将目的培养基进行分装，121℃下湿热灭菌20min后并保温60℃待用，得到所需改良沙煲琼脂培养基成品。

[0027] 实施例2：

[0028] 一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨1g、葡萄糖3g、甘草酸单铵盐1.5g、琼脂粉1.8g，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100mL，用1％的氢氧化钠pH调节为5.48。

[0029] 上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法同实施例1。

[0030] 实施例3：

[0031] 一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨1.5g、葡萄糖5g、甘草酸单铵盐2g、琼脂粉2.2g，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100mL，用1％的氢氧化钠pH调节为5.55。

[0032] 上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法同实施例1。

[0033] 实施例4：

[0034] 一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨1.8g、葡萄糖6g、甘草酸单铵盐2.5g、琼脂粉1.5g，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100mL，用1％的氢氧化钠pH调节为5.65。

[0035] 上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法同实施例1。

[0036] 实施例5：

[0037] 一种改良沙堡琼脂培养基，在普通的琼脂培养基的基础上加入甘草酸单铵盐，具体以质量分数计算，包括如下成分：蛋白胨0.8g、葡萄糖2g、甘草酸单铵盐3g、琼脂粉2.5g，以蒸馏水作为培养基配剂至额定量100mL，用1％的氢氧化钠pH调节为5.62。

[0038] 上述改良沙堡琼脂培养基的制备方法同实施例1。

[0039] 有益效果试验验证：

[0040] 以实施例1-5制备的改良沙堡琼脂培养基与基础沙堡琼脂培养基进行对比试验；其中基础沙堡琼脂培养基制备方法为将2g蛋白胨和4g葡萄糖用热水溶解，加水至总体积
100ml，调节PH为5.4-5.8；加入2g琼脂粉，加热溶解，然后分装，在121℃湿热灭菌20min，保温60℃待用。

[0041] 将实施例1-5与制备完成的对照组基础沙堡琼脂培养基在60℃时，分别进行倾注法试验进行真菌培养，并测定凝固时间。具体方法如下：

[0042] 无菌条件下倒入保温45℃的平板上，从倒入开始计时，手持平板水平方向轻摇使培养基在平面内均匀分布；待培养基完全凝固时记下时间，进行差异显著性分析。每组三个平行试验，同时观察培养基分布情况，软硬程度。结果见表1：

[0043] 表1实施例1-5以及对照组凝固时间对比分析

[0044]

[0045]

[0046] 注：与对照组比：*P<0.05，**P<0.01

[0047] 从表1中数据可以看出，实施例1-5的改良沙堡琼脂培养基和对照组基础沙堡琼脂培养基在平板上的凝固时间均差异明显，其中实施例1-4的改良沙堡琼脂培养基的凝固时间较对照组基础沙堡琼脂培养基的凝固时间有极显著差异；实施例5的改良沙堡琼脂培养基的凝固时间较对照组基础沙堡琼脂培养基的凝固时间有显著性差异。

[0048] 综上：本发明一种改良沙堡琼脂培养基在平板上的凝固时间明显优于基础沙堡琼脂培养基在平板上的凝固时间，且甘草酸单铵盐在本发明限定范围内不同的用量差异均达显著或极显著水平。

[0049] 应当指出，以上具体实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。