一种祖卡木制剂的质量检测方法

摘要

本发明为一种祖卡木制剂的质量检测方法。该检测方法包括以下步骤：(1)制备供试品溶液；(2)制备对照品溶液；(3)检测。本发明所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，反映的信息较完全，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠；该检测方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

权利要求

1.一种祖卡木制剂的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)制备供试品溶液：

将祖卡木颗粒溶解于水中，得祖卡木颗粒溶液；

用萃取剂萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用萃取剂萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，合并上层溶液1和上层溶液2，得萃取液；所述萃取剂为水饱和的正丁醇溶液；

蒸干萃取液去除正丁醇，得残渣；

将残渣溶解于甲醇溶液后，过滤，得滤液，滤液为供试品溶液；所述祖卡木颗粒的质量与甲醇溶液的体积比为2-5g：50ml；

(2)制备对照品溶液：

将烟花苷溶解于甲醇后，过滤，得滤液，滤液为对照品溶液；所述烟花苷的质量与甲醇的体积比为0.009-0.011mg：1ml；

(3)检测：

分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μl，注入高效液相色谱仪，记录69-75分钟内的色谱图；

其中，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为甲醇，流动相B为质量分数为0.09-

0.11％的磷酸水溶液；柱温为30-35℃；理论塔板数大于2000；

洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.0ml/min，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相

15％→35％，B相85％→65％；10-35min，A相35％→55％，B相65％→45％；35-40min，A相

55％→65％，B相45％→35％；40-45min，A相65％→67％，B相35％→33％；45-50min，A相

67％→70％，B相33％→30％；50-55min，A相70％→72％，B相30％→28％；55-58min，A相

72％→73％，B相28→27％；58-63min，A相73％→79％，B相27→21％；63-75min，A相79％→

82％，B相21％→18％；

检测器为二极管阵列检测器，检测波长为250-260nm。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤(1)中，甲醇溶液的质量分数为30-70％；

所述蒸干萃取液的温度小于80℃；

所述过滤采用0.22μm的微孔滤膜过滤；

所述步骤(2)中，过滤采用0.22μm的微孔滤膜过滤。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤(1)还包括，用萃取剂萃取下层溶液2，静置分层后，得上层溶液3和下层溶液

3，合并上层溶液1、上层溶液2和上层溶液3，得萃取液；

所述步骤(2)中，烟花苷的质量与甲醇的体积比为0.01mg：1ml。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤(1)中，祖卡木颗粒溶液中的水与甲醇溶液的体积比为10-50：50。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤(1)中，每次萃取时萃取剂的体积与甲醇溶液的体积比为10-50：50。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤(3)中，磷酸水溶液的质量分数为0.1％；

所述柱温为35℃；

所述二极管阵列检测器的检测波长为254nm。

说明书

一种祖卡木制剂的质量检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药检测领域，具体涉及一种祖卡木制剂的质量检测方法。

背景技术

[0002] 祖卡木制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维吾尔药分册。祖卡木制剂具有调节异常气质、清热、发汗、通窍的作用，用于感冒咳嗽、发热无汗、咽喉肿痛，鼻塞流涕，是维吾尔医治疗感冒的经典名方，在新疆各族人民中广为使用，在全国各省市均有分布，是维吾尔药大品种。其处方包括山奈、睡莲花、薄荷、卡西卡甫枣、洋甘菊、破布木果、甘草、蜀葵子、大黄、罂粟壳等十味药材。祖卡木制剂组分复杂，因此评价其质量应采用与之相适应的、能提供丰富鉴别信息的检测方法。目前，对祖卡木制剂的质量控制，多采用其中一两种中药成分的含量测定或薄层色谱鉴别，其中，有文献报道测定其中的大黄素、大黄酚含量；或测定罂粟碱、吗啡含量；或测定甘草中主要成分的含量。但是，这些单一成分测定并不能完全反映祖卡木制剂的内在质量，且薄层鉴别的Rf值较大，同时没有对主要成分和活性成分的含量进行测定，都具有片面性，如何建立一种方便易行并包含信息量全面的检测方法亟待解决。

[0003] 有鉴于此，有必要提出一种方便易行，包含信息量较为全面的针对于祖卡木制剂的质量检测方法。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种祖卡木制剂的质量检测方法，该检测方法简便、稳定、精密度高、重现性好，可以全面监控产品的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性。

[0005] 为了实现上述目的，所采用的技术方案为：

[0006] 一种祖卡木制剂的质量检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

[0007] (1)制备供试品溶液：

[0008] 将祖卡木颗粒溶解于水中，得祖卡木颗粒溶液；

[0009] 用萃取剂萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用萃取剂萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，合并上层溶液1和上层溶液2，得萃取液；所述萃取剂为水饱和的正丁醇溶液；

[0010] 蒸干萃取液去除正丁醇，得残渣；

[0011] 将残渣溶解于甲醇溶液后，过滤，得滤液，滤液为供试品溶液；所述祖卡木颗粒的质量与甲醇溶液的体积比为2-5g：50ml；

[0012] (2)制备对照品溶液：

[0013] 将烟花苷溶解于甲醇后，过滤，得滤液，滤液为对照品溶液；所述烟花苷的质量与甲醇的体积比为0.009-0.011mg：1ml；

[0014] (3)检测：

[0015] 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μl，注入高效液相色谱仪，记录69-75分钟内的色谱图；其中，所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；所述流动相A为甲醇，所述流动相B为磷酸水溶液；所述洗脱方式为梯度洗脱；所述检测器为二极管阵列检测器。

[0016] 进一步的，所述步骤(1)中，甲醇溶液的质量分数为30-70％；

[0017] 所述蒸干萃取液的温度小于80℃；

[0018] 所述过滤采用0.22μm的微孔滤膜过滤；

[0019] 所述步骤(2)中，过滤采用0.22μm的微孔滤膜过滤。

[0020] 再进一步的，所述步骤(1)还包括，用萃取剂萃取下层溶液2，静置分层后，得上层溶液3和下层溶液3，合并上层溶液1、上层溶液2和上层溶液3，得萃取液；

[0021] 所述步骤(2)中，烟花苷的质量与甲醇的体积比为0.01mg：1ml。

[0022] 再进一步的，所述步骤(1)中，祖卡木颗粒溶液中的水与甲醇溶液的体积比为10-50：50。

[0023] 再进一步的，所述步骤(1)中，每次萃取时萃取剂的体积与甲醇溶液的体积比为10-50：50。

[0024] 再进一步的，所述步骤(3)中，磷酸水溶液的质量分数为0.09-0.11％；

[0025] 所述柱温为30-35℃；

[0026] 所述二极管阵列检测器的检测波长为250-260nm；

[0027] 所述理论塔板数大于2000。

[0028] 再进一步的，所述梯度洗脱的流速为1.0ml/min，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-33％；45-50min，A相67％-
70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-28％；55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-75min，A相79％-82％，B相21％-
18％。

[0029] 再进一步的，所述步骤(3)中，磷酸水溶液的质量分数为0.1％；

[0030] 所述柱温为35℃；

[0031] 所述二极管阵列检测器的检测波长为254nm。

[0032] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

[0033] 1、本发明所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；

[0034] 2、本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了18个共有峰，建立的指纹图谱技术含量高，18个共有峰中1号峰为药材大黄、睡莲花、山柰、破布木果共有成分没食子酸；7号峰为药材睡莲花的特征性成分烟花苷；15号峰为药材山柰特征性成分对甲氧基肉桂酸乙酯；16号峰为药材甘草的特征性成分甘草酸铵；18号峰为药材大黄的特征性成分大黄素，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。

[0035] 3、本发明所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的指纹图谱出峰较多，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收，以及只是为了测定某个成分的精确含量的情况。

[0036] 4、本发明所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法所得的祖卡木制剂指纹图谱的峰多，峰形好，易于鉴别，相似性高，准确可靠。

[0037] 5、本发明所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，该检测方法以祖卡木颗粒为例，虽然市售的祖卡木制剂仅有祖卡木颗粒一种制剂类型，若出现其他祖卡木制剂类型，也同样适用于其他祖卡木制剂类型，因药物的物质基础没有改变，所含化学成分无差异，因此，本发明所述的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法仍适用。

附图说明

[0038] 图1为本发明实施例1测得的祖卡木颗粒其颗粒的共有模式图谱；

[0039] 图2为本发明祖卡木颗粒其颗粒精密度HPLC指纹图谱；

[0040] 图3为本发明祖卡木颗粒其颗粒重复性HPLC指纹图谱；

[0041] 图4为本发明祖卡木颗粒其颗粒稳定性HPLC指纹图谱；

[0042] 图5为本发明10个批次祖卡木颗粒其颗粒指纹图谱叠加图。

具体实施方式

[0043] 为了进一步阐述本发明一种祖卡木制剂的质量检测方法，达到预期发明目的，以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的一种祖卡木制剂的质量检测方法，其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。

[0044] 在详细阐述本发明一种祖卡木制剂的质量检测方法之前，有必要对本发明中提及的相关材料和实验仪器，以及名词做进一步说明，以达到更好的效果。

[0045] 指纹图谱是指某些复杂物质，比如中药，某种生物体或某种组织或细胞的DNA，蛋白质经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段。建立指纹图谱将能较为全面地反映制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价，可以为控制和保证产品质量的稳定性提供保障。

[0046] 本发明所述的祖卡木制剂由山奈、睡莲花、破布木果、薄荷、大枣、洋甘菊、甘草、蜀葵子、大黄、罂粟壳十种干药材按重量比83∶176∶333∶176∶83∶83∶33∶83∶50∶83的比例称取后水提取挥发油，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过备用；药渣与其余甘草等7味，加水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.06-
1.16(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达到60％，静置24小时以上使沉淀，滤过，滤液减压浓缩至适量，加入适量医学常用的辅料，及上述备用的挥发油，制成颗粒，低温干燥，混匀，制成颗粒。

[0047] 本发明中质量分数(mass fraction)指溶液中溶质质量与溶液质量之比。也指混合物中某种物质质量占总质量的百分比。

[0048] 本发明中体积分数指的是：在理想溶液中，溶液的体积有加成性，总体积等于所有成份混合前的体积和，此时的体积分数也可称为体积浓度，指某种成分在总体积中所占的百分比。

[0049] 在了解上述相关材料和实验仪器后，下面将结合具体的实施例，对本发明一种祖卡木制剂的质量检测方法做进一步的详细介绍：

[0050] 一实施例

[0051] 实施例1.

[0052] (1)供试品溶液的制备：

[0053] 精密称定5g祖卡木颗粒，溶解于50ml水中，搅拌至溶解，得祖卡木颗粒溶液；

[0054] 用50ml的水饱和正丁醇溶液萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用40ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，用30ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液2，静置分层后，得上层溶液3和下层溶液3，合并上层溶液1、上层溶液2和上层溶液3，得萃取液；

[0055] 蒸干萃取液去除正丁醇，加热温度小于80℃，得残渣；

[0056] 将残渣溶解于50ml的质量分数为70％的甲醇溶液后，过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液为供试品溶液；

[0057] (2)对照品溶液的制备：精密称定0.011mg的烟花苷对照品，加入到1ml的甲醇，溶解后过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液作为对照品溶液；

[0058] (3)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录69分钟内的色谱图，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以质量分数为0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的体积分数变化如表1所示为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-33％；45-50min，A相67％-70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-
28％；55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-
69min，A相79％-82％，B相21％-18％；流速1.0ml·min-1，采用DAD检测器，波长260nm，柱温
35℃，理论塔板数按烟花苷峰计算应大于2000。记录75分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得祖卡木颗粒的指纹图谱中18个共有峰，由这18个共有峰构成祖卡木制剂的指纹特征，作为祖卡木制剂成分的标准指纹图谱，如图1所示。

[0059] 表1祖卡木颗粒指纹图谱梯度洗脱程序

[0060]

[0061] 结果表明，通过表1中流动相的梯度洗脱程序所得高效液相色谱图基线平稳，各色谱峰分离效果良好，峰形佳。

[0062] 18个共有峰中1号峰为药材大黄、睡莲花、山柰、破布木果共有成分没食子酸；7号峰为药材睡莲花的特征性成分烟花苷；15号峰为药材山柰特征性成分对甲氧基肉桂酸乙酯；16号峰为药材甘草的特征性成分甘草酸铵；18号峰为药材大黄的特征性成分大黄素。

[0063] 本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了18个共有峰，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，成功的表征了祖卡木制剂中所含4种药材(睡莲花、甘草、大黄、山奈)的特征成分，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

[0064] 实施例2.

[0065] (1)供试品溶液的制备：

[0066] 精密称定2g祖卡木颗粒，溶解于10ml水中，加热溶解，冷却至室温，得祖卡木颗粒溶液；

[0067] 用30ml的水饱和正丁醇溶液萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用20ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，用10ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液2，静置分层后，得上层溶液3和下层溶液3，合并上层溶液1、上层溶液2和上层溶液3，得萃取液；

[0068] 蒸干萃取液去除正丁醇，加热温度为75℃，得残渣；

[0069] 将残渣溶解于50ml的质量分数为30％的甲醇溶液后，过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液为供试品溶液；

[0070] (2)对照品溶液的制备：精密称定0.009mg的烟花苷对照品，加入到1ml的甲醇，溶解后过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液作为对照品溶液；

[0071] (3)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，记录69分钟内的色谱图，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以质量分数为0.09％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-
33％；45-50min，A相67％-70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-28％；
55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-69min，A-1
相79％-82％，B相21％-18％；流速1.0ml·min ，采用DAD检测器，波长250nm，柱温30℃，理论塔板数按烟花苷峰计算应大于2000。记录69分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得祖卡木颗粒的指纹图谱中17个共有峰，由这17个共有峰构成祖卡木制剂的指纹特征，作为祖卡木制剂成分的标准指纹图谱。

[0072] 本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

[0073] 实施例3.

[0074] (1)供试品溶液的制备：

[0075] 精密称定4g祖卡木颗粒，溶解于40ml水中，搅拌至溶解，得祖卡木颗粒溶液；

[0076] 用30ml的水饱和正丁醇溶液萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用30ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，合并上层溶液1和上层溶液2，得萃取液；

[0077] 蒸干萃取液去除正丁醇，加热温度为70℃，得残渣；

[0078] 将残渣溶解于50ml的质量分数为40％的甲醇溶液后，过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液为供试品溶液；

[0079] (2)对照品溶液的制备：精密称定0.01mg的烟花苷对照品，加入到1ml的甲醇，溶解后过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液作为对照品溶液；

[0080] (3)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8μl，注入高效液相色谱仪，记录72分钟内的色谱图，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以质量分数为0.11％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-
33％；45-50min，A相67％-70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-28％；
55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-72min，A相79％-82％，B相21％-18％；流速1.0ml·min-1，采用DAD检测器，波长255nm，柱温33℃，理论塔板数按烟花苷峰计算应大于2000。记录72分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得祖卡木颗粒的指纹图谱中17个共有峰，由这17个共有峰构成祖卡木制剂的指纹特征，作为祖卡木制剂成分的标准指纹图谱。

[0081] 本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

[0082] 实施例4.

[0083] (1)供试品溶液的制备：

[0084] 精密称定3g祖卡木颗粒，溶解于30ml水中，加热溶解，冷却至室温，得祖卡木颗粒溶液；

[0085] 用30ml的水饱和正丁醇溶液萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用20ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，用20ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液2，静置分层后，得上层溶液3和下层溶液3，合并上层溶液1、上层溶液2和上层溶液3，得萃取液；

[0086] 蒸干萃取液去除正丁醇，加热温度小于80℃，得残渣；

[0087] 将残渣溶解于50ml的质量分数为50％的甲醇溶液后，过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液为供试品溶液；

[0088] (2)对照品溶液的制备：精密称定0.01mg的烟花苷对照品，加入到1ml的甲醇，溶解后过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液作为对照品溶液；

[0089] (3)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6μl，注入高效液相色谱仪，记录75分钟内的色谱图，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以质量分数为0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-
33％；45-50min，A相67％-70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-28％；
55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-75min，A相79％-82％，B相21％-18％；流速1.0ml·min-1，采用DAD检测器，波长254nm，柱温35℃，理论塔板数按烟花苷峰计算应大于2000。记录75分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得祖卡木颗粒的指纹图谱中18个共有峰，由这18个共有峰构成祖卡木制剂的指纹特征，作为祖卡木制剂成分的标准指纹图谱。

[0090] 本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了18个共有峰，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

[0091] 实施例5.

[0092] (1)供试品溶液的制备：

[0093] 精密称定4g祖卡木颗粒，溶解于50ml水中，加热溶解，冷却至室温，得祖卡木颗粒溶液；

[0094] 用50ml的水饱和正丁醇溶液萃取祖卡木颗粒溶液，静置分层后，得上层溶液1和下层溶液1；用50ml的水饱和正丁醇溶液萃取下层溶液1，静置分层后，得上层溶液2和下层溶液2，合并上层溶液1和上层溶液2，得萃取液；

[0095] 蒸干萃取液去除正丁醇，加热温度为73℃，得残渣；

[0096] 将残渣溶解于50ml的质量分数为60％的甲醇溶液后，过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液为供试品溶液；

[0097] (2)对照品溶液的制备：精密称定0.01mg的烟花苷对照品，加入到1ml的甲醇，溶解后过0.22μm的微孔滤膜，得滤液，滤液作为对照品溶液；

[0098] (3)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各7μl，注入高效液相色谱仪，记录69分钟内的色谱图，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以质量分数为0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的体积分数变化为：0-10min，A相15％-35％，B相85％-65％；10-35min，A相35％-55％，B相65％-45％；35-40min，A相55％-65％，B相45％-35％；40-45min，A相65％-67％，B相35％-
33％；45-50min，A相67％-70％，B相33％-30％；50-55min，A相70％-72％，B相30％-28％；
55-58min，A相72％-73％，B相28-27％；58-63min，A相73％-79％，B相27-21％；63-69min，A相79％-82％，B相21％-18％；流速1.0ml·min-1，采用DAD检测器，波长254nm，柱温35℃，理论塔板数按烟花苷峰计算应大于2000。记录69分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得祖卡木颗粒的指纹图谱中18个共有峰，由这18个共有峰构成祖卡木制剂的指纹特征，作为祖卡木制剂成分的标准指纹图谱。

[0099] 本发明实施例所述的一种祖卡木制剂的质量检测方法，根据该检测方法制得的祖卡木制剂的指纹图谱检测方法，建立的祖卡木制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；建立的祖卡木制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了18个共有峰，出峰较多，峰形好，易于鉴别，相似性高，反映的信息较完全，可以充分反映化学成分的信息，并且各个峰吸收值良好，基线平稳，建立的指纹图谱技术含量高，准确可靠，避免了祖卡木制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征上控制祖卡木其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保祖卡木制剂的安全性和有效性，为祖卡木制剂的质量控制提供科学的依据。

[0100] 二实验测试

[0101] 1、精密度试验

[0102] 取实施例3的同一批祖卡木颗粒1份，制备供试品溶液，重复进样6次，记录色谱图，分别对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.1％，相对峰面积比值RSD小于2.34％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，如图2所示，图中从上至下相似度分别为0.997、1、0.998、0.996、0.995、0.999，相似度均大于0.994，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。

[0103] 2、重复性试验

[0104] 精密称取实施例2的同一批祖卡木颗粒6份，制备供试品溶液，分别进样，记录色谱图，对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.11％，相对峰面积比值RSD小于2.55％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，如图3所示，图中从上至下相似度分别为0.997、0.996、0.993、0.994、0.998、0.996，相似度均大于
0.992，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。

[0105] 3、稳定性试验

[0106] 精密称取实施例4的同一批祖卡木颗粒1份，制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24分钟进样分析，对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.32％，相对峰面积比值RSD小于3.0％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，如图4所示，图中从上至下相似度分别为0.998、0.999、0.996、0.999、0.995、0.995，相似度均大于0.994，能有效的表征其质量。

[0107] 4、共有峰相对保留时间和共有峰相对峰面积

[0108] 分别称取10批实施例5的同一批祖卡木其颗粒各4g，加入50ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取2次，每次50ml，合并萃取液，蒸干后加体积浓度50％甲醇50ml溶解，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液，进样。对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果见表2、表3；利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将10份HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，如图5所示，10批相似度分别为0.995、0.984、0.998、0.994、0.984、0.999、0.995、0.994、0.992、0.990，相似度均大于0.9；

[0109] 表2祖卡木其颗粒指纹对照图谱10批次共有峰相对保留时间

[0110]

[0111]

[0112] 由表2可以看出，对10个批次祖卡木其颗粒共有峰的相对保留时间比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间比值的RSD值小于0.3％。

[0113] 表3祖卡木其颗粒指纹对照图谱10批次共有峰相对峰面积

[0114]

[0115] 注：S为标准峰，即烟花苷的峰。

[0116] 由表3可以看出，对10个批次祖卡木颗粒共有峰的相对峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对峰面积比值的RSD值较大，说明这10批次祖卡木颗粒中个别批次的成分含量具有一定的差异。

[0117] 以上所述，仅是本发明实施例的较佳实施例而已，并非对本发明实施例作任何形式上的限制，依据本发明实施例的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明实施例技术方案的范围内。