一种微生物菌剂及其应用

摘要

本发明属于生物领域，具体涉及的是应用酵母菌马克斯克鲁维酵母菌剂防治农作物病害，尤其是草莓灰霉病的用途。本发明的微生物制剂的主要成分是马克斯克鲁维酵母，通过对菌种制备成菌悬液喷雾防治草莓灰霉病，防效在45%以上，而将其与化学杀菌剂啶酰菌胺复配使用时，可以减少化学杀菌剂的使用量而维持其较好的防治效果。本发明的微生物制剂原料易得，制备工艺简单，使用该微生物制剂对环境无污染，绿色安全，推广以后社会效益和经济效益明显。

权利要求

1.一种微生物菌剂用于防治草莓灰霉病的用途，其特征在于，所述微生物菌剂的活性成分为马克斯克鲁维酵母菌。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：（1）、将马克斯克鲁维酵母菌种接种到NYDB液体培养基中，于28℃下，在200 r/min摇床中培养48 h;（2）、将培养好的酵母菌菌液在3000 r/min条件下离心10分钟，收集菌体细胞，再用无菌蒸馏水洗涤菌体两次，然后用无菌蒸馏水洗下酵母菌并用移液枪反复吸打两三次酵母菌重悬浮成菌悬液，用血球计数板计数，算出酵母菌悬液的浓度，然后用无菌水调整菌悬液的浓度至1×109 CFU/mL。

说明书

一种微生物菌剂及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于微生物领域，具体涉及的是一种用于防治农作物病害的微生物制剂，所述微生物制剂在应用中对人体安全、对环境无公害。

背景技术

[0002] 生物农药是指使用活体微生物、植物源农药、微生物次生代谢产物等用于防治各种昆虫和病害的农药种类。尤其是微生物农药，由于自然界中潜在的微生物资源种类丰富，在微生物农药的产品开发方面具有明显的优势，因此，世界各国都投入了大量的人力和财力进行研究，在我国，微生物农药的研制和开发已经成为国家科技公关和高新技术发展的计划；各地方政府也把微生物农药作为生物领域的一个重点研发方向。

[0003] 微生物农药是实现农药产业结构调整、促进循环经济和社会可持续发展的重要保障，因此，研究开发具有自主知识产权的新型微生物农药，并以此带动其它高科技产业，如发酵工程、制剂加工、精细化工领域的协同发展是微生物农药发展的一个重要目标。微生物农药不仅具有高效、安全、低残留、易降解的特点，而且微生物本身来源于环境本身，对环境友好，且微生物作用机理复杂，作用位点多，一般微生物活菌和次生代谢产物都能够应用于抑制有害生物的生长，因而备受人们关注。目前，放线菌、细菌等在农业上已经有广泛推广使用，然而，应用酵母菌进行生物防治虽然已经有研究，但真正应用的还较少。

[0004] 酵母菌一般对化学杀菌剂抗性较大， 甚至能和化学杀菌剂结合使用，一旦筛选得到合适的复配种类，不仅能够降低化学农药的使用剂量，而且可以减少对环境和人体潜在为害的同时，提高生物防治效果。另外，酵母菌具有遗传稳定、营养要求简单、抑菌谱广、生长速度快的特点，和在多种胁迫环境和逆境下的较强耐受力、对多数化学杀菌剂不敏感、能与一些化学或物理方法相结合，成为微生物防治研究的热点。

[0005] 草莓是一种集栽培和观赏于一体的宿根性、多年生草本资源植物。在草莓栽培区，灰霉病、炭疽病、白粉病是阻碍草莓产业发展的瓶颈，其中，草莓灰霉病的危害最为严重，在每年的草莓生长期危害茎、叶柄、叶片、托叶，在后期危害花和果实，直接影响到草莓产量、造成很大的经济损失。对草莓灰霉病的防治大多数采用化学农药喷洒植株表面，造成土壤不同程度的农药残留和污染问题，严重影响产品质量和人体的身体健康。从保护生态环境和食品安全的角度处罚，草莓生产需要有低毒、污染少，对人体安全的微生物制剂来控制草莓病害，从而达到草莓安全食用的目的，也符合生物农业发展和政府、社会与生物农药产业的发展。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于针对草莓灰霉病对草莓造成影响的情况，提供一种微生物活菌制剂，从而解决现有技术中大量使用化学农药造成的农药残留、环境安全性问题。

[0007] 本发明的另一目的在于提供所述微生物活菌制剂的应用，所述微生物活菌制剂适用于防治草莓灰霉病。

[0008] 本发明应用的微生物活菌制剂的原料为马克斯克鲁维酵母，所述酵母菌种可以通过市售手段购买得到，本发明所用的马克斯克鲁维酵母购自上海抚生实业有限公司。

[0009] 为达到上述目的，本发明采用如下步骤制备得到一种微生物活菌制剂：

[0010] 1、将马克斯克鲁维酵母菌种接种到NYDB液体培养基中，于28℃下，在200 r/min摇床中培养48 h;

[0011] 2、将培养好的酵母菌菌液在3000 r/min条件下离心10分钟，收集菌体细胞，再用无菌蒸馏水洗涤菌体两次，然后用无菌蒸馏水洗下酵母菌并用移液枪反复吸打两三次使酵母菌重悬浮成菌悬液，用血球计数板计数，算出酵母菌悬液的浓度，然后用无菌蒸馏水调整菌悬液的浓度至1×109 CFU/mL。

[0012] 进一步的，所述微生物菌剂的施用方式为使用所述的马克斯克鲁维酵母均匀喷雾。

[0013] 较佳的，本发明的微生物菌剂可以与化学杀菌剂啶酰菌胺复配使用，效果更佳。

[0014] 进一步的，本发明的微生物菌剂的施用方法为，预防处理，在发病前或发病初期用药，连续施药三次，间隔7-10天。

[0015] 进一步的，当使用本发明的微生物菌剂时，取决于施用的作物种类、防治病害的不同等，使用剂量可以在相当宽的范围内变化。

[0016] 与现有技术相比，本发明的微生物菌剂的有益效果为：

[0017] 1、本发明拓宽了微生物制剂用于生物防治的种类，首次将市售可以获得的已知菌株经过大量的试验发现其可以用于防治草莓灰霉病；

[0018] 2、本发明的微生物菌剂储存性质稳定，防治效果好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉；

[0019] 3、本发明的微生物菌剂与啶酰菌胺复配后，两者可以完美共存，可以更好的防治草莓灰霉病；

[0020] 4、本发明的微生物菌剂对作物安全、对环境无污染，效能稳定在45%以上，与化学杀菌剂啶酰菌胺复配后效能在85%以上，可以减少化学农药的用量。

具体实施方式

[0021] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明用以下具体实施例进行说明，但本发明绝非限于这些例子。以下所述仅为本发明较好的实施例，仅仅用于解释本发明，但不能因此理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内，因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

[0022] 本发明实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，均可以通过商业途径购买得到和/或通过已知的常规方法制备得到。

[0023] 一、马克斯克鲁维酵母微生物菌剂的制备

[0024] 本发明的马克斯克鲁维酵母微生物菌剂的制备方法可以通过如下方法制备得到：

[0025] 1、将马克斯克鲁维酵母菌种接种到NYDB液体培养基中，于28℃下，在200r/min摇床中培养48 h;

[0026] 2、将培养好的酵母菌菌液在3000 r/min条件下离心10分钟，收集菌体细胞，再用无菌蒸馏水习题菌体两次，然后用无菌蒸馏水洗下酵母菌并用移液枪反复吸打两三次使酵母菌重悬浮成菌悬液，用血球计数板计数，算出酵母菌悬液的浓度，然后用无菌蒸馏水调整菌悬液的浓度至1×109 CFU/mL。

[0027] 二、室内生物测定

[0028] 本发明的微生物菌悬液与化学杀菌剂啶酰菌胺给定的预期活性可以如下计算（参见，Colby, S.R. “Calculating Synergistic and Antagonistic Responses of Herbicide Combinations”, weed 15, (1967),20-22）:

[0029] 如果

[0030] X是当组分A在x的使用剂量施用时的效力，

[0031] Y是当组分B在y的使用剂量施用时的效力，

[0032] E是当组分A和组分B分别以用量x和y的使用剂量施用时的效力，则[0033] E=X+Y-XY/100

[0034] 效力值以%计，0%指效力相当于对照，而效力100%是指未观察到感染。

[0035] 如果实际的杀真菌活性超过计算值，则该组合物的活性是超加和，即存在协同增效作用。在次情况下，实际观察稻的效力必须大于由上面提到的公式计算出的预期效力（E）。

[0036] 1、防治草莓灰霉病活性测定

[0037] 对草莓灰霉病的活性测定以50%啶酰菌胺水分散粒剂作为对照药剂（购自巴斯夫公司），测定活性保护时，将草莓幼苗用本发明所述的微生物菌剂悬浮液和50%啶酰菌胺水分散粒剂兑水稀释后喷雾，喷液层变干后，将植株用草莓灰霉病的孢子水悬浮液接种，之后，将植株置于20℃和相对湿度为80%的温室中培养。

[0038] 接种草莓灰霉病孢子悬浮液三天后进行评价，试验组、使用剂量和试验结果如表1所示：

[0039]

[0040]  由以上试验结果可以看出，本发明的微生物制剂单独使用时，对草莓灰霉病的防治表现出一定的防治效果，当本发明的微生物制剂与啶酰菌胺有效成分用量100g /公顷时，防治效果可以达到89.7%，表现出明显的协同增效作用，防治效果与50%啶酰菌胺以有效成分用量200 g a.i./hm2施用时，防效效果相当。