本发明公开了NEP抑制剂结晶型游离酸、钙盐多晶型及其制备方法和应用。其涉及NEP抑制剂式1所示化合物(又称HAS‑000129)的结晶型游离酸、钙盐多晶型及其制备方法和应用，HAS‑000129结晶型游离酸的粉末X射线衍射图包括位于6.4±0.2°,15.9±0.2°,20.8±0.2°和19.0±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。其还涉及含有效量HAS‑000129结晶型游离酸、钙盐多晶型及其药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压、急慢性心衰、充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构等药物中的用途。本发明HAS‑000129工艺可操作性强，物质化学稳定，利于保存及药学应用。
1.一种式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸，其粉末X射线衍射图包括位于6.4±0.2°,15.9±0.2°,20.8±0.2°和19.0±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
2.根据权利要求1所述的结晶型游离酸，其特征在于，粉末X射线衍射图还包括位于
20.4±0.2°,19.2±0.2°,26.0±0.2°,18.0±0.2°和7.9±0.2°的衍射角2θ处的峰。
3.根据权利要求2所述的结晶型游离酸，其特征在于，粉末X射线衍射图进一步还包括位于25.70±0.2°,7.5±0.2°,24.7±0.2°,20.2±0.2°,10.2±0.2°和16.5±0.2°的衍射角2θ处的峰。
4.根据权利要求3所述的结晶型游离酸，其特征在于，粉末X射线衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。
5.一种式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型，其粉末X射线衍射图包括位于20.8±0.2°,11.3±0.2°,3.9±0.2°和19.2±0.2°的衍射角2θ处的峰。
6.根据权利要求5所述的钙盐一水合物晶型，其特征在于，粉末X射线衍射图还包括位于11.7±0.2°,14.8±0.2°,20.3±0.2°,5.6±0.2°,19.9±0.2°的衍射角2θ处的峰。
7.根据权利要求6所述的钙盐一水合物晶型，其特征在于，粉末X射线衍射图进一步还包括位于13.5±0.2°，5.9±0.2°，12.7±0.2°，24.8±0.2°，14.6±0.2°，和31.6±0.2°的衍射角2θ处的峰。
8.根据权利要求7所述的钙盐一水合物晶型，其特征在于，粉末X射线衍射图与图4中显示的衍射角2θ处的峰基本上相同。
9.根据权利要求1所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸的制备方法，包括：
1)将(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸溶解在适合的有机溶剂中；
2)搅拌下加入适量反溶剂至溶液出现浑浊，或加入晶种，继续搅拌析晶；
3)固液分离得到(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸结晶型游离酸；
步骤1)所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物；
步骤2)所述反溶剂选自正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚、水或其组合物。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤1)所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物；步骤2)所述反溶剂选自正庚烷、正己烷、乙醚或其组合物。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，包括，
1)在(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸中加入适合的有机溶剂溶解，使其形成浓度为1-
200mg/mL的溶液，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物；
2)搅拌下加入适量反溶剂至溶液出现浑浊，所述反溶剂选自正庚烷、正己烷、乙醚或其组合物，反溶剂的体积为步骤1)所述有机溶剂的1-10倍，继续搅拌析晶；
3)固液分离得到(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸结晶型游离酸。
12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，包括，
1)在(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸中加入适合的有机溶剂，加热至30～80℃使其溶解形成浓度为1-200mg/mL的溶液，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物；
2)缓慢降温至20～30℃，搅拌下加入与(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,
9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸的质量比为0.1-
3)固液分离得到(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸结晶型游离酸。
13.根据权利要求5所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型的制备方法，包括，
1)将(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸溶解或分散在水溶性有机溶剂或含水的水溶性有机溶剂中，与等量或过量合适的碱相混合制备生成(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-
2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸相应的盐；其中，当所述水溶性有机溶剂不含水时，所述碱的溶液含有水；
2)将上述(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,
5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸盐体系与钙盐相混合，继续搅拌反应析出(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-
3)固液分离得到(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸钙盐一水合物晶型。
14.根据权利要求5所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型的制备方法，包括，
1)将(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸游离酸溶解在水溶性有机溶剂中，与等量或过量合适的碱相混合制备生成(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,
5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸相应的盐；
2)将上述(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,
5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸盐体系与钙盐相混合，继续搅拌反应，析出沉淀物，过滤除去沉淀物；
3)收集上述母液，通过挥发溶剂或浓缩得到(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-
2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸钙盐一水合物晶型。
15.根据权利要求13或14所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述水溶性有机溶剂选自醇类、酮类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其组合物。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述水溶性有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其组合物。
17.根据权利要求13-14、16中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述合适的碱选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、甲酸钠、丙酸钠、丙烯酸钠、苯甲酸钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钾、甲酸钾、丙酸钾、丙烯酸钾、苯甲酸钾或其混合物；所述钙盐选自氯化钙、溴化钙、碘化钙、硝酸钙、氯酸钙、次氯酸钙，高氯酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙或其混合物。
18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，所述合适的碱选自碳酸氢钠、碳酸氢钾；所述钙盐选自氯化钙。
19.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述(9R，
11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸结晶型游离酸、其钙盐一水合物晶型以及药学上可接受的载体或赋形剂。
20.根据权利要求1-4任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸、权利要求5-8任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型、权利要求19所述的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病的药物中的用途。
21.根据权利要求1-4任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸、权利要求5-8任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型、权利要求19所述的药物组合物在制备治疗或预防高血压的药物中的用途。
22.根据权利要求1-4任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸、权利要求5-8任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型、权利要求19所述的药物组合物在制备治疗或预防恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压的药物中的用途。
23.根据权利要求1-4任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的结晶型游离酸、权利要求5-8任一项所述的式1所示的(9R，11S)-11-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2,6,9-三甲基-4,8,13-三氧代-3,5,7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸的钙盐一水合物晶型、权利要求19所述的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰、充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。
NEP抑制剂结晶型游离酸、钙盐多晶型及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂HAS-000129结晶型游离酸、钙盐多晶型及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 中性内肽酶(EC 3.4.24.11；脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素(ANF，也被称为ANP)、脑钠肽(BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。
[0003] ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式——ANF 99-126是在心脏扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬(thiorphan)和凯拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3’，5’-单磷酸(cGMP)排泄的作用。因为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。
[0004] 上海翰森公司专利CN201410001940.2中公开了一类联芳基取代的4-氨基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合物为式1所示(9R，11S)-11-([1，1′-联苯]-4-基甲基)-2，6，9-三甲基-4，8，13-三氧代-3，5，7-三氧杂-12-氮杂十六烷-16-酸(又称HAS-000129)。
[0005]
[0006] 现有技术中HAS-000129是油状物，难以纯化，溶剂残留难以达标，物质稳定性、储存、称量均存在很大问题，而且难以制成口服固体制剂，不利于药学开发和工业生产。
发明内容
[0007] 为了解决现有技术存在的问题，改善HAS-000129理化性质。迫切需要将HAS-000129油状物改造成固体状态，特别是结晶状态来满足药学开发和工业生产的需求。发明人深入研究了HAS-000129不同的聚集状态，在现有技术基础上开发出了HAS-000129结晶型游离酸、钙盐结晶型固体，使得HAS-000129的结晶性、溶解性、吸湿性等理化性质得到彻底的改变，物质化学稳定，利于存储和口服固体制剂的开发。通过将HAS-000129从油状转变为结晶性固体，可以达到对其进行分离纯化、去除有机溶剂的残留、提高化学稳定性、制备固体制剂便利性方面，具有明显的进步。
[0008] 本发明一方面提供一种HAS-000129结晶型游离酸(指定为晶型I)，其粉末X射线衍射图包括位于6.4±0.2°，15.9±0.2°，20.8±0.2°和19.0±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
[0009] 作为进一步优选的方案，其粉末X射线衍射图还包括位于20.4±0.2°，19.2±0.2°，26.0±0.2°，18.0±0.2°和7.9±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
[0010] 作为更进一步优选的方案，其粉末X射线衍射图还包括位于25.70±0.2°，7.5±0.2°，24.7±0.2°，20.2±0.2°，10.2±0.2°和16.5±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
[0011] 作为最优选的方案，其粉末X射线衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：
[0012] 表1
[0013]
[0014]
[0015] 用差示量热扫描仪测得，HAS-000129结晶型游离酸(晶型I)的熔点为131.5℃左右(onset点)。
[0016] 本发明另一方面还提供一种HAS-000129钙盐多晶型(指定为晶型I)，其粉末X射线衍射图包括位于20.8±0.2°，11.3±0.2°，3.9±0.2°和19.2±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
[0017] 作为进一步优选的方案，其粉末X射线衍射图还包括位于11.7±0.2°，14.8±0.2°，20.3±0.2°，5.6±0.2°，19.9±0.2°
[0018] 作为更进一步优选的方案，其粉末X射线衍射图还包括位于13.5±0.2°，5.9±0.2°，12.7±0.2°，24.8±0.2°，14.6±0.2°，和31.6±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。
[0019] 作为最优选的方案，其粉末X射线衍射图与图4中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表2所示：
[0020] 表2
[0021]2θ(°) 强度％ 2θ(°) 强度％
3.9 55.2 14.8 40.9
5.6 34.5 19.2 45
5.9 31.7 19.9 33.2
8.7 26.3 20.3 39.6
11.3 70.1 20.8 100
11.7 41.7 23.8 27.1
12.7 30.9 24.8 30.9
13.5 32.2 31.6 27.4
14.6 28.1
[0022] 本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语“基本上相同”意指考虑典型的峰位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置(2θ)将由于XRPD仪器不同，而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解，XRPD样品制样方法，XRPD仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样品XRPD衍射图中相对峰强度的改变。
[0023] 本发明另一方面还提供了HAS-000129结晶型游离酸的制备方法，包括，
[0024] 1)将HAS-000129游离酸溶解在适合的有机溶剂中；
[0025] 2)搅拌下加入适量反溶剂至溶液出现浑浊或加入少量晶种，继续搅拌析晶；
[0026] 3)固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸。
[0027] 作为进一步优选的方案，步骤1)所述有机溶剂选自醇类、氯代烷烃、酮类、醚类、环醚类、酯类、烷烃类、环烷烃类、苯类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物；包括但不限定于以下溶剂：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物；优选乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物。
[0028] 所述反溶剂包括但不限定于以下溶剂：正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚、水或其组合物；优选正庚烷、正己烷、乙醚或其组合物。
[0029] 所述的溶解是指本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以适当的加热使原料溶解或溶清，或者加大溶剂的用量来使原料溶解或溶清，或者其技术方案进行修改或者等同替换，其均应涵盖在本发明的发明内容之内。
[0030] 作为进一步优选的方案，具体操作如下：1)在HAS-000129游离酸中加入适合的有机溶剂溶解，使其形成浓度为1-200mg/mL的溶液，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物；2)搅拌下加入适量反溶剂正庚烷、正己烷、乙醚或其组合物至溶液出现浑浊，反溶剂的量为结晶溶剂1-10倍体积比，继续搅拌析晶；3)固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸。
[0031] 作为进一步优选的方案，具体操作如下：1)在HAS-000129游离酸中加入适合的有机溶剂，加热至30～80℃使其溶解，使其形成浓度为1-200mg/mL的溶液，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物；2)缓慢降温至20～30℃，搅拌下加入质量比0.1-10.0％的同系结晶体作为晶种，继续搅拌析晶；3)固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸。
[0032] 本发明另一方面提供一种HAS-000129钙盐多晶型的制备方法，包括，
[0033] 1)将HAS-000129游离酸溶解或分散在水溶性有机溶剂或含水的水溶性有机溶剂中，与等量或过量合适的碱相混合制备生成HAS-000129相应的盐；
[0034] 2)将上述HAS-000129盐体系与钙盐相混合，继续搅拌反应析出HAS-000129钙盐晶体；
[0035] 3)固液分离得到HAS-000129钙盐多晶型。
[0036] 本发明另一方面还提供一种HAS-000129钙盐多晶型的制备方法，包括，
[0037] 1)将HAS-000129游离酸溶解在水溶性有机溶剂中，与等量或过量合适的碱相混合制备生成HAS-000129相应的盐；
[0038] 2)将上述HAS-000129盐体系与钙盐相混合，继续搅拌反应，析出沉淀物，过滤除去沉淀物；
[0039] 3)收集上述母液，通过挥发溶剂或浓缩得到HAS-000129钙盐多晶型。
[0040] 作为进一步优选的方案，步骤1)所述水溶性有机溶剂选自醇类、酮类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物；包括但不限定于以下溶剂：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其组合物。
[0041] 作为进一步优选的方案，所述合适的碱选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、甲酸钠、丙酸钠、丙烯酸钠、苯甲酸钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钾、甲酸钾、丙酸钾、丙烯酸钾、苯甲酸钾或其混合物；优选碳酸氢钠、碳酸氢钾；所述钙盐选自氯化钙、溴化钙、碘化钙、硝酸钙、氯酸钙、次氯酸钙，高氯酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙或其混合物；优选自氯化钙。
[0042] 上述两种制备HAS-000129钙盐多晶型的方法，步骤2)继续搅拌至析出沉淀物，所述沉淀物可能是HAS-000129钙盐，也可能是加入步骤1)加入碱的相应的盐，区别主要在于整个结晶体系是否含水，结晶体系含水将析出HAS-000129钙盐。而加入的钙盐可以固体加入，也可以是钙盐溶于水后加入或者钙盐溶于合适的有机溶剂加入。
[0043] 本发明另一方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述HAS-000129结晶型游离酸、其钙盐多晶型以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0044] 本发明的另一方面提供了前述HAS-000129结晶型游离酸、其钙盐多晶型或其药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途。
[0045] 通过改善功效和具有更高的响应率而产生了更有效的抗高血压治疗，不论是对于恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压还是对于其它继发性高血压而言都是如此。
[0046] 本发明的另一方面提供了前述HAS-000129结晶型游离酸、其钙盐多晶型或其药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰如、充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。
[0047] “药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，亦或其他组分例如生理学/药学上可接受的载体或赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
附图说明
[0048] 图1为实施例1中HAS-000129游离酸晶型的粉末X射线衍射图，横坐标为角度2θ(°)，纵坐标为强度；
[0049] 图2为实施例1中HAS-000129游离酸晶型的DSC图，横坐标为温度(℃)，纵坐标位热流(W/g)。
[0050] 图3为实施例1中HAS-000129游离酸晶型的TGA图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为失重比例(％)。
[0051] 图4为实施例5中HAS-000129钙盐晶型的粉末X射线衍射图，横坐标为角度2θ(°)，纵坐标为强度；
[0052] 图5为实施例5中HAS-000129钙盐晶型的TGA图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为失重比例(％)。
[0053] 图6为实施例8中HAS-000129钙盐胶囊的溶出曲线，横坐标为时间(分钟)，纵坐标为释放度(％)。
[0054] 图7为实施例9中结晶型HAS-000129游离酸胶囊的溶出曲线，横坐标为时间(分钟)，纵坐标为释放度(％)。
具体实施方式
[0055] 以下提供的具体实施例以及制备方法例将进一步举例说明本发明实施方案的特定方面。下列实施例的范围将不以任何方式限制本发明的范围。
[0056] 方法和材料
[0057] HAS-000129结晶型游离酸及其钙盐多晶型由它们的X射线粉末衍射图表征。因此，在具有使用Cu Kα辐射 以反射方式操作的GADDS(一般面积衍射检测器系统)CS的Bruker D8Discover X射线粉末衍射仪上采集所述盐的X射线粉末衍射图。管电压和电流量分别设置为40kV和40mA采集扫描。在3.0°至40°的2θ范围内扫描样品60秒的时期。针对2θ表示的峰位置，使用刚玉标准品校准衍射仪。在通常是20℃-30℃的室温下实施所有分析。使用用于4.1.14T版WNT软件的GADDS，采集和积分数据。使用2003年发行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus软件，分析衍射图。XRPD样品的制备，通过是将样品至于单晶硅片上，用玻璃片或等效物压样品粉末以确保样品的表面平坦并有适当的高度。然后将样品支架放入Bruker XRPD仪器，并使用上文描述的仪器参数采集粉末X射线衍射图。由包括以下的多种因素产生与这类X射线粉末衍射分析结果相关的测量差异：(a)样品制备物(例如样品高度)中的误差，(b)仪器误差，(c)校准差异，(d)操作人员误差(包括在测定峰位置时出现的那些误差)，和(e)物质的性质(例如优选的定向误差)。校准误差和样品高度误差经常导致所有峰在相同方向中的位移。一般地说，这个校准因子将使测量的峰位置与预期的峰位置一致并且可以在预期的2θ值±0.2°的范围中。
[0058] 本发明实施例所得各多晶型的角度2θ(°)值和强度值(作为最高峰值的％)已列入表1-表2中。
[0059] 本发明实施例中所用原料HAS-000129游离酸油状物是按照中国专利CN201410001940.2实施例11制备得到的，其它原料或市级为市售产品。
[0060] 实施例1
[0061] 称取20mg HAS-000129游离酸(油状)置于4.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL正溶剂甲基叔丁基醚，搅拌溶清，缓慢加入2.0mL反溶剂正庚烷，室温下(20-25℃)搅拌48小时，固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸，其粉末X射线衍射图如图1所示。
[0062] 用差示量热扫描仪(DSC，型号Perkins Elmer 8500)测量游离酸晶型的熔点。测量条件为从室温加热到160摄氏度，升温速率为10摄氏度每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为20mL每分钟。游离酸晶型的DSC图如图2所示。游离酸晶型的熔点(onset点)为：131.5摄氏度。
[0063] 用热重分析仪(TGA，型号Netzsch F3)测量游离酸晶型的热失重情况。测量条件为从室温加热到350摄氏度，升温速率为10摄氏度每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为50mL每分钟。游离酸晶型的TGA图如图3所示。在100摄氏度以内几乎不失重，因此可以判定化合物游离酸晶型为无水晶型。
[0064] 实施例2
[0065] 称取20mg HAS-000129游离酸(油状)置于4.0mL玻璃瓶中，然后加入0.3mL正溶剂乙酸异丙酯，加热至50℃搅拌溶清，缓慢加入2.0mL反溶剂正己烷，降温至室温(20-25℃)，继续搅拌48小时，固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸，其粉末X射线衍射图与图1基本一致。
[0066] 实施例3
[0067] 称取20mg HAS-000129游离酸(油状)置于4.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL乙酸乙酯/正己烷(20∶80，v/v)，加热至60℃搅拌溶清，降温至室温(20-25℃)，缓慢加入0.2mg实施例1晶体，继续搅拌72小时，固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸，其粉末X射线衍射图与图1基本一致。
[0068] 实施例4
[0069] 称取20mg HAS-000129游离酸(油状)置于4.0mL玻璃瓶中，然后加入0.2mL二氯甲烷，加热至40℃搅拌溶清，降温至室温(20-25℃)，缓慢加入0.2mg实施例1晶体，继续搅拌72小时，固液分离得到HAS-000129结晶型游离酸，其粉末X射线衍射图与图1基本一致。
[0070] 实施例5
[0071] 在30g(58.45mmol)HAS-000129游离酸(油状)中加入300mL丙酮，搅拌溶解。称取4.91g(58.45mmol)NaHCO3，加入550mL水溶解，缓慢滴加到上述丙酮溶液中，滴加完毕，继续搅拌反应1h，40℃旋转蒸发溶液至无馏分(除去丙酮，收集馏分约250mL)。称取3.24g无水CaCl2(29.3mmol)加入450mL水中溶解，缓慢滴加至上述馏分中，滴加完毕，继续搅拌反应
24h，过滤，40℃真空干燥20h得白色固体29.72g，其粉末X射线衍射图如图4所示。
[0072] 用热重分析仪(TGA，型号TA Q500)测量HAS-000129钙盐晶型的热失重情况。测量条件为从室温加热到350摄氏度，升温速率为10摄氏度每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为50mL每分钟。HAS-000129钙盐晶型的TGA图如图所示。在100摄氏度以内失重约3.0％，是由于脱水造成，因此可以判断该晶型为HAS-000129钙盐一水合物(一水合物理论脱水失重3.2％)。
[0073] 实施例6
[0074] 在20mg(0.039mmol)HAS-000129游离酸(油状)中加入0.4mL甲醇，搅拌溶解。称取2.4mg(0.043mmol)KOH，加入1.0mL甲醇溶解，缓慢滴加到上述HAS-000129甲醇溶液中，滴加完毕，继续搅拌反应2h。称取2.6mg(0.023mmol)无水CaCl2加入1.0mL甲醇中溶解，缓慢滴加至上述反应体系中，滴加完毕，继续搅拌反应24h，过滤除去固体，收集滤液，减压浓缩至干，然后40℃真空干燥20h得白色固体20.2mg，其粉末X射线衍射图与图4一致。
[0075] 实施例7
[0076] 为了比较HAS-000129游离酸的油状物、结晶型及钙盐的化学稳定性，将HAS-000129游离酸油状物、结晶型HAS-000129游离酸(本专利实施例1中制备)以及HAS-000129钙盐(本专利实施例5中制备)置于80摄氏度的恒温箱中，放置一周后，用高效液相法测量纯度，稳定性试验结果如下：
[0077]
[0078] 试验证明：通过热加速试验后HAS-000129游离酸的结晶型和钙盐的化学稳定性远优于HAS-000129游离酸油状物。
[0079] 实施例8
[0080] (HAS-000129钙盐胶囊剂)
[0081]组分 重量(mg) 重量百分比
HAS-000129钙盐一水合物 25 62.2％
微晶纤维素 7 17.4％
低取代羟丙基纤维素(L-HPC) 5 12.4％
交联聚维酮(PVP) 2 5.0％
滑石粉(Talc) 0.4 1.0％
胶态二氧化硅 0.2 0.5％
硬脂酸镁 0.6 1.5％
合计 40.2 100％
[0082] 1、胶囊制备方法
[0083] 首先将硬脂酸镁、胶态二氧化硅和微晶纤维素通过30目筛进行筛分。然后将上述混合物、活性成分HAS-000129钙盐、低取代羟丙基纤维素(L-HPC)和聚维酮、滑石粉、胶态二氧化硅在料斗混合机中混合约120转。使用滚压机用30kN的压力压制所述混合物。压制后，使用研磨机研磨所述混合物并经18目筛筛分，得到最终的内相或颗粒。将颗粒灌装于胶囊，制成胶囊剂。
[0084] 2、溶出测定方法
[0085] 对所得胶囊进行的溶出实验在ERWEKA DT827LH溶出仪上完成，具体溶出方法和条件为：取本品，照中国药典(2010版，二部)溶出度测定法(附录X C第二法)，以pH6.8磷酸盐缓冲液900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作。分别于10、20、40、60分钟时取样10ml，HPLC测定药物浓度，计算释放百分比。
[0086] 3、试验过程与结果
[0087] 称取HAS-000129钙盐一水合物25g，以及按上述配比称取辅料，将称取好的药物及辅料用V型粉末混合机混匀24小时，用胶囊板填装胶囊。胶囊为明胶胶囊，型号零。每个胶囊的装量为40.2mg±5％。所得胶囊取6粒做溶出度试验，试验条件为：溶出介质为pH 6.8磷酸缓冲液，温度37摄氏度，篮法，转速100转/分钟，分别于10、20、40、60分钟时采样。HAS-000129钙盐的胶囊溶出结果见图6。
[0088] 实施例9
[0089] (结晶型HAS-000129游离酸胶囊剂)
[0090]
[0091]
[0092] 1、胶囊制备方法
[0093] 首先将硬脂酸镁、胶态二氧化硅和微晶纤维素通过30目筛进行筛分。然后将上述混合物、活性成分结晶型HAS-000129游离酸、低取代羟丙基纤维素(L-HPC)和聚维酮、滑石粉、胶态二氧化硅在料斗混合机中混合约120转。使用滚压机用30kN的压力压制所述混合物。压制后，使用研磨机研磨所述混合物并经18目筛筛分，得到最终的内相或颗粒。将颗粒灌装于胶囊，制成胶囊剂。
[0094] 2、溶出测定方法
[0095] 对所得胶囊进行的溶出实验在ERWEKA DT827LH溶出仪上完成，具体溶出方法和条件为：取本品，照中国药典(2010版，二部)溶出度测定法(附录X C第二法)，以pH6.8磷酸盐缓冲液900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作。分别于10、20、40、60分钟时取样10ml，HPLC测定药物浓度，计算释放百分比。
[0096] 3、试验过程与结果
[0097] 称取结晶型HAS-000129游离酸25g，以及按上述配比称取辅料，将称取好的药物及辅料用V型粉末混合机混匀24小时，用胶囊板填装胶囊。胶囊为明胶胶囊，型号零。每个胶囊的装量为40.2mg±5％。所得胶囊取6粒做溶出度试验，试验条件为：溶出介质为pH 6.8磷酸缓冲液，温度37摄氏度，篮法，转速100转/分钟，分别于10、20、40、60分钟时采样。结晶型HAS-000129游离酸胶囊溶出结果见图7。
[0098] 发明人同样尝试了将油状HAS-000129游离酸制备成胶囊，但是，由于油状物与上述辅料混合后成团块状，无法均匀分散成流动性粉末，无法进行胶囊的填充。因此油状HAS-000129游离酸无法制成胶囊剂。
[0099] 试验证明，本发明制备得到的HAS-000129结晶型游离酸及其钙盐，可以方便的制备成为口服固体制剂，而其油状物则无法进行口服固体制剂开发。
[0100] 最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。
