作为JAK抑制剂的氨基嘧啶基化合物转让专利
申请号 : CN201580057140.5
文献号 : CN107074867B
文献日 : 2019-10-22
发明人 : A·芬索梅 , A·戈帕尔萨米 , B·S·格斯滕伯格 , I·V·叶夫列莫夫 , Z-K·万 , B·皮尔斯 , J-B·泰利耶 , J·I·特鲁希略 , L·张 , L·刑 , E·萨亚
申请人 : 辉瑞公司
摘要 :
本发明提供具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供作为Janus激酶抑制剂的治疗方法，以及包含本发明的化合物及其与其它治疗剂的组合的药物组合物。
权利要求 :
1.化合物，其具有以下结构：
或其药学上可接受的盐，其中X为N或CR，其中R为氢、氘或C1-C4烷基；
A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H，并且Ra和Rb独立地为氢、氘或C1-C6烷基；
A′选自键、--(C＝O)NR0′--和--NR0′(C＝O)--，其中R0′为H；
Z为--(CH2)h--或键；
R1选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、杂芳基、CN、氨基、C1-C6烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)、杂环基和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、卤素、CN、CF3和--SO2-(C1-C6烷基)；
R1′选自氢、氘和C3-C6环烷基，其中所述环烷基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素和CN；
R2选自氢、氘、C1-C6烷基和卤素；
R3选自氢和氘；
R4为单环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、C1-C6烷氧基、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)和--SO2-(C1-C6烷基)，其中所述烷基、烷氧基或杂环烷基任选地被一个或多个卤素、CN或OH取代；
R5为氢；
h为1、2或3；j和k独立地为0、1、2或3；m和n独立地为1；并且q为0、1或2；
其中所述芳基包含6至10个环碳原子；并且
所述杂芳基、杂环基和杂环烷基各自独立地包含5至10个环原子。
2.权利要求1的化合物，其具有以下结构：
或其药学上可接受的盐，其中
X为N；
A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H，并且Ra和Rb独立地为氢、氘或C1-C6烷基；
R1选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、杂芳基、CN、氨基、C1-C6烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)、杂环基和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、卤素、CN、CF3和--SO2-(C1-C6烷基)；
R2选自氢、氘、C1-C6烷基和卤素；
R3选自氢和氘；
R4为单环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、C1-C6烷氧基、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)和--SO2-(C1-C6烷基)，其中所述烷基、烷氧基或杂环烷基任选地被一个或多个卤素、CN或OH取代；
h为1、2或3；j为0、1、2或3；并且q为0、1或2；并且
R5为氢。
3.权利要求1的化合物，其具有以下结构：
或其药学上可接受的盐，其中
X为N；
A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H，并且Ra和Rb独立地为氢、氘或C1-C6烷基；
R1选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、杂芳基、CN、氨基、C1-C6烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)、杂环基和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、卤素、CN、CF3和--SO2-(C1-C6烷基)；
R2选自氢、氘、C1-C6烷基和卤素；
R3选自氢和氘；
R4为单环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、C1-C6烷氧基、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)和--SO2-(C1-C6烷基)，其中所述烷基、烷氧基或杂环烷基任选地被一个或多个卤素、CN或OH取代；
R5为氢；j为0、1、2或3；并且q为0、1或2。
4.权利要求1的化合物，其具有以下结构：
或其药学上可接受的盐，其中
A′选自键、--(C＝O)NR0′和--NR0′(C＝O)--，其中R0′为H；
R1′选自氢、氘和C3-C6环烷基，其中所述环烷基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素和CN；
R2选自氢、氘、C1-C6烷基和卤素；
R3选自氢和氘；
R4为单环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、C1-C6烷氧基、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)和--SO2-(C1-C6烷基)，其中所述烷基、烷氧基或杂环烷基任选地被一个或多个卤素、CN或OH取代；
R5为氢；
R7和R8独立地为氢或C1-C4烷基；
k为0、1、2或3；m和n均为1；并且q为0、1或2。
5.化合物，其选自：
[(1S)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-({5-氟-6-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]吡啶-
3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
(1R，5S)-N-乙基-3-[2-(1，2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
4-{(1R，5S)-8-[(2，2-二氟环丙基)甲基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
(1R，5S)-3-(2-{[5-氯-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-乙基-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
环丙基[(1R，5S)-3-(2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-{(1R，5S)-8-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-胺；
4-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，6-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R，2S)-2-氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
环丙基[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
3-{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丁腈；
5-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
3-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈；
5-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
(1R，5S)-N-乙基-3-(2-{[5-氟-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
3-氯-5-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-(丙-2-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
(3，3-二氟环丁基)[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
1-({(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲基)环丙烷甲腈；
3-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈；
(1S，2R)-2-{[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；
(1R，2S)-2-{[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；
[(1R，2R)-2-氟环丙基][(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-
3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[(1R，2R)-2-氟环丙基][(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-
3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
N，3-二甲基-5-[(4-{(1R，5S)-8-[(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺；
{3-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
4-({4-[8-(氰基乙酰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
(1R，5S)-N-(氰基甲基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S，2R)-2-氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-(顺式-3-氰基环丁基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R)-2，2-二氟环丙基]甲基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
N，3-二甲基-5-({4-[(1R，5S)-8-(1，2-噁唑-5-基甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-
3-基]嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-甲酰胺；
2-[5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-
3-基]嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-基]-2-甲基丙腈；
3-{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙腈；
(1R，5S)-N-乙基-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]甲基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[(1S)-2，2-二氟环丙基][(1R，5S)-3-(2-{[5-氟-6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[(1S)-2，2-二氟环丙基][(1R，5S)-3-(2-{[5-氟-6-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-
3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[(1R，5S)-3-(2-{[5-氯-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基][(1S)-2，2-二氟环丙基]甲酮；
{3-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]氧杂环丁烷-3-基}乙腈；
[(1R，5S)-3-(2-{[5-氯-6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基][(1S)-2，2-二氟环丙基]甲酮；
2-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-4-甲腈；
3-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]环丁烷甲腈；
2-[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1，3-噁唑-5-甲腈；
(1R，5S)-N-(2-氰基乙基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R，5S)-8-(1，2-噁唑-4-基甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
4-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-6-(羟基甲基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
(1-氟环丙基)[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R，5S)-8-(1，3-噻唑-2-基甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
环丙基{(1R，5S)-3-[2-(1，2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[(1S)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-({5-氟-6-[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]吡啶-
3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]甲基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-[(1R，5S)-8-{[(1R)-2，2-二氟环丙基]甲基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
6-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-磺酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-(反式-3-氰基环丁基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
1，2-噁唑-5-基{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R，5S)-8-(甲基磺酰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
(1S，2S)-2-{[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈；
3-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺；
(1S，2S)-2-{[(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈；
环丙基{(1R，5S)-3-[5-氟-2-(哒嗪-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
4-({4-[6-(2，2-二氟丙酰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺；
(1S，2S)-2-氰基-N-[(1S，5R，6R)-3-(2-{[6-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基]氨基}-5-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
N-[(1S，5R)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
(1S)-2，2-二氟-N-[(1S，5R，6R)-3-(5-氟-2-{[1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
(1S)-2，2-二氟-N-[(1S，5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-
5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
N-{(1S，5R，6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
5-[(4-{(1S，5R，6R)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-
5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
N-{(1S，5R，6R)-3-[2-({5-氯-6-[(1R)-1-羟基乙基]吡啶-3-基}氨基)-5-氟嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
(1R)-2，2-二氟-N-[(1R，5S，6S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
5-[(4-{(1R，5S，6S)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-
5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
N-[(1R，5S)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
N-{(1S，5R，6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；和(1S)-2，2-二氟-N-[(1R，5S，6S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
6.化合物，其选自：
N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(2-氟-2-甲基丙酰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(三氟乙酰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
N-乙基-2-甲基-4-({4-[6-(三氟乙酰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
4-({4-[6-(环丙基羰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺；和
4-({4-[6-(2，2-二氟丙酰基)-3，6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
7.化合物，其选自：
4-({4-[8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
N-乙基-4-({5-氟-4-[8-(三氟乙酰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
(1R，5S)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
(1R，5S)-N-(氰基甲基)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
3-(2-{[4-(乙基氨甲酰基)-3-甲基苯基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R，2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
3-氯-5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R，5S)-8-(1，2-噻唑-5-基甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[(1S)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
3-氯-5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R，2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[(1S)-2，2-二氟环丙基][(1R，5S)-3-(2-{[5-氟-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
5-[(4-{(1R，5S)-8-[(2，2-二氟环丙基)羰基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
5-({4-[(1R，5S)-8-(环丙基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N，3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
(1R，5S)-N-乙基-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3，
8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[(1S)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R，5S)-8-(1，2-噁唑-5-基甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
环丙基{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-
8-基}甲酮；
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R，2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[(1R)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；和，
5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1R)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
8.化合物，其选自：
(1R)-2，2-二氟-N-[(1S，5R，6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
N-[(1S，5R，6R)-3-(2-{[5-氯-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；和，N-[(1S，5R，6R)-3-(5-氟-2-{[6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-
3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
9.化合物，其中所述化合物为[(1S)-2，2-二氟环丙基]{(1R，5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；或其药学上可接受的盐。
10.化合物，其中所述化合物为[(1S)-2，2-二氟环丙基][(1R，5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；或其药学上可接受的盐。
11.化合物，其中所述化合物为5-({4-[(1R，5S)-8-{[(1S)-2，2-二氟环丙基]羰基}-3，
8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；或其药学上可接受的盐。
12.化合物，其中所述化合物为(1R，5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；或其药学上可接受的盐。
13.药物组合物或兽药组合物，其包含权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
14.权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防病症或病况的药物中的用途，所述病症或病况选自炎症、自身免疫性疾病、脊椎关节病、疼痛、发热、肺结节病、硅肺病、心血管疾病、充血性心力衰竭、心肌病、再灌注损伤、脑水肿、脑外伤、神经变性、肝病、炎性肠病、视网膜病变、青光眼、糖尿病1型和2型、糖尿病神经病变、病毒和细菌感染、内毒素性休克、中毒性休克综合征、骨质疏松症、子宫内膜异位症、经期痉挛、纤维化、肥胖症、肌营养不良症、白癜风、脱发、皮肤发红、湿疹和晒伤。
15.权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防病症或病况的药物中的用途，所述病症或病况选自神经炎症、关节炎、溃疡性结肠炎、肾炎、视网膜炎、阴道炎、多肌炎、皮肌炎、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、特应性皮炎、银屑病、克罗恩氏病、心脏再灌注损伤、心肌梗死、肌痛、动脉粥样硬化、血栓形成、卒中、缺血、系统性红斑狼疮、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬变、黄斑变性、阿尔茨海默病和念珠菌病。
16.权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防病症或病况的药物中的用途，所述病症或病况选自类风湿性关节炎、骨性关节炎、痛风性关节炎和狼疮肾炎。
17.包含权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防病症或病况的药物中的用途，所述病症或病况选自急性髓性白血病、急性T细胞淋巴母细胞白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、脑瘤、神经胶质瘤、急性CNS创伤、癫痫、惊厥、PD、ALS、额颞叶痴呆，以及神经精神性病症。
18.包含权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防病症或病况的药物中的用途，所述病症或病况选自星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、外伤性脑损伤、脑炎、卒中、脊髓损伤、精神分裂症、双相型障碍、抑郁症、PTSD、焦虑和自身抗体介导的脑病。
19.权利要求18的用途，其中所述抑郁症为难治性抑郁症。
说明书 :
作为JAK抑制剂的氨基嘧啶基化合物
发明领域
[0001] 本发明提供药学活性的氨基嘧啶基化合物和类似物。这样的化合物可用于抑制Janus激酶(JAK)。本发明还涉及包含这样的化合物的组合物和制造这样的化合物的方法，以及用于治疗和预防由JAK介导的病况的方法。
[0002] 发明背景
[0003] 蛋白质激酶是催化蛋白质中特定残基磷酸化的酶家族，并广义地分类为酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶。由于突变、过度表达或不适当调节、调节异常或失调，以及生长因子或细胞因子的过度产生或产生不足所导致的不适当的激酶活性涉及许多疾病，其包括但不限于癌症、心血管疾病、变态反应、哮喘和其它呼吸疾病、自身免疫病、炎症疾病、骨病、代谢紊乱及神经病症和神经变性病症(例如阿尔茨海默病)。不适当的激酶活性触发多种生物细胞反应，所述生物细胞反应与涉及上述和相关疾病的细胞生长、细胞分化、细胞功能、存活、凋亡和细胞运动性有关。
[0004] 因此，蛋白质激酶已成为一类重要的作为治疗性介入的靶点的酶。特别地，细胞蛋白质酪氨酸激酶的JAK家族(JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2)在细胞因子信号转导中扮演重要的角色(Kisseleva等人,Gene,2002,285,1；Yamaoka等人Genome Biology 2004,5,253)。当细胞因子与其受体结合时，细胞因子活化JAK，然后JAK磷酸化细胞因子受体，从而产生信号转导分子的停靠位点，值得注意的是，最终导致基因表达的信号转导子和转录活化子(STAT)家族成员。许多细胞因子已知可活化JAK家族。这些细胞因子包括干扰素IFN家族(IFN-α、IFN-β、IFN-ω、限制素(Limitin)、IFN-γ、IL-10、IL-19、IL-20、IL-22)、gp130家族(IL-6、IL-11、OSM、LIF、CNTF、NNT-1/BSF-3、G-CSF、CT-1、瘦素、IL-12、IL-23)、γC家族(IL-2、IL-7、TSLP、IL-9、IL-15、IL-21、IL-4、IL-13)、IL-3家族(IL-3、IL-5、GM-CSF)、单链家族(EPO、GH、PRL、TPO)、受体酪氨酸激酶(EGF、PDGF、CSF-1、HGF)、及G-蛋白偶联受体(AT1)。
[0005] 仍然需要有效和选择性抑制特定JAK酶(特别是TYK2和JAK1)的新颖化合物。TYK2是JAK激酶家族一员，并且在I型干扰素(IFNa、INFb)IL-6、IL-10、IL-12和IL-23的信号转导中是重要的(Liang,Y.等人,Expert Opinion on Therapeutic Targets,18,5,571-580(2014))。因此，TYK2与JAK激酶家族的其它成员以下述组合产生信号：TYK2/JAK1、TYK2/JAK2、TYK2/JAK1/JAK2。TYK2已被证明在多种对炎症疾病和自身免疫病重要的细胞类型(包括自然杀伤细胞、B细胞和T辅助细胞类型)的分化和发挥功能是重要的。异常的TYK2表达与多种自身免疫或炎症病况相关。JAK1是包含JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的Janus家族蛋白质激酶中的一员。JAK1在所有组织中有不同水平的表达。许多细胞因子受体经由下列组合的JAK激酶对传导信号：JAK1/JAK2、JAK1/JAK3、JAK1/TYK2、JAK2/TYK2或JAK2/JAK2。在这方面，JAK1是最广泛的配对JAK激酶，且是通过γ-共同(IL-2Rγ)细胞因子受体、IL-6受体家族、I、II和III型受体家族和IL-10受体家族进行信号转导所必须的。动物研究已表明，JAK1是免疫系统的发育、发挥作用和体内稳态所必须的。通过抑制JAK1激酶活性来调节免疫活性证实可用于治疗多种免疫病症(Murray,P.J.,J.Immunol.,178,2623–2629(2007)；Kisseleva,T.等人,Gene,285,1–24(2002)；O'Shea,J.J.等人,Cell,109,(suppl.),S121–S131(2002))，同时避免JAK2依赖性的促红细胞生成素(EPO)和促血小板生成素(TPO)的信号转导(Neubauer H.等人,Cell,93(3),397-409(1998)；Parganas E.等人,Cell,93(3),
385-95(1998))。
385-95(1998))。
[0006] 发明概述
[0007] 本发明提供具有以下结构的式I的化合物：
[0008]
[0009] 或其药学上可接受的盐，其中X为N或CR，其中R为氢、氘、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、CF3或羟基；
[0010] A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H或C1-C4烷基，并且Ra和Rb独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0011] A′选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0′、--NR0′(C＝O)--和--(CRa′Rb′)q--，其中R0′为H或C1-C4烷基，并且Ra′和Rb′独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0012] Z为--(CH2)h--或键，其中一个或多个亚甲基单元任选地被一个或多个C1-C3烷基、CN、OH、甲氧基或卤素取代，并且其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0013] R1和R1′独立地选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氟烷基、烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)、杂环基和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、芳基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1–C6烷基、卤素、CN、羟基、甲氧基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4烷基)氨基、CF3、--SO2-(C1-C6烷基)和C3-C6环烷基；
[0014] R2选自氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素和氰基，其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0015] R3选自氢、氘和氨基；
[0016] R4为单环或双环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、CN、羟基、--CO2H、C1-C6烷氧基、氨基、--N(C1-C6烷基)(CO)(C1-C6烷基)、--NH(CO)(C1-C6烷基)、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)、--(CO)N(C1-C6烷基)2、--(C1-C6烷基)氨基、--N(C1-C6烷基)2、--SO2-(C1-C6烷基)、--(SO)NH2和C3-C6环烷基，其中所述烷基、环烷基、烷氧基或杂环烷基可被一个或多个C1-C6烷基、卤素、CN、OH、烷氧基、氨基、--CO2H、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)或--(CO)N(C1-C6烷基)2取代，并且其中所述烷基可进一步被一个或多个氟原子取代；
[0017] R5独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和羟基；
[0018] h为1、2或3；j和k独立地为0、1、2或3；m和n独立地为0、1或2；并且q为0、1或2。
[0019] 在其它方面中，本发明还提供：
[0020] 药物组合物，其包含药学上可接受的载体和式I的化合物；治疗病况或病症的方法，所述病况或病症包括肌炎、血管炎、天疱疮、克罗恩氏病、狼疮、肾炎、银屑病、多发性硬化、重性抑郁症、变态反应、哮喘、干燥综合征(Sjogren’s disease)、干眼综合征、移植排斥、癌症、炎性肠病、感染性休克、心肺功能障碍、白癜风、脱发、急性呼吸道疾病、强直性脊柱炎、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬变、阿尔茨海默病或恶病质，所述方法通过向有需要的个体给药治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐进行；
[0021] 治疗病况或病症的方法，所述病况或病症包括特应性皮炎、湿疹、银屑病、硬皮病、狼疮、瘙痒、其它瘙痒病况、变态反应(包括哺乳动物的变应性皮炎、马变应性疾病(包括叮咬过敏)、夏季湿疹、马甜痒症(sweet itch)、肺气肿、炎症性气道疾病、复发性气道阻塞、气道反应过度和慢性阻塞性肺疾病)，所述方法通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐进行；以及制备本发明的化合物的方法。
[0022] 通过下列说明(仅作为实例)，会进一步理解本发明。本发明涉及一类氨基嘧啶衍生物。具体而言，本发明涉及可用作JAK(特别是TYK2和JAK1)的抑制剂的氨基嘧啶化合物。尽管本发明并不如此受限，但通过下列讨论及实施例将对本发明的各方面获得了解。
[0023] 术语“烷基”(单独或组合)意指式CnH2n+1的非环状的饱和烃基，其可为线性或支化的。这样的基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基和己基。除非特别指明，烷基包含1至6个碳原子。烷基和多种其它的含烃部分的碳原子含量是由表示该部分中的碳原子的下限和上限数目的前缀指明的，换言之，前缀Ci-Cj表示具有整数“i”至整数“j”(包括端值)个碳原子的部分。因此，例如，C1-C6烷基意指具有1至6个碳原子(包括端值)的烷基。
[0024] 如本文中所使用，术语“羟基”意指OH基团。术语“杂环基”意指饱和或部分饱和(即，非芳族)杂环，其包含5至10个环原子，其中一个或多个(优选1、2或3个)环原子是选自N、O和S的杂原子，其余为碳，且其可通过环氮原子或通过环碳原子连接。同样地，当被取代时，取代基可位于环氮原子上(如果所述取代基通过碳原子连接时)或位于环碳原子上(所有的情况)。具体实例包括氧杂环丙烷基、氮杂环丙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、1,4-二氧杂环己烷基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基和二氮杂 基。
[0025] 术语“芳基”是指可通过环碳原子之一连接的包含6至10个环碳原子的芳族单环或双环烃。同样地，当被取代时，取代基可位于环碳原子上。具体实例包括但不限于苯基、甲苯基、二甲苯基、三甲基苯基和萘基。芳基取代基的实例包括但不限于烷基、羟基、卤代、腈、烷氧基、三氟甲基、甲酰氨基、SO2Me、苄基和被取代的苄基。
[0026] 术语“杂芳基”是指5至10个环原子(其中一个或多个(优选1、2或3个环原子)是选自N、O和S的杂原子，其余是碳)的单价芳族单环或双环杂环，且其可通过环碳原子连接或通过具有适合化合价的环氮原子连接。同样地，当被取代时，取代基可位于环碳原子上或位于具有适合化合价的环氮原子上连接。具体实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。术语“环烷基”意指式CnH2n-1的单环的饱和烃基。其实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。除非特别指明，环烷基包含3至8个碳原子。
[0027] 术语“卤代”和“卤素”意指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
[0028] 术语“哺乳动物”意指人类、家畜或伴侣动物。
[0029] 术语“伴侣动物”意指以宠物或家居动物形式饲养的动物。伴侣动物的实例包括狗、猫和啮齿类(包括仓鼠、豚鼠、沙鼠等)、兔、雪貂和鸟类。
[0030] 术语“家畜”意指于农业环境中饲养或哺育以制备产品(例如食物或纤维)或为了其劳动力的动物。在一些实施方案中，家畜适合于被哺乳动物(例如人类)所消费。家畜动物的实例包括牛、山羊、马、猪、绵羊(包含羔羊)和兔，以及鸟类(例如鸡、鸭和火鸡)。
[0031] 术语“治疗”意指减缓与疾病、病症或病况有关的症状，或停止那些症状的进一步发展或恶化。取决于患者的疾病和病况，如本文中所使用的“治疗”可包括治愈、缓和及预防性治疗中的一种或多种。治疗还可包括结合其它治疗给药本发明的药物制剂。
[0032] 术语“治疗有效的”表示药剂预防病症或改善病症的严重程度，同时避免通常与其它供选择的疗法有关的不良副作用的能力。应将短语“治疗有效的”理解为等同于短语“对于治疗、预防或减缓是有效的”，且二者都欲用于界定用于组合治疗的各个药剂达到相对于以每个药剂本身治疗而言在癌症、心血管疾病或疼痛和炎症的严重程度和发病频率方面得到改善的目标而同时避免通常与其它供选择的疗法有关的不良副作用的量。
[0033] “药学上可接受的”意指适合用于哺乳动物、伴侣动物或家畜动物。
[0034] 如果取代基被描述为“独立地选自”某组时，则各个取代基彼此独立地被选择。因此，各个取代基与其它取代基可以相同或不相同。
[0035] 发明详述
[0036] 本发明涉及新化合物，其为可用于治疗与TYK2和JAK1调节异常相关的疾病和病症的TYK2和JAK1调节剂。本发明还提供包含这样的JAK酶调节剂的药物组合物以及治疗和/或预防这样的疾病和病症的方法。因此，本发明提供具有以下结构的式I的化合物：
[0037]
[0038] 或其药学上可接受的盐，其中X为N或CR，其中R为氢、氘、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、CF3或羟基；
[0039] A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H或C1-C4烷基，并且Ra和Rb独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0040] A′选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0′、--NR0′(C＝O)--和--(CRa′Rb′)q--，其中R0′为H或C1-C4烷基，并且Ra′和Rb′独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0041] Z为--(CH2)h--或键，其中一个或多个亚甲基单元任选地被一个或多个C1-C3烷基、CN、OH、甲氧基或卤素取代，并且其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0042] R1和R1′独立地选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氟烷基、烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、芳基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1–C6烷基、卤素、CN、羟基、甲氧基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4烷基)氨基、CF3、--SO2-(C1-C6烷基)和C3-C6环烷基；
[0043] R2选自氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素和氰基，其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0044] R3选自氢、氘和氨基；
[0045] R4为单环或双环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、CN、羟基、--CO2H、C1-C6烷氧基、氨基、--N(C1-C6烷基)(CO)(C1-C6烷基)、--NH(CO)(C1-C6烷基)、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)、--(CO)N(C1-C6烷基)2、--(C1-C6烷基)氨基、--N(C1-C6烷基)2、--SO2-(C1-C6烷基)、--(SO)NH2和C3-C6环烷基，其中所述烷基、环烷基、烷氧基或杂环烷基可被一个或多个C1-C6烷基、卤素、CN、OH、烷氧基、氨基、--CO2H、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)或--(CO)N(C1-C6烷基)2取代，并且其中所述烷基可进一步被一个或多个氟原子取代；
[0046] R5独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和羟基；
[0047] h为1、2或3；j和k独立地为0、1、2或3；m和n独立地为0、1或2；并且q为0、1或2。
[0048] 本发明还提供具有以下结构的化合物：
[0049]
[0050] 或其药学上可接受的盐，其中
[0051] X为N；
[0052] A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H或C1-C4烷基，并且Ra和Rb独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0053] R1选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氟烷基、烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、芳基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、卤素、CN、羟基、甲氧基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4烷基)氨基、CF3、--SO2-(C1-C6烷基)和C3-C6环烷基；
[0054] R2选自氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素和氰基，其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0055] R3选自氢和氘；
[0056] R4为单环或双环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、CN、羟基、--CO2H、C1-C6烷氧基、氨基、--N(C1-C6烷基)(CO)(C1-C6烷基)、--NH(CO)(C1-C6烷基)、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)、--(CO)N(C1-C6烷基)2、--(C1-C6烷基)氨基、--N(C1-C6烷基)2、--SO2-(C1-C6烷基)、--(SO)NH2和C3-C6环烷基，其中所述烷基、环烷基、烷氧基或杂环烷基可被一个或多个C1-C6烷基、卤素、CN、OH、烷氧基、氨基、--CO2H、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)或--(CO)N(C1-C6烷基)2取代，并且其中所述烷基可进一步被一个或多个氟原子取代；
[0057] h为1，j为1、2或3；并且q为0、1或2。
[0058] 本发明还提供具有以下结构的化合物：
[0059]
[0060] 或其药学上可接受的盐，其中
[0061] X为N；
[0062] A选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0--和--(CRaRb)q--，其中R0为H或C1-C4烷基，并且Ra和Rb独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0063] R1选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氟烷基、烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、芳基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1–C6烷基、卤素、CN、羟基、甲氧基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4烷基)氨基、CF3、--SO2-(C1-C6烷基)和C3-C6环烷基；
[0064] R2选自氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素和氰基，其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0065] R3选自氢和氘；
[0066] R4为单环或双环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、CN、羟基、--CO2H、C1-C6烷氧基、氨基、--N(C1-C6烷基)(CO)(C1-C6烷基)、--NH(CO)(C1-C6烷基)、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)、--(CO)N(C1-C6烷基)2、--(C1-C6烷基)氨基、--N(C1-C6烷基)2、--SO2-(C1-C6烷基)、--(SO)NH2和C3-C6环烷基，其中所述烷基、环烷基、烷氧基或杂环烷基可被一个或多个C1-C6烷基、卤素、CN、OH、烷氧基、氨基、--CO2H、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)或--(CO)N(C1-C6烷基)2取代，并且其中所述烷基可进一步被一个或多个氟原子取代；
[0067] R5选自氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和羟基；j为0、1、2或3；并且q为0、1或2。
[0068] 本发明还提供具有以下结构的化合物：
[0069]
[0070] 或其药学上可接受的盐，其中
[0071] A′选自键、C＝O、--SO2--、--(C＝O)NR0′、--NR0′(C＝O)--和--(CRa′Rb′)q--，其中R0′为H或C1-C4烷基，并且Ra′和Rb′独立地为氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)、杂芳基、(C1-C6烷基)杂芳基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)；
[0072] R1′选自氢、氘、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6烷基)、CN、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氟烷基、烷氧基、杂芳基(C1-C6烷基)和杂环基(C1-C6烷基)，其中所述烷基、芳基、环烷基、杂环基或杂芳基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1–C6烷基、卤素、CN、羟基、甲氧基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4烷基)氨基、CF3、--SO2-(C1-C6烷基)和C3-C6环烷基；
[0073] R2选自氢、氘、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤素和氰基，其中所述烷基可被一个或多个氟原子取代；
[0074] R3选自氢和氘；
[0075] R4为单环或双环芳基或者单环或双环杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：C1-C6烷基、杂环烷基、卤素、CN、羟基、--CO2H、C1-C6烷氧基、氨基、--N(C1-C6烷基)(CO)(C1-C6烷基)、--NH(CO)(C1-C6烷基)、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)、--(CO)N(C1-C6烷基)2、--(C1-C6烷基)氨基、--N(C1-C6烷基)2、--SO2-(C1-C6烷基)、--(SO)NH2和C3-C6环烷基，其中所述烷基、环烷基、烷氧基或杂环烷基可被一个或多个C1-C6烷基、卤素、CN、OH、烷氧基、氨基、--CO2H、--(CO)NH2、--(CO)NH(C1-C6烷基)或--(CO)N(C1-C6烷基)2取代，并且其中所述烷基可进一步被一个或多个氟原子取代；
[0076] R7和R8独立地为氢、C1-C4烷基、芳基、杂芳基、(芳基)C1-C6烷基、(杂芳基)C1-C6烷基、(杂环基)C1-C6烷基、(C1-C6烷基)芳基、(C1-C6烷基)杂芳基或(C1-C6烷基)杂环基，其中所述烷基进一步任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、羟基、甲氧基、氨基、CF3和C3-C6环烷基；
[0077] k为0、1、2或3；m和n均为1；并且q为0、1或2。
[0078] 在某些实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：
[0079] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({5-氟-6-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0080] (1R,5S)-N-乙基-3-[2-(1,2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0081] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0082] (1R,5S)-3-(2-{[5-氯-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0083] 环丙基[(1R,5S)-3-(2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0084] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-{(1R,5S)-8-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-胺；
[0085] 4-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,6-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0086] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2S)-2-氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0087] 环丙基[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0088] 3-{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丁腈；
[0089] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0090] 3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈；
[0091] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0092] (1R,5S)-N-乙基-3-(2-{[5-氟-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0093] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0094] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-(丙-2-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0095] (3,3-二氟环丁基)[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0096] 1-({(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲基)环丙烷甲腈；
[0097] 3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈；
[0098] (1S,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；
[0099] (1R,2S)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；
[0100] [(1R,2R)-2-氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0101] [(1R,2R)-2-氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮
[0102] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0103] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0104] N,3-二甲基-5-[(4-{(1R,5S)-8-[(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺；
[0105] {3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
[0106] 4-({4-[8-(氰基乙酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
[0107] (1R,5S)-N-(氰基甲基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0108] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S,2R)-2-氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0109] 5-({4-[(1R,5S)-8-(顺式-3-氰基环丁基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0110] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟吡啶-2-甲酰胺
[0111] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0112] N,3-二甲基-5-({4-[(1R,5S)-8-(1,2-噁唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-甲酰胺；
[0113] 2-[5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-基]-2-甲基丙腈；
[0114] 3-{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙腈；
[0115] (1R,5S)-N-乙基-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0116] 4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0117] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-(2-{[5-氟-6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0118] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-(2-{[5-氟-6-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0119] [(1R,5S)-3-(2-{[5-氯-6-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基][(1S)-2,2-二氟环丙基]甲酮；
[0120] {3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]氧杂环丁烷-3-基}乙腈；
[0121] [(1R,5S)-3-(2-{[5-氯-6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基][(1S)-2,2-二氟环丙基]甲酮；
[0122] 2-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-4-甲腈；
[0123] 3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]环丁烷甲腈；
[0124] 2-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-噁唑-5-甲腈；
[0125] (1R,5S)-N-(2-氰基乙基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0126] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噁唑-4-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0127] 4-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-6-(羟基甲基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0128] (1-氟环丙基)[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0129] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,3-噻唑-2-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0130] 环丙基{(1R,5S)-3-[2-(1,2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0131] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({5-氟-6-[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0132] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0133] 4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0134] 6-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺；
[0135] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-磺酰胺；
[0136] 5-({4-[(1R,5S)-8-(反式-3-氰基环丁基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0137] 1,2-噁唑-5-基{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0138] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(甲基磺酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0139] (1S,2S)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈；
[0140] 3-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺；
[0141] (1S,2S)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈；
[0142] 环丙基{(1R,5S)-3-[5-氟-2-(哒嗪-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0143] 4-({4-[6-(2,2-二氟丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺；
[0144] (1S,2S)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-(2-{[6-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基]氨基}-5-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0145] N-[(1S,5R)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0146] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-{[1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0147] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0148] N-{(1S,5R,6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
[0149] 5-[(4-{(1S,5R,6R)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0150] N-{(1S,5R,6R)-3-[2-({5-氯-6-[(1R)-1-羟基乙基]吡啶-3-基}氨基)-5-氟嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
[0151] (1R)-2,2-二氟-N-[(1R,5S,6S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0152] 5-[(4-{(1R,5S,6S)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0153] N-[(1R,5S)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；和，
[0154] (1S)-2,2-二氟-N-[(1R,5S,6S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0155] 或其药学上可接受的盐。
[0156] 在某些其它实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：
[0157] N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(2-氟-2-甲基丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
[0158] N-乙基-2-甲基-4-({4-[6-(三氟乙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；和
[0159] 4-({4-[6-(2,2-二氟丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
[0160] 或其药学上可接受的盐。
[0161] 在其它实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：
[0162] 4-({4-[8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
[0163] N-乙基-4-({5-氟-4-[8-(三氟乙酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
[0164] (1R,5S)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0165] (1R,5S)-N-(氰基甲基)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0166] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0167] 3-(2-{[4-(乙基氨甲酰基)-3-甲基苯基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯；
[0168] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0169] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0170] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噻唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0171] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0172] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0173] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0174] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-(2-{[5-氟-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0175] 5-[(4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)羰基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0176] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0177] (1R,5S)-N-乙基-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0178] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0179] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噁唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0180] 环丙基{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0181] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0182] [(1R)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；和
[0183] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0184] 或其药学上可接受的盐。
[0185] 在其它实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：
[0186] (1R)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0187] N-{(1S,5R,6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
[0188] N-[(1S,5R,6R)-3-(2-{[5-氯-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；和
[0189] N-[(1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-{[6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0190] 或其药学上可接受的盐。
[0191] 在一个实施方案中，本发明提供化合物，其为[(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；或其药学上可接受的盐。
[0192] 在另一实施方案中，本发明提供化合物，其为[(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
或其药学上可接受的盐。
或其药学上可接受的盐。
[0193] 在另一实施方案中，本发明提供化合物，其为5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；或其药学上可接受的盐。
[0194] 在另一实施方案中，本发明提供化合物，其为(1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；或其药学上可接受的盐。
[0195] 在一个实施方案中，本发明提供化合物，其为[(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
或其药学上可接受的盐。
或其药学上可接受的盐。
[0196] 在另一实施方案中，本发明提供化合物，其为(1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
[0197] 在某些其它实施方案中，本发明提供化合物，其为(1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
[0198] 在一个实施方案中，本发明提供化合物，其为(1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；或其药学上可接受的盐。
[0199] 在另一实施方案中，本发明提供化合物，其为(1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；或其药学上可接受的盐。
[0200] 在某些其它实施方案中，本发明提供化合物，其为4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；或其药学上可接受的盐。
[0201] 本发明进一步提供药物组合物或兽药组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
[0202] 本发明还提供用于治疗或预防病症或病况的方法，所述病症或病况选自炎症、自身免疫性疾病、神经炎症、关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、关节炎、骨性关节炎、痛风性关节炎、疼痛、发热、肺结节病(sarcoisosis)、硅肺病、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗死、血栓形成、充血性心力衰竭和心脏再灌注损伤、心肌病、卒中、缺血、再灌注损伤、脑水肿、脑外伤、神经变性、肝病、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肾炎、视网膜炎、视网膜病变、黄斑变性、青光眼、糖尿病(1型和2型)、糖尿病神经病变、病毒和细菌感染、肌痛、内毒素性休克、中毒性休克综合征、自身免疫性疾病、骨质疏松症、多发性硬化、子宫内膜异位症、经期痉挛、阴道炎、念珠菌病、癌症、纤维化、肥胖症、肌营养不良症、多肌炎、皮肌炎、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎、白癜风、脱发、阿尔茨海默病、皮肤发红、湿疹、银屑病、特应性皮炎和晒伤，所述方法包括向个体给药治疗有效量的式I的化合物，或其药学上可接受的盐，或者所述化合物或盐的药学上可接受的溶剂合物。
[0203] 在某些实施方案中，本发明提供上述方法，其中所述化合物选自：
[0204] 4-({4-[8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
[0205] N-乙基-4-({5-氟-4-[8-(三氟乙酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
[0206] (1R,5S)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0207] (1R,5S)-N-(氰基甲基)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0208] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0209] 3-(2-{[4-(乙基氨甲酰基)-3-甲基苯基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯；
[0210] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0211] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0212] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噻唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0213] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0214] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0215] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0216] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-(2-{[5-氟-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0217] 5-[(4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)羰基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]-3-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0218] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0219] (1R,5S)-N-乙基-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0220] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0221] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噁唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺；
[0222] 环丙基{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0223] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2R)-2-氰基环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0224] [(1R)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0225] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0226] N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(2-氟-2-甲基丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺；
[0227] (1R)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0228] N-乙基-2-甲基-4-({4-[6-(三氟乙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺；
[0229] 4-({4-[6-(2,2-二氟丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺；
[0230] 4-({4-[6-(环丙基羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺；
[0231] N-{(1S,5R,6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺；
[0232] N-[(1S,5R,6R)-3-(2-{[5-氯-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；和
[0233] N-[(1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-{[6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0234] 或其药学上可接受的盐。
[0235] 在某些其它实施方案中，本发明提供治疗或预防银屑病、白癜风、脱发或特应性皮炎的方法，所述方法通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的选自下列的化合物进行：
[0236] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0237] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0238] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0239] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0240] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0241] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0242] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0243] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0244] (1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；和，
[0245] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0246] 或其药学上可接受的盐。
[0247] 在其它实施方案中，本发明提供治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的方法，其通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的选自下列的化合物进行：
[0248] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0249] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0250] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0251] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0252] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0253] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0254] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0255] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0256] (1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；和，
[0257] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0258] 或其药学上可接受的盐。
[0259] 在其它实施方案中，本发明提供治疗或预防原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎的方法，其通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的选自下列的化合物进行：
[0260] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0261] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0262] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0263] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0264] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0265] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0266] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0267] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0268] (1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；和，
[0269] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0270] 或其药学上可接受的盐。
[0271] 在某些其它实施方案中，本发明提供治疗或预防炎性肠病、克罗恩氏病或溃疡性结肠炎的方法，其通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的选自下列的化合物进行：
[0272] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0273] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0274] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0275] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0276] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0277] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0278] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0279] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0280] (1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；和，
[0281] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0282] 或其药学上可接受的盐。
[0283] 在其它实施方案中，本发明提供治疗或预防多发性硬化的方法，其通过向有需要的哺乳动物给药治疗有效量的选自下列的化合物进行：
[0284] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮；
[0285] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0286] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
[0287] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺；
[0288] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮；
[0289] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0290] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0291] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺；
[0292] (1R,2R)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-乙基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]羰基}环丙烷甲腈；和，
[0293] 4-{(1R,5S)-8-[(2,2-二氟环丙基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；
[0294] 或其药学上可接受的盐。
[0295] 本发明进一步提供治疗或预防选自急性髓性白血病、急性T细胞淋巴母细胞白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、脑瘤、神经胶质瘤(包括星形细胞瘤、少突神经胶质瘤和胶质母细胞瘤)、急性CNS创伤(包括外伤性脑损伤、脑炎、卒中和脊髓损伤)、癫痫、惊厥、PD、ALS、额颞叶痴呆，以及神经精神性病症(包括精神分裂症、双相型障碍、抑郁症、难治性抑郁症、PTSD、焦虑和自身抗体介导的脑病)的病症或病况的方法，其包括向个体给药有效量的包含式I的化合物或其药学上可接受的盐，或者所述化合物或盐的药学上可接受的溶剂合物的组合物的步骤。
[0296] 本发明还提供在需要这样的治疗的个体中治疗其中需要JAK抑制剂的疾病或病况的方法，其包括向所述个体给药治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐，或者所述化合物或盐的药学上可接受的溶剂合物。
[0297] 在某些实施方案中，根据所述方法使用的治疗有效量为0.01mg/kg体重/天至100mg/kg体重/天。在某些其它实施方案中，根据所述方法使用的治疗有效量为0.1mg/kg体重/天至10mg/kg体重/天。
[0298] 具有相同的分子式但其原子键连的性质或顺序或者其原子的空间排列不同的本发明的化合物称为“异构体”。原子的空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。本领域技术人员会明白式I的化合物可以顺式-和反式-非手性非对映异构体的形式存在。
[0299] 本文中所述化合物的所有异构体(例如顺式-、反式-或非对映异构体)单独或其任意混合物均涵盖在所述化合物的范围内。所有这些形式(包括对映异构体、非对映异构体、顺式、反式、同侧(syn)、异侧(anti)、溶剂合物(包括水合物)、互变异构体及其混合物)均涵盖在所述化合物的范围内。立体异构混合物(例如非对映异构体的混合物)可以已知方式利用适合的分离方法而分离为其相应的异构体。非对映异构混合物例如可利用分级结晶、色谱法、溶剂分配法和类似的操作而分离为单独非对映异构体。该分离可发生于起始化合物之一的水平或发生于式I的化合物本身。对映异构体可通过形成非对映异构盐而分离(例如通过与对映异构纯的手性酸形成盐)，或通过使用具有手性配体的色谱基质利用色谱法(例如HPLC)而分离。本发明包括所有药学上可接受的同位素标记的式I的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占大多数的原子质量或质量数的原子替换。
[0300] 适合于包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，诸如2H及3H；碳的同位素，诸如11C、13C及14C；氯的同位素，诸如36Cl；氟的同位素，诸如18F；碘的同位素，诸如123I及125I；氮的同位素，诸如13N及15N；氧的同位素，诸如15O、17O及18O；磷的同位素，诸如32 35
P；及硫的同位素，诸如 S。
P；及硫的同位素，诸如 S。
[0301] 某些同位素标记的式I的化合物(例如掺入放射性同位素的那些)可用于药物和/或底物组织分布研究。由于放射性同位素氚(即3H)及碳-14(即14C)易于掺入并易于检测，所以其特别可用于该目的。
[0302] 用诸如氘(即2H)的较重同位素取代可得到由较高代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如体内半衰期增加或剂量需求减少，且因此在一些情况下可为优选的。用正电子发射同位素(诸如11C、18F、15O及13N)取代可用于正电子发射断层造影术(PET)研究，以检查底物受体占有率。同位素标记的式I的化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与在所附实施例及制备中所述类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替先前采用的未标记试剂来制备。
[0303] 在治疗哺乳动物的病症的治疗用途中，本发明的化合物或其药物组合物可通过口服、胃肠外、局部、直肠、黏膜或小肠给药。胃肠外给药包括间接注射以产生全身效果或直接注射至患病的部位。局部给药包括可容易地由局部施用而到达的皮肤或器官(例如眼或耳)的治疗。还包括经皮递送以产生全身效果。直肠给药包括栓剂的形式。优选的给药途径是口服和胃肠外。
[0304] 式I的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。适合的酸加成盐由可形成无毒性盐的酸所形成。其实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己胺磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和羟萘酸盐(xinofoate)。
[0305] 适合的碱盐由形成无毒性盐的碱所形成。其实例包括铝、精氨酸、N-双苄乙二胺(benzathine)、钙、胆碱、二乙胺、二醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨基丁三醇和锌的盐类。
[0306] 还可形成酸和碱的半盐，例如，半硫酸盐和半钙盐。适合的盐类的评论参见Stahl和Wermuth的Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(Wiley-VCH，2002)。
[0307] 式I的化合物的药学上可接受的盐可以分别通过下列三种方法之一来制备：(i)使式I的化合物与所期望的酸或碱反应；(ii)由式I的化合物的适合的前体移除酸或碱不稳定的保护基，或使用所期望的酸或碱对适合的环状前体(例如内酯或内酰胺)进行开环反应；或(iii)通过与适合的酸或碱反应或利用适合的离子交换柱将式I的化合物的一种盐转换成另一种盐。所有三种反应通常是于溶液中进行。所得的盐可沉淀出并通过过滤或可通过蒸发溶剂来收集。所得的盐的离子化程度可由完全离子化变化至几乎未离子化。
[0308] 本发明的药物组合物可通过本领域中已知的方法制备，例如，通过常规的混合、溶解、粒化、制成糖锭剂、水飞、乳化、包封、包埋、冷冻干燥处理或喷雾干燥。
[0309] 根据本发明使用的药物组合物可依常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制，所述载体包括赋形剂和助剂，其有利于将活性化合物处理成药学上可使用的制剂。适合的制剂取决于所选择的给药途径。药学上可接受的赋形剂和载体通常为本领域技术人员所知的，并因而涵盖在本发明的范围内。这样的赋形剂和载体在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Pub.Co.,New Jersey(1991)中记载。本发明的制剂可设计成短效型、快速释出型、长效型和持续释放型。因此，所述药物制剂还可配制用于控制释放型或缓释形式。
[0310] 适合用于本发明的药物组合物包括其中含有足以达到所期望的目的(即控制或治疗病症或疾病)的量的活性成分的组合物。具体而言，治疗有效量意指有效地预防、减轻或改善疾病的症状/体征或延长被治疗个体的存活的化合物的量。
[0311] 活性组分(其为本发明的化合物)在所述药物组合物及其单位剂型中的量可依据给药方式、特定化合物的功效及所期望的浓度而广泛地变化或调整。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内。通常，活性组分的量为组合物的0.01重量％至99重量％。
[0312] 一般而言，活性组分的治疗有效剂量范围为约0.01至约100mg/kg体重/天，优选约0.1至约10mg/kg体重/天，更优选约0.3至3mg/kg体重/天，甚至更优选约0.3至1.5mg/kg体重/天。会理解，剂量可根据各个个体的要求及待治疗的病症或疾病的严重性而变化。
[0313] 所期望的剂量可方便地以于适合的间隔(例如，以每日二、三、四或多个亚剂量)给药的单一剂量或分剂量的形式呈现。亚剂量本身可进一步分成，例如，许多不连续松散分开的给药剂量；例如由吹药器产生的多重吸入剂量或以施用数滴至眼的方式。
[0314] 此外，要理解，为了快速达到所期望的血浆浓度，起始给药剂量可能增加至超出上限。另一方面，起始剂量可能低于最佳剂量，且治疗期间内的每日剂量可根据特定状况而逐渐增加。必要时，每日剂量亦可分割成多个剂量以例如每日给药二至四次。
[0315] 本发明的化合物涉及可用作Janus激酶抑制剂(JAK-i)的氨基嘧啶基化合物。它们可用作与治疗或预防选自下列的病症或病况有关的治疗剂：类风湿性关节炎、肌炎、血管炎、天疱疮、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、阿尔茨海默病、狼疮、肾炎、银屑病、特应性皮炎、自身免疫甲状腺病、多发性硬化、重性抑郁症、变态反应、哮喘、干燥综合征、干眼综合征、器官移植排斥、异种移植、I型糖尿病和糖尿病并发症、癌症、白血病、急性T细胞淋巴母细胞白血病、成人T细胞白血病、活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、炎性肠病、感染性休克、心肺功能障碍、慢性阻塞性肺疾病、急性呼吸道疾病、恶病质和其中期望免疫抑制/免疫调节的其它适应症，其包括向个体给药有效量的本发明的化合物的步骤。
[0316] 对用于控制人和动物中与JAK相关的病症(例如特应性皮炎)的安全和有效的药剂存在实质需求。治疗动物的特应性皮炎的市场目前主要由皮质类固醇主导，其在动物(特别是伴侣动物，例如狗)中造成令人苦恼和不期望的副作用。还可使用抗组织胺，但其效果较差。环孢菌素的犬类制剂(ATOPICATM)在目前市场上用于特应性皮炎，但其价格昂贵且效力开始较慢。此外，ATOPICATM有胃肠道耐受性的问题。本发明的化合物是JAK抑制剂，且针对JAK1具有选择性效力。这些化合物预期可对类固醇的使用提供其它选择，及对存留于特应性皮炎或在移除变应原或病原体(例如跳蚤变应性皮炎中的跳蚤)之后缓慢退去的慢性瘙痒和发炎提供解决方法。
[0317] 本发明还提供上述定义的任何用途、方法或组合，其中式I的化合物或其药学上可接受的盐，或者所述化合物或盐的药学上可接受的溶剂合物，与其它药理学活性化合物联合使用，特别是下列功能定义的种类或特定化合物之一。根据本领域技术人员熟知的标准药学实践，这些药剂可作为同一或分开的药物剂型的部分，通过相同或不同的给药途径及相同或不同的给药安排来给药。
[0318] 适合与式I的化合物或其药学上可接受的盐，或者所述化合物或盐的溶剂合物在联合疗法中，特别是在呼吸疾病的治疗中使用的药剂包括：5-脂加氧酶激活蛋白(FLAP)拮抗剂；白三烯拮抗剂(LTRA)，如LTB4、LTC4、LTD4、LTE4、CysLT1或CysLT2的拮抗剂，例如孟鲁司特或扎鲁司特；组胺受体拮抗剂，如1型组胺受体拮抗剂或2型组胺受体拮抗剂，例如氯雷他定、非索非那定、地氯雷他定、左西替利嗪、美沙吡林或西替利嗪；α1-肾上腺素受体激动剂或α2-肾上腺素受体激动剂，例如去氧肾上腺素、甲氧明、羟甲唑啉或甲基肾上腺素；毒蕈碱M3受体拮抗剂，例如噻托溴铵或或异丙托铵；双重毒蕈碱M3受体拮抗剂/β2激动剂；PDE抑制剂，如PDE3抑制剂、PDE4抑制剂或PDE5抑制剂，例如茶碱、西地那非、伐地那非、他达拉非、异丁司特、西洛司特或罗氟司特；色甘酸钠或奈多罗米钠；环加氧酶(COX)抑制剂，如非选择性抑制剂(例如阿司匹林或布洛芬)或选择性抑制剂(例如塞来昔布或伐地考昔)；糖皮质激素，如氟替卡松、莫米松、地塞米松、泼尼松龙、布地奈德、环索奈德或倍氯米松(beclamethasone)；抗炎单克隆抗体，例如英夫利昔单抗、阿达木单抗、他尼珠单抗、雷珠单抗、贝伐珠单抗或美泊珠单抗；β2激动剂，例如沙美特罗、沙丁胺醇、舒喘灵、非诺特罗或福莫特罗，特别是长效β2激动剂，intigrin拮抗剂，例如那他珠单抗；粘附分子抑制剂，如VLA-4拮抗剂；激肽B1或B2受体拮抗剂；免疫抑制剂，如IgE通路抑制剂(例如奥马珠单抗)或环孢素；基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂，如MMP-9或MMP-12抑制剂；速激肽NK1、NK2或NK3受体拮抗剂；蛋白酶抑制剂，如弹性蛋白酶、糜酶或catheopsin G的抑制剂；腺苷A2a受体激动剂；腺苷A2b受体拮抗剂；尿激酶抑制剂；多巴胺受体激动剂(例如罗匹尼罗)，特别是多巴胺D2受体激动剂(例如溴隐亭)；NFκB通路调节剂，如IKK抑制剂；细胞因子信号转导通路的进一步调节剂，如JAK激酶、syk激酶、p38激酶、SPHK-1激酶、Rho激酶、EGF-R或MK-2的抑制剂；粘液溶解、mucokinetic或镇咳药剂；抗生素；抗病毒药；疫苗；趋化因子；上皮钠通道(ENaC)阻滞剂或上皮钠通道(ENaC)抑制剂；核苷受体激动剂，如P2Y2激动剂；血栓烷抑制剂；烟酸；5-脂氧合酶(5-LO)抑制剂，例如齐留通；粘着因子，如VLAM、ICAM或ELAM；CRTH2受体(DP2)拮抗剂；前列腺素D2受体(DP1)拮抗剂；造血前列腺素D2合成酶(HPGDS)抑制剂；干扰素-β；可溶性人TNF受体，例如依那西普；HDAC抑制剂；磷酸肌醇3-激酶γ(PI3Kγ)抑制剂；磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂；CXCR-1或CXCR-2受体拮抗剂；IRAK-4抑制剂；以及TLR-4或TLR-9抑制剂，包括具体命名的化合物的药学上可接受的盐和所述具体命名的化合物和盐的药学上可接受的溶剂合物。
[0319] 因此，本发明提供治疗或预防个体(例如人或非人类哺乳动物)中与JAK相关的疾病、病况或病症的方法，其包括向个体给药有效量的一种或多种本文中所述化合物。可被治疗的适合的个体包括驯养或野生的动物、伴侣动物(例如狗、猫、马等)；家畜，包括牛和其它反刍动物、猪、家禽、兔等；灵长类，例如猴，例如罗猴和石蟹猴(亦称为食蟹猴或长尾猴)、狨猴、绢毛猴、黑猩猩、猕猴等；以及啮齿动物，例如大鼠、小鼠、沙鼠、天竺鼠等。在一个实施方案中，所述化合物是以药学上可接受的形式，任选地于药学上可接受的载体中给药。
[0320] 预期对JAK途径的选择性靶向或JAK激酶的调节(特别是JAK1)具有治疗功效的病况包括关节炎、哮喘、自身免疫病、癌症或肿瘤、糖尿病、某些眼疾病、病症或病况、炎症、肠发炎、变态反应或病况、神经变性疾病、银屑病和移植排斥。可受益于选择性抑制JAK1的病况会在下文中进行更详细的讨论。
[0321] 因此，式I的化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物可用于治疗许多例如下列的病况或病症：
[0322] 关节炎，包括类风湿性关节炎、幼年型关节炎和银屑病关节炎；
[0323] 自身免疫疾病或病症，包括单一器官或单一细胞类型自身免疫病症，例如桥本甲状腺炎、自身性免疫溶血性贫血、恶性贫血的自身免疫性萎缩性胃炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性睾丸炎、古德帕斯彻病、自身免疫性血小板减少症、交感性眼炎、重症肌无力、格雷夫斯病、原发性胆汁性肝硬变、慢性侵袭性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球病、涉及全身性自身免疫病症的那些(例如全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征、莱特尔综合征、多肌炎-皮肌炎、系统性硬化病、结节性多动脉炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮)以及其它O-细胞(体液)型或T细胞型自身免疫病(包括寇甘综合征)、强直性脊椎炎、Wegener's氏肉芽肿、自身免疫性脱发、I型糖尿病或幼年发病型糖尿病或甲状腺炎；
[0324] 癌症或肿瘤，包括消化道/胃肠道癌、结直肠癌、肝癌、皮肤癌(包括肥大细胞瘤和鳞状细胞癌)、乳房和乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病(包括急性髓性白血病和慢性髓性白血病)、肾癌、肺癌、肌癌、骨癌、膀胱癌、脑癌、黑色素瘤(包含口腔和转移性黑色素瘤)、卡波西肉瘤、骨髓瘤(包括多发性骨髓瘤)、骨髓增殖性病症、增生型糖尿病视网膜病变或与血管生成相关的病症(包括实体瘤)；
[0325] 糖尿病，包括I型糖尿病或糖尿病并发症；
[0326] 眼疾病、病症或病况，包括眼的自身免疫病、角膜结膜炎、春季结膜炎、葡萄膜炎(包括与贝切特病相关的葡萄膜炎和晶状体性葡萄膜炎)、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜炎、角膜上皮营养障碍、角膜白斑、眼天疱疮、莫伦溃疡、巩膜炎、格雷夫眼病、Vogt-Koyanagi-Harada综合征、干燥性角结膜炎(干眼症)、水疱、虹膜睫状体炎、结节病、内分泌性眼病、交感性眼炎、变应性结膜炎或眼部新生血管形成；
[0327] 肠炎症、变态反应或病况，包括克罗恩氏病和/或溃疡性结肠炎、炎性肠病、乳糜泻、直肠炎、嗜酸细胞性胃肠炎或肥大细胞增多症；
[0328] 神经变性疾病，包括运动神经元病、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、脑缺血或创伤性损伤引发的神经变性疾病、卒中、谷氨酸神经毒性或缺氧；卒中的缺血/再灌注损伤、心肌缺血、肾缺血、心脏病发作、心脏肥大、动脉粥样硬化和动脉硬化、器官缺氧或血小板聚集；
[0329] 皮肤疾病、病况或病症，包括特应性皮炎、湿疹、银屑病、硬皮病、瘙痒或其它瘙痒病况、白癜风、脱发；
[0330] 变态反应，包括哺乳动物的变应性皮炎(包括马变应性疾病，例如叮咬过敏)、夏季湿疹、马甜痒症(sweet itch)、肺气肿、炎症性气道疾病、复发性气道阻塞、气道反应过度或慢性阻塞性肺疾病；
[0331] 哮喘和其它阻塞性气道疾病，包括慢性或顽固型哮喘、晚期哮喘、支气管炎、支气管性哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘或粉尘性哮喘；
[0332] 移植排斥，包括胰岛移植排斥、骨髓移植排斥、移植物抗宿主病、器官和细胞移植排斥(例如骨髓、软骨、角膜、心脏、椎间盘、胰岛、肾、四肢、肝、肺、肌肉、成肌细胞、神经、胰脏、皮肤、小肠或气管)或者异种移植。
[0333] 化学合成
[0334] 下列路线及书面说明提供关于本发明的化合物的制备的一般细节。
[0335] 可以通过用于制备类似结构的化合物的任何本领域已知方法制备本发明的化合物。特别地，可以通过参考以下路线所述操作，或通过实施例所述具体方法，或通过与所述操作或具体方法之一相似的方法来制备本发明的化合物。
[0336] 本领域技术人员会认识到，以下路线所述实验条件是实现所示转化的适合条件的例示，并且可能需要或期望改变用于制备式(I)化合物的精确条件。
[0337] 此外，本领域技术人员会认识到，可能需要或期望在本发明的化合物合成的任何阶段保护一个或多个敏感性基团，从而防止不期望的副反应。特别地，可能需要或期望保护氨基或羧酸基团。用于制备本发明的化合物的保护基可以常规方式使用。参见例如援引加入本文的Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts的Protective Groups in Organic Synthesis，第3版(John Wiley and Sons,1999)所述那些，特别是第7章(“Protection for the Amino Group”)和第5章(“Protection for the Carboxyl Group”)所述那些，其还描述了用于移除这样的基团的方法。
[0338] 可以通过以下所示的一般方法中描述的操作，或通过其常规变型来制备所有的式I的衍生物。除了其中所用的任何新的中间体外，本发明还包括用于制备式(I)的衍生物的这些方法中的任意一种或多种。本领域技术人员会明白，以下反应可热力学加热或在微波辐射下加热。
[0339] 会认识到，可能需要或期望以与下述路线所述顺序不同的顺序来进行转化，或改变这些转化中的一个或多个，从而提供期望的本发明的化合物。
[0340] 根据第一种方法，如路线1中所说明，式(IA)的化合物可由式(VI)和(V)的化合物制备。
[0341]
[0342] 其中PG为叔丁氧羰基；X为氯、羟基、适合的离去基团或适合的酸酐；Z＝(CH2)h；A为--N(C＝O)R0--；
[0343] 式(VI)、(V)、(VIII)和(VII)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IA)的化合物可视需要通过外消旋体的手性分离而分离为各自对映异构体。其中R4包含保护基，诸如叔丁氧羰基或甲苯磺酰基，视需要可应用适合的脱保护条件。优选的条件包括二氧杂环己烷中的4M HCl或二氧杂环己烷中5N NaOH。
[0344] 式(IA)的化合物可由式(II)的化合物根据方法步骤(iv)的在Buchwald-Hartwig交叉偶联条件下或通过酸和高温介导的与式(VII)的化合物的亲核取代反应来制备。代表性Buchwald-Hartwig条件包括适合的钯催化剂和适合的螯合膦配体与无机碱在适合的有机溶剂中于升高的温度下(加热地或在微波辐射下)。优选条件包括三(二亚苄基丙酮)二钯(0)和2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯或xantphos或RuPHOS钯(II)苯乙胺氯化物与叔丁醇钠或磷酸钾或碳酸铯在叔戊醇或DMSO中于120-140℃在微波辐射下。代表性酸性条件包括适合的无机酸在适合的醇性溶剂中于升高的温度下(加热地或在微波辐射下)。优选条件包括浓盐酸在异丙醇中于140℃在微波辐射下。
[0345] 式(II)的化合物可由式(III)的化合物根据方法步骤(iii)的与式(VIII)的化合物的酰胺键形成反应来制备，其中X可为氯、羟基、适合的离去基团或酸酐。其中式(VIII)的化合物为酸氯化物，优选条件包括DCM中三乙胺在室温下。其中式(VIII)的化合物为羧酸，使用适合的无机碱活化羧酸，并应用适合的偶联剂。优选条件包括在室温下DIPEA或三乙胺与HATU在DCM或DMF中。其中式(VIII)的化合物为酸酐，优选条件包括在DCM中于室温下搅拌。其中式(VII)的化合物包含适合的离去基团，诸如对氯苯氧基，优选条件包括在回流下DIPEA在二氧杂环己烷中。
[0346] 式(III)的化合物可由式(IV)的化合物根据方法步骤(ii)的由无机酸或有机酸在适合的有机溶剂中介导的脱保护反应来制备。优选条件包括盐酸或THF在二氧杂环己烷或DCM中。式(IV)的化合物可由式(V)和(VI)的化合物根据方法步骤(i)的芳族亲核取代反应在无机碱的存在下来制备。优选条件包括在0℃至室温下三乙胺在甲醇中。
[0347] 根据第二种方法，如路线2中所说明，式(IA)的化合物可由式(IV)的化合物制备。
[0348]
[0349] 其中PG为叔丁氧羰基；X为氯、羟基、适合的离去基团或适合的酸酐；Z＝(CH2)h；A为--N(C＝O)R0--。
[0350] 式(IV)的化合物可如路线1中所述制备。
[0351] 式(VIII)和(VII)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IA)的化合物可由式(IV)的化合物通过颠倒路线1中所示步骤来制备。式(IA)的化合物可由式(XI)和(VIII)的化合物根据方法步骤(iii)的如路线1中所述酰胺键形成反应来制备。
[0352] 式(XI)的化合物可由式(IV)的化合物根据方法步骤(iv)和(ii)的如路线1中所述在Buchwald-Hartwig交叉偶联条件下或通过酸和高温介导的与式(VII)的化合物的亲核取代反应，随后通过无机酸或有机酸介导的脱保护反应来制备。作为另外的选择，在方法步骤(iv)期间原位发生脱保护。
[0353] 根据第三种方法，如路线3中所说明，式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物制备。
[0354]
[0355] 其中A为NR0；Z＝(CH2)h；LG为离去基团，诸如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯。
[0356] 式(XI)的化合物可如路线1中所述制备。式(X)、(XII)和(XIII)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物根据方法步骤(v)的与式(X)的醛或酮的还原胺化反应，或者方法步骤(vi)的与式(XII)的共轭烯烃的Michael加成反应，或者方法步骤(vii)的与式(XIII)的化合物的烷基化反应来制备。所述还原胺化的优选条件包括三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠在MeOH中，存在或不存在无机碱和无机酸下；诸如三乙胺和乙酸。Michael加成的优选条件包括将式(XI)的化合物与式(XII)的共轭烯烃在乙醇中于0-140℃下，在加热或在微波辐射下搅拌。烷基化反应的优选条件包括将式(XI)的化合物与包含对于烷基化适合的离去基团的式(XIII)的化合物和无机碱(诸如碳酸钠)以及催化剂(诸如叔丁基碘化铵)搅拌。
[0357] 根据第四种方法，如路线4中所说明，式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物制备。
[0358]
[0359] 其中A为NR0，Z＝(CH2)h；其中R0为杂芳基；Hal为氟、氯、溴、碘。
[0360] 式(XI)的化合物可如路线1中所述制备。式(XIV)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物根据方法步骤(iv)的在如路线1中所述Buchwald-Hartwig交叉偶联条件下或通过碱和高温介导的亲核取代反应来制备。通过碱和高温介导的优选条件包括三乙胺在异丙醇中，于160℃下微波辐射下。
[0361] 根据第五种方法，如路线5中所说明，式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物制备。
[0362]
[0363] 其中A为NSO2R0；Z＝(CH2)h。
[0364] 式(XI)的化合物可如路线1中所述制备。式(XV)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物根据方法步骤(viii)的与式(XV)的磺酰胺形成反应来制备。优选条件包括在室温下三乙胺在DCM中。
[0365] 根据第六种方法，如路线6中所说明，式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物制备。
[0366]
[0367] 其中A为-N(C＝O)NHR0--；Z＝(CH2)h。
[0368] 式(XI)的化合物可如路线1中所述制备。式(XVI)和(XVII)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。
[0369] 式(IA)的化合物可由式(XI)的化合物根据方法步骤(ix)的与式(XVI)的异氰酸酯或式(XVII)的咪唑脲的脲形成反应来制备。优选条件包括在-50℃至室温下三乙胺在DCM中。
[0370] 根据第七种方法，如路线7中所说明，式(IA)的化合物还可内部转化为式(IA)的其它化合物。
[0371]
[0372] 其中Z＝(CH2)h。
[0373] 式(IAi)的化合物可如路线1-5中对于式(IA)的化合物所述制备。式(IAii)的化合物可由式(IAi)的化合物根据方法步骤(ii)和(viii)的如路线1和5所述脱保护步骤随后通过磺酰胺形成反应来制备。根据第八种方法，如路线8中所说明，式(IAiv)的化合物还可内部转化为式(IAiii)的其它化合物。
[0374]
[0375] 其中Z＝(CH2)h。
[0376] 式(IAiv)的化合物可如路线1-5中对于式(IA)的化合物所述制备。式(IAiii)的化合物可由式(IAiv)的化合物根据方法步骤(x)的通过伯甲酰胺的脱水反应来制备。优选条件包括在90℃的升高的温度下甲醇中的7M氨，随后用TFAA脱水。
[0377] 根据第九种方法，如路线9中所说明，式(IB)的化合物可由式(XXIII)的化合物制备。
[0378]
[0379] 其中Rx为H或甲基，Ry为H或CH2OH，PG1为叔丁氧羰基；PG2为苄基；X为氯、羟基、适合的离去基团或适合的酸酐。
[0380] 式(XXIII)、(VI)、(XVIII)和(VII)的化合物市售可得，或者可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成。式(IB)的化合物可视需要通过外消旋体的手性分离而分离为各自对映异构体。式(IB)的化合物可由式(XIX)和(VII)的化合物根据方法步骤(iv)的如路线1中所述在Buchwald-Hartwig交叉偶联条件下或通过酸和高温介导的与式(VII)的化合物的亲核取代反应来制备。
[0381] 式(IB)的化合物还可由式(XX)和(XVIII)的化合物根据方法步骤(iii)的如路线1中所述酰化反应来制备。式(XIX)的化合物可由式(XXI)和(VI)的化合物根据方法步骤(ii)和(i)的如路线1中所述脱保护反应随后通过芳族亲核取代反应来制备。并且其如路线10中所说明。式(XIX)的化合物可由式(XXIII)和(XVIII)的化合物根据方法步骤(iii)的如路线1中所述酰胺键形成反应来制备。
[0382] 根据第十种方法，如路线10中所说明，式(IB)的化合物可由式(XXIII)的化合物制备。
[0383]
[0384] 其中Rx为H或甲基，Ry为H或CH2OH，PG1为叔丁氧羰基；PG2为苄基；X为氯、羟基、适合的离去基团或适合的酸酐。式(XX)的化合物可由式(XXII)和(VII)的化合物根据方法步骤(ii)和(iv)的如路线1中所述脱保护反应和在Buchwald-Hartwig交叉偶联条件下或通过酸和高温介导的与式(VII)的化合物的亲核取代反应来制备。脱保护也可在反应步骤(iv)期间发生。
[0385] 式(XXII)的化合物可由式(XXIV)和(VI)的化合物根据方法步骤(i)的如路线1中所述芳族亲核取代反应来制备。式(XXIV)的化合物可由式(XXIII)的化合物根据反应步骤(xi)和(xii)的适合的脱保护和保护步骤(视需要)来制备。优选保护条件包括二甲酸二叔丁酯与三乙胺在室温下，随后在金属催化剂上的氢化下进行正交保护基的脱保护。优选条件包括在50psi于室温下在氢氧化钯上氢化。
[0386] 根据第十一种方法，如路线11中所说明，式(IA)的化合物可由式(XXX)和(VIII)的化合物制备。
[0387]
[0388] 其中PG为叔丁氧羰基；LG为离去基团，诸如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯；W为羟基或硫醚；X为氯、羟基、适合的离去基团或适合的酸酐；Z＝(CH2)h；A为--N(C＝O)R0--；
[0389] 式(XXX)、(XXVII)和(VII)的化合物为市售可得或可由本领域技术人员根据文献或本文中所述制备来合成，式(IA)的化合物可由式(XXV)和(VII)的化合物根据方法步骤(iii)的如路线1中所述酰胺键形成反应来制备。
[0390] 式(XXV)的化合物可由式(XXVIII)和(XXVII)的化合物根据方法步骤(iv)的如路线1中所述亲核取代反应来制备。
[0391] 式(XXVIII)的化合物可由式(XXIX)的化合物根据方法步骤(xiii)的由磷酰基卤化物介导的卤化来制备。代表性条件包括磷酰基卤化物，在有或无添加溶剂下，于室温或加热下的反应。用于由醇向卤化物的转化的优选条件包括磷酰基氯化物且加热至回流。
[0392] 式(XXIX)的化合物可由式(XXX)和(VII)的化合物根据方法步骤(ii)的如路线1中所述亲核取代反应来制备。
[0393] 在执行本发明的化合物的合成时，本领域技术人员会明白，在后处理之前，需要取样和测定反应混合物，以监测反应的进行并决定是否应继续进行反应或是否已可进行后处理以得到所期望的产物。测定反应混合物的常见方法包括薄层色谱法(TLC)、液相色谱法/质谱法(LCMS)和核磁共振(NMR)。
[0394] 本领域技术人员会认识到，本发明的化合物可制成非对映异构体或几何异构体(例如，环己烷环上的顺式和反式取代)的混合物。这些异构体可由标准色谱法技术分离，例如硅胶上的正向色谱法、逆相制备型高压液相色谱法或超临界流体色谱法。本领域技术人员也会明白，本发明的一些化合物是手性的，因而可制成对映异构体的外消旋混合物或成比例(scalemic)混合物。对映异构体的分离方法已有数种，且为本领域技术人员公知的。惯用于对映异构体分离的优选方法是使用手性固定相的超临界流体色谱法。
[0395] 实验部分
[0396] 除非另外注明，反应在氮气气氛下进行。使用250-400目硅胶，使用加压氮气(～10-15psi)以驱动溶剂通过柱来进行硅胶上的色谱法(“快速色谱法”)。在说明的部分，将溶液和反应混合物通过真空下的旋转蒸发来浓缩。
[0397] 1H和19F核磁共振(NMR)波谱在所有情况中与所计划结构一致。表征化学位移(δ)以由四甲基甲硅烷(对于1H-NMR)向低磁场和由三氯氟甲烷(对于19F NMR)向高磁场的百万分率给出，其使用用于表示主要峰的常规缩写：例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽锋。以下缩写用于常见溶剂：CDCl3，氘代氯仿；d6-DMSO，氘代二甲基亚砜；以及CD3OD，氘代甲醇。在适合时，可在NMR数据中记录互变异构体；并且一些可交换质子可能是不可见的。使用电喷雾离子化(ESI)或大气压化学电离(APCI)记录质谱(MS(m/z))。在相关19 35 79 127
且除非另外说明，提供同位素 F、Cl、Br和 I的m/z数据。
且除非另外说明，提供同位素 F、Cl、Br和 I的m/z数据。
[0398] 该专利中的命名通过如IUPAC(International Union of Pure and Applied Chemistry)中所述书写，并使用ACD/Name Version 12(Toronto,Canada)生成名称。
[0399] 在说明书下文示出的非限制性实施例和制备例中，以及在前述路线中，以下缩写、定义和分析操作可以指：
[0400] CDI为羰基二咪唑；
[0401] DBU为二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；
[0402] DCC为N,N’-二环己基碳二亚胺；
[0403] DCM为二氯甲烷；亚甲基氯化物；
[0404] DEAD为偶氮二甲酸二乙酯；
[0405] DIPEA/DIEA为N-乙基二异丙基胺，N,N-二异丙基乙基胺；
[0406] DMA为二甲基乙酰胺；
[0407] DMAP为二甲基氨基吡啶；
[0408] DPPP为1,3-双(二苯基膦基)丙烷；
[0409] EDCI·HCl为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；
[0410] ee为对映体过量；
[0411] HATU为1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐；
[0412] HOBt为羟基苯并三唑；
[0413] LCMS为液相色谱法质谱法(Rt＝保留时间)；
[0414] Pd2(dba)3为三二亚苄基丙酮二钯；
[0415] Pd(dppf)Cl2为1,1-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)；
[0416] RuPHOS为2-二环己基膦基-2′,6′-二异丙氧基联苯；
[0417] TBDMS为叔丁基二甲基甲硅烷基；
[0418] TLC为薄层色谱法；
[0419] Xantphos/Xphos为4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨.
[0420] GCMS条件
[0421] 柱：12m x 0.2mm,HP-1甲基硅氧烷,0.33μm膜，1.0ml/min柱流速
[0422] 方法：7.6min：起始烘箱温度105℃；保持0.1min；30℃/min斜线上升至在7.6min的300℃终点，或7.6min：起始烘箱温度60℃；保持0.1min；40℃/min斜线上升至在7.6min的
320℃终点，或5.1min：起始烘箱温度40℃；保持0.1min；30℃/min斜线上升至在5.1min的
150℃终点
320℃终点，或5.1min：起始烘箱温度40℃；保持0.1min；30℃/min斜线上升至在5.1min的
150℃终点
[0423] GC进气室参数：前进气室，分流30:1,He,8psi压力,250℃进样器,33.9ml/min总流量
[0424] MSD调整:230℃源温度,150℃Quad Temp,280℃Aux2Temp
[0425] 注射体积：1.0μL
[0426] 系统组分：Agilent 5890GC烘箱与Agilent 5973质量选择性检测器
[0427] LCMS条件
[0428] 酸：Waters Acquity HSS T3,2.1mmx50mm,C18,1.7μm；柱温：60℃
[0429] 碱：Waters Acquity UPLC BEH,2.1mmx50mm,C18,1.8μm；柱温：60℃
[0430] 流动相：A：水中0.1％甲酸(v/v)；流动相B：乙腈中0.1％甲酸(v/v)。
[0431] 流动相A：水中0.1％氨(v/v)；流动相B：乙腈中0.1％氨(v/v)
[0432] 梯度特征：
[0433] 运行1.5min：初始条件：A-95％:B-5％；从0.0-0.1min保持在初始条件下；0.1-1.0min内线性斜线上升至A-5％:B-95％；从1.0-1.1min在A-5％:B-95％保持；在1.1-
1.5min返回至初始条件
1.5min返回至初始条件
[0434] 1H和19F核磁共振(NMR)波谱在所有情况中与所计划结构一致。表征化学位移(δ)以1 19
由四甲基甲硅烷(对于 H-NMR)向低磁场和由三氯氟甲烷(对于 F NMR)向高磁场的百万分率给出，其使用用于表示主要峰的常规缩写：例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽锋。以下缩写用于常见溶剂：CDCl3，氘代氯仿；d6-DMSO，氘代二甲基亚砜；以及CD3OD，氘代甲醇。在适合时，可在NMR数据中记录互变异构体；并且一些可交换质子可能是不可见的。
由四甲基甲硅烷(对于 H-NMR)向低磁场和由三氯氟甲烷(对于 F NMR)向高磁场的百万分率给出，其使用用于表示主要峰的常规缩写：例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽锋。以下缩写用于常见溶剂：CDCl3，氘代氯仿；d6-DMSO，氘代二甲基亚砜；以及CD3OD，氘代甲醇。在适合时，可在NMR数据中记录互变异构体；并且一些可交换质子可能是不可见的。
[0435] 使用电喷雾离子化(ESI)或大气压化学电离(APCI)记录质谱(MS(m/z))。在相关且除非另外说明，提供同位素19F、35Cl、79Br和127I的m/z数据。在使用制备型TLC或硅胶色谱法时，本领域技术人员可选择溶剂的任意组合以纯化期望的化合物。
[0436] 纯化方法(PM)
[0437] 除非另外描述，根据以下纯化方法(PM)之一纯化实施例的化合物：
[0438] 纯化方法A：制备型HPLC，使用[Agella venusil ASB C18 150x21.2mmx5μm，由水中16％MeCN(0.225％甲酸)至水中36％MeCN(0.225％甲酸)]
[0439] 纯化方法B：制备型HPLC，使用[Phenomenex Gemini C18 250x21.2mmx8um或150mmx25mmx5μm；由水中16-55％MeCN(0.1％氨)至水中36-60％MeCN(0.1％氨)]
[0440] 纯化方法C：[YMC-Actus Triart C18 150x30μm，由水中24％MeCN(0.1％氨)至水中44％MeCN(0.1％氨)]
[0441] 纯化方法D：制备型HPLC，使用[Phenomenex Gemini C18 250x21.2mmx8μm，由水中25％MeCN(氨pH＝10)至水中45％MeCN(氨pH＝10)]，随后通过手性色谱法，使用AS
250x25mm I.D.20μM柱和超临界CO2：EtOH或IPA(0.05％氨水溶液)70:30，50-80mL/min[0442] 纯化方法E：制备型HPLC，使用[Phenomenex Gemini C18 250x21.2mmx8μm，由水中
25％MeCN(0.225％氨)至水中45％MeCN(0.225％氨)，随后通过手性色谱法，使用AD
250mmx30mmx20μm柱，流动相A：超临界CO2和流动相B MeOH含0.1％氨A:B 50:50，180mL/min[0443] 纯化方法F：硅胶柱色谱法，用100％DCM至12％MeOH(含1％NH4OH)洗脱。
250x25mm I.D.20μM柱和超临界CO2：EtOH或IPA(0.05％氨水溶液)70:30，50-80mL/min[0442] 纯化方法E：制备型HPLC，使用[Phenomenex Gemini C18 250x21.2mmx8μm，由水中
25％MeCN(0.225％氨)至水中45％MeCN(0.225％氨)，随后通过手性色谱法，使用AD
250mmx30mmx20μm柱，流动相A：超临界CO2和流动相B MeOH含0.1％氨A:B 50:50，180mL/min[0443] 纯化方法F：硅胶柱色谱法，用100％DCM至12％MeOH(含1％NH4OH)洗脱。
[0444] 纯化方法G：硅胶柱色谱法，用97:2:1DCM:MeOH:NH3洗脱，随后使用制备型HPLC。
[0445] 纯化方法H：制备型HPLC，使用柱：Waters XBridge C18 19mmx100mm,5μ；流动相A：水中0.03％氢氧化铵(v/v)；流动相B：乙腈中0.03％氢氧化铵(v/v)；由5-20％B至40-100％B，以25mL/min的流速。
[0446] 纯化方法I：制备型HPLC，使用柱：Waters Sunfire C18 19mmx100mm,5μ；流动相A：水中0.05％TFA(v/v)；流动相B：乙腈中0.05％TFA(v/v)；由20％B至在6.75分钟40％B，然后在7分钟至100％B，以30mL/min的流速。
[0447] 比旋光
[0448] 比旋光基于等式[α]＝(100·α)/(l·c)，并且以无单位的数目报道，其中浓度c为g/l00mL，并且光程长l为分米。比旋光的单位((deg·mL)/(g·dm))是隐含的，并且未包含在所报道的数值中。
[0449] 库方案1
[0450]
[0451] 将((1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(环丙基)甲酮(制备27,500μl,100μmol)在叔戊醇中的0.2M溶液加入至式(R4NH2)的胺(150μmol)中，随后在氮气下加入叔丁醇钠(200μmol)、Pd2(dba)3(2μmol)和XPhos(2μmol)。将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续40分钟。将反应物冷却，真空浓缩，并使用制备型HPLC纯化。
[0452] 制备型HPLC
[0453] 纯化方法1(PM1)：Phenomenex Gemini C18,250x21.2mmx8μm；乙腈-氢氧化铵；流速30mL/min；梯度时间8mins。
[0454] 纯化方法2(PM2)：DIKMA Diamonsil C18 200mmx20mmx5μm；MeCN-水(0.225％甲酸)；流速35mL/min；梯度时间9mins。
[0455] LCMS方法：
[0456] 柱：XBridge C18 2.1mmx50mmx5μm
[0457] 流动相A：水中0.05％氢氧化铵
[0458] 流动相B：100％MeCN
[0459] 梯度：5％B至在3.40分钟100％B，然后在4.21分钟返回至5％B。
[0460] 流速：0.8mL/min
[0461] 由((1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(环丙基)甲酮(制备27)和适合的胺根据库方案1制备下表中的实施例化合物。
[0462]
[0463] 实施例5
[0464] (1R,5S)-N-乙基-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0465] 向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-N-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺(制备29,184mg,0.624mmol)和4-氨基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(PCT公开号WO2012022681,126mg,0.686mmol)在DMA(8mL)中的溶液加入Cs2CO3(405.6mg,1.248mmol)、Pd(OAc)2(28mg,
0.124mmol)和xantphos(72mg,0.124mmol)。将反应物用氮气吹扫3分钟，然后在微波辐射下加热至120℃持续1小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)，随后制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(81mg,38％)。
0.124mmol)和xantphos(72mg,0.124mmol)。将反应物用氮气吹扫3分钟，然后在微波辐射下加热至120℃持续1小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)，随后制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(81mg,38％)。
[0466] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.02(t,3H),1.58(d,2H),1.77(d,2H),2.96-3.11(m,4H)3.79-4.09(m,2H),4.34(br s,2H),6.07(d,1H),6.67(t,1H),7.49-7.94(m,3H),8.82(br s,1H),12.35(br s,1H).MS m/z 343[M+H]+
[0467] 实施例6
[0468] 5-({4-[(1R,5S)-8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺
[0469] 向5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1,77mg,0.220mmol)和三乙胺(133mg,1.32mmol)在DCM(10mL)中的溶液滴加环丙烷羰基氯化物(27mg,0.26mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。将残渣使用制备型HPLC纯化，以得到标题化合物(48mg,52％)。
[0470] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.60-0.85(m,4H),1.53-2.07(m,5H),2.56(s,3H),2.75(d,3H),2.95-3.04(m,1H),3.04-3.15(m,1H),3.96-4.26(m,2H),4.55-4.67(m,
1H),4.73-4.85(m,1H),6.28-6.37(m,1H),7.99-8.11(m,2H),8.39-8.47(m,1H),8.74-8.81(m,1H),9.52(s,1H).MS m/z 444[M+Na]+
1H),4.73-4.85(m,1H),6.28-6.37(m,1H),7.99-8.11(m,2H),8.39-8.47(m,1H),8.74-8.81(m,1H),9.52(s,1H).MS m/z 444[M+Na]+
[0471] 实施例7和8
[0472] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮和[(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮[0473] 向(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68,318mg,2.61mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,700mg,2.17mmol)、HATU(1.02g,2.61mmol和DIPEA(0.76mL,4.34mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物用DCM和饱和氯化铵水溶液稀释。将有机层分离，随后用氯化铵溶液洗涤，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-12％MeOH和1％NH4OH洗脱)纯化。将残渣在DCM中溶解，随后用饱和氯化铵水溶液洗涤三次。将有机层收集，真空浓缩，并干燥以得到标题化合物(500mg,60％)。
[0474] 标题化合物及其对映异构体还可根据相同方法(使用外消旋2,2-二氟环丙烷-1-甲酸)，纯化后使用以下方法进行额外的对映异构体的手性分离来制备，以得到：
[0475] 峰1：实施例7：
[0476] [(1S)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮
[0477] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.58-2.06(m,6H),2.82-3.27(m,3H),3.80(s,3H),4.14(br s,2H),4.55-4.74(m,2H),6.07-6.19(m,1H),7.44(s,1H),7.74(br s,1H),
7.93(d,1H),8.90(br s,1H).MS m/z 390[M+H]+；[α]D20 50.1(c 1.27,EtOH)
7.93(d,1H),8.90(br s,1H).MS m/z 390[M+H]+；[α]D20 50.1(c 1.27,EtOH)
[0478] 峰2：实施例8：
[0479] [(1R)-2,2-二氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮
[0480] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.58-2.06(m,6H),2.82-3.27(m,3H),3.80(s,3H),4.14(br s,2H),4.55-4.74(m,2H),6.07-6.19(m,1H),7.44(s,1H),7.74(br s,1H),
7.93(d,1H),8.90(br s,1H).MS m/z 390[M+H]+；[α]D20-51(c 0.66,EtOH)
7.93(d,1H),8.90(br s,1H).MS m/z 390[M+H]+；[α]D20-51(c 0.66,EtOH)
[0481] 还可根据以下方法制备实施例7：
[0482] 向(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68,18.1g,35.33mmol)、4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,11g,40mmol)和DIPEA(41.7mL,246mmol)在DMF(60mL)中的溶液加入T3P(102mL,176mmol)，并将反应物在室温下搅拌1.5小时。将反应物通过加入饱和NaHCO3水溶液直至pH 6进行猝灭，并真空浓缩。将残渣在DCM中溶解，并用饱和NaHCO3水溶液，随后用水洗涤。将有机层收集，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-15％MeOH(含1％氨)洗脱)纯化，随后通过手性制备纯化(使用Chiral Tech OD-H 250mmx21.2mm,5μ，使用流动相A
75％CO2和流动相B 25％MeOH，流速为80mL/min)。
75％CO2和流动相B 25％MeOH，流速为80mL/min)。
[0483] 实施例9
[0484] 4-({4-[8-(环丙基羰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺
[0485] 向4-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯甲酰胺盐酸盐(制备24,50mg,0.14mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入三乙胺(0.1mL,0.7mmol)、HATU(50mg,0.135mmol)和环丙烷甲酸(15mg,0.17mmol)。将反应物在室温下搅拌
18小时，然后直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 0.78(br s,2H),1.00(d,2H),1.21(t,3H),1.61-1.75(m,1H),
1.79(d,1H),1.83-1.97(m,2H),2.05(d,2H),3.25(dd,2H)3.36-3.53(m,2H),4.16(d,1H),
4.28(d,1H),4.52(d,1H),4.74(br s,1H),6.28(t,1H),7.37(s,1H),7.53(d,2H),7.70(d,
2H),7.85(d,1H).
18小时，然后直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 0.78(br s,2H),1.00(d,2H),1.21(t,3H),1.61-1.75(m,1H),
1.79(d,1H),1.83-1.97(m,2H),2.05(d,2H),3.25(dd,2H)3.36-3.53(m,2H),4.16(d,1H),
4.28(d,1H),4.52(d,1H),4.74(br s,1H),6.28(t,1H),7.37(s,1H),7.53(d,2H),7.70(d,
2H),7.85(d,1H).
[0486] MS m/z 439[M+H]+
[0487] 实施例10
[0488] 3-氯-5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
[0489] 根据对于实施例9所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-氯-N-甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备5)和(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68)制备标题化合物。将残渣如下所述通过制备型HPLC，随后通过手性色谱法进行纯化：
[0490] 制备型HPLC：DIKMA Diamonsil(2)C18 200x 20mm x 5μm
[0491] 流动相：由水中10％MeCN(0.225％甲酸)至水中60％MeCN(0.225％甲酸)
[0492] 制备型手性色谱法：Chiralpak AD 250x30mm I.D.10μm
[0493] 流动相：超临界CO2:MeOH(0.1％氨水溶液)55:45；
[0494] 流速：50mL/min
[0495] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.61-2.03(m,6H),2.75(d,3H),2.92-3.10(m,2H),3.18-3.26(m,1H),4.15(br s,2H),4.58-4.76(m,2H),6.40(dd,1H),8.05-8.14(m,
1H),8.44(d,2H),8.81(dd,1H),9.77(d,1H).MS m/z 478[M+H]+
1H),8.44(d,2H),8.81(dd,1H),9.77(d,1H).MS m/z 478[M+H]+
[0496] 实施例11和12
[0497] [(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮
[0498] 和(([(1S)-2,2-二氟环丙基]{(1R,5S)-3-[2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮
[0499] 根据对于实施例9所述方法，使用外消旋2-(5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-2-基)丙-1-醇盐酸盐(制备2)和(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68)制备标题化合物。将残渣如下所述使用制备型HPLC，随后通过手性色谱法的对映异构体分离进行纯化：
[0500] 制备型HPLC：Kromasil Eternity XT C18 250x21.2x10μm
[0501] 流动相：由水中16％MeCN(氨pH＝10)至水中36％MeCN(氨pH＝10)；
[0502] 流速：30mL/min
[0503] 制备型手性色谱法：Chiralpak AD 250x30mm I.D.10μm
[0504] 流动相：超临界CO2:IPA(氨水)55:45；流速：70mL/min
[0505] 第一洗脱化合物被任意地指定为：实施例11:
[0506] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.19(d,3H),1.61-2.07(m,6H),2.83-3.06(m,3H),3.24(br s,2H),3.43-3.53(m,1H),3.62(m,1H),4.18(br s,2H),4.50-4.81(m,3H),
6.27(m,1H),7.15(d,1H),7.93-8.11(m,2H),8.74(br s,1H),9.19(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
6.27(m,1H),7.15(d,1H),7.93-8.11(m,2H),8.74(br s,1H),9.19(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
[0507] 第二洗脱化合物被任意地指定为：实施例12
[0508] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.18(d,3H),1.60-2.07(m,7H),2.83-3.04(m,3H),3.25(dd,1H),3.44-3.52(m,1H),3.57-3.66(m,1H),4.13(br s,2H),4.52-4.79(m,
3H),6.27(dd,1H),7.15(d,1H),7.93-8.09(m,2H),8.74(d,1H),9.19(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
3H),6.27(dd,1H),7.15(d,1H),7.93-8.09(m,2H),8.74(d,1H),9.19(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
[0509] 根据对于实施例9所述方法，使用如下所述适合的酸和胺，制备以下实施例。纯化细节如下文所述或所提及：
[0510]
[0511]
[0512]
[0513]
[0514]
[0515]
[0516]
[0517]
[0518] 实施例42和43
[0519] [(1R,2R)-2-氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮和[(1S,2S)-2-氟环丙基][(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮
[0520] 根据对于实施例9所述方法，使用4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19)和顺式-外消旋(1S,2S)-2-氟环丙烷-1-甲酸(PCT公开号WO2005095322)制备标题化合物。使用如下所述手性色谱法，将顺式-外消旋标题化合物分离为其对映异构体：
[0521] 柱：IB 21mmx250mmx5μm，流动相A：CO2；流动相B：MeOH中0.2％氢氧化铵；80:20A/B；保持15分钟；流速65mL/min。
[0522] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.10-1.20(m,1H),1.70-2.30(m,6H),3.10-3.25(m,3H),3.85(s,3H),4.10-4.40(br m,2H),4.75-5.00(m,2H),6.15(m,1H),7.55(s,1H),7.80(m,1H),7.90(m,1H).
[0523] LCMS Rt＝0.50分钟；MS m/z 372[M+H]+
[0524] 实施例44和45
[0525] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R,2S)-2-氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺和5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S,2R)-2-氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺
[0526] 根据对于实施例9所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)和反式-外消旋(1S,2S)-2-氟环丙烷-1-甲酸(PCT公开号WO2005095322)制备标题化合物。使用如下所述手性色谱法，将反式-外消旋标题化合物分离为其对映异构体：
[0527] 柱：Lux-cellulose-3；250mmx21.2mm,5μ；流动相A：75％CO2，流动相B：MeOH,流速80mL/min。
[0528] 第一洗脱异构体：Rt＝6.06分钟；第二洗脱异构体：Rt＝6.40分钟
[0529] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.30-1.40(m,1H),1.40-1.60(m,1H),1.80-1.90(m,1H),1.90-2.05(m,1H),2.10-2.40(m,1H),2.50-2.60(m,1H),3.10-3.40(m,4H),4.10-4.40(br m,2H),4.70-5.00(m,2H),6.30(m,1H),8.00(m,2H),8.80(br s,1H).MS m/z 440[M+H]+
[0530] 实施例46
[0531] (1-氟环丙基)[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲酮
[0532] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,100mg,0.311mmol)在二氧杂环己烷(10mL)中的溶液加入DIEA(401mg,3.11mmol)和外消旋4-氯苯基-1-氟环丙烷-1-甲酸酯(欧洲专利申请533013,80mg,0.373mmol)。将反应混合物加热至回流持续18小时。将反应物真空浓缩，并使用制备型HPLC纯化以得到黄色固体形式的标题化合物(半甲酸盐)(37mg,32％)。
[0533] 制备型HPLC：使用Phenomenex Synergi C18 150mmx30mmx4μm；由水中5％MeCN(0.225％Fa)至水中25％MeCN(0.225％FA)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.27-1.32(m,4H),1.69(m,2H),1.90(m,2H),3.04-3.07(m,2H),3.18(s,3H),4.13(m,2H),4.72(m,2H),
6.11(d,1H),7.42(s,1H),7.92(d,1H),8.87(s,1H).MS m/z 372[M+H]+
6.11(d,1H),7.42(s,1H),7.92(d,1H),8.87(s,1H).MS m/z 372[M+H]+
[0534] 实施例47
[0535] (1R,5S)-N-(2-氰基乙基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0536] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,50mg,0.175mmol)在DCM(10mL)中的溶液加入三乙胺(53mg,0.525mmol)和N-(2-氰基乙基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备78,0.35mmol)，并将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩，并使用制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物
1
(31mg,47％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.59-1.61(m,2H),1.80-1.82(m,2H),2.66(t,2H),3.02(m,4H),3.28-3.29(m,2H),3.78(s,3H),3.97(br s,2H),4.36(s,2H),6.10(d,
1H),7.14(m,1H),7.43(s,1H),7.72(s,1H),7.90(d,1H),8.84(s,1H).MS m/z 382[M+H]+[0537] 实施例48
1
(31mg,47％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.59-1.61(m,2H),1.80-1.82(m,2H),2.66(t,2H),3.02(m,4H),3.28-3.29(m,2H),3.78(s,3H),3.97(br s,2H),4.36(s,2H),6.10(d,
1H),7.14(m,1H),7.43(s,1H),7.72(s,1H),7.90(d,1H),8.84(s,1H).MS m/z 382[M+H]+[0537] 实施例48
[0538] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0539] 根据对于实施例47所述方法，使用[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸苯酯(PCT公开号WO2010006938)在50℃下制备标题化合物，并使用制备型HPLC(纯化方法B)纯化。1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.80-1.83(m,2H),2.02(m,2H),3.20-3.23(m,2H),3.85(s,3H),4.17(br m,2H),4.64(m,2H),6.14(d,1H),7.51(s,1H),7.75(s,1H),7.87(d,1H),+
7.95-7.98(m,1H),8.08(d,1H),8.54(s,1H).MS m/z 474[M+H]
7.95-7.98(m,1H),8.08(d,1H),8.54(s,1H).MS m/z 474[M+H]
[0540] 实施例49
[0541] 环丙基{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮
[0542] 向((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(环丙基)甲酮(制备28,100mg,0.342mmol)和1-H-吡唑-4-胺(100mg,0.54mmol)在iPrOH(5mL)中的溶液加入cHCl(2滴)，并将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续1小时。将反应物冷却，真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中5％MeOH洗脱)，随后制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(34mg,29％)。
[0543] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.77(br s,4H),1.63(br s,1H),1.74(br s,2H),2.01(d,2H),2.94-3.10(m,2H),3.87-4.27(m,2H),4.53-4.84(m,2H),6.10(d,1H),7.53(br s,1H),7.78(br s,1H),7.92(d,1H),8.86(br s,1H),12.36(br s,1H).MS m/z 340[M+H]+[0544] 实施例50和51
[0545] ((1R,5S)-3-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)((R)-2,2-二氟环丙基)甲酮和((1R,5S)-3-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮
[0546] 根据对于实施例49所述方法，使用外消旋((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(2,2-二氟环丙基)-甲酮(制备30)和4-氨基-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯制备标题化合物。将对映异构体使用制备型HPLC(纯化方法B)纯化，随后使用手性色谱法分离：手性制备型HPLC：柱AD250mmx30mm I.D.20μm；流动相：超临界CO2/MeOH(0.05％氨,55/45，80mL/min.
[0547] 实施例50：((1R,5S)-3-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)((R)-2,2-二氟环丙基)甲酮(25mg,11％).
[0548] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.60-2.04(m,5H),2.84-2.96(m,1H),2.96-3.17(m,1H),3.18-3.32(m,2H),3.97-4.40(m,2H),4.54-4.76(m,2H),6.05-6.22(m,1H),7.43-+7.86(m,2H),7.89-8.01(m,1H),8.84-9.05(m,1H),12.32-12.51(m,1H).MS m/z 376[M+H][0549] 实施例51：((1R,5S)-3-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮(23mg,10％).
[0550] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.59-2.05(m,5H),2.86-2.95(m,1H),2.96-3.16(m,1H),3.16-3.32(m,2H),3.93-4.40(m,2H),4.54-4.77(m,2H),6.04-6.21(m,1H),7.41-7.86(m,2H),7.87-8.00(m,1H),8.79-9.00(m,1H),12.27-12.43(m,1H).MS m/z 376[M+H]+[0551] 还可根据以下方法制备实施例51：
[0552] 向(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68,28mg,0.227mmol)、4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1l2-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备22,56mg,0.21mmol)和DIPEA(0.22mL,1.24mmol)在二氯甲烷(3mL)和DMF(1mL)中的溶液加入HATU(97mg,0.25mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩。将残渣通过使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物(26mg,34％)。
[0553] 实施例52
[0554] 环丙基{(1R,5S)-3-[2-(1,2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲酮
[0555] 根据对于实施例49所述方法，使用4-异噻唑胺制备标题化合物。
[0556] 制备型HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18 250x 21.2mm x 8μm
[0557] 流动相：由水中3％MeCN(0.225％甲酸)至水中23％MeCN(0.225％甲酸)；流速：1
30mL/min。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.70-0.77(m,4H),1.61-1.81(m,3H),1.99-2.00(m,2H),2.97-3.00(m,1H),3.07-3.10(m,1H),4.11(s,2H),4.62(s,1H),4.77(s,1H),6.24(d,1H),8.00(d,1H),8.59(s,1H),8.76(s,1H),9.71(s,1H).MS m/z 357[M+H]+
30mL/min。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.70-0.77(m,4H),1.61-1.81(m,3H),1.99-2.00(m,2H),2.97-3.00(m,1H),3.07-3.10(m,1H),4.11(s,2H),4.62(s,1H),4.77(s,1H),6.24(d,1H),8.00(d,1H),8.59(s,1H),8.76(s,1H),9.71(s,1H).MS m/z 357[M+H]+
[0558] 实施例53
[0559] N,3-二甲基-5-({4-[(1R,5S)-8-(1,2-噁唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)吡啶-2-甲酰胺
[0560] 向N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备82)和5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1,50mg,0.12mmol)和5-异噁唑甲醛(32mg,0.33mmol)在MeCN(1mL)中的溶液加入三乙酰氧基硼氢化钠(76mg,0.35mmol)，并将反应物在室温下搅拌1.5小时。将反应物通过加入饱和NaHCO3水溶液猝灭，并用EtOAc萃取三次。将有机层收集，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH洗脱)纯化，随后用乙醚研磨，以得到标题化合物(30mg,
59％)。LCMS Rt＝0.69分钟；MS m/z 435[M+H]+
59％)。LCMS Rt＝0.69分钟；MS m/z 435[M+H]+
[0561] 实施例54
[0562] N,3-二甲基-5-[(4-{(1R,5S)-8-[(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
[0563] 根据对于实施例53所述方法，使用3-甲基氧杂环丁烷-3-甲醛与DIPEA在THF/DMSO中制备标题化合物。使用制备型HPLC进行纯化。
[0564] 制备型HPLC：DIKMA Diamonsil(2)C18 200x 20mm x 5μm
[0565] 流动相：由水中0-27％MeCN(0.225％FA)；35mL/min流速。Rt＝1.95分钟；MS m/z 438[M+H]+
[0566] 实施例55
[0567] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(1,2-噻唑-5-基甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺
[0568] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,100mg,0.351mmol)和5-异噻唑甲醛(55mg,0.49mmol)在MeOH(10mL)中的溶液加入三乙胺(71mg,0.70mmol)和乙酸(3滴)。将溶液在室温下搅拌3小时，然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(44mg,0.702mmol)。将反应物在室温下搅拌18小时。将溶液真空浓缩，并通过制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(26.2mg,20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.57(d,2H),1.96(br s,2H),3.06(d,2H),3.77(s,9H),6.06(d,1H),7.28(s,1H),7.42(s,1H),7.74(br s,1H),7.90(d,1H),8.49(d,1H),8.83(br s,1H).MS m/z 383[M+H]+
[0569] 根据对于实施例55所述方法，使用4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19)和适合的醛或酮制备以下实施例。当需要时，在95℃的升高的温度下，于甲苯中用樟脑磺酸或三乙胺进行亚胺形成，并省略乙酸。纯化方法如下文所述或所提及：
[0570]
[0571] 实施例60
[0572] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-{(1R,5S)-8-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}嘧啶-2-胺
[0573] 向3-((1R,5S)-3-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(制备135,51mg,0.12mmol)在DCM(1mL)中的溶液加入二氧杂环己烷中的4N HCl(2mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，并在DCM(1mL)中溶解。加入DIPEA(61μl,0.348mmol)，随后加入甲烷磺酰氯(10μl,0.128mmol)，并将反应物在室温下搅拌30分钟。将反应物通过加入水猝灭，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH(1％氨)洗脱)，随后制备型HPLC(纯化方法H)纯化。Rt＝1.18分钟；MS m/z 419[M+H]+
[0574] 实施例61和62
[0575] 5-({4-[(1R,5S)-8-(顺式-3-氰基环丁基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺和5-({4-[(1R,5S)-8-(反式-3-氰基环丁基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺
[0576] 使用对于实施例55所述方法，使用3-氧代-环丁烷甲腈和5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)制备标题化合物。将异构体使用如下所述手性色谱法进行分离：
[0577] 柱：Lux Cellulose-4 250mmx21.2mmx5μm；流动相A：庚烷；流动相B：乙醇；由50:50A:B在10分钟时至100％B，然后在12.5分钟时返回50:50A:B。流速：27.0mL/min。第一洗脱+
化合物被任意地指定为实施例61：Rt＝8.45分钟,MS m/z 433[M+H]
化合物被任意地指定为实施例61：Rt＝8.45分钟,MS m/z 433[M+H]
[0578] 第二洗脱异构体被任意地指定为实施例62：Rt＝9.35分钟,MS m/z 433[M+H]+[0579] 实施例63和64
[0580] 4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺和4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
[0581] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,32mg,11mmol)和外消旋(2,2-二氟环丙基)甲基4-甲基苯磺酸酯(PCT公开号WO20130908375,30mg,12mmol)在MeCN(3mL)中的溶液加入碳酸钠(18mg,17mmol)和叔丁基碘化铵(6mg,17mmol)，并将反应物在60℃下搅拌42小时。将反应物冷却并真空浓缩。将残渣在DCM和饱和氯化铵水溶液之间分配。将有机层收集，并使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH(1％氨)洗脱)纯化。将残渣在DCM中溶解，用氯化铵洗涤三次，然后真空浓缩。然后将残渣在EtOAc中溶解，并用饱和NaHCO3水溶液、水、盐水洗涤，并真空浓缩，以得到外消旋标题化合物，将其使用如下所述手性色谱法分离为两个对映异构体：
[0582] 柱：OJ-H 21mmx250mmx5μ，流动相A：CO2；流动相B：MeOH(0.2％氢氧化铵)，使用90％A和10％B，保持10分钟,流速75mL/min。
[0583] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.20-1.30(m,1H),1.50-2.05(m,6H),2.50(m,1H),2.75(m,1H),3.15-3.20(m,3H),3.50(m,1H),3.90(s,3H),4.00(m,2H),6.10(m,1H),
7.50(d,1H),7.78(s,1H),7.85(d,1H).LCMS Rt＝0.71分钟；MS m/z 376[M+H]+
7.50(d,1H),7.78(s,1H),7.85(d,1H).LCMS Rt＝0.71分钟；MS m/z 376[M+H]+
[0584] 实施例65和66
[0585] 4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺和4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
[0586] 根据对于实施例63和64所述方法，使用外消旋(2,2-二氟环丙基)甲基4-甲基苯磺酸酯(PCT公开号WO20130908375)和4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(制备15)制备标题化合物。将残渣在DCM(1mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4N HCl(1mL)处理，并在室温下搅拌18小时。加入MeOH(1mL)，并继续反应另外18小时。将反应物真空浓缩，通过碳酸盐筒洗脱，并使用如下所述手性色谱法分离为对映异构体：
[0587] 柱：AD-H 21mmx250mmx5μ，流动相A：CO2；流动相B：MeOH(0.2％氢氧化铵)，使用75％A和25％B，保持8分钟，流速75mL/min。
[0588] 第一洗脱异构体：Rt＝5.74分钟,实施例66；第二洗脱异构体：Rt＝6.44分钟，实施例67
[0589] 实施例67和68
[0590] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺和5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1R)-2,2-二氟环丙基]甲基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺
[0591] 根据对于实施例63和64所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)制备标题化合物。
[0592] 使用如下所述手性色谱法，将外消旋体分离为两个对映异构体：
[0593] 柱：Chiral Tech OJ-H；500mmx21.2mm,5μ；流动相A 70％CO2,30％MeOH(0.2％氨),流速80mL/min.
[0594] 第一洗脱化合物被任意地指定为实施例67：Rt＝6.09分钟,MS m/z 444[M+H]+[0595] 第二洗脱化合物被任意地指定为实施例68：Rt＝6.21分钟,MS m/z 444[M+H]+[0596] 实施例69和70
[0597] (1S,2S)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈和(1S,2S)-2-{[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]甲基}环丙烷甲腈
[0598] 根据对于实施例63和64所述方法，使用(2-氰基环丙基)甲基4-甲基苯磺酸酯(Acta Pharmaceutica Suecica(1972),9(5),491-498)制备标题化合物。使用如下所述手性色谱法，将残渣分离为两个对映异构体：柱：OD-H 21mmx250mmx5μ，流动相A：CO2；流动相B：EtOH(0.2％氢氧化铵)，使用70％A和30％B，保持7分钟,流速75mL/min。
[0599] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.05-1.10(m,1H),1.30(m,1H),1.50-1.55(m,1H),1.70(m,3H),2.00(m,2H),3.15-3.40(m,4H),3.50(m,1H),3.80(s,3H),4.00(br m,
2H),4.80(m,1H),6.10(m,1H),7.55(d,1H),7.75(s,1H),7.90(m,1H).MS m/z 365[M+H]+[0600] 实施例71
2H),4.80(m,1H),6.10(m,1H),7.55(d,1H),7.75(s,1H),7.90(m,1H).MS m/z 365[M+H]+[0600] 实施例71
[0601] 1-({(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}甲基)环丙烷甲腈
[0602] 根据对于实施例55所述方法，使用4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(制备15)和1-甲酰基环丙烷-1-甲腈(PCT公开号WO2009005675)制备标题化合物。将残渣(5mg,0.011mmol)在MeOH(0.5mL)中溶解，并在搅拌下加入5N NaOH(aq)(220μl)，持续1小时。将反应物真空浓缩，与DCM共沸，并使用制备型HPLC(纯化方法H)纯化。Rt＝1.06分钟；MS m/z 351[M+H]+
[0603] 实施例72
[0604] N-乙基-4-({5-氟-4-[8-(三氟乙酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺
[0605] 向4-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺盐酸盐(制备25,30mg,0.08mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入TFAA(5滴)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物直接通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH)，随后通过制备型HPLC(纯化方法I)纯化。Rt＝2.22分钟；MS m/z 481[M+H]+[0606] 实施例73
[0607] 3-(2-{[4-(乙基氨甲酰基)-3-甲基苯基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[0608] 根据对于制备24步骤1所述方法，使用4-氨基-N-乙基-2-甲基-苯甲酰胺(PCT公开号WO2006109846)制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.13(t,3H),1.44-1.49(m,9H),1.74(d,2H),1.89(br s,2H),2.35(s,3H),3.18-3.28(m,4H),4.16(d,2H),4.26(br s,2H),7.29(d,1H),7.51-7.55(m,1H),7.56(s,1H),8.03-8.09(m,2H),9.30(s,1H).[0609] 实施例74
[0610] (1R,5S)-N-乙基-3-[2-(1,2-噻唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0611] 向N-(4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)异噻唑-4-胺盐酸盐(制备21,100mg,0.27mmol)在DCM(10mL)中的溶液加入三乙胺(84mg,0.83mmol)，并将溶液冷却至0℃。加入异氰酸乙酯(21.7mg,0.306mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并通过制备型HPLC(纯化方法B)直接纯化，以得到标题化合物(29mg,
29％)。制备型HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18 250x 21.2mm x 24μm
29％)。制备型HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18 250x 21.2mm x 24μm
[0612] 流动相：由水中29％MeCN(氨pH＝10)至水中39％MeCN(氨pH＝10)；流速：30mL/min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.021(t,3H),1.58-1.59(m,2H),1.77(m,2H),3.01-3.08(m,4H),3.96(m,2H),4.35(s,2H),6.23(d,1H),6.67-6.69(m,1H),7.98(d,1H),8.59(s,1H),8.75(s,1H),9.68(s,1H).MS m/z 382[M+Na]+
[0613] 实施例75
[0614] (1R,5S)-3-(2-{[5-氯-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0615] 根据对于实施例74所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-氯-N-甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备5)和异氰酸乙酯制备标题化合物。将残渣使用如下所述制备型HPLC进行纯化：制备型HPLC：DIKMA Diamonsil(2)C18 200x
20mm x 5μm
20mm x 5μm
[0616] 流动相：由水中10％MeCN(0.225％甲酸)至水中30％MeCN(0.225％甲酸)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.02(t,3H),1.53-1.63(m,2H),1.74-1.84(m,2H),2.75(d,3H),3.03-3.12(m,4H),3.96(br s,2H),4.37(br s,2H),6.36(d,1H),6.72(t,1H),8.05(d,1H),
8.45(d,2H),8.80(d,1H),9.74(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
8.45(d,2H),8.80(d,1H),9.74(s,1H).MS m/z 445[M+H]+
[0617] 实施例76
[0618] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0619] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,30mg,0.09mmol)和异氰酸钠(14mg,0.21mmol)在DCM(0.3mL)中的溶液加入乙酸(11μl,0.186mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并通过反相硅胶柱色谱法(用0.1％氨水溶液中5-50％MeCN)纯化，随后用MeOH和乙醚研磨，以得到标题化合物(26mg,85％)。
[0620] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.70(m,2H),1.90(m,2H),3.10(m,2H),3.90(s,3H),4.00-4.15(br m,2H),4.40(m,2H),6.10(m,1H),7.50(s,1H),7.75(s,1H),7.85(m,
1H).
1H).
[0621] LCMS Rt＝0.50分钟；MS m/z 329[M+H]+
[0622] 实施例77
[0623] N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-[(1R,5S)-8-(甲基磺酰基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-胺
[0624] 在10℃下，向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,100mg,0.31mmol)在DCM(30mL)中的溶液加入三乙胺(350mg,3.46mmol)，随后加入MsCl(280mg,2.44mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用水(10mL)洗涤，并将有机层真空浓缩，并用制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(70mg,62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.55-1.70(m,2H),1.85-2.01(m,2H),3.04(s,5H),3.78(s,3H),3.95-4.21(m,2H),4.23-4.36(m,2H),6.02-6.17(m,1H),
7.41(s,1H),7.65-7.80(m,1H),7.85-7.97(m,1H),8.79-8.95(m,1H).MS m/z 364[M+H]+[0625] 实施例78
7.41(s,1H),7.65-7.80(m,1H),7.85-7.97(m,1H),8.79-8.95(m,1H).MS m/z 364[M+H]+[0625] 实施例78
[0626] 2-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-噁唑-5-甲腈
[0627] 向2-((1R,5S)-3-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噁唑-5-甲酸乙酯(制备136,200mg,0.47mmol)在7M NH3/MeOH(50mL)中的溶液在密封容器中加热至90℃，持续18小时。将反应物真空浓缩，并在DCM(20mL)中溶解。加入三乙胺(6mL)，随后加入TFAA(3mL)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将溶液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，并真空浓缩。将残渣通过制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(46mg,26％)。
[0628] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.73(d,2H),1.97-2.01(m,2H),3.16(d,2H),3.79(s,3H),4.04-4.24(m,2H),4.55(br s,2H),6.14(d,1H),7.42(s,1H),7.75(br s,1H),7.92(d,1H),8.04(s,1H),8.98(br s,1H).MS m/z 378[M+H]+PM B HATU
[0629] 实施例79
[0630] 3-{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙腈
[0631] 在0℃下，向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1l2-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备22,83mg,0.308mmol)和三乙胺(622mg,6.16mmol)在EtOH(10mL)中的溶液滴加丙烯腈(270mg,5.09mmol)。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将残渣通过制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到白色固体形式的标题化合物(45mg,44％)。
[0632] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.43-1.57(m,2H),1.75-1.91(m,2H),2.56-2.71(m,4H),2.92-3.05(m,2H),3.37-3.43(m,3H),3.64-4.06(m,1H),6.03(d,1H),7.41-7.61(m,1H),7.64-7.79(m,1H),7.87(d,1H),8.72-8.87(m,1H),12.33(br s,1H).MS m/z 325[M+H]+
[0633] 实施例80和81
[0634] 3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈和
[0635] 3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]丁腈
[0636] 根据对于实施例80所述方法，使用4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19)和E/Z-丁-2-烯腈在100℃下于密封容器中制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用0.1％氨水溶液中5％MeCN至0.1％氨水溶液中40％MeCN洗脱)纯化，随后通过手性分离(使用Chiraltech OJ-H
250mmx10mmx5μm柱；流动相A：70％CO2和流动相B：含0.2％氨的30％EtOH；流速15mL/min)纯化。
250mmx10mmx5μm柱；流动相A：70％CO2和流动相B：含0.2％氨的30％EtOH；流速15mL/min)纯化。
[0637] 第一洗脱化合物被任意地指定为实施例80：峰1Rt＝6.69分钟；LCMS Rt＝0.63分钟MS m/z353[M+H]+
[0638] 第二洗脱化合物被任意地指定为实施例81：峰2Rt＝6.95分钟，并且为实施例81；+
LCMS Rt＝0.63分钟；MS m/z 353[M+H]
LCMS Rt＝0.63分钟；MS m/z 353[M+H]
[0639] 实施例82
[0640] 3-{(1R,5S)-3-[2-(1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丁腈
[0641] 根据对于实施例79所述方法，使用4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1l2-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备22)和E/Z-丁-2-烯腈在140℃，于微波辐射下反应8小时，以制备标题化合物。将残渣使用反相硅胶柱色谱法(用水中5-75％MeCN(0.1％氨)洗脱)纯化。
[0642] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.50(d,3H),0.90(m,2H),1.00-1.20(m,2H),2.10(m,1H),2.30-2.40(m,2H),2.80(m,2H),3.00-3.40(br m,2H),4.00(m,2H),5.25(m,1H),6.90(m,2H),7.05(m,1H).LCMS Rt＝0.59分钟；MS m/z 339[M+H]+
[0643] 实施例83
[0644] {3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基}乙腈
[0645] 根据对于实施例77所述方法，使用2-(3-((1R,5S)-3-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁烷-3-基)乙腈盐酸盐(实施例84)和DIPEA制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH(含1％氨)洗脱)纯化。
[0646] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.75-1.90(m,4H),3.05(s,3H),3.20(m,2H),3.30(m,2H),3.40(s,3H),3.80(m,2H),3.85(m,2H),4.00-4.20(m,4H),6.10(m,1H),7.55(d,1H),7.78(s,1H),7.90(d,1H).LCMS Rt＝0.52分钟；MS m/z 458[M+H]+
[0647] 实施例84
[0648] {3-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]氧杂环丁烷-3-基}乙腈
[0649] 根据对于制备135所述方法，使用2-(3-亚氧杂环丁烷基)乙腈在85℃下反应5天来制备标题化合物。将反应物冷却，并使用制备型HPLC(纯化方法H)纯化。LCMS Rt＝1.50分钟；MS m/z 381[M+H]+
[0650] 实施例85
[0651] ((1R,5S)-N-(氰基甲基)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0652] 在密封容器中，向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,26mg,0.08mmol)和N-(氰基甲基)氨甲酰基咪唑(制备79,14mg,0.09mmol)在EtOH(0.8mL)中的溶液加入三乙胺(110μl,0.082mmol)，并将反应物物加热至60℃持续2小时。加入另外的N-(氰基甲基)氨甲酰基咪唑(2mg,0.01mmol)，并将反应物继续加热2小时，然后真空浓缩。将残渣在DCM(10mL)中溶解，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH)纯化，以得到白色固体形式的标题化合物(21mg,70％)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.78(m,2H),2.00(m,2H),3.15(m,4H),3.88(d,3H),4.00-4.15(m,2H),4.43(m,2H),6.10(m,1H),7.55(m,1H),7.75(m,1H),7.90(m,1H).MS m/z 368[M+H]+
[0653] 实施例86
[0654] (1R,5S)-N-乙基-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0655] 根据实施例85，使用N-乙基-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备80,24mg,0.17mmol)和4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,50mg,0.16mmol)制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH洗脱)纯化，以得到白色固体形式的标题化合物(41mg,74％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.00(m,3H),1.55(m,2H),1.75(m,2H),3.10(m,3H),3.18(m,3H)3.80(s,3H),4.00(m,1H),4.10(m,1H),4.40(m,2H),6.10(m,1H),6.67(t,1H),7.45(s,1H),7.73(br s,1H),7.91(d,1H),8.82(s,1H)。LCMS Rt＝0.58分钟；MS m/z 357[M+H]+
[0656] 实施例87
[0657] (1R,5S)-N-乙基-3-(2-{[5-氟-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0658] 根据实施例85，使用N-乙基-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备80)和5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-氟-N-甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备14)(无三乙胺作为碱)制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.04(t,3H),1.60(q,2H),1.81(d,2H),2.78(d,3H),2.93-3.14(m,4H),3.18(d,2H),4.39(br s,2H),6.39(d,1H),
6.71(t,1H),8.07(d,1H),8.27(d,1H),8.42(d,1H),8.71(s,1H),9.85(s,1H).MS m/z 429[M+H]+
6.71(t,1H),8.07(d,1H),8.27(d,1H),8.42(d,1H),8.71(s,1H),9.85(s,1H).MS m/z 429[M+H]+
[0659] 实施例88
[0660] (1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-N-(丙-2-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0661] 根据对于实施例85所述方法，使用N-异丙基-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备81)和4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19)制备标题化合物。色谱分析后，将残渣在DCM中溶解，通过加入乙醚沉淀并过滤。LCMS Rt＝0.61分钟；MS m/z 371[M+H]+
[0662] 实施例89
[0663] (1R,5S)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0664] 根据对于实施例85所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)制备标题化合物。将残渣使用
1
硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH(1％氨)洗脱)纯化。H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm
1.80(m,2H),2.00(m,2H),2.60(s,3H),2.95(s,3H),3.40(m,2H),3.90-4.00(m,2H),4.15(br m,2H),4.50(m,2H),6.30(m,1H),8.00(m,2H),8.75(m,1H).LCMS Rt＝0.56分钟；MS m/z 479[M+H]+
1
硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH(1％氨)洗脱)纯化。H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm
1.80(m,2H),2.00(m,2H),2.60(s,3H),2.95(s,3H),3.40(m,2H),3.90-4.00(m,2H),4.15(br m,2H),4.50(m,2H),6.30(m,1H),8.00(m,2H),8.75(m,1H).LCMS Rt＝0.56分钟；MS m/z 479[M+H]+
[0665] 实施例90
[0666] (1R,5S)-N-(氰基甲基)-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0667] 根据对于实施例85所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)和N-(氰基甲基)-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备78)制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH(1％氨)洗脱)纯化。1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.80(m,2H),2.00(m,2H),2.65(s,3H),2.95(s,
3H),3.20(m,2H),4.20(m,4H),4.50(m,2H),6.30(m,1H),8.00(m,2H),8.70(s,1H).LCMS Rt＝0.50min；MS m/z 436[M+H]+
3H),3.20(m,2H),4.20(m,4H),4.50(m,2H),6.30(m,1H),8.00(m,2H),8.70(s,1H).LCMS Rt＝0.50min；MS m/z 436[M+H]+
[0668] 实施例91
[0669] (1R,5S)-N-乙基-3-(2-{[5-甲基-6-(甲基氨甲酰基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺
[0670] 根据对于实施例85所述方法，使用5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐(制备1)和N-乙基-1H-咪唑-1-甲酰胺(制备79)制备标题化合物。色谱分析后，将标题化合物进一步使用制备型HPLC(纯化方法H)纯化。Rt＝1.69分钟；MS m/z 425[M+H]+
[0671] 实施例92
[0672] 2-[(1R,5S)-3-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-4-甲腈
[0673] 向4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,51mg,0.16mmol)在iPrOH(1.5mL)中的溶液加入4-氰基-2-氯吡啶(45mg,0.32mmol)和三乙胺(100μl,0.68mmol)。将反应物使用微波辐射加热至160℃，持续13小时。将反应物冷却，真空浓缩，并使用反相硅胶柱色谱法(用0.1％氨水溶液中5-100％MeCN洗脱)纯化，以得到标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.70(m,2H),1.90(m,
2H),3.10(m,2H),3.70(s,3H),3.80-3.90(br m,2H),4.50(m,2H),5.75(d,1H),6.50(br s,
1H),6.60-6.70(m,2H),7.35(s,1H),7.50(s,1H),7.80(d,1H),8.15(m,1H).LCMS Rt＝0.74分钟；MS m/z 388[M+H]+
2H),3.10(m,2H),3.70(s,3H),3.80-3.90(br m,2H),4.50(m,2H),5.75(d,1H),6.50(br s,
1H),6.60-6.70(m,2H),7.35(s,1H),7.50(s,1H),7.80(d,1H),8.15(m,1H).LCMS Rt＝0.74分钟；MS m/z 388[M+H]+
[0674] 实施例93和94
[0675] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺和(1R)-2,2-二氟-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0676] 向(1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺盐酸盐(制备90,148mg,0.15mmol)在DMA(1mL)和DCM(1mL)中的溶液加入外消旋2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(51mg,0.42mmol)、HATU(188mg,0.49mmol)和DIPEA(279μl,0.54mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并在EtOAc和水之间分配。将有机层收集，干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM至91:8:
1DCM:MeOH:氨洗脱)纯化，以得到外消旋标题化合物。将外消旋体使用手性色谱法(使用ChiralTech AD-H柱(250mmx21.2mmx5um)；流动相A：80％CO2；流动相B：含0.2％氨的20％MeOH)分离。各个对映异构体的残渣可进一步通过由MeOH重结晶来纯化。
1DCM:MeOH:氨洗脱)纯化，以得到外消旋标题化合物。将外消旋体使用手性色谱法(使用ChiralTech AD-H柱(250mmx21.2mmx5um)；流动相A：80％CO2；流动相B：含0.2％氨的20％MeOH)分离。各个对映异构体的残渣可进一步通过由MeOH重结晶来纯化。
[0677] 峰2Rt＝5.89分钟实施例93：
[0678] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.05-1.10(m,3H),1.36-1.43(m,1H),1.73-1.82(m,1H),1.86-1.90(m,1H),1.98-2.06(m,1H),2.45-2.53(m,1H),3.75-3.83(m,2H),3.86(s,3H),4.10(m,2H),7.50(s,1H),7.76(d,1H),7.80(s,1H).
[0679] LCMS Rt＝0.57分钟；MS m/z 408[M+H]+
[0680] 峰1Rt＝3.90分钟实施例94：
[0681] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.05-1.10(m,3H),1.40(m,1H),1.75(m,1H),1.80(m,1H),2.00(m,1H),2.50(m,1H),3.60-3.80(m,5H),4.10(m,2H),7.50(s,1H),7.80(m,2H).
[0682] LCMS Rt＝0.57分钟；MS m/z 408[M+H]+；[α]D20＝16.8(c 1.095,MeOH)[0683] 实施例95
[0684] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5R,6R)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0685] 根据对于实施例93所述方法，使用(1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸酯(制备72)制备标题化合物。
[0686] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.90(m,3H),1.25-1.35(m,4H),1.45(m,1H),1.80(m,1H),2.00(m,1H),2.20(m,1H),3.60-3.80(m,3H),3.90(m,2H),7.40(s,1H),7.70(s,1H),7.90(d,1H),9.00(br s,1H),9.10(s,1H).MS m/z 397[M+H]+；[α]D20＝113.3(c
0.965,EtOH)
0.965,EtOH)
[0687] 根据对于实施例93所述方法，使用如下所述适合的酸和胺，制备以下实施例。纯化细节如下文所述或所提及：
[0688] 纯化方法A：使用制备型HPLC进行纯化：柱：Diol,250mmx21.2mmx5μm；流动相A：庚烷；流动相B：乙醇；由50％B至10分钟时100％B，然后在12分钟时返回至50％B；流速27mL/min。
[0689] 分析型LCMS：Phenomenex Luna C18；150mmx3mmx5μm，流动相A：水中0.1％甲酸，流动相B：乙腈中0.1％甲酸，由5％B至10分钟时100％B，然后在12.5分钟时返回至5％B。流速0.75mL/min.
[0690] 纯化方法B：硅胶柱色谱法，用97:2:1DCM:MeOH:NH4OH洗脱。
[0691] 纯化方法C：制备型HPLC，使用[Phenomenex Gemini C18 250x21.2mmx8μm或150mmx25mmx5μm；由水(0.1％氨)中16-55％MeCN至水(0.1％氨)中36-60％MeCN]
[0692]
[0693] 实施例100和101
[0694] 5-[(4-{(1S,5R,6R)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺和5-[(4-{(1R,5S,6S)-1-[(环丙基羰基)氨基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-5-氟嘧啶-2-基)氨基]-N,3-二甲基吡啶-2-甲酰胺
[0695] 根据对于实施例5所述方法，使用反式-外消旋N-(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷-甲酰胺(制备95)和5-氨基-N,3-二甲基吡啶酰胺(制备38)制备标题化合物。将残渣纯化，并通过手性色谱法分离为对映异构体：手性柱：Lux Cellulose-4,250mmx21.2mmx5μm，流动相A：超临界CO2，流动相B：甲醇,A:B 65:35；流速80mL/min。第一洗脱异构体：实施例100；第二洗脱异构体：实施例101.
[0696] MS m/z 440[M+H]+
[0697] 实施例102
[0698] N-[(1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-{[6-(2-羟基乙基)吡啶-3-基]氨基}嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0699] 根据对于实施例5所述方法，使用N-((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备95)和2-(5-氨基吡啶-2-基)乙-1-醇(纯化116)制备标题化合物。将残渣通过硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)，随后用制1
备型HPLC(纯化方法B)纯化。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.64-0.66(m,4H),0.90(d,
3H),1.24-1.28(m,1H),1.49(m,1H),1.76-1.77(m,1H),2.76-2.80(m,2H),3.39(s,1H),
3.64-3.70(m,4H),3.87-3.88(m,1H),4.59-4.61(m,1H),7.13(d,1H),7.94(d,1H),7.97(d,
1H),8.71(s,1H),8.74(s,1H),9.20(s,1H).MS m/z 413[M-H]-
备型HPLC(纯化方法B)纯化。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.64-0.66(m,4H),0.90(d,
3H),1.24-1.28(m,1H),1.49(m,1H),1.76-1.77(m,1H),2.76-2.80(m,2H),3.39(s,1H),
3.64-3.70(m,4H),3.87-3.88(m,1H),4.59-4.61(m,1H),7.13(d,1H),7.94(d,1H),7.97(d,
1H),8.71(s,1H),8.74(s,1H),9.20(s,1H).MS m/z 413[M-H]-
[0700] 实施例103和104
[0701] N N-{(1S,5R,6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2R)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺和N-{(1S,5R,6R)-3-[5-氟-2-({6-[(2S)-1-羟基丙-2-基]吡啶-3-基}氨基)嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺
[0702] 根据对于实施例5所述方法，使用N-((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备95)和外消旋-2-(5-氨基吡啶-2-基)丙-1-醇(制备40)制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)，随后通过制备型HPLC(纯化方法B)纯化。使用以下手性色谱法，将外消旋体分离为其对映异构体：
[0703] 手性柱：Chiralpak IC,250mmx30mmx5μm，流动相A：超临界CO2，流动相B：IPA(0.1％氨),A:B60:40；流速70mL/min.
[0704] 第一洗脱异构体被任意地指定为实施例103：
[0705] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.76-0.86(m,4H),1.00-1.02(m,3H),1.28-1.38(m,4H),1.54(m,1H),1.76-1.83(m,1H),3.00-3.05(m,1H),3.66-3.80(m,4H),4.03-4.05(m,2H),7.23-7.27(d,1H),7.80-7.81(d,1H),8.04-8.05(d,1H),8.84(s,1H).MS m/z 449[M+Na]+,99.2％ee.
[0706] 第二洗脱异构体被任意地指定为实施例104：
[0707] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.76-0.86(m,4H),1.00-1.02(m,3H),1.28-1.38(m,4H),1.54(m,1H),1.76-1.83(m,1H),3.00-3.05(m,
1H),3.66-3.80(m,4H),4.03-4.05(m,2H),7.23-7.27(d,1H),7.80-7.81(d,1H),8.04-8.05(d,1H),8.84(s,1H).
1H),3.66-3.80(m,4H),4.03-4.05(m,2H),7.23-7.27(d,1H),7.80-7.81(d,1H),8.04-8.05(d,1H),8.84(s,1H).
[0708] MS m/z 449[M+Na]+,94％ee.
[0709] 实施例105
[0710] N-[(1S,5R,6R)-3-(2-{[5-氯-6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基}-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0711] 根据对于实施例5所述方法，使用N-((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备95)和(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)甲醇(制备122)制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用EtOAc中30％石油醚洗脱)，随后通过制备型HPLC(纯化方法B)纯化。
[0712] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.76-0.78(m,2H),0.86(m,2H),1.01-1.03(m,3H),1.35-1.37(m,1H),1.53(m,1H),1.82(m,1H),3.75-3.78(m,2H),4.04(m,2H),4.72(s,
2H),7.85(m,1H),8.45(s,1H),8.65(s,1H).MS m/z 433[M+H]+
2H),7.85(m,1H),8.45(s,1H),8.65(s,1H).MS m/z 433[M+H]+
[0713] 实施例106
[0714] N-{(1S,5R,6R)-3-[2-({5-氯-6-[(1R)-1-羟基乙基]吡啶-3-基}氨基)-5-氟嘧啶-4-基]-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基}环丙烷甲酰胺
[0715] 向((1S,5R,6R)-3-(2-((5-氯-6-((S)-1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备138 350mg,0.718mmol)在MeOH(10mL)中的溶液滴加二氧杂环己烷中的4M HCl(10mL,4M)。将溶液在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。将残渣(54mg,0.143mmol)在DMF(10mL)中溶解，并用三乙胺(86mg,
0.85mmol)、环丙烷甲酸(24mg,0.28mmol)和HATU(86mg,0.23mmol)处理。将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并直接使用制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(38mg,58％)。
0.85mmol)、环丙烷甲酸(24mg,0.28mmol)和HATU(86mg,0.23mmol)处理。将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并直接使用制备型HPLC(纯化方法B)纯化，以得到标题化合物(38mg,58％)。
[0716] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.62-0.73(m,3H),0.93(s,2H),1.16-1.21(m,1H),1.24-1.31(m,1H),1.37(d,2H),1.46-1.56(m,1H),1.72-1.85(m,1H),3.06-3.15(m,
1H),3.58-3.76(m,1H),3.86-3.97(m,1H),4.97-5.08(m,1H),7.98-8.05(m,1H),8.29-8.40(m,1H),8.69-8.79(m,2H),9.50-9.60(m,1H).MS m/z 447[M+H]+
1H),3.58-3.76(m,1H),3.86-3.97(m,1H),4.97-5.08(m,1H),7.98-8.05(m,1H),8.29-8.40(m,1H),8.69-8.79(m,2H),9.50-9.60(m,1H).MS m/z 447[M+H]+
[0717] 实施例107和108
[0718] N-[(1S,5R)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺和N-[(1R,5S)-3-(5-氯-2-{[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基}嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0719] 根据对于实施例49所述方法，使用外消旋-N-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备98)和4-氨基-1H-吡唑-1-乙醇制备外消旋标题化合物。
[0720] 使用如下所述制备型手性色谱法，将外消旋体分离为其对映异构体：
[0721] 手性柱：Chiralpak Ad 250mmx30mm I.D.20μm；流动相：超临界CO2:EtOH(0.2％氨)45:55；流速：80mL/min
[0722] 第一洗脱异构体：实施例107；
[0723] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.76-0.79(m,3H),0.86-0.87(m,2H),1.10(m,1H),1.28(m,1H),1.54(m,1H),1.76(m,1H),3.73(m,1H),3.87(m,2H),3.91-3.94(m,1H),
4.16(m,3H),4.47-4.49(m,1H),7.52(s,1H),7.81(s,1H),7.87(s,1H).MS m/z 404[M+H]+[0724] 第二洗脱异构体：实施例108；
4.16(m,3H),4.47-4.49(m,1H),7.52(s,1H),7.81(s,1H),7.87(s,1H).MS m/z 404[M+H]+[0724] 第二洗脱异构体：实施例108；
[0725] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.76-0.79(m,3H),0.86-0.87(m,2H),1.10(m,1H),1.28(m,1H),1.54(m,1H),1.76(m,1H),3.73(m,1H),3.87(m,2H),3.91-3.94(m,1H),
4.16(m,3H),4.47-4.49(m,1H),7.52(s,1H),7.81(s,1H),7.87(s,1H).MS m/z 404[M+H]+[0726] 实施例109
4.16(m,3H),4.47-4.49(m,1H),7.52(s,1H),7.81(s,1H),7.87(s,1H).MS m/z 404[M+H]+[0726] 实施例109
[0727] (1S)-2,2-二氟-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0728] 根据对于实施例49所述方法，在85℃下，使用(S)-N-((1S,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酰胺(制备88)和1-甲基-1H-吡唑-4-基胺制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-5％MeOH洗脱)纯化。
[0729] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.78-1.88(m,1H),2.00-2.10(m,1H),2.55-2.65(m,1H),3.70(m,1H),3.70(m,1H),3.90(s,3H),3.95-4.00(m,1H),4.10-4.20(m,1H),7.50(s,1H),7.80(s,2H).
[0730] MS m/z 424[M+H]+
[0731] 实施例110
[0732] (1R,2R)-2-氰基-N-[(1S,5S)-3-{5-氟-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基}-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]环丙烷甲酰胺
[0733] 根据对于实施例109所述方法，使用外消旋-(1R,2R)-N-(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(制备89)制备标题化合物。使用如下所述手性色谱法，将外消旋体分离为其对映异构体：
[0734] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.05(d,1H),1.13(m,1H),1.50(m,2H),2.02(m,1H),2.33(m,1H),3.60-3.79(m,4H),3.87(s,3H),3.98(m,1H),4.09(m,1H),4.16(m,1H),
7.54(s,1H),7.77-7.78(m,2H).
7.54(s,1H),7.77-7.78(m,2H).
[0735] 柱：Cellulose-3 21mmx250mmx5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH；90:10A:B；保持10分钟；65mL/min。峰2；Rt＝7.08分钟,MS m/z 413[M+H]+
[0736] 实施例111
[0737] 4-({4-[6-(2,2-二氟丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]-5-氟嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺
[0738] 向4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺(制备126,25mg,0.067mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入2,2-二氟丙酸(7mg,0.067mmol)、HATU(25mg,0.066mmol)和三乙胺(0.03mL,0.2mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用水稀释，将有机相通过相分离筒收集，并真空浓缩。将残渣使用制备型HPLC(方法1,8.5min内5％B至50％B，9min内至100％B，在100％B下保持至10min)纯化，以得到标题化合物。
[0739] 制备型HPLC条件
[0740] 方法1：Waters Sunfire C18 19x500mm,5μ，流动相A：水中0.05％TFA；流动相B：乙腈中0.05％TFA。流速25mL/min.
[0741] 方法2：Waters Sunfire C18 19x500mm,5μ，流动相A：水中0.05％甲酸；流动相B：乙腈中0.05％甲酸。流速25mL/min.
[0742] LCMS QC条件：
[0743] 柱：Waters Atlantis dC18 4.6x50mm,5μ
[0744] 改性剂：TFA 0.05％
[0745] 梯度：95％水:5％MeCN 4分钟内线性变至5％水:95％MeCN，保持1分钟(至5分钟)。流速：2mL/min
[0746] MS模式：ESI+；扫描范围160-650Da
[0747] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.15(t,3H),1.77-1.88(m,4H),2.37(s,3H),2.86(q,1H),3.23-3.30(m,2H),4.02-4.09(m,2H),4.09-4.19(m,2H),4.65(br s,1H),4.92(br s,1H),7.31(d,1H),7.60(br s,2H),8.05-8.12(m,2H),9.36(s,1H).LCMS Rt＝1.96分钟；MS m/z 463[M+H]+
[0748] 实施例112
[0749] N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(2-氟-2-甲基丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺
[0750] 如对于实施例111所述方法，使用2-氟-2-甲基丙酸和4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺(制备126)制备、纯化和分析标题化合物。
[0751] 制备型HPLC方法1,8.5min内10％B至50％B，9min内至100％B，在100％B下保持至10min。
[0752] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.13(t,3H),1.38-1.49(m,3H),1.52-1.61(m,3H),1.74(d,1H),2.35(s,3H),2.77(q,1H),3.20-3.28(m,2H),3.94(d,1H),4.02(d,1H),
4.06-4.13(m,1H),4.17(d,1H),4.52(br s,1H),4.82(br s,1H),7.28(d,1H),7.54-7.63(m,2H),8.05(d,2H),9.31(s,1H).
4.06-4.13(m,1H),4.17(d,1H),4.52(br s,1H),4.82(br s,1H),7.28(d,1H),7.54-7.63(m,2H),8.05(d,2H),9.31(s,1H).
[0753] LCMS Rt＝1.95分钟；MS m/z 459[M+H]+
[0754] 实施例113
[0755] 4-({4-[6-(环丙基羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺
[0756] 使用对于实施例111所述方法，使用环丙烷甲酸和3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯盐酸盐(制备128)制备、纯化和分析标题化合物。
[0757] 制备型HPLC方法2,8.5min内10％B至50％B，在100％B下保持至10min。
[0758] LCMS Rt＝1.57分钟；MS m/z 421[M+H]+
[0759] 实施例114
[0760] 4-({4-[6-(2,2-二氟丙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-N-乙基苯甲酰胺
[0761] 使用对于实施例115所述方法，使用2,2-二氟丙酸和4-((4-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)嘧啶-2-基)氨基-N-乙基苯甲酰胺盐酸盐(制备127)制备、纯化和分析标题化合物。
[0762] 制备型HPLC方法1,8.5min内10％B至60％B，9min内至100％B，在100％B下保持至10min。
[0763] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.17(t,3H),1.76-1.88(m,4H),2.87-2.95(m,1H),3.28-3.37(m,2H),3.84-4.14(m,4H),4.70(br s,1H),4.97(br s,1H),6.51(d,1H),
7.75-7.83(m,2H),7.91(br s,2H),8.14(d,1H),8.42(br s,1H),10.48(br s,1H).LCMS Rt＝1.93分钟；MS m/z 431[M+H]+
7.75-7.83(m,2H),7.91(br s,2H),8.14(d,1H),8.42(br s,1H),10.48(br s,1H).LCMS Rt＝1.93分钟；MS m/z 431[M+H]+
[0764] 实施例115
[0765] N-乙基-2-甲基-4-({4-[6-(三氟乙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)苯甲酰胺
[0766] 向4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺盐酸盐(制备128,30mg,0.077mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入三乙胺(0.1mL,0.7mmol)，随后加入TFAA(2滴)。将反应物在室温下搅拌2小时，真空浓缩，并使用对于实施例111所述制备型HPLC(方法2,8.5min内5％B至100％B，在100％B下保持至10min)进行纯化和分析，以得到标题化合物。LCMS Rt＝1.76分钟；MS m/z 449[M+H]+
[0767] 实施例116
[0768] N-乙基-4-({5-氟-4-[6-(三氟乙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯甲酰胺
[0769] 将1-(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)-2,2,2-三氟乙-1-酮(制备129,100mg,0.31mmol)和4-氨基-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺(PCT公开号WO2006109846)在异丙醇(3mL)中的溶液用1滴cHCl处理，并在微波辐射下加热至140℃持续40分钟。将反应物冷却，真空浓缩，并直接用于下一步骤。
[0770] 实施例117
[0771] 5-({4-[(1R,5S)-8-{[(1S)-2,2-二氟环丙基]羰基}-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]嘧啶-2-基}氨基)-3-氟吡啶-2-甲酰胺
[0772] 在0℃下，向制备144(280mg,0.815mmol)和制备68(129mg,1.06mmol)在DMF(30mL)中的溶液加入TEA(330mg,3.26mmol)和HATU(372mg,0.979mmol)。将混合物在室温(10℃)下搅拌18小时。将溶液浓缩，并通过制备型HPLC纯化。
[0773] 制备型HPLC条件
[0774] Phenomenex Synergi C18 150x30mm,4μ，流动相A：乙腈；流动相B：水(用氨调节至pH 10)。流速：35mL/min.LCMS：(M+1＝447.9,M+23＝469.9)
[0775] 将外消旋体使用手性色谱法(使用Chiralpal AS-H柱(150mmx4.6mmx5um)；流动相A：5％CO2至40％；流动相B：MeOH(含0.05％DEA))分离，以在Rt＝8.12分钟时得到标题化合物(143mg,39％)。LCMS Rt＝0.73分钟,MS m/z 448.1[M+H]
[0776] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.58-2.10(m,6H),2.93-3.28(m,3H),4.04-4.33(m,2H),4.57-4.78(m,2H),6.41(dd,1H),7.37(br.s.,1H),7.80(br.s.,1H),8.10(dd,1H),8.27(m,1H),8.67(d,1H),9.88(s,1H).
[0777] 制备1
[0778] 5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N,3-二甲基吡啶酰胺盐酸盐
[0779] 步骤1
[0780] 向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34,500mg,1.54mmol)和5-氨基-N,3-二甲基吡啶酰胺(制备38,458mg,2.78mmol)在DMA(20mL)中的溶液加入碳酸铯(1g,3.08mmol)、xantphos(178mg,0.31mmol)和乙酸钯(69mg,0.31mmol)。将反应物用氮气吹扫1分钟，然后在微波辐射下加热至130℃持续1小时。将反应物冷却、过滤并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用石油醚中50-80％EtOAc洗脱)纯化。
[0781] 步骤2
[0782] 将所得的固体在DCM(20mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl(20mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.67-1.83(m,2H),1.90-2.06(m,2H),2.58(s,3H),2.78(br s,3H),3.59-3.72(m,2H),4.16-4.27(m,4H),6.66-6.77(m,1H),7.88(br s,1H),8.17(d,1H),
8.46-8.60(m,1H),8.66(br s,1H),9.61-9.75(m,1H),10.03-10.16(m,1H),11.09(br s,
1H).
8.46-8.60(m,1H),8.66(br s,1H),9.61-9.75(m,1H),10.03-10.16(m,1H),11.09(br s,
1H).
[0783] MS m/z 354[M+H]+
[0784] 根据制备1所述方法，使用(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34)和如下所述适合的胺制备以下制备例。除非另外说明，将化合物以盐酸盐的形式分离。
[0785] 脱保护方法B：将Boc-保护的中间体在DCM中溶解，用TFA处理，并在室温下搅拌18小时。将反应物通过加入三乙胺碱化至pH＝10。将溶液真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用EtOAc中10％MeOH或96:3:1DCM:MeOH:NH3洗脱)纯化。
[0786] 脱保护方法C：将Boc-保护的中间体在DCM中溶解，用TFA处理，并在室温下搅拌1.5小时。将反应物真空浓缩，在MeOH中溶解，并通过碳酸盐筒洗脱，以得到游离的母体。
[0787]
[0788]
[0789]
[0790] 制备18
[0791] 5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基吡啶酰胺盐酸盐
[0792] 根据对于制备1步骤1所述方法，制备标题化合物。在Buchwald步骤后，将中间体与甲醇中的氨在密封容器中加热至90℃。将反应物冷却并真空浓缩，然后如所述用HCl脱保护。
[0793] 制备19
[0794] 4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
[0795] 将(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34,2.25g,6.93mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-基胺盐酸盐(1.02g,7.62mmol)在iPrOH(30mL)中的溶液在微波辐射下加热至140℃，持续1小时。将反应物真空浓缩，以得到盐酸盐1
形式的标题化合物(2.2g,99％)。H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.97-2.02(m,2H),2.19-
2.20(m,2H),3.48-3.51(m,1H),3.72-3.78(m,1H),3.98(s,3H),4.20-4.31(m,3H),6.67(d,
1H),7.81(s,1H),7.86(m,2H).MS m/z 286[M+H]+
形式的标题化合物(2.2g,99％)。H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.97-2.02(m,2H),2.19-
2.20(m,2H),3.48-3.51(m,1H),3.72-3.78(m,1H),3.98(s,3H),4.20-4.31(m,3H),6.67(d,
1H),7.81(s,1H),7.86(m,2H).MS m/z 286[M+H]+
[0796] 制备20
[0797] 2-(4-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)乙-1-醇盐酸盐
[0798] 在室温下，向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34,200mg,0.617mmol)和4-氨基-1H-吡唑-1-乙醇(134mg,0.74mmol)在iPrOH(10mL)中的溶液加入3滴浓HCl。将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续40分钟。将反应物真空浓缩以得到标题化合物，将其以盐酸盐的形式直接用于下一步骤。
[0799] 根据制备20所述方法，使用(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34)和如下所述适合的胺制备以下制备例。将化合物以盐酸盐的形式分离。
[0800]
[0801] 制备24
[0802] 4-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯甲酰胺盐酸盐
[0803] 步骤1
[0804] 向(1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备35,0.5g,1.5mmol)在二氧杂环己烷(5mL)中的溶液加入4-氨基-N-乙基苯甲酰胺(0.26g,1.6mmol)、RuPHOS钯(II)苯乙胺氯化物(0.1g,0.1mmol)和叔丁醇钠(0.15g,1.5mmol)。将反应物在微波辐射下加热至120℃，持续25分钟。将反应物冷却，并通过固相萃取筒洗脱。将滤液使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化，以得到boc-保护的中间体(0.65g,95％)。
[0805] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.07(t,3H),1.37-1.41(m,9H),1.67(d,2H),1.78-1.86(m,2H),3.13-3.18(m,2H),3.18-3.26(m,2H),4.07-4.13(m,2H),4.20(br s,
2H),7.65-7.69(m,2H),7.69-7.74(m,2H),8.02(d,1H),8.19(t,1H),9.43(s,1H).
2H),7.65-7.69(m,2H),7.69-7.74(m,2H),8.02(d,1H),8.19(t,1H),9.43(s,1H).
[0806] 步骤2
[0807] 将中间体在DCM(5mL)和MeOH(2mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl处理。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物。
[0808] 制备25
[0809] 4-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺盐酸盐
[0810] 将(1R,5S)-3-(2-((4-(乙基氨甲酰基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(实施例74)在DCM(5mL)和MeOH(2mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl处理。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物。
[0811] 制备26
[0812] 5-((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基吡啶酰胺盐酸盐
[0813] 将(1R,5S)-3-(2-((6-(乙氧基羰基)-5-甲基吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备33,100mg,0.214mmol)在NH3/MeOH(15mL)中的溶液在密封容器中加热至90℃，持续18小时。将溶液真空浓缩，并将残渣用4M HCl/二氧杂环己烷(20mL)处理，并在室温下搅拌2小时。将溶液真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物。
[0814] 制备27
[0815] ((1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(环丙基)甲酮
[0816] 在室温下，向(1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(制备31,4g,11.7mmol)、环丙烷甲酸(2g,23.4mmol)和三乙胺(3.5g,35.1mmol)在DMF(40mL)中的悬浮液加入HATU(5.33g,14mmol)。加入后，将反应物在室温下搅拌30分钟。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用EtOAc中20％石油醚洗脱)纯化，以得到标题化合物(2.5g,70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm0.80-0.86(m,2H),1.01-1.05(m,2H),1.66-2.09(m,5H),3.29-3.34(m,2H),4.23-4.26(m,1H),4.37-4.40(m,1H),4.53-4.52(m,1H),4.77-4.78(m,1H),7.94-7.95(m,1H).MS m/z 311[M+H]+
[0817] 制备28
[0818] ((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(环丙基)甲酮[0819] 在室温下，向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(制备32,3.5g,15.57mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入三乙胺(7.86g,78mmol)和环丙烷羰基氯化物(3.26g,31mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将有机层收集、干燥，真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物(2.5g,55％)。
[0820] MS m/z 293[M+H]+
[0821] 制备29
[0822] (1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-N-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酰胺[0823] 在0℃下，向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(制备32,170mg,0.6173mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入三乙胺(125mg,1.23mmol)，随后加入异氰酸乙酯(175.4mg,2.47mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩，并用硅胶柱色谱法(用EtOAc中20％石油醚)纯化，以得到标题化合物(184mg,100％)。MS m/z 296[M+H]+[0824] 制备30
[0825] 外消旋((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)(2,2-二氟环丙基)甲酮
[0826] 根据对于制备27所述方法，使用外消旋2,2-二氟环丙烷-1-甲酸制备标题化合物。MS m/z 329[M+H]+
[0827] 纯化31
[0828] (1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷
[0829] 根据对于制备25所述方法，使用(1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备35)制备标题化合物。
[0830] 制备32
[0831] (1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷
[0832] 根据对于制备125所述方法，使用二氧杂环己烷中的(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34)制备标题化合物。
[0833] 制备33
[0834] (1R,5S)-3-(2-((6-(乙氧基羰基)-5-甲基吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[0835] 根据对于制备1步骤1所述方法，使用(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34)和5-氨基-3-甲基吡啶甲酸乙酯制备标题化合物。+
MS m/z 469[M+H]
MS m/z 469[M+H]
[0836] 制备34
[0837] (1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯[0838] 在0℃下，向(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备36,11g,52mmol)在MeOH(500mL)中的溶液加入2,4-二氯嘧啶(8.4g,57mmol)和TEA(6.7g,66mmol)。
将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用石油醚中20％EtOAc洗脱)纯化，得到白色固体形式的标题化合物(12g,71％)。
将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用石油醚中20％EtOAc洗脱)纯化，得到白色固体形式的标题化合物(12g,71％)。
[0839] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.48(s,9H),1.63-1.74(m,2H),1.97(br s,2H),3.18(br s,2H),3.38-3.74(m,1H),4.36(br s,3H),6.35(d,1H),8.06(d,1H).MS m/z 325[M+H]+
[0840] 制备35
[0841] (1R,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯[0842] 根据对于制备36所述方法，使用2,4-二氯-5-氟嘧啶制备标题化合物。将残渣通过硅胶柱色谱法(用庚烷中0-100％EtOAc洗脱)纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.38(s,9H),1.62(d,2H,)1.76-1.84(m,2H),3.16(d,2H),4.08(d,2H),4.15-4.22(m,2H),8.17(d,
1H).
1H).
[0843] 制备36
[0844] (1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[0845] 将(1R,5S)-3-苄基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备37,19g,63mmol)在甲醇(500mL)中的溶液用钯/炭(4g)在50psi下，于室温下氢化18小时。将反应物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(13.2g,99％)。
[0846] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 1.49(s,9H),1.85-2.02(m,4H),2.65(d,2H),2.90(d,2H),4.08(br s,2H).
[0847] 制备37
[0848] (1R,5S)-3-苄基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[0849] 将(1R,5S)-3-苄基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(20g,99mmol)、二甲酸二叔丁酯(21g,97mmol)和三乙胺(10g,99mmol)在DCM(500mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用石油醚中1％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(19g,64％)。
[0850] 制备38
[0851] 5-氨基-N,3-二甲基吡啶酰胺
[0852] 将5-氨基-3-甲基吡啶甲酸乙酯(制备41,500mg,2.78mmol)在甲胺的乙醇溶液(30％,50mL)中溶解，并将溶液在密封溶液中加热至100℃，持续18小时。将反应物冷却，真空浓缩，并直接在下一反应中使用。
[0853] 制备39
[0854] 5-氨基-3-氯-N-甲基吡啶酰胺
[0855] 根据对于制备38所述方法，使用5-氨基-3-氯-2-吡啶甲酸甲酯制备标题化合物。
[0856] 制备40
[0857] 外消旋2-(5-氨基吡啶-2-基)丙-1-醇
[0858] 向冷却至0℃的LiAlH4(1.16g,30.7mmol)在THF(15mL)中的溶液加入外消旋2-(5-氨基吡啶-2-基)丙酸甲酯(制备43,850mg,4.72mmol)。将反应物在室温下搅拌2小时，然后用Na2SO4.10H2O猝灭。将反应物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到标题化合物(0.72g,100％)。
[0859] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.28(d,3H),2.94-3.01(m,1H),3.62(br s,1H),3.78(m,1H),3.85-3.93(m,1H),6.99(d,2H),8.00(m,1H).
[0860] 制备41
[0861] 5-氨基-3-甲基吡啶甲酸乙酯
[0862] 将3-甲基-5-硝基吡啶甲酸乙酯(制备53,28g,133mmol)在乙醇(600mL)中的溶液用氩气脱气15分钟。加入10％钯/炭(12g)，并将反应物在氢气气氛下于室温下氢化18小时。将反应物通过硅藻土垫过滤，并用乙醇洗涤。将滤液真空浓缩，并将残渣通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-2％甲醇洗脱)纯化，随后在己烷中研磨，以得到标题化合物(22g,92％)。
[0863] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.39(t,3H),3.99(br s,2H),4.38(q,2H),6.76(d,1H),7.98(d,1H).
[0864] 根据对于制备41所述方法，使用如下所述适合的硝基中间体，制备以下制备例。纯化方法如下所述或下文所提及：
[0865] 纯化方法1(Pm1)：硅胶柱色谱法(用EtOAc中25％石油醚洗脱)。
[0866]
[0867]
[0868] 制备45
[0869] 2-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)乙-1-醇
[0870] 向2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯(制备58,4.6g,20mmol)在EtOH/H2O(50mL/20mL)中的溶液加入氯化铵(20g,374mmol)和Fe(8g,143mmol)。将反应物在室温下搅拌3小时，然后过滤并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法纯化，在THF(50mL)中溶解，并在0℃下滴加至LiAlH4(2.3g,55mmol)在THF(50mL)中的溶液。将反应物在室温下搅拌3小时，然后在0℃下用Na2SO4.10H2O猝灭。将混合物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到黄色固体形式的标题化合物(1.3g,46％)。MS m/z 173[M+H]+
[0871] 制备46
[0872] 2-(5-氨基-3-氟吡啶-2-基)乙-1-醇
[0873] 根据对于制备45、57和58所述方法，使用2-氯-3-氟-5-硝基吡啶制备标题化合物。MS m/z 157[M+H]+
[0874] 制备47
[0875] (S)-1-(5-氨基-3-氟吡啶-2-基)吡咯烷-3-醇
[0876] 向(S)-1-(3-氟-5-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-3-醇(制备59,250mg,1.10mmol)在EtOH/H2O(5mL/2mL)中的溶液加入氯化铵(233mg,4.40mmol)和Fe(123mg,2.20mmol)。将反应物在80℃下搅拌30分钟，然后过滤并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用石油醚中10-100％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(80mg,36％)。
[0877] 根据对于制备47所述方法，使用如下所述适合的硝基中间体，制备以下制备例。纯化方法如下所述或下文所提及：
[0878]
[0879]
[0880] 制备51
[0881] 5-氨基-3-氟-N-甲基吡啶酰胺
[0882] 在0℃下，向5-((二-[叔丁氧羰基])氨基)-3-氟吡啶甲酸(制备65,750mg,2.11mmol)在DMF(20mL)中的溶液加入三乙胺(3.2g,31.65mmol)、HATU(1.2g,3.17mmol)和MeNH2.HCl(1.5g,22.4mmol)。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用EtOAc中33％石油醚洗脱)纯化，并在MeOH(20mL)中溶解。向所述溶液中加入MeOH(30mL)中的4M HCl，将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将残渣在MeOH(20mL)中溶解，并通过加入1M NaHCO3水溶液调节至pH 10。将混合物真空浓缩，并加入至
10:1DCM:MeOH(100mL)，并在室温下搅拌30分钟。将混合物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到黄色固体形式的标题化合物(480mg,80％)。
10:1DCM:MeOH(100mL)，并在室温下搅拌30分钟。将混合物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到黄色固体形式的标题化合物(480mg,80％)。
[0883] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 2.70-2.71(d,3H),6.25(s,2H),6.67-6.71(dd,1H),7.75(s,1H),8.20(s,1H).
[0884] 制备52
[0885] N-乙基-3-甲基-5-硝基吡啶酰胺
[0886] 根据对于制备41所述方法，使用3-甲基-5-硝基吡啶甲酸乙酯(制备53)和乙胺在70℃下制备标题化合物。
[0887] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.28(t,3H),2.87(s,3H),3.49(q,2H),7.97(br s,1H),8.37(d,1H),9.17(d,1H).
[0888] 制备53
[0889] 3-甲基-5-硝基吡啶甲酸乙酯
[0890] 在0℃下，将硫酸(150mL)缓慢加入至乙醇(600mL)。向该溶液中分批加入2-氰基-3-甲基-5-硝基吡啶(15g,92mmol)，并将反应物加热至回流，持续65小时。将反应物冷却，倒入冰-水中，并萃取入EtOAc中。将有机层收集，并将水层进一步用EtOAc洗涤。将有机萃取物合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用己烷中0-30％DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(8.5g,44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.44(t,3H),
2.67(s,3H),4.50(q,2H),8.39(d,1H),9.29(d,1H).
2.67(s,3H),4.50(q,2H),8.39(d,1H),9.29(d,1H).
[0891] 制备54
[0892] 外消旋2-(5-硝基吡啶-2-基)丙酸甲酯
[0893] 将外消旋1-(叔丁基)3-甲基2-甲基-2-(5-硝基吡啶-2-基)丙二酸酯(制备55,1.6g,5.15mmol)和TFA(15mL)在DCM(50mL)中的溶液在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并用三乙胺处理，然后直接通过硅胶柱色谱法(用石油醚中25％EtOAc洗脱)纯化，以得
1
到标题化合物(0.99g,91％)。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.61(d,3H),3.72(s,3H),4.10-
4.30(m,1H),7.51(d,1H),8.46(dd,1H),9.38(d,1H).
1
到标题化合物(0.99g,91％)。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.61(d,3H),3.72(s,3H),4.10-
4.30(m,1H),7.51(d,1H),8.46(dd,1H),9.38(d,1H).
[0894] 制备55
[0895] 外消旋1-(叔丁基)3-甲基2-甲基-2-(5-硝基吡啶-2-基)丙二酸酯
[0896] 在0℃下，向1-(叔丁基)3-甲基2-(5-硝基吡啶-2-基)丙二酸酯(PCT公开号WO 2007042299,1.9g,6.41mmol)在DMF(50mL)中的溶液加入碳酸铯(4.18g,13mmol)。将反应物在室温下搅拌10分钟，然后加入MeI(3.64g,25.7mmol)，并在室温下搅拌3小时。在10℃下，向反应物中加入水(40mL)，然后将其用EtOAc(3x50mL)萃取三次。将有机层合并，真空浓缩，
1
并通过硅胶柱色谱法(用戊烷中25％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(1.6g,80％)。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.47(s,9H),1.89(s,3H),3.80(s,3H),7.71(d,1H),8.47(m,
1H),9.35(d,1H).
1
并通过硅胶柱色谱法(用戊烷中25％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(1.6g,80％)。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.47(s,9H),1.89(s,3H),3.80(s,3H),7.71(d,1H),8.47(m,
1H),9.35(d,1H).
[0897] 制备56
[0898] N,6-二甲基-4-硝基吡啶酰胺
[0899] 向6-甲基-4-硝基-2-吡啶甲酸(2g,10mmol)在THF(50mL)中的溶液加入HOBt(1.77g,13.1mmol)、EDCI.HCl(2.30g,12mmol)、DIPEA(1.90mL,10.9mmol)和甲胺(5.46mL,10.9mmol)。将反应物在室温下搅拌15分钟，然后回流30分钟。将反应物倒入饱和NaHCO3水溶液中，并萃取入EtOAc中。将有机层收集，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物。
[0900] 制备57
[0901] 2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯
[0902] 向1-(叔丁基)3-甲基2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)丙二酸酯(制备58,6.6g,20mmol)在DCM(100mL)中的溶液加入TFA(100mL)，并将反应物在室温下搅拌20小时。将反应物真空浓缩，以得到三氟乙酸盐形式的标题化合物(6.8g,100％)。
[0903] 制备58
[0904] 1-(叔丁基)3-甲基2-(3-氯-5-硝基吡啶-2-基)丙二酸酯
[0905] 向NaH(6g,150mmol)在DMF(30mL)中的溶液缓慢加入叔丁基甲基丙二酸酯(5g,28.7mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后滴加2,3-二氯-5-硝基吡啶(5g,26mmol)。
将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化，以得到红色油形式的标题化合物(6.6g,77％)。
将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化，以得到红色油形式的标题化合物(6.6g,77％)。
[0906] 制备59
[0907] (S)-1-(3-氟-5-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-3-醇
[0908] 向NaH(227mg,5.68mmol,60％)在DME(30mL)中的混合物加入(S)-吡咯烷-3-醇(494mg,5.68mmol)，并将反应物在室温下搅拌1小时。在10℃下加入2-氯-4-氟-5-硝基吡啶(250mg,1.42mmol)在DME(10mL)中的溶液，并在室温下搅拌1小时。将反应物用水(30mL)猝灭，并用EtOAc(100mL×2)萃取。将有机层合并，真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用石油醚中0-50％EtOAc洗脱)纯化，以得到黄色固体形式的标题化合物(250mg,77％)。
[0909] 根据通过制备59所述方法，使用如下所述适合的氟吡啶，制备以下制备例。
[0910]
[0911] 制备63
[0912] 4-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(羟基甲基)吡啶甲酸甲酯
[0913] 在0℃下，向4-((叔丁氧羰基)氨基)吡啶-2,6-二甲酸二甲酯(制备64,300mg,0.967mmol)在DCM(2mL)和MeOH(1mL)中的溶液加入硼氢化钠(38mg,0.966mmol)。将反应物在该温度下搅拌30分钟，加入另外的硼氢化钠(17mg,0.483mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物通过加入1:1盐水:水猝灭，并用EtOAc萃取五次。将有机层合并，用硫酸-
钠干燥并真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(232mg,85％)。MS m/z 281[M-H][0914] 制备64
钠干燥并真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(232mg,85％)。MS m/z 281[M-H][0914] 制备64
[0915] 4-((叔丁氧羰基)氨基)吡啶-2,6-二甲酸二甲酯
[0916] 向4-溴吡啶-2,6-二甲酸二甲酯(2.4g,8.76mmol)在二氧杂环己烷(30mL)中的溶液加入氨基甲酸叔丁酯(1.13g,9.63mmol)、Pd2(dba)3(246mg,0.263mmol)、xantphos(207mg,0.350mmol)和碳酸铯(5.7g,17.5mmol)。将反应物用氩气脱气，并加热至85℃持续18小时。将反应物冷却，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用庚烷中20％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(1.2g,44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.55(s,9H),4.05(s,6H),7.30(d,1H),8.35(d,1H).
[0917] 制备65
[0918] 5-((二-[叔丁氧羰基])氨基)-3-氟吡啶甲酸
[0919] 在室温下，向5-((二-[叔丁氧羰基])氨基)-3-氟吡啶甲酸乙酯(制备66,3.3g,8.59mmol)在THF:水(46mL,15:8)中的溶液加入LiOH(0.72g,17.12mmol)。将反应物在室温下搅拌4小时。在0℃下，通过加入柠檬酸将反应物酸化至pH 3，并用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的有机层真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(2.6g,86％)。
[0920] MS m/z 357[M+H]+
[0921] 制备66
[0922] 5-((二-[叔丁氧羰基])氨基)-3-氟吡啶甲酸乙酯
[0923] 向二-[叔丁基氨基甲酸酯]-(6-溴-5-氟吡啶-3-基)(制备67,3.7g,9.46mmol)在乙醇(100mL)中的溶液加入Pd(OAc)2(1.6g,7.53mmol)、DPPP(3.12g,7.56mmol)和三乙胺(5.4g,53.46mmol)。将反应物在50psi的一氧化碳气氛下加热至60℃，持续18小时。将反应物过滤，并将滤液真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用石油醚中10％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(3.3g,90％)。
[0924] 制备67
[0925] 二-[叔丁基氨基甲酸酯]-(6-溴-5-氟吡啶-3-基)
[0926] 在室温下，向6-溴-5-氟-3-吡啶胺(2.6g,13.6mmol)在THF(100mL)中的溶液加入二甲酸二叔丁酯(8.81g,40.8mmol)、DIPEA(5.26g,40.8mmol)和DMAP(83.2mg,0.68mmol)。将反应物加热至回流，持续4小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用石油醚中
10％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(3.7g,56％)，将其直接用于下一步骤。
10％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(3.7g,56％)，将其直接用于下一步骤。
[0927] 制备68
[0928] (S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸
[0929] 向(S)-1-苯基乙基(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯(制备70,3.67g,16.2mmol)在MeOH(48mL)中的溶液加入1N NaOH(48mL,48mmol)，并将反应物在室温下搅拌1.5小时。将反应物真空浓缩，使用12N HCl(aq)酸化至pH＝5.8，并萃取入nBuOH。将有机层收集，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.5g,76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.90(m,2H),2.65(m,1H).
[0930] 制备69
[0931] (R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸
[0932] 根据对于实施例68所述方法，使用(S)-1-苯基乙基(R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯(制备71)制备标题化合物。
[0933] 制备70和71
[0934] (S)-1-苯基乙基(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯和(S)-1-苯基乙基(R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯
[0935] 向2,2-二氟-环丙烷甲酸(4.02g,33mmol)在DCM(140mL)中的溶液加入DCC(8.16g,39mmol)，随后加入DMAP(403mg,3.30mmol)，并将反应物搅拌10分钟。加入(S)-1-苯基乙-1-醇(4.83g,39mmol)，并将反应物在室温下搅拌72小时。将反应物过滤，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用0-5％EtOAc洗脱)纯化，以得到非对映异构体混合物形式的标题化合物。将非对映异构体使用如下所述色谱法进行分离：
[0936] Kromasil Silica 10um,4.6x250mm；运行时间14分钟；1.0mL/min；用庚烷中3％MTBE洗脱。
[0937] 峰1：Rt＝5.34分钟；(S)-1-苯基乙基(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯(制备70).1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.61(d,3H),1.74-1.79(m,1H),2.06-2.12(m,1H),2.45-2.53(m,1H),5.95-6.00(m,1H),7.33-7.42(m,5H).
[0938] 峰2：Rt＝6.22分钟；(S)-1-苯基乙基(R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸酯(制备71).1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.61(d,3H),1.74-1.79(m,1H),2.06-2.12(m,1H),2.45-2.53(m,1H),5.95-6.00(m,1H),7.33-7.42(m,5H).
[0939] 制备72
[0940] (1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸
[0941] 向(1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯(制备74,100mg,0.5mmol)在无水THF(10mL)中的溶液加入Pd/C(10mg)。将反应物脱气，然后在室温下于氢气球下搅拌1小时。将反应物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(56mg,100％)，将其直接在下一步骤中使用。
[0942] 制备73
[0943] (1S,2S)-2-氰基环丙烷-1-甲酸
[0944] 根据对于制备72所述方法，使用(1S,2S)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯(制备75)制备标题化合物。
[0945] 制备74和75
[0946] (1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯和(1S,2S)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯[0947] 向反式-外消旋2-氰基环丙烷-1-甲酸乙酯(制备77,24.7g,0.17mol)在THF(400mL)和水(200mL)中的溶液加入氢氧化锂(14.9g,0.35mol)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物用水(20mL)稀释，并用DCM(2x30mL)萃取。将水层用1M HCl酸化至pH 2，并三次萃取入EtOAc(3x400mL)中。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残渣由乙醚重结晶，以得到所述羧酸。向所述酸(8g,0.072mol)在DMF(150mL)中的部分加入碳酸铯(25.8g,0.35mol)，随后加入溴化苄(13.6g,0.08mol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物用水(300mL)稀释，并用EtOAc(3x400mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用石油醚中10-70％EtOAc洗脱)纯化，得到反式外消旋体形式的标题化合物(13.6g,94％)。
[0948] 将反式外消旋体通过如下所述手性色谱法进行分离：
[0949] 柱：OD 300mmx50mmx10μm.
[0950] 流动相：A：超临界CO2,B：EtOH(0.1％NH3H2O),A:B＝90:10；流速：180mL/min[0951] 制备74：(1S,2S)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯(5.80g,43％)
[0952] 峰1,Rt＝3.61分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.50-1.56(m,2H),1.96-1.99(m,1H),2.29-2.32(m,1H),5.16(s,2H),7.35-7.41(m,5H).
[0953] 制备75：(1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸苄酯(5.82g,43％)
[0954] 峰2,Rt＝3.87分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.50-1.56(m,2H),1.96-1.98(m,1H),2.30-2.32(m,1H),5.16(s,2H),7.35-7.41(m,5H).
[0955] 制备76和77
[0956] 顺式-外消旋和反式-外消旋2-氰基环丙烷-1-甲酸乙酯
[0957] 将丙烯腈(70g,1.32mol)在回流下搅拌，同时将重氮乙酸乙酯(70g,0.614mol)在2.5小时内分批加入。在加入完成后，将混合物在回流下搅拌另外1.5小时，然后通过蒸馏移除过量的丙烯腈。然后将反应物加热至125-130℃，并在此温度下保持，直至氮气产生停止，并将反应物加热至160-170℃，持续1小时，然后在氮气下冷却至室温。将反应物在真空下蒸馏，并将产物通过硅胶柱色谱法(用石油醚中10-50％EtOAc洗脱)纯化，以得到作为第一洗脱化合物的反式-外消旋2-氰基环丙烷-1-甲酸乙酯(24g,28％)和作为第二洗脱化合物的顺式-外消旋2-氰基环丙烷-1-甲酸乙酯(17g,20％)。
[0958] 制备76；
[0959] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.30(m,3H),1.42(m,1H),1.67(m,1H),1.82(m,1H),2.10(m,1H),4.23(m,2H)
[0960] 制备77；
[0961] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.28(m,3H),1.42(m,1H),1.66(m,1H),1.82(m,1H),2.10(m,1H),4.23(m,2H)；MS m/z 140[M+H]+
[0962] 制备78
[0963] N-(2-氰基乙基)-1H-咪唑-1-甲酰胺
[0964] 在0℃下，向CDI(250mg,1.56mmol)和三乙胺(236mg,2.34mmol)在无水THF(15mL)中的溶液加入2-氰基乙胺(100mg,0.78mmol)在无水THF(5mL)中的溶液，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用EtOAc洗脱)纯化，以得到无色油形式的标题化合物(44mg,34％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 2.79(t,2H),3.47(q,2H),7.12(s,1H),7.50(s,1H),7.66(br s,1H),8.39(s,1H).
[0965] 制备79
[0966] N-(氰基甲基)-1H-咪唑-1-甲酰胺
[0967] 向氨基乙腈硫酸氢盐(436mg,2.75mmol)和1,1’-羰基二咪唑(500mg,3.0mmol)在乙腈(3mL)中的溶液加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，并将反应物在室温下于密封容器中搅拌18小时。将残渣真空浓缩，在DCM(1mL)中溶解并过滤。将滤液使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-
10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物。
10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物。
[0968] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 3.50(s,2H),7.18(d,1H),7.30(d,1H),7.75(s,1H).[0969] 制备80
[0970] N-乙基-1H-咪唑-1-甲酰胺
[0971] 在室温下，将乙基胺盐酸盐(1.78g,21mmol)和CDI(4.20g,25mmol)在MeCN(20mL)中搅拌3小时。将反应物用DCM稀释、过滤并真空浓缩。将残渣进一步用DCM稀释，过滤，并使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-10％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物。
[0972] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.88(t,3H),3.50(m,2H),6.35(br s,1H),7.10(d,1H),7.40(d,1H),8.20(s,1H).
[0973] 制备81
[0974] N-异丙基-1H-咪唑-1-甲酰胺
[0975] 根据对于制备80所述方法，使用异丙基胺盐酸盐与DMF(1mL)制备标题化合物。将残渣在EtOAc中悬浮，过滤，将滤液用盐水洗涤，真空浓缩，并将其直接用于下一步骤。
[0976] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.20(m,6H),4.10(m,1H),6.95(s,1H),7.50(d,1H),7.80(d,1H),7.80(m,1H),8.20(d,1H).
[0977] 制备82
[0978] N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-咪唑-1-甲酰胺
[0979] 根据对于制备80所述方法，使用2,2,2-三氟乙-1-胺盐酸盐与DMF制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 4.00(m,2H),7.00(d,1H),7.60(d,1H),8.25(s,1H),9.00(br s,1H).
[0980] 制备83
[0981] 5-氨基-N-丙基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐
[0982] 将1-(叔丁基)3-乙基5-氨基-1H-吡唑-1,3-二甲酸酯(制备84,7.5g,29mmol)在丙胺(40mL)中的溶液加热至回流，持续48小时。将反应物冷却，真空浓缩，并在DCM(20mL)中溶解。加入二氧杂环己烷中的4N HCl(20mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将所得的固体过滤，用叔丁醚洗涤并干燥。将固体由2:1EtOAc:IPA重结晶，用炭脱色，以得到盐酸盐形式的标题化合物(5.1g,85％)。
[0983] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 0.95(t,3H),1.60(m,2H),3.30(m,4H),5.90(br s,1H).
[0984] 制备84
[0985] 1-(叔丁基)3-乙基5-氨基-1H-吡唑-1,3-二甲酸酯
[0986] 向(Z)-2-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基)肼-1-甲酸叔丁酯(制备85,10.5g,41mmol)在乙腈(150mL)中的溶液加入三乙胺(17.4mL,123mmol)，并将反应物在室温下搅拌
3小时。将反应物真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用庚烷中20-80％EtOAc洗脱)纯化。
3小时。将反应物真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用庚烷中20-80％EtOAc洗脱)纯化。
[0987] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.40(t,3H),1.60(s,9H),4.40(q,2H),5.40(br s,2H),5.95(s,1H).
[0988] 制备85
[0989] (Z)-2-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基)肼-1-甲酸叔丁酯
[0990] 在0℃下，在15分钟内，向乙酸钠(EtOH中21％溶液,51mL,137mmol)在乙醚(30mL)中的溶液滴加草酸二乙酯(20g,140mmol)在乙醚(80mL)中的溶液，随后在该温度下搅拌1小时。缓慢加入乙腈(7.15mL,137mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将所得的沉淀物过滤，用1:1乙醚:乙醇洗涤，并在真空下干燥。将固体(8.7g,53mmol)在乙醇(25mL)和乙酸(3.2g,53mmol)中溶解，并冷却至0℃。加入肼甲酸叔丁酯(7.75g,59mmol)，并将反应物在0℃下搅拌1小时，随后在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并在EtOAc和饱和碳酸钠水溶液之间分配。将有机层收集，用硫酸钠干燥并真空浓缩，以得到橙色固体形式的标题化合物(10.5g,77％)。
[0991] 制备86
[0992] 6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
[0993] 向6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(制备87,2g,0.0074mol)在MeOH(30mL)中的溶液加入氨(3g,0,044mol)，并将反应物在密封容器中加热至100℃，持续24小时。将反应物冷却，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.9g,90％)。
[0994] 制备87
[0995] 6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
[0996] 向2-氨基-5-溴吡啶(5g,0.029mol)在乙醇(180mL)中的溶液加入3-溴-2-氧代丙酸乙酯(5.64g,0.029mol)和NaHCO3(4.86g,0.058mol)，并将反应物加热至回流，持续18小时。将反应物冷却，真空浓缩，并在EtOAc和饱和碳酸钠水溶液之间分配。将有机层收集，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用石油醚中30％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(4.2g,45％)。
[0997] 制备88
[0998] (S)-N-((1S,5S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酰胺
[0999] 根据对于制备27所述方法，使用外消旋-(5-氨基-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)甲醇(制备99)和(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(制备68)与DCM中的DIPEA制备标题化合物。将外消旋残渣使用硅胶柱色谱法(用庚烷中50-100％EtOAc洗脱)纯化。将第二更极性的洗脱异构体收集为标题化合物。
[1000] MS m/z 363[M+H]+
[1001] 制备89
[1002] 外消旋-(1R,2R)-N-(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
[1003] 根据对于制备27所述方法，使用外消旋-(5-氨基-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)甲醇(制备99)和(1R,2R)-2-氰基环丙烷-1-甲酸(制备72)与DCM中的DIPEA制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用庚烷中50-100％EtOAc洗脱)纯化。+
MS m/z 352[M+H]
MS m/z 352[M+H]
[1004] 制备90
[1005] (1S,5R,6R)-3-(5-氟-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺盐酸盐
[1006] 向((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环-[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备94,1g,2.91mmol)在异丙醇(10mL)中的溶液加入1-甲基-1H-吡唑-4-基胺盐酸盐(506mg,3.79mmol)，并将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续1小时。将所得的固体过滤并干燥，以得到盐酸盐形式的标题化合物(991mg,86％)。MS m/z 304[M+H]+
[1007] 根据对于制备90或制备1所述方法，使用如下所述适合的卤化物和适合的胺，制备以下制备例。除非另外说明，将化合物以盐酸盐的形式分离。
[1008] 脱保护方法B：将Boc-保护的中间体在DCM中溶解，用TFA处理，并在室温下搅拌18小时。将反应物通过加入三乙胺碱化至pH＝10。将溶液真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)纯化。
[1009]
[1010] 制备94
[1011] ((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1012] 向((1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备101,1.8g,8.50mmol)和三乙胺(1.7g,16.8mmol)在MeOH(100mL)中的溶液加入2,4-二氯-5-氟嘧啶(1.5g,9.03mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并直接使用硅胶柱色谱法(用石油醚中20％EtOAc洗脱)纯化，以得到白色固体形式的标题化合物(2g,
69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.98(d,3H),1.39(m,1H),1.45(br s,9H),1.80(m,+
1H),3.67-4.17(m,4H),5.05(m,1H),7.86(d,1H).MS m/z343[M+H] 手性分析柱：Chiralpak AD-3 150mmx4.6mm I.D.,3μm；保留时间：3.83分钟；100％ee.流动相：甲醇(0.05％乙醇胺)，CO2由5％至40％，流速：2.5mL/min
69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.98(d,3H),1.39(m,1H),1.45(br s,9H),1.80(m,+
1H),3.67-4.17(m,4H),5.05(m,1H),7.86(d,1H).MS m/z343[M+H] 手性分析柱：Chiralpak AD-3 150mmx4.6mm I.D.,3μm；保留时间：3.83分钟；100％ee.流动相：甲醇(0.05％乙醇胺)，CO2由5％至40％，流速：2.5mL/min
[1013] 制备95和95A
[1014] N-((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺和
[1015] N-((1R,5S,6S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺
[1016] 根据制备94所述方法，使用反式-外消旋-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备102)制备反式-外消旋混合物形式的标题化合物。GCMS Rt＝5.91分钟MS m/z 310[M]
[1017] 还可根据制备94和102所述方法，使用N-((1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备107A)制备单个对映异构体形式的N-((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺。
[1018] 制备96
[1019] ((1R,5S,6S)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1020] 根据对于制备105、101和94所述方法，使用(1R,5S,6S)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(制备110)制备标题化合物。
[1021] 制备97
[1022] ((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1023] 根据对于制备94所述方法，使用((1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备101)和2,4-二氯-5-甲基嘧啶制备标题化合物。LCMS Rt＝0.90分+钟；MS m/z 339[M+H]
[1024] 制备98
[1025] 外消旋-N-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺[1026] 根据对于制备94所述方法，使用外消旋-N-(3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺(制备103)和2,4,5-三氯嘧啶制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)纯化。
[1027] 制备99
[1028] 外消旋-(5-氨基-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)甲醇[1029] 向外消旋-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备100,1.25g,2.64mmol)在DCM(25mL)中的溶液加入TFA(5mL)，并将反应物在0℃下搅拌30分钟，随后在室温下搅拌3小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液猝灭，用固体NaOH碱化至pH＝12，并萃取入DCM中。将有机层收集，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-5％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物(200mg,30％)。
[1030] LCMS Rt＝0.49分钟；MS m/z 261[M37Cl+H]+
[1031] 制备100
[1032] 外消旋-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1033] 根据对于实施例94所述方法，使用外消旋-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备104)和2,4-二氯-5-氟嘧啶制备标题化合物。MS m/z 473[M+H]+
[1034] 制备101
[1035] ((1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1036] 向((1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备105,3.4g,0.326mmol)在MeOH(200mL)中的溶液加入Pd(OH)2(20％,3g)，并将反应物在50psi氢气下，于室温下氢化2天。将反应物过滤，并真空浓缩，以得到标题化合物(2.3g,100％)。
[1037] 根据对于制备101或制备1所述方法，使用如下所述适合的苄基保护的中间体，制备以下制备例。
[1038]
[1039]
[1040] 制备105
[1041] ((1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯[1042] 向(1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(制备109,2.5g,0.0123mol)和三乙胺(2.5g,0.0247mmol)在DCM(50mL)中的溶液加入二甲酸二叔丁酯(2.6g,0.0130mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将反应物过滤，并将滤液直接通过硅胶柱色谱法(用石油醚中10％EtOAc洗脱)纯化，以得到黄色油形式的标题化合物(3.4g,
91％)。
91％)。
[1043] 制备106
[1044] 外消旋-(3-苄基-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1045] 根据对于制备105所述方法，使用外消旋-3-苄基-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(制备111)在TBME中制备标题化合物。MS m/z 433+[M+H]
[1046] 制备107
[1047] N-((1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺和N-((1R,5S,6S)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺
[1048] 向反式-外消旋-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(制备109和110,700mg,3.46mmol)在DCM(15mL)中的溶液加入DIPEA(1.20mL,6.92mmol)，随后加入环丙基羰基氯化物(362mg,3.46mmol)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物真空浓缩，并直接使用硅胶柱色谱法(用庚烷中10-100％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物的反式-外消旋混合物(400mg,43％)。
[1049] 还可根据该制备，使用(1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(制备667C)制备单一对映异构体形式的N-((1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺。
[1050] 制备108
[1051] 外消旋-N-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)环丙烷甲酰胺
[1052] 根据制备107所述方法，使用外消旋-3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺(Tetrahedron L.,(2003),44(12),2485-2487)和三乙胺与环丙基羰基氯化物制备标题化合物。将残渣直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)纯化。
[1053] 制备109和110
[1054] (1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺和(1R,5S,6S)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺
[1055] 在氮气下，向(Z)-2-(苄基(丁-2-烯-1-基)氨基)乙腈(制备112,64g,0.32mol)在无水THF(2L)中的溶液加入Ti(OiPr)4(300g,1.05mol)，随后在20-30℃下，在1.5小时内滴加环己基氯化镁(乙醚中2M溶液,800mL,1.6mol)。然后将反应物在室温下搅拌2小时。将反应物通过加入10％NaOH水溶液(1L)猝灭，并搅拌1小时，然后过滤并真空浓缩。将残渣在DCM(6L)中溶解，用水(2L)洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用DCM中10％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物的反式-外消旋混合物(827g,36％)。
[1056] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.07-1.08(m,1H),1.18-1.21(m,1H),1.25-1.28(d,3H),2.54-2.56(d,1H),2.76-2.81(m,2H),3.05-3.07(d,1H),3.55(s,2H),7.21-7.31(m,
5H).MS m/z 203[M+H]+
5H).MS m/z 203[M+H]+
[1057] 使用如下所述手性色谱法，可将所述反式-外消旋化合物分离为其对映异构体：
[1058] 手性柱：IC 300mmx50mmx10μm；流动相：A：超临界CO2,B:MeOH(含0.1％氨水溶液),A:B＝75:25，200mL/min
[1059] 手性LCMS QC：
[1060] Chiralpak Pheno Lux Cellulose-2；150mmx4.6mm I.D.5μm；流动相MeOH(0.05％乙醇胺)，CO25-60％；流速3mL/min。
[1061] (1R,5S,6S)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺
[1062] 第一洗脱异构体：Rt＝6.78分钟,89.9％ee.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.08-1.11(m,1H),1.16-1.22(m,1H),1.26(m,3H)2.54(d,1H),2.70-2.84(m,2H),3.05(d,1H),
3.59(s,2H),7.23-7.30(m,5H).
3.59(s,2H),7.23-7.30(m,5H).
[1063] (1S,5R,6R)-3-苄基-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺
[1064] 第二洗脱异构体：Rt＝6.10分钟,99.4％ee.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.05-1.13(m,1H),1.20(m,1H),1.26(m,3H),2.53(m,1H),2.71-2.84(m,2H),3.05(d,1H),3.58(s,2H),7.25-7.30(m,5H).
[1065] 制备111
[1066] 外消旋-3-苄基-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-胺
[1067] 根据对于制备109和110所述方法，使用2-(苄基(2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)烯丙基)氨基)乙腈(制备114)制备标题化合物。
[1068] 制备112
[1069] (Z)-2-(苄基(丁-2-烯-1-基)氨基)乙腈
[1070] 向2-(苄基(丁-2-炔-1-基)氨基)乙腈(制备113,100g,0.5mol)在MeOH(2000mL)中的溶液加入Lindlar催化剂(10g)，并将反应物在30℃下，于氢气球下搅拌24小时。将反应物1
过滤，并真空浓缩，以得到标题化合物。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.72-1.74(m,3H),
3.26-3.27(m,2H),3.45(s,2H),3.69(s,2H),5.45-5.48(m,1H),5.73-5.77(m,1H),7.29-
7.39(m,5H).
过滤，并真空浓缩，以得到标题化合物。H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.72-1.74(m,3H),
3.26-3.27(m,2H),3.45(s,2H),3.69(s,2H),5.45-5.48(m,1H),5.73-5.77(m,1H),7.29-
7.39(m,5H).
[1071] 制备113
[1072] 2-(苄基(丁-2-炔-1-基)氨基)乙腈
[1073] 向2-(苄基氨基)乙腈(制备115,666g,4.56mol)在MeCN(11L)中的溶液加入1-溴丁-2-炔(600g,4.51mol)和碳酸钾(1365g,14mol)，并将反应物加热至40℃，持续18小时。将反应物过滤，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用石油醚中3-10％EtOAc洗脱)纯化，以得到黄色油形式的标题化合物(700g,77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.72-1.74(m,3H),3.25-3.27(d,2H),3.45(s,2H),3.69(s,2H),7.29-7.39(m,5H).
[1074] 制备114
[1075] 2-(苄基(2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)烯丙基)氨基)乙腈
[1076] 根据制备113所述方法，使用((2-(溴甲基)烯丙基)氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷和2-(苄基氨基)乙腈(制备115)在75℃下6小时内制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 0.00(s,6H),0.80(s,9H),3.15(s,2H),3.35(s,2H),3.60(s,2H),4.10(s,2H),5.10(m,1H),5.20(m,1H),7.20-7.40(m,5H).
[1077] 制备115
[1078] 2-(苄基氨基)乙腈
[1079] 向苄胺(1250g,11.68mol)和DIPEA(2878g,22.31mol)在乙腈(13L)中的溶液加入2-溴乙腈(1340g,11.17mol)，并将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩，并在DCM(2.5L)中溶解。将溶液用水(1.5L x 2)洗涤，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用石油醚中
10-30％EtOAc洗脱)纯化(1600g,94％)。
10-30％EtOAc洗脱)纯化(1600g,94％)。
[1080] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 3.57(s,2H),3.94(s,2H),7.35-7.37(m,5H).[1081] 制备116
[1082] 2-(5-氨基吡啶-2-基)乙-1-醇
[1083] 根据对于制备40所述方法，使用2-(5-氨基吡啶-2-基)乙酸甲酯(PCT公开号WO2007042299)制备标题化合物。
[1084] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 2.80-2.85(t,2H),3.80(t,2H),7.05(m,2H),7.90(s,1H).
[1085] 制备117
[1086] 外消旋-1-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)乙-1-醇
[1087] 在0℃下，向外消旋-(5-氯-6-(1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(制备118,2.2g,8mmol)在MeOH(50mL)中的悬浮液加入HCl/二氧杂环己烷(4M,30mL)。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩以得到盐酸盐形式的标题化合物，将其直接用于下一步骤(2.2g,100％)。
[1088] 制备118
[1089] 外消旋-(5-氯-6-(1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
[1090] 在0℃下，向二叔丁基(6-乙酰基-5-氯吡啶-3-基)氨基甲酸酯(制备119,2.33g,6.7mmol)在MeOH(50mL)中的悬浮液加入硼氢化钠(656mg,17.25mmol)。将反应物在室温下搅拌3小时，然后通过加入水猝灭，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机层真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(2g,85％)。MS m/z 372[M+H]+
[1091] 制备119
[1092] (6-乙酰基-5-氯吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
[1093] 在-30℃下，向二叔丁基(5-氯-6-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氨基甲酸酯(制备120,2.1g,6.7mmol)在THF(150mL)中的悬浮液滴加MeMgCl(2.2mL,3mol/L)。将反应物在室温下搅拌3小时，然后通过加入水猝灭。将反应物萃取入EtOAc(3x 50mL)中，并真空浓缩，以得到白色固体形式的标题化合物(2.3g,77％)。MS m/z 271[M+H]+
[1094] 制备120
[1095] 二叔丁基(5-氯-6-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氨基甲酸酯
[1096] 在0℃下，向5-((二叔丁氧羰基)氨基)-3-氯吡啶甲酸甲酯(制备121,2g,5.18mmol)在THF/H2O(100mL/50mL)中的溶液加入LiOH(435mg,10.36mmol)，并在室温下搅拌2小时。将反应物用柠檬酸调节pH＝2，并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣(1.35g,3.6mmol)在DCM(100mL)中溶解，并在0℃下，用N,O-二甲基羟胺盐酸盐(423mg,4.3mmol)、三乙胺(1.1g,11mmol)和HATU(1.65g,4.3mmol)处理。
将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩，并直接使用硅胶柱色谱法(用石油醚中
30％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(1.4g,94％)。MS m/z 416[M+H]+
将反应物在室温下搅拌3小时。将反应物真空浓缩，并直接使用硅胶柱色谱法(用石油醚中
30％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(1.4g,94％)。MS m/z 416[M+H]+
[1097] 制备121
[1098] 5-((二叔丁氧羰基)氨基)-3-氯吡啶甲酸甲酯
[1099] 向5-氨基-3-氯吡啶甲酸甲酯(1.42g,7.63mmol)和二甲酸二叔丁酯(4.7g,18.8mmol)在THF(150mL)中的溶液加入DIPEA(2.95g,22.87mmol)，随后加入DMAP(47mg,
0.38mmol)。将反应物加热至70℃，持续3小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用石油醚中30％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(2.5g,85％)。MS m/z 387[M+H]+[1100] 制备122
0.38mmol)。将反应物加热至70℃，持续3小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用石油醚中30％EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(2.5g,85％)。MS m/z 387[M+H]+[1100] 制备122
[1101] (5-氨基-3-氯吡啶-2-基)甲醇
[1102] 根据对于制备40所述方法，使用5-氨基-3-氯吡啶甲酸甲酯制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用EtOAc中30％石油醚洗脱)纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 4.42-4.44(d,2H),4.88(t,1H),5.57(br s,2H),6.97(s,1H),7.83(s,1H).
[1103] 制备123
[1104] 1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-胺
[1105] 向4-硝基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑(制备124,119mg,0.70mmol)在MeOH(20mL)中的溶液加入湿Pd/C(30mg)，并将反应物在氢气球下于室温下氢化2小时。将反应物过滤，并将滤液真空浓缩，以得到标题化合物(100mg,100％)。
[1106] 制备124
[1107] 4-硝基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑
[1108] 向4-硝基-1H-吡唑(0.3g,2.66mmol)和3-碘-氧杂环丁烷(1.47g,7.99mmol)在DMF(13mL)中的溶液加入碳酸铯(1.7g,5.23mmol)，并将反应物加热至100℃，持续18小时。将反应物真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用EtOAc洗脱)纯化，以得到标题化合物(380mg,86％)。
[1109] 1H NMR(400MHz,MeOH-d4):δppm 5.02(br s,4H),5.61(br s,1H),8.24(br s,1H),8.68(br s,1H).
[1110] 制备125
[1111] 4-氨基-6-(羟基甲基)-N-甲基吡啶酰胺
[1112] 将4-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(羟基甲基)吡啶甲酸甲酯(制备63,220mg,0.78mmol)在MeOH中2M甲胺(4mL)中加热至60℃，持续18小时。将反应物冷却，并将所得的固体过滤，干燥，并在DCM(4mL)中溶解。向所述溶液中加入MeOH(1mL)，随后加入二氧杂环己烷中的4M HCl(3mL)，并将反应物在室温下搅拌4小时。将所得的固体过滤并干燥，以得到盐酸盐形式的标题化合物(75mg,2步40％)。LCMS Rt＝0.16分钟；MS m/z 182[M+H]+
[1113] 制备126
[1114] 4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺
[1115] 向N-乙基-4-((5-氟-4-(6-(2,2,2-三氟乙酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺(实施例121,100mg,0.21mmol)在MeOH(5mL)中的溶液加入1M NaOH(aq)(2mL)，并将反应物在50℃下搅拌1小时。将反应物真空浓缩，并在DCM和水之间分配。将有机相通过相分离筒收集，并真空浓缩，以得到标题化合物，将其直接在下一反应中使用。
[1116] 制备127
[1117] 4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯甲酰胺盐酸盐
[1118] 向4-((4-氯嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯甲酰胺(制备132,1.2g,4.3mmol)和3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(900mg,5mmol)在THF(20mL)中的溶液加入三乙胺(2mL,10mmol)，并将反应物加热至50℃持续18小时。将反应物冷却，并直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化。将残渣在1:1MeOH:DCM(10mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl(5mL)处理。将反应物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。将所得的固体收集为标题化合物的盐酸盐(1.5g,定量)。
[1119] MS m/z 339[M+H]+
[1120] 制备128
[1121] 4-((4-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺盐酸盐
[1122] 向3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(制备131,100mg,0.3mmol)和4-氨基-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺(PCT公开号WO2006109846,60mg,
0.34mmol)在二氧杂环己烷(3mL)中的溶液加入叔丁醇钠(35mg,0.36mmol)和RuPHOS(25mg,
0.034mmol)。将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续25分钟。将反应物冷却，过滤，并直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化。将残渣在DCM(5mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl(含数滴MeOH)处理，以得到溶液。将反应物在室温下搅拌18小时，并真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物，将其直接用于下一反应。
0.34mmol)在二氧杂环己烷(3mL)中的溶液加入叔丁醇钠(35mg,0.36mmol)和RuPHOS(25mg,
0.034mmol)。将反应物在微波辐射下加热至140℃，持续25分钟。将反应物冷却，过滤，并直接使用硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化。将残渣在DCM(5mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl(含数滴MeOH)处理，以得到溶液。将反应物在室温下搅拌18小时，并真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物，将其直接用于下一反应。
[1123] 制备129
[1124] 1-(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)-2,2,2-三氟乙-1-酮
[1125] 向3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(制备130,200mg,0.61mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入二氧杂环己烷中的4M HCl(4mL)，并将反应物在室温下搅拌以确保移除叔丁氧羰基保护基。将反应物真空浓缩，在DCM(5mL)中溶解，用TFAA(0.1mL)处理，并在室温下搅拌18小时。将反应物真空浓缩，并将残渣在DCM和水之间分配。将有机层通过相分离筒收集，并真空浓缩，以得到标题化合物，将其直接在下一步骤中使用。MS m/z 325[M+H]+
[1126] 制备130
[1127] 3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯
[1128] 向5-氟-2,4-二氯嘧啶(0.85g,5.1mmol)在MeOH(15mL)中的溶液加入3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(1g,5mmol)，随后加入三乙胺(3mL,20mmol)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将所得的沉淀物过滤，用MeOH洗涤，并干燥，以得到白色固体形式的标题化合物(1.46g,88％)。
[1129] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.28(s,9H),1.48(d,1H),2.48-2.53(m,1H),3.70(br s,2H),4.03-4.19(m,4H),8.88(d,1H).MS m/z 329[M+H]+
[1130] 制备131
[1131] 3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯
[1132] 根据对于制备130所述方法，使用2,4-二氯嘧啶和3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯制备标题化合物。将残渣使用硅胶柱色谱法(用庚烷中0-100％EtOAc洗脱)纯化。
[1133] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.24(s,9H),1.44(d,1H),2.48-2.56(m,1H),3.42(m,2H),3.83(br s,1H),3.92-4.04(m,1H),4.15(d,2H),6.70(br d,1H),8.09(d,1H).MS m/z 311[M+H]+
[1134] 制备132
[1135] 4-((4-氯嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯甲酰胺
[1136] 向4-((4-氯嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(制备133,1g,4mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入乙胺(4.4mL,8.81mmol)，随后加入HATU(1.71g,4.4mmol)和三乙胺(1.23mL,8.81mmol)。将反应物在室温下搅拌30分钟，然后倒入水中。将有机层分离，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残渣使用硅胶柱色谱法(用庚烷中0-100％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(1g,90％)。
[1137] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 1.05(t,3H),3.20-3.30(m,2H),7.00(m,1H),7.70(m,4H),8.30(t,1H),8.45(s,1H),10.25(br s,1H).MS m/z 277[M+H]+
[1138] 制备133
[1139] 4-((4-氯嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸
[1140] 将4-((4-羟基嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(制备134,5g,21.6mmol)和POCl3的混合物加热至回流，持续6小时，然后冷却至室温，并真空浓缩。将残渣倒入冰-水中，并将所得的固体通过过滤收集并干燥，以得到标题化合物，将其直接用于下一步骤。
[1141] 制备134
[1142] 4-((4-羟基嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸
[1143] 向4-羟基-2-甲基硫代嘧啶(5g,35.17mmol)在乙二醇二甲醚(20mL)中的溶液加入4-氨基苯甲酸(5.79g,42.2mmol)，并将反应物加热至回流，持续18小时。将反应物冷却至室温，并将所得的固体过滤，用乙醚洗涤，并干燥以得到标题化合物(6.5g,35.17mmol)。将样品纯化，并使用如实施例116(方法1,9min内5％B至100％B，在100％B下保持至10min)所述制备型HPLC进行纯化和分析，以得到以下数据。将剩余物直接用于下一步骤。LCMS Rt＝
1.37分钟；MS m/z 232[M+H]+
1.37分钟；MS m/z 232[M+H]+
[1144] 制备135
[1145] 2-(3-((1R,5S)-3-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁烷-3-基)乙腈盐酸盐
[1146] 向1-Boc-3-(氰基亚甲基)氮杂环丁烷(PCT公开号WO2013043964,60mg,0.308mmol)和4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,83mg,0.257mol)在MeCN(1mL)和EtOH(1mL)中的溶液加入DBU(77μl,0.514mmol)，并将反应物加热至90℃，持续24小时。加入另外的4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,3eq)，并将反应物继续在90℃下加热72小时。将反应物冷却，真空浓缩，并使用硅胶柱色谱法(用0-10％MeOH(含1％氨)洗脱)纯化。将残渣在DCM(1mL)中溶解，并用二氧杂环己烷中的4M HCl(1mL)处理。将反应物在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩，以得到盐酸盐形式的标题化合物。
[1147] LCMS Rt＝0.38分钟；MS m/z 380[M+H]+
[1148] 制备136
[1149] 2-((1R,5S)-3-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噁唑-5-甲酸乙酯
[1150] 将4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(制备19,300mg,0.614mmol)、2-氯-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(300mg,1.71mmol)、磷酸钾(163mg,0.613mmol)、X-phos(60mg,0.126mmol)和Pd2(dba)3(60mg,
0.065mmol)在DMSO(20mL)中的混合物用氮气吹扫1分钟。将反应物在微波辐射下加热至130℃持续30分钟。将反应物过滤，真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物(200mg,76％)。MS m/z 425[M+H]+
0.065mmol)在DMSO(20mL)中的混合物用氮气吹扫1分钟。将反应物在微波辐射下加热至130℃持续30分钟。将反应物过滤，真空浓缩，并通过硅胶柱色谱法(用DCM中0-20％MeOH洗脱)纯化，以得到标题化合物(200mg,76％)。MS m/z 425[M+H]+
[1151] 制备137和138
[1152] ((1S,5R,6R)-3-(2-((5-氯-6-((R)-1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯和((1S,5R,6R)-3-(2-((5-氯-6-((S)-1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-
1-基)氨基甲酸叔丁酯
1-基)氨基甲酸叔丁酯
[1153] 在氮气下，向外消旋-1-(5-氨基-3-氯吡啶-2-基)乙-1-醇(制备117,100mg,0.58mmol)、((1S,5R,6R)-3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯(制备94,187mg,0.46mmol)和Cs2CO3(375mg,1.16mmol)在DMA(5mL)中的溶液加入Pd(OAc)2(25mg,0.93mmol)和xantphos(65mg,0.93mmol)。将反应物在微波辐射下加热至110℃，持续1小时。将反应物真空浓缩，并直接使用硅胶柱色谱法(用石油醚中50％EtOAc洗脱)，随后制备型HPLC纯化，以得到外消旋标题化合物。通过如下所述制备型手性色谱法，将外消旋体分离为其对映异构体：
[1154] 柱：Chiralpak AS-3 150x4.6mm I.D.3μm
[1155] 流动相：CO2中乙醇(0.05％DEA)，从5％至40％；流速：2.5mL/min
[1156] 第一洗脱对映异构体：
[1157] 实施例137：((1S,5R,6R)-3-(2-((5-氯-6-((R)-1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基)-1
5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.88-0.90(m,3H),1.20-1.30(m,1H),1.40(m,12H),1.75(m,1H),3.60(m,
2H),3.90(m,2H),5.00(m,2H),7.55(br s,1H),8.00(m,1H),8.35(br s,1H),8.75(br s,
1H),9.55(s,1H).MS m/z 479[M+H]+；100％ee.
5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.88-0.90(m,3H),1.20-1.30(m,1H),1.40(m,12H),1.75(m,1H),3.60(m,
2H),3.90(m,2H),5.00(m,2H),7.55(br s,1H),8.00(m,1H),8.35(br s,1H),8.75(br s,
1H),9.55(s,1H).MS m/z 479[M+H]+；100％ee.
[1158] 第二洗脱对映异构体
[1159] 实施例138：((1S,5R,6R)-3-(2-((5-氯-6-((S)-1-羟基乙基)吡啶-3-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-6-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基)氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 0.88-0.90(m,3H),1.20-1.30(m,1H),1.35-1.39(m,12H),1.75(m,1H),
3.60(m,2H),3.90(m,2H),5.00(m,2H),7.55(br s,1H),8.00(m,1H),8.38(br s,1H),8.71(br s,1H),9.57(s,1H).MS m/z 479[M+H]+；100％ee.
3.60(m,2H),3.90(m,2H),5.00(m,2H),7.55(br s,1H),8.00(m,1H),8.38(br s,1H),8.71(br s,1H),9.57(s,1H).MS m/z 479[M+H]+；100％ee.
[1160] 制备139
[1161] (6-氯-5-氟吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
[1162] 向5-溴-2-氯-3-氟吡啶(62.5g,297mmol x 4)、Xantphos(38.4g,327.8mmol x 4)和Cs2CO3(6.87g,11.9mmol x 4)在二氧杂环己烷(2L x 4)中的溶液加入Pd2(dpa)3(10.8g,11.9mmol x 4)。将混合物加热至85℃过夜。将反应物合并，然后过滤。将滤液通过硅胶柱色谱法(用石油醚中5％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(170g,58％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.53(s,9H),6.78(br.s.,1H),7.99(d,1H),8.05(d,1H)
[1163] 制备140
[1164] 5-((叔丁氧羰基)氨基)-3-氟吡啶甲酸甲酯
[1165] 向(6-氯-5-氟吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(制备139,43.3g,175.67mmol x 3)、DPPP(14.46g,35.1mmol x 3)、TEA(124.1g,1.228mol x 3)在MeOH(600mL x 3)中的溶液加入Pd(OAc)2(7.88g,35.1mmol x 3)。将混合物在50psi CO，于60℃下搅拌36小时。将反应混合物合并，过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱法(用石油醚中10％EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(33.7g,71％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 1.53(s,9H)3.99(s,3H)7.06(br.s.,1H)8.13(d,1H)8.24(s,1H)
[1166] 制备141
[1167] 6-氯-5-氟吡啶-3-胺盐酸盐
[1168] 将5-((叔丁氧羰基)氨基)-3-氟吡啶甲酸甲酯(制备140,1.50g,5.55mmol)在1N HCl/二氧杂环己烷(70mL,4M)中的混合物于室温(10℃)下搅拌16小时。将混合物真空浓缩以得到标题化合物(1.1g,100％)，将其在未进一步纯化下于下一步骤中使用。
[1169] 制备142
[1170] 3-(2-((5-氟-6-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[1171] 在室温(10℃)下，向6-氯-5-氟吡啶-3-胺盐酸盐(制备141,500mg,1.54mmol)、(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备34,314mg,1.85mmol)和Cs2CO3(1000mg,3.08mmol)在DMA(15mL)中的混合物加入Xantphos(178mg,0.308mmol)和Pd(OAc)2(69.1mg,0.308mmol)。将混合物用N2鼓泡3分钟。将小瓶密封，然后用微波辐射在120℃下处理1小时。将混合物浓缩，并通过硅胶上的柱色谱法(石油醚中25％EtOAc至石油醚中75％EtOAc)纯化，以得到标题化合物(296mg,42％)。LCMS Rt＝
0.70分钟；MS m/z 459[M+H]
0.70分钟；MS m/z 459[M+H]
[1172] 制备143
[1173] 3-(2-((6-氨甲酰基-5-氟吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
[1174] 将3-(2-((5-氟-6-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(制备142,400mg,0.11mmol)在NH3/MeOH(80mL,4M)中的溶液在100℃下于100mL密封管中搅拌8h。将溶液真空浓缩以得到标题化合物(270mg,72％)，将其在未进一步纯化下于下一步骤中使用。LCMS Rt＝0.67分钟；MS m/z 444[M+H]
[1175] 制备144
[1176] 5-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-氟吡啶酰胺盐酸盐
[1177] 在0℃下，向制备143(250mg,0.564mmol)在THF(10mL)中的混合物加入HCl/二氧杂环己烷(20mL,4M)。将混合物在室温(10℃)下搅拌3h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)表明仍有一些原料剩余。将溶液真空浓缩以得到标题化合物(300mg,收率:100％)，将其直接用于下一步骤。
[1178] 生物学评价
[1179] 将本发明的化合物通过体外方法评价以测定其各自抑制JAK激酶(TYK2、JAK1、JAK2、JAK3)的能力。
[1180] 测定模式
[1181] 通过使用微流体测定监测合成肽被JAK家族四个成员(JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)各自的重组的人激酶域的磷酸化来测定人JAK抑制活性。反应混合物包含1μM荧光标记的合成肽(少于表观Km的浓度)和1mM ATP。优化各个测定条件的酶浓度和室温孵育时间来获得20％到30％的磷酸化肽产物的转化率。通过加入含有EDTA的终止缓冲液来终止反应。使用LabChip 3000迁移技术(Caliper Life Science)，对各个测定反应取样来测定磷酸化水平。该技术是基于分离的，允许直接检测荧光标记的底物和产物。通过对各个肽底物优化的真空压力和电场强度的组合来控制分离。
[1182] 测定方案
[1183] 1mM ATP下JAK Caliper酶测定
[1184] 将化合物加入到384孔板中。反应混合物包含10mM HEPES，pH为7.4，10mM MgCl2，0.01％BSA，0.0005％Tween 20，1mM ATP和1μM肽底物。JAK1和TYK2测定包含1μM的IRStide肽(5FAM-KKSRGDYMTMQID)，并且JAK2和JAK3测定包含1μM JAKtide肽(FITC-
KGGEEEEYFELVKK)。所述测定通过加入20nM的JAK1、1nM JAK2、1nM JAK或1nM TYK2酶启动，并在室温下对于JAK1孵育3小时，对于JAK2孵育60分钟，对于JAK3孵育75分钟或对于TYK2孵育135分钟。对于各个新酶制备物优化酶浓度和孵育时间，并随时间稍微修改来确保20％到
30％的磷酸化。通过加入15μL的180mM HEPES，pH为7.4,20mM EDTA和0.2％包被试剂3来终止测定。将测定板放置在Caliper Life Science LC3000仪器上，并使用合适的分离条件对各个孔取样来测量非磷酸化的和磷酸化的肽。
KGGEEEEYFELVKK)。所述测定通过加入20nM的JAK1、1nM JAK2、1nM JAK或1nM TYK2酶启动，并在室温下对于JAK1孵育3小时，对于JAK2孵育60分钟，对于JAK3孵育75分钟或对于TYK2孵育135分钟。对于各个新酶制备物优化酶浓度和孵育时间，并随时间稍微修改来确保20％到
30％的磷酸化。通过加入15μL的180mM HEPES，pH为7.4,20mM EDTA和0.2％包被试剂3来终止测定。将测定板放置在Caliper Life Science LC3000仪器上，并使用合适的分离条件对各个孔取样来测量非磷酸化的和磷酸化的肽。
[1185] 数据分析
[1186] 使用来自Caliper Life Sciences的HTS孔分析软件收集数据。数据分析的数据输出是基于峰高计算的转化的产物百分比(等式1)。
[1187] 等式1：％产物转化＝100*((产物)/(产物+底物))
[1188] 各个化合物浓度的效果百分比基于各个测定板内包含的阳性和阴性对照孔计算(等式2)。阳性对照孔包含对照化合物的饱和浓度，其产生的磷酸化水平与背景相近(即完全抑制了JAK1、JAK2、JAK3或TYK2)。阴性对照孔仅包含DMSO(与化合物孔浓度相同)，其用于设置测定中的基线活性(即没有抑制JAK1、JAK2、JAK3或TYK2)。
[1189] 等式2：％效果＝100*((样品孔-阴性对照)/(阳性对照-阴性对照))
[1190] 将效果百分比相对于化合物浓度做图。使用4参数逻辑模型拟合无约束S形曲线，并测定50％抑制所需的化合物浓度(IC50)(等式3)。
[1191] 等式3：y＝((max-min)/(1+((x/IC50)^s)))+min
[1192] 其中max是最大渐近线(完全抑制)，min是最小渐近线(无抑制)，s是坡度因子。各个化合物的IC50值以nM报道：
[1193]
[1194]
[1195]
[1196]
[1197]
[1198]
[1199]
[1200]
[1201]
[1202]
[1203]
[1204]
[1205]
[1206]
[1207]
[1208]
[1209]
[1210]
[1211]
[1212]
[1213] 2.在人全血流式细胞术测定中评价所选择化合物抑制干扰素α信号转导的能力。干扰素α通过TYK2和JAK1进行信号转导。
[1214] 人全血INFα诱导的STAT3磷酸化测定
[1215] 将测试品在DMSO中制备成30mM储备液。建立DMSO中11点2.5倍稀释系列，最高浓度为5mM。通过将4μL上述测试品溶液加入到96μL PBS中进行进一步稀释，最高浓度为200μM。人全血收集自健康的捐献者，使用静脉穿刺进入包含肝素钠的真空收集管(目录号366480；
Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)。使用前将血液温热至37℃。将人全血等分入96孔的深孔V形底板中(90μL/孔)，并用11个不同浓度(最终0.2％DMSO)的化合物在37℃下处理
60分钟。随后用IFNα(5μL/孔；最终5000U/Ml)处理15分钟。将样品用温热的1X裂解/固定缓冲液(700μL/孔)处理来终止活化，并进一步在37℃下孵育20分钟来裂解血红细胞。将板在
300x g下离心5分钟，吸取上清液，将细胞用800μL每孔的染色缓冲液洗涤。将洗涤的细胞团块用350μL每孔的预冷90％甲醇重悬浮，并在冰上孵育30分钟。在移除90％甲醇后，将细胞用染色缓冲液(800μL/孔)洗涤一次。将细胞团块用染色缓冲液(包含抗pSTAT3-
AlexaFluor647(1:150稀释，150μL/孔)重悬浮，在暗处于室温下孵育过夜。
Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)。使用前将血液温热至37℃。将人全血等分入96孔的深孔V形底板中(90μL/孔)，并用11个不同浓度(最终0.2％DMSO)的化合物在37℃下处理
60分钟。随后用IFNα(5μL/孔；最终5000U/Ml)处理15分钟。将样品用温热的1X裂解/固定缓冲液(700μL/孔)处理来终止活化，并进一步在37℃下孵育20分钟来裂解血红细胞。将板在
300x g下离心5分钟，吸取上清液，将细胞用800μL每孔的染色缓冲液洗涤。将洗涤的细胞团块用350μL每孔的预冷90％甲醇重悬浮，并在冰上孵育30分钟。在移除90％甲醇后，将细胞用染色缓冲液(800μL/孔)洗涤一次。将细胞团块用染色缓冲液(包含抗pSTAT3-
AlexaFluor647(1:150稀释，150μL/孔)重悬浮，在暗处于室温下孵育过夜。
[1216] 将样品转移到96孔U底板中，然后在配有HTS板装载器的FACSCalibur,FACSCanto或LSRFortessa(BD Biosciences)上进行流式细胞术分析。将淋巴细胞群体门控，用于pSTAT3直方图分析。使用未被刺激的细胞测定背景荧光并在峰的底部设置门控以包含约0.5％门控的群体。使用CellQuestTMPro版本5.2.1(BD Biosciences),FACSDiva版本6.2(BD Biosciences)或FlowJo版本7.6.1(Ashland,OR)软件进行直方图统计分析。通过将阳性群体百分比乘以其平均荧光来计算相对荧光单位(RFU)(其度量磷酸化STAT3的水平)。来自11个化合物浓度的数据(早各个浓度下一份)基于下式标准化为对照的百分比：％对照＝
100x(A-B)/(C-B)
100x(A-B)/(C-B)
[1217] 其中A是包含化合物和细胞因子的孔的RFU，B是不包含细胞因子和化合物的孔的RFU(最小荧光)，并且C是仅含有细胞因子的孔的RFU(最大荧光)。使用Prism版本5软件(GraphPad,La Jolla,CA)测定抑制曲线和IC50值。
[1218]
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