一种海水轮虫的纯化保种方法

摘要

本发明公开了一种海水轮虫的纯化保种方法，步骤包括捞取、过滤清洗、消毒、取样稀释、挑选纯化、保种培育。通过对海水轮虫原料进行过滤清洗处理，筛去除了原料中的草屑、泥皮和沙等杂质和原料中个体较大的枝角类和桡足类等敌害生物，使海水轮虫原料得到第一次的净化，同时，再通过消毒去除原料中带有的有害细菌，得到第二次净化，再通过显微镜下逐个筛查得到优质和健康的纯化后轮虫种源，最后采用消毒过的过滤海水为培养水质，培养出成活率较高的海水轮虫，为水产幼苗持续的提供健康的纯化的优质轮虫种源。

权利要求

1.一种海水轮虫的纯化保种方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)捞取：通过200～300目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料；

2)过滤清洗：用80～150目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质，然后再用200～300目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗；

3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，用100～200ppm的甲醛进行消毒10～15分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过200～300目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入容器内加水备用；

4)取样稀释：采用注射器对容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品进行稀释至100～120倍放在烧杯内备用；

5)挑选纯化：用注射器在烧杯内取稀释的原液，采用显微镜进行观察，挑选出有轮虫而且没有别的物质的原液水样，放入含有培养水质的三角瓶内；

6)保种培育：采用饵料在培养水质中进行培养，培养水质为消毒过的过滤海水。

2.根据权利要求1所述的海水轮虫的纯化保种方法，其特征在于，所述步骤5)中，取原液的水样滴放在玻片上，每片玻片放一滴水样，然后在显微镜下镜检逐个观察，发现载玻片内有单个轮虫而且没有别的物质的水样，就将其用消毒好的镊子夹起，连同玻片一起放进备好的消毒过的备有消毒海水的三角瓶内进行培养，每个三角瓶中放1～12个海水轮虫。

3.根据权利要求1所述的海水轮虫的纯化保种方法，其特征在于，所述步骤6)中，所述饵料为浓缩小球藻或扁藻，在培养过程中进行连续不间断的充气。

4.根据权利要求1所述的海水轮虫的纯化保种方法，其特征在于，所述步骤6)中，海水的PH值为7.8～8.2、溶氧度为4mg/L以上、温度为25～36℃、盐度为19～30‰。

说明书

一种海水轮虫的纯化保种方法

技术领域

[0001] 本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及一种海水轮虫的纯化保种方法。

背景技术

[0002] 轮虫广泛分布于湖泊、池塘、江河、近海等各类淡、咸水水体中，轮虫因其极快的繁殖速率，生产量很高，轮虫是大多数经济水生动物幼体的开口饵料，在渔业生产上有颇大的应用价值。随着水产养殖业的迅速发展，水产动物苗种繁育过程中，由于轮虫的特殊性，海水轮虫已经成为水产育苗不可缺少的开口鲜活饵料。

[0003] 目前轮虫的种源主要来源于野生轮虫，野生轮虫由河口处采取和人工室外大塘发酵培育粗养获得，由于采收野生轮虫的质量和供应量的不稳定以及人工室外发酵培育的轮虫是采用有机物发酵肥水(例如猪粪、鸡粪、化肥等)获得，这种培育方式中通常会产生各种浮游生物且难以控制种群及其数量，导致实际生产中产量不稳定。而且是在室外，会受天气影响较大，如果遇到连续阴天下雨，会导致产量下降。不仅如此，外源发酵物的加入，往往会引入有害菌群、病原体等，将会使海水鱼育苗的风险大大提高。这样孵化后的轮虫种源含有大量杂质和细菌，既影响了轮虫的培养又影响了水产幼苗的成活率。

[0004] 中国专利公布号CN102599109A公开了一种批量纯化轮虫的简易方法，包括以下步骤：捞取、初滤、清洗、药物处理、静置、分离、祛除药液。该方法不需要实验室精密设备，将原液中轮虫纯化，具有高效、经济、实用等特点。但是由于采用为氟氰菊脂为处理药物，鉴于氟氰菊脂具有毒性，或多或少会影响轮虫种源的生产，直接影响了在后续用于水产幼苗的养殖中水产幼苗的成活率。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种海水轮虫的纯化保种方法，解决了现有的轮虫纯化方法成活率低的技术问题。

[0006] 本发明采用的技术手段如下：一种海水轮虫的纯化保种方法，包括以下步骤：

[0007] 1)捞取：通过200～300目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料；

[0008] 2)过滤清洗：用80～150目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质，然后再用200～300目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗；

[0009] 3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，用100～200ppm的甲醛进行消毒10～15分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过200～300目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入容器内加水备用；

[0010] 4)取样稀释：采用注射器对容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品进行稀释至100～120倍放在烧杯内备用；

[0011] 5)挑选纯化：用注射器在烧杯内取稀释的原液，采用显微镜进行观察，挑选出有轮虫而且没有别的物质的原液水样，放入含有培养水质的三角瓶内；

[0012] 6)保种培育：采用饵料在培养水质中进行培养，培养水质为消毒过的过滤海水。

[0013] 优选地，所述步骤5)中，取原液的水样滴放在玻片上，每片玻片放一滴水样，然后在显微镜下镜检逐个观察，发现载玻片内有单个轮虫而且没有别的物质的水样，就将其用消毒好的镊子夹起，连同玻片一起放进备好的消毒过的备有消毒海水的三角瓶内进行培养，每个三角瓶中放1～12个海水轮虫。

[0014] 优选地，所述步骤6)中，所述饵料为浓缩小球藻或扁藻，在培养过程中进行连续不间断的充气。

[0015] 优选地，所述步骤6)中，海水的PH值为7.8～8.2、溶氧度为4mg/L以上、温度为25～36℃、盐度为19～30‰。

[0016] 采用本发明所提供的一种海水轮虫的纯化保种方法，通过对海水轮虫原料进行过滤清洗处理，筛去除了原料中的草屑、泥皮和沙等杂质和原料中个体较大的枝角类和桡足类等敌害生物，使海水轮虫原料得到第一次的净化，同时，再通过消毒去除原料中带有的有害细菌，得到第二次净化，再通过显微镜下逐个筛查得到优质和健康的纯化后轮虫种源，最后采用消毒过的过滤海水为培养水质，培养出成活率较高的海水轮虫，为水产幼苗持续的提供健康的纯化的优质轮虫种源。

具体实施方式

[0017] 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

[0018] 实施例1

[0019] 一种海水轮虫的纯化保种方法，步骤如下：

[0020] 1)捞取：通过300目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料。

[0021] 2)过滤清洗：用80目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质和大型敌害生物，然后再用300目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗。

[0022] 3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，具体地，将300目网捞内的轮虫原料放进透明的容器内加入海水，用100ppm的甲醛进行消毒15分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过300目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入5L的容器内加水搅拌充气备用。

[0023] 4)取样稀释：采用消毒好的1ml注射器对5L容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品1ml轮虫原液放进150ml的烧杯内稀释至100倍。

[0024] 5)挑选纯化：用消毒好的1ml注射器在150ml烧杯内取稀释的1ml原液，分别点滴在消毒好的玻片上，每片玻片上滴上1滴水样，采用显微镜进行观察，即将有水样的玻片放在显微镜下逐个镜检，观察它是否有杂质和轮虫；将镜检过的没有杂质和别的生物的且只有单个轮虫的玻片，用消毒过的镊子夹取玻片，放进备好水的消毒过的100ml的三角瓶内培养，每个三角瓶加水50ml，放入1～10个挑选纯化的轮虫，可根据生产需求时间而调节这个密度，但纯化的轮虫密度达到高峰时，可以将轮虫种进一步分瓶保种或者进行扩培保种。

[0025] 6)保种培育：将挑选纯化好的轮虫，放置在阳光可以直射的地方，日照时间越长为好，培养所用的水为过滤消毒的海水，保种培育要保持充足的光照时间，培养水体为50ml，海水的PH值控制在7.8左右、溶氧度控制在4mg/L以上、水温控制在25℃左右、盐度控制在20‰左右。保种培育的充气为连续不间断的充气，防止饵料下沉和补充足够的氧气，饵料为浓缩小球藻。

[0026] 实施例2

[0027] 一种海水轮虫的纯化保种方法，步骤如下：

[0028] 1)捞取：通过200目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料。

[0029] 2)过滤清洗：用100目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质和大型敌害生物，然后再用200目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗。

[0030] 3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，具体地，将300目网捞内的轮虫原料放进透明的容器内加入海水，用120ppm的甲醛进行消毒12分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过200目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入5L的容器内加水搅拌充气备用。

[0031] 4)取样稀释：采用消毒好的1ml注射器对5L容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品1ml轮虫原液放进150ml的烧杯内稀释至100倍。

[0032] 5)挑选纯化：用消毒好的1ml注射器在150ml烧杯内取稀释的1ml原液，分别点滴在消毒好的玻片上，每片玻片上滴上1滴水样，采用显微镜进行观察，即将有水样的玻片放在显微镜下逐个镜检，观察它是否有杂质和轮虫；将镜检过的没有杂质和别的生物的且只有单个轮虫的玻片，用消毒过的镊子夹取玻片，放进备好水的消毒过的100ml的三角瓶内培养，每个三角瓶加水50ml，放入1～10个挑选纯化的轮虫，可根据生产需求时间而调节这个密度，但纯化的轮虫密度达到高峰时，可以将轮虫种进一步分瓶保种或者进行扩培保种。

[0033] 6)保种培育：将挑选纯化好的轮虫，放置在阳光可以直射的地方，日照时间越长为好，培养所用的水为过滤消毒的海水，保种培育要保持充足的光照时间，培养水体为50ml，海水的PH值控制在8.0左右、溶氧度控制在4mg/L以上、水温控制在25℃左右、盐度控制在25‰之间。保种培育的充气为连续不间断的充气，防止饵料下沉和补充足够的氧气，饵料为浓缩小球藻。

[0034] 实施例3

[0035] 一种海水轮虫的纯化保种方法，步骤如下：

[0036] 1)捞取：通过230目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料。

[0037] 2)过滤清洗：用120目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质和大型敌害生物，然后再用230目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗。

[0038] 3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，具体地，将300目网捞内的轮虫原料放进透明的容器内加入海水，用150ppm的甲醛进行消毒10分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过230目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入5L的容器内加水搅拌充气备用。

[0039] 4)取样稀释：采用消毒好的1ml注射器对5L容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品1ml轮虫原液放进150ml的烧杯内稀释至100倍。

[0040] 5)挑选纯化：用消毒好的1ml注射器在150ml烧杯内取稀释的1ml原液，分别点滴在消毒好的玻片上，每片玻片上滴上1滴水样，采用显微镜进行观察，即将有水样的玻片放在显微镜下逐个镜检，观察它是否有杂质和轮虫；将镜检过的没有杂质和别的生物的且只有单个轮虫的玻片，用消毒过的镊子夹取玻片，放进备好水的消毒过的100ml的三角瓶内培养，每个三角瓶加水50ml，放入1～10个挑选纯化的轮虫，可根据生产需求时间而调节这个密度，但纯化的轮虫密度达到高峰时，可以将轮虫种进一步分瓶保种或者进行扩培保种。

[0041] 6)保种培育：将挑选纯化好的轮虫，放置在阳光可以直射的地方，日照时间越长为好，培养所用的水为过滤消毒的海水，保种培育要保持充足的光照时间，培养水体为50ml，海水的PH值控制在8.1左右、溶氧度控制在4mg/L以上、水温控制在27℃左右、盐度控制在28‰之间。保种培育的充气为连续不间断的充气，防止饵料下沉和补充足够的氧气，饵料为扁藻。

[0042] 实施例4

[0043] 一种海水轮虫的纯化保种方法，步骤如下：

[0044] 1)捞取：通过250目的筛绢网在河口处或者是在池塘具有海水轮虫种源处捞取海水轮虫原料。

[0045] 2)过滤清洗：用130目的筛绢网过滤掉海水轮虫原料中的杂质和大型敌害生物，然后再用250目的筛绢网沥干，最后用淡水冲洗。

[0046] 3)消毒：将冲洗后的海水轮虫原料放入备好水的容器内，具体地，将300目网捞内的轮虫原料放进透明的容器内加入海水，用200ppm的甲醛进行消毒15分钟，再将消毒过的海水轮虫原料再通过250目的筛绢网过滤沥干消毒的水，用海水冲洗后放入5L的容器内加水搅拌充气备用。

[0047] 4)取样稀释：采用消毒好的1ml注射器对5L容器内的海水轮虫原料进行取样，将取样品1ml轮虫原液放进150ml的烧杯内稀释至100倍。

[0048] 5)挑选纯化：用消毒好的1ml注射器在150ml烧杯内取稀释的1ml原液，分别点滴在消毒好的玻片上，每片玻片上滴上1滴水样，采用显微镜进行观察，即将有水样的玻片放在显微镜下逐个镜检，观察它是否有杂质和轮虫；将镜检过的没有杂质和别的生物的且只有单个轮虫的玻片，用消毒过的镊子夹取玻片，放进备好水的消毒过的100ml的三角瓶内培养，每个三角瓶加水50ml，放入1～10个挑选纯化的轮虫，可根据生产需求时间而调节这个密度，但纯化的轮虫密度达到高峰时，可以将轮虫种进一步分瓶保种或者进行扩培保种。

[0049] 6)保种培育：将挑选纯化好的轮虫，放置在阳光可以直射的地方，日照时间越长为好，培养所用的水为过滤消毒的海水，保种培育要保持充足的光照时间，培养水体为50ml，海水的PH值控制在8.2左右、溶氧度控制在4mg/L以上、水温控制在35℃左右、盐度控制在30‰之间。保种培育的充气为连续不间断的充气，防止饵料下沉和补充足够的氧气，饵料为扁藻。

[0050] 对比例

[0051] 步骤如下：捞取、初滤、清洗、药物处理、静置、分离、祛除药液。所述步骤的详细操作如下：第一步、捞取：在池塘中用200目筛绢抄网人工捞取或通过小功率小于0.5KW的抽水机将水抽进200目筛绢网袋过滤获取轮虫，所获取的轮虫通常混杂有线虫、挠足类成虫及挠足类六肢幼体、虾幼体，杂虾、原生动物等。第二步、初滤：用40目或60目抄网，除去杂草、大个体水生生物如杂虾等大型杂物，得到混杂有各种小个体动物的轮虫原液。第三步、清洗：使用200目筛绢抄网或200目筛绢网袋过滤原液，用消毒后的干净水冲洗干净，然后放进消毒干净20升～50升的分液漏斗中。

[0052] 第四步、药物处理：往分液漏斗中添加0.01ppm至0.015ppm的处理药物，用干净玻棒搅拌10秒～30秒，然后阻止漏斗中水的旋转，让漏斗中的水在短时间内静止下来。所述处理药物氟氰菊脂用量根据三角分液漏斗中的水体及用药浓度计算。第五步、静置：经过5～10分钟静置，不是轮虫的各种动物纷纷死亡，沉入漏斗底部成为下沉物；而轮虫不会死亡，浮游在分液漏斗表面处理液中。第六步、分离：打开分液漏斗的开关，用塑料桶收集下沉物，至分液漏斗内处理液不再有杂物为止，关好开关。进一步，若上述的原液太浓，下沉物可能带有较多的轮虫，可以再次放进漏斗中，加入洁净水进行再次的静止分离。第七步、祛除药液：打开开关，将分液漏斗中的处理液流进200目的筛绢网袋中，下面用干净塑料桶接着，待分液漏斗中的处理液全部流进筛绢网袋，用清毒后干净水清洗3次左右，得到纯化的轮虫。

[0053] 一、轮虫成活密度试验

[0054] 采用实施例1至实施例4中的方法和对比例的方法对轮虫进行培育10天，分别取1ml的水体原液3～5样品，分别进行3个批次的试验，将活力及死亡情况为检测其最主要指标，计算出在每1ml的水体原液中轮虫的平均成活密度数据如下：

[0055]

[0056] 由上表可知，实施例1至实施例4的方法培养的轮虫的平均成活密度较高，高于对比例中的平均成活密度。可见，本发明的方法培养出成活率较高的海水轮虫。

[0057] 二、不同浓度的甲醛消毒处理对比试验

[0058] 将收集到的海水轮虫原料，通过80和300目的筛绢网捞过滤沥干，用淡水冲洗沥干，放进50L的塑料桶内充气备用，再加入甲醛消毒剂，使用浓度分别为50ppm、100ppm、150ppm、200ppm、250ppm。将采收的同一批海水轮虫原料经初滤后，分别放入不同有甲醛浓度的锥形容器内充气培养。然后取经不同有甲醛浓度消毒后的轮虫进行细菌培养，再进行定性分析。经50ppm甲醛处理后的轮虫含有较多的菌落，经100ppm、150ppm、200ppm、250ppm甲醛处理后的轮虫均未发现菌落。取不同甲醛浓度消毒后的轮虫，分别进行3个批次的试验，在相同条件下轮虫的活力及死亡情况为检测其最主要指标，得出不同甲醛浓度消毒后轮虫的平均成活率结果如下：

[0059]

[0060]

[0061] 从上表看出，经250PPm甲醛消毒液的轮虫有死亡的个体，所以在海水中加入甲醛消毒剂的浓度控制在100～200ppm之间可达到最佳的效果。

[0062] 三、不同饵料的培育对比试验

[0063] 将采收同一批的轮虫，经消毒后，放在不同三角瓶烧杯内进行养殖培育保种，在相同条件培育10天，将镜检纯化后的轮虫玻片放进100ml的三角瓶内培育，分别用扁藻、浓缩小球藻和金藻进行培育比较轮虫的活力密度情况为检测最主要指标，分别进行3次试验，计算出在每1ml的水体原液中轮虫的平均成活密度数据如下：

[0064]

[0065] 从上表看出，经扁藻、浓缩小球藻和金藻培育的轮虫，经过10天的生长培育比较中，金藻培育的密度较低，扁藻和浓缩小球藻的密度相当，也就是说，在保种过程中，用浓缩小球藻和扁藻培育轮虫可以达到高成活密度的效果。

[0066] 综上所述，采用本发明所提供的一种海水轮虫的纯化保种方法，通过对海水轮虫原料进行过滤清洗处理，筛去除了原料中的草屑、泥皮和沙等杂质和原料中个体较大的枝角类和桡足类等敌害生物，使海水轮虫原料得到第一次的净化，同时，再通过消毒去除原料中带有的有害细菌，得到第二次净化，再通过显微镜下逐个筛查得到优质和健康的纯化后轮虫种源，最后采用消毒过的过滤海水为培养水质，培养出成活率较高的海水轮虫，为水产幼苗持续的提供健康的纯化的优质轮虫种源。

[0067] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。