一种新型的微环境生物大分子通用振荡器、其合成方法及应用

摘要

本发明公开了一种新型的微观环境生物大分子振荡器。该装置依托DNA折纸术，使用M13噬菌体的单链基因为骨架，使用百余种单链寡核苷酸引物将骨架核酸折叠成稳定的三联夹子结构，结合aptamer(适配体)对生物大分子的亲和能力，夹子的闭合与打开可以对游离的蛋白质进行动态捕获与释放，实现对微环境中生物大分子的浓度的调控的功能。外围夹子与中间夹子的打开闭合状态总是不同，当本装置对一对功能相拮抗的大分子浓度进行调节时，可以控制代谢反应速率和反应方向。该DNA装置的结构通过原子力显微镜得到观察，通过体外凝血等实验证明了对蛋白质分子的调控能力。

权利要求

1.一种微环境生物大分子通用振荡器，其特征在于，所述振荡器包括三联夹子结构，其包括第一外围夹子、第二外围夹子和中间夹子，所述中间夹子位于所述第一外围夹子和所述第二外围夹子之间，所述中间夹子的两肢分别与所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的内肢相连，所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的外肢分别固定在基座上；

所述第一外围夹子、第二外围夹子和中间夹子的两肢均由一个霍利结连接，所述中间夹子的两肢之间还设置有茎环结构，该茎环结构由一个反向互补序列组成，该序列能够与具体应用时环境中的序列完全互补的单链进行配对，作为动力装置；所述第一外围夹子、第二外围夹子和中间夹子的两肢顶端各连接有适配体。

2.一种如权利要求1所述的微环境生物大分子通用振荡器的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：以脚手架链作为骨架，采用订书钉链将所述脚手架链固定成所述的振荡器。

3.如权利要求2所述的合成方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)利用折纸软件进行所述振荡器的设计，首先设置基座的长、宽、高，然后确定所述三联夹子结构中每一个夹子的位置、长度与双螺旋股数，以及适配体在每一个夹子上的具体位置；

(2)对订书钉链的位置、长短以及双螺旋股数进行调整，添加所述脚手架链的序列，自动生成全部订书钉链的序列；

(3)实验合成步骤(2)所述的脚手架链和所述订书钉链。

4.如权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)首先确定所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的外肢的位置，根据所述第一外围夹子的外肢和所述第二外围夹子的外肢的长度以及所述第一外围夹子的外肢和所述第二外围夹子的外肢之间的宽度来确定所述中间夹子的位置、中间夹子两肢的长度和双螺旋股数、以及所述第一外围夹子的内肢和所述第二外围夹子的内肢的位置、长度以及双螺旋股数；所述适配体设置于所述各夹子的两肢的顶端。

5.如权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)所述订书钉链长度在14-49bp之间。

6.如权利要求3所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)所述订书钉链的双螺旋股数为

1-4股。

说明书

一种新型的微环境生物大分子通用振荡器、其合成方法及

应用

技术领域

[0001] 本发明以DNA折纸术(DNA origami)技术与核酸适配体技术为基础，在结构上利用现有的软件工具进行设计，功能验证方面结合分子生物学、生物化学等手段完成。具体地，涉及一种新型的微环境生物大分子通用振荡器及其合成方法和应用。

背景技术

[0002] DNA折纸技术是目前生物分子自主设计中，最热门的一项实验技术，它的基本原理是，利用DNA分子之间的碱基的互补配对原则，进行分子的自组装，得到预先设计好的分子结构。DNA折纸技术具有，分子结构设计可控、分子定点修饰精确、自组装实验条件简单等优点。适配体(Aptamer)也同样是近几年发展起来的热门技术，利用碱基互补配对的原则，DNA或RNA单链可以形成特定的二级结构而与某些大分子之间存在较强的亲和力，通过高通量的筛选，可以为各种生物大分子筛选出具有高亲和力的适配体。

[0003] 从蛋白质功能研究方面来看，目前针对蛋白质的研究主要集中在，分析构造出新的类型的蛋白质、对蛋白质结构的解析、对蛋白质作用过程中构象变化研究以及分离纯化研究等。而关于蛋白质的机械功能，以及构造机械纳米器件方面研究的较少。蛋白质分子在机械方面的研究，为蛋白质分子的应用研究开拓了一个新的领域。

[0004] 从纳米器件的功能研究来看，目前针对纳米分子结构设计主要是应用DNA折纸技术来进行研究，而在DNA折纸技术中人们大多关注DNA折纸的机械性能、或是应用其它小分子颗粒如纳米金球、纳米磁球、碳纳米管等的特殊性能，而忽略了折纸技术与蛋白质相结合，利用蛋白质的生物特性，合成生物分子器件。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种新型的微环境生物大分子通用振荡器及其合成方法和应用，其目的在于通过折纸技术合成包括三联夹子结构的生物分子器件，该生物分子器件可以通过调控三联夹子结构中各夹子的打开和闭合，实现蛋白质的释放或捕获，从而实现对微环境的蛋白质的浓度人工可控，进而用于制备治疗降血压、降血糖、降血脂、溶血栓的药物，由此解决现有技术缺乏将折纸技术与蛋白质相结合并应用的技术问题。

[0006] 为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种微环境生物大分子通用振荡器，所述振荡器包括三联夹子结构，其包括第一外围夹子、第二外围夹子和中间夹子，所述中间夹子位于所述第一外围夹子和所述第二外围夹子之间，所述中间夹子的两肢分别与所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的内肢相连，所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的外肢分别固定在基座上。

[0007] 优选地，所述中间夹子的两肢之间设置有茎环结构。

[0008] 优选地，所述第一外围夹子、第二外围夹子以及中间夹子的两肢均由一个霍利结连接。

[0009] 优选地，所述第一外围夹子、第二外围夹子和中间夹子的两肢的顶端均连接有适配体。

[0010] 按照本发明的另一个方面，提供了一种微环境生物大分子通用振荡器的合成方法，所述合成方法包括：以脚手架链作为骨架，采用订书钉链将所述脚手架链固定成所述的振荡器。

[0011] 优选地，所述的合成方法包括如下步骤：

[0012] (1)利用折纸软件进行所述振荡器的设计，首先设置基座的长、宽、高，然后确定所述三联夹子结构中每一个夹子的位置、长度与双螺旋股数，以及适配体在每一个夹子上的具体位置；

[0013] (2)对订书钉链的位置、长短以及双螺旋股数进行调整，添加所述脚手架链的序列，自动生成全部订书钉链的序列；

[0014] (3)实验合成步骤(2)所述的脚手架链和所述订书钉链。

[0015] 优选地，步骤(1)首先确定所述第一外围夹子和所述第二外围夹子的外肢的位置，根据所述第一外围夹子的外肢和所述第二外围夹子的外肢的长度以及所述第一外围夹子的外肢和所述第二外围夹子的外肢之间的宽度来确定所述中间夹子的位置、中间夹子两肢的长度和双螺旋股数、以及所述第一外围夹子的内肢和所述第二外围夹子的内肢的位置、长度以及双螺旋股数；所述适配体设置于所述各夹子的两肢的顶端。

[0016] 优选地，步骤(2)所述订书钉链长度在14-49bp之间。

[0017] 优选地，步骤(2)所述订书钉链的双螺旋股数为1-4股。

[0018] 优选地，合成步骤(3)所述脚手架链时，其退火反应体系的pH＝7.9，其中所述脚手架链浓度为10nM，所述订书钉链的浓度为100nM，Mg2+离子浓度为12mM，Tris浓度为5mM，EDTA浓度为1mM。

[0019] 优选地，合成步骤(3)所述脚手架链时，其退火程序为：95℃持续两分钟，92℃至80℃每分钟降温2℃，80℃至70℃每2分钟降温1℃，70至60℃每10分钟降温1℃，60℃至40℃每15分钟降温1℃，40℃至24℃每5分钟降温4℃，最后保存于4℃。

[0020] 按照本发明的另一个方面，提供了一种所述的微环境生物大分子通用振荡器的应用，其用作生物分子器件，通过调控三联夹子结构中各夹子的打开和闭合，实现蛋白质分子的的释放或捕获，从而实现对微环境的蛋白质分子的浓度的控制。

[0021] 优选地，所述振荡器用于制备治疗降血压、降血糖、降血脂、溶血栓的药物。

[0022] 总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：

[0023] (1)本发明利用DNA折纸技术设计合成了一种新型的微环境生物大分子通用振荡器，其为一种包含三联夹子结构的生物分子器件，利用适配体将DNA和蛋白质两种大分子结合在一起，实现动态的对于蛋白质分子的捕获和释放。

[0024] (2)本发明利用荧光共振能量转移对DNA结构的动态变化进行检测，同时验证了结构的完整性。本发明应用动态荧光标记的技术，实时观察机械构象的改变，简化了蛋白分子的研究方案。

[0025] (3)本发明构建了三联夹子结构，由于外围夹子的外肢被固定于基座且距离一定，所以中间夹子与外围夹子的打开与闭合状态总是不同；夹子闭合时可以夹住蛋白，打开时释放蛋白，当夹子末端连接可以亲和不同种类分子的适配体时，使得该装置同时对多种分子进行调节，提高了DNA装置的适用范围。

[0026] (4)本发明通过将蛋白质与折纸DNA结构结合起来，构建新型纳米机械器件。本发明设计的三联夹子结构的生物分子器件，夹子打开和闭合时可以分别释放和捕获蛋白质，通过各夹子特定距离的设计使得中间夹子与外围夹子的打开闭合状态总是不同，当本装置对一对功能相拮抗的蛋白质浓度进行调节时，有促进功能的蛋白质和有抑制作用的蛋白质的释放与捕获状态总是不相同的，这样不仅实现了对生物大分子浓度的控制，同时还能控制代谢反应速率和反应方向。

[0027] (5)三联夹子结构是一个基础结构，根据此结构进行夹子数量的扩增和适配体种类的增加，可以大大增强该DNA装置对于微环境中各种分子的调控能力。

附图说明

[0028] 图1为本发明微环境生物大分子通用振荡器的结构图；

[0029] 图2为实施例1合成的微环境生物大分子通用振荡器的结构图；

[0030] 图3为实施例1合成的微环境生物大分子通用振荡器两种构象的模拟图；

[0031] 图4为原子力显微镜下观察到的实施例1的振荡器的结构图；

[0032] 图5为实施例1荧光共振能量转移数据图片；

[0033] 图6为实施例1合成的微环境生物大分子通用振荡器与凝血酶(Thrombin)以不同比例混合时琼脂电泳图；

[0034] 图7为实施例1合成的微环境生物大分子通用振荡器体外凝血实验结果。

[0035] 在所有附图中，相同的附图标记用来表示相同的元件或结构，其中，1-中间夹子；2-第一外围夹子；3-第二外围夹子；4-基座；5-第一外围夹子外肢；6-第二外围夹子外肢；7-第一外围夹子内肢；8-第二外围夹子内肢；9-中间夹子茎环；10-适配体；11-Cy3染料；12-Cy5染料；13-蛋白质分子。

具体实施方式

[0036] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

[0037] 本发明提供的微环境生物大分子通用振荡器，如图1所示，包括三联夹子结构，该三联夹子结构包括第一外围夹子2、第二外围夹子3和中间夹子1，中间夹子1位于第一外围夹子2和第二外围夹子3之间，中间夹子1的两肢分别与第一外围夹子内肢7和第二外围夹子内肢8相连，第一外围夹子外肢5和第二外围夹子外肢6分别固定在基座4上。每一个夹子的两肢均由一个霍利结(Holiday junction)连接，中间夹子的两肢之间还设置有茎环结构，即中间夹子茎环9，该茎环结构由一个反向互补序列组成，该序列可以与具体应用时环境中的序列完全互补的单链进行配对，形成刚性较强的双链而伸展开，作为动力装置。中间夹子1与外围夹子串联连接处为单链序列，该单链序列中间有未配对的碱基以提供夹子之间的连接柔性，利于夹子的张开和闭合；该未配对的碱基个数越多，中间夹子1与外围夹子相连接的两肢的连接柔性越大，反之越小；第一外围夹子2、第二外围夹子3和中间夹子1的两肢顶端各连接有适配体10。

[0038] 该微环境生物大分子通用振荡器的合成方法为：利用折纸软件，以脚手架链作为骨架，采用订书钉链将所述脚手架链固定成上述三联夹子结构，其包括如下步骤：

[0039] (1)首先设置基座4的长、宽、高，然后确定所述三联夹子结构中每一个夹子的位置、长度与双螺旋股数，以及适配体10在每一个夹子上的具体位置；

[0040] (2)对订书钉链的位置、长短以及双螺旋股数进行调整，添加所述脚手架链的序列，自动生成全部订书钉链的序列；

[0041] (3)实验合成步骤(2)所述的脚手架链和所述订书钉链。

[0042] 其中，步骤(1)首先确定第一外围夹子外肢5和第二外围夹子外肢6的位置，根据第一外围夹子外肢5和第二外围夹子外肢6的长度以及第一外围夹子外肢5和第二外围夹子外肢6之间的宽度来确定中间夹子1的位置、中间夹子两肢的长度和双螺旋股数、以及第一外围夹子的内肢和第二外围夹子的内肢的位置、长度以及双螺旋股数；以基座4作为本发明振荡器器件的底部。适配体10设置于各夹子的两肢的顶端。

[0043] 步骤(1)具体参数设计需要满足荧光共振能量转移的检测以及适合所捕获蛋白的三维尺度。

[0044] 步骤(2)所述订书钉链长度优选在14-49bp之间，有少量略长或略短的引物也可以；部分特殊功能的引物长度不设限制，但是过长的引物合成有困难，并且对退火反应的程序有较大影响。

[0045] 步骤(2)所述订书钉链的双螺旋股数为1-4股。当订书钉链经过的双螺旋较多时，订书钉链过度折叠、连接效率较低；保证订书钉链在每股双螺旋中的配对碱基数超过4bp，数量较低时引物与脚手架链(Scaffold)的亲和力低，对脚手架链定型不利。

[0046] 合成步骤(3)的脚手架链时，其退火反应体系的pH＝7.9，其中所述脚手架链浓度为10nM，所述订书钉链的浓度为100nM，Mg2+离子浓度为12mM，Tris浓度为5mM，EDTA浓度为1mM。其退火程序为：95℃持续两分钟，92℃至80℃每分钟降温2℃，80℃至70℃每2分钟降温
1℃，70至60℃每10分钟降温1℃，60℃至40℃每15分钟降温1℃，40℃至24℃每5分钟降温4℃，最后保存于4℃。

[0047] 本发明选择长度较长、能同时存在于多股双螺旋(甚至所有双螺旋)中的单链作为脚手架链(Scaffold)，例如噬菌体基因M13mp18、p7308、p7560等；本发明的订书钉链(Staples)为长度较短，只存在于少数双螺旋、起到连接作用的寡核苷酸单链。

[0048] 作为优选的方案，本发明选择M13mp18噬菌体的基因为脚手架链(骨架)，利用CADnano软件进行三联夹子结构设计，在设计时有两个重要参数需要设置：第一个是双螺旋在平面的延伸方向，可以选择蜂窝形(任意三个相邻的双螺旋夹角为120°)或者是正方形(任意三个相邻的双螺旋夹角为90°)，优选蜂窝形，这种状态下的DNA结构更接近生理状态；第二个参数是Scaffold的序列，需要根据实验条件以及所需要的Scaffold的长度确定添加的序列，可以是噬菌体基因M13mp18、p7308、p7560等。

[0049] 作为优选的方案，当所述骨架使用B型DNA时，其双螺旋直径为2nm，纵向长度为0.34nm/bp；所述基座4的具体参数为：底座的长60nm，宽13nm，高10nm；外围夹子边缘肢高
29nm；夹子之间连接是3个未配对的碱基AAA；茎环结构在中间夹子的二分之一处；适配体在各肢的最顶端；染料Cy3和Cy5在外围夹子各肢的顶端处、适配体10以下的位置。

[0050] 本发明提供的微环境生物大分子通用振荡器可以用作生物分子器件，通过调控三联夹子结构中各夹子的打开和闭合，实现蛋白质分子13的释放或捕获，从而实现对微环境的蛋白质分子13的浓度的人工可控。当其中一个夹子由开放变为关闭状态时，另外一个夹子会联动地由关闭变为开放状态，从而实现对两个夹子联动地调控。

[0051] 通过选择或合成适当的适配体，利用本发明振荡器三联夹子结构的作用原理，将该振荡器用于制备治疗降血压、降血糖、降血脂、溶血栓的药物。

[0052] 以下为实施例：

[0053] 实施例1

[0054] 一种新型的微环境生物大分子通用振荡器，见附图2，其具体合成步骤是：

[0055] 步骤一：利用CADnano软件进行三联夹子结构设计，确定DNA结构基座4的长、宽、高，确定三联夹子结构中每一个夹子(第一外围夹子2、中间夹子1和第二外围夹子3)的长度与双螺旋股数，确定适配体10(Aptamer)在各夹子上的具体位置。

[0056] 三联夹子结构的设计的具体内容是：由M13mp18噬菌体的基因为骨架(脚手架链)，结合订书钉链构成DNA基座4和第一外围夹子外肢5和第二外围夹子外肢6，由订书钉链合成中间夹子1的两肢和第一外围夹子内肢7和第二外围夹子内肢8，每股双螺旋的相对位置确定，DNA双螺旋之间成120°角，形成蜂窝形状进行延伸。每个夹子的两肢均由一个霍利结(Holiday junction)连接，中间夹子的两肢之间有一个反向互补序列组成的茎环结构，即中间夹子茎环9(该序列可以与具体应用时环境中的序列完全互补的单链进行配对，作为动力装置)；中间夹子与外围夹子串联连接处为单链序列，该单链序列中间有3个未配对的碱基。

[0057] 借助于real-time FRET(实时荧光共振能量转移)技术，将染料分子Cy3染料11和Cy5染料12设置于第一外围夹子和第二外围夹子的顶端处、适配体10以下的位置，用于检测制备的三联夹子结构的开关和闭合。具体参数设计需要满足荧光共振能量转移的检测以及适合所捕获蛋白的三维尺度。使用B型DNA，其双螺旋直径为2nm，纵向长度为0.34nm/bp；DNA基座4的具体参数为：基座4长60nm，宽13nm，高10nm；外围夹子外肢高29nm；；中间夹子茎环9在中间夹子1的二分之一处；适配体10设置在各肢的最顶端。

[0058] 步骤二：对订书钉链的位置及长短进行调整，利用CADnano软件添加M13噬菌体序列，自动生成引物序列。

[0059] 步骤三：进行退火反应，在特定的程序以及缓冲条件下合成最终的结构。

[0060] 具体的退火反应的体系：50uL体系中，M13噬菌体终浓度为10nM，284条引物的终浓度为100nM，Mg2+离子终浓度为12mM，Tris终浓度为5mM，EDTA终浓度为1mM，pH＝7.9，由ddH2O补充体积。

[0061] 退火反应的具体温度和反应时间：95℃持续两分钟，92℃至80℃每分钟降温2℃，80℃至70℃每2分钟降温1℃，70至60℃每10分钟降温1℃，60℃至40℃每15分钟降温1℃，40℃至24℃每5分钟降温4℃，最后可保存于4℃。

[0062] 本实施例提供了其中一种新型的微观环境生物大分子浓度调节装置。该装置依托DNA折纸术，使用M13噬菌体的单链基因为骨架，使用百余种单链寡核苷酸订书钉序列将骨架核酸折叠成稳定的三联夹子结构，结合aptamer(适配体)独有的对生物大分子的亲和能力，夹子的闭合与打开可以对游离的蛋白质进行动态捕获与释放，实现对微环境中生物大分子的浓度的调控的功能。外围夹子与中间夹子的打开闭合状态总是不同，当本装置对一对功能相拮抗的大分子浓度进行调节时，可以控制代谢反应速率和反应方向。该DNA结构装置通过原子力显微镜证明了有稳定的结构，通过体外凝血等实验证明了对蛋白质分子的调控能力。

[0063] 图3为由3Dmax提供的DNA装置两种构象的模拟图。a：未加入可以与中间夹子茎环9结构配对单链时的状态，中间夹子1闭合，可以捕获蛋白，第一外围夹子2和第二外围夹子3打开，释放蛋白；b：加入可以与中间夹子茎环9结构配对单链时的状态，中间夹子1张开，可以释放蛋白，第一外围夹子2和第二外围夹子3闭合而捕获蛋白。

[0064] 实施例2

[0065] 利用原子力显微镜对实施例1制备得到的振荡器进行了观察，具体的制样及观察步骤为，首先将盖玻片浸泡于0.1mg/mL多聚L型赖氨酸的PBS溶液中过夜，然后向盖玻片表面加入7uL样品室温放置10分钟，之后用100uL 1xTAE溶液润洗盖玻片表面两次，在用原子力显微镜观察的过程中保持湿润。

[0066] 图4为原子力显微镜下观察到的实施例1的三联夹子结构(振荡器)。a和b分别为在不同放大比例下用原子力显微镜观察到的振荡器；c：中间夹子1张开，第一外围夹子2和第二外围夹子3闭合时原子力显微镜图片，由于中间夹子1与基座4电荷相同互斥，导致中间夹子1向外翻折，但是并不影响整体结构与功能；d：原子力显微镜产出的样品高度数据，峰形中的高度能与该振荡器的框架一致；e：使用CADnano软件设计的振荡器图，解释c中中间夹子1外翻的模型。

[0067] 实施例3

[0068] 利用real-time FRET(实时荧光共振能量转移)技术检测实施例1制备的三联夹子结构(振荡器)的动态变化，其具体操作步骤为：向该装置中加入能与中间夹子茎环9结构相配对的引物，将混合物和未加入引物的该装置在37℃下放置4小时，将样品加在标准的显微用玻片上用以检验荧光染料是否正确连接；将载玻片光滑面用0.1mg/mL多聚L型赖氨酸的PBS溶液浸泡过夜，再在空气中自然晾干；将5uL样品加到载玻片上，室温下避光放置15分钟后盖上盖玻片；用连续线性模式进行观察，所有图片在100倍放大的条件下拍摄。

[0069] 图5为本实施例荧光共振能量转移数据图片。在本发明中，外围夹子的两肢顶端处、适配体10以下的位置分别用Cy3染料11和Cy5染料12进行修饰，当外围夹子打开时，荧光分子的距离较远，不能发生荧光共振能量转移，此状态下Cy3的荧光可以被检测到，Cy5的不能，反之外围夹子闭合时，荧光分子距离较近，发生能量转移，此时Cy5的能量升高可以被检测到，相应的Cy3的荧光强度减弱。图3中的能量变化验证了DNA装置处于不同状态。

[0070] 实施例4

[0071] 以凝血酶为例，用于调节微环境中凝血酶浓度，将实施例制备的振荡器与凝血酶分别以1:0,1:2,1:5,1:10和1:20的终浓度进行混合，在25℃条件下静置2小时；用1.5％的琼脂(含有0.1％EB)在80V电压下电泳40分钟检测结合程度。

[0072] 以凝血酶为例，通过体外凝血实验(Prothrombin time test)验证因浓度改变而导致的凝血速率的变化。血液准备：用牛源纤维蛋白原加少量红墨水模拟血液，300uL/管分装于2mL的离心管中；将0.6uL样品(能够捕获蛋白构象的DNA装置与凝血酶)(只有凝血酶的溶液)加入到每支离心管中；37℃水浴锅静置，每隔1分钟从水浴锅中取出一只试管，倒置；凝固的样品倒置后不会掉落，据此来判断模拟血液的凝固情况。

[0073] 图6为实施例1制备的振荡器与凝血酶(Thrombin)以不同比例混合时琼脂电泳图。随着凝血酶的比例的上升，电泳条带迁移速率变慢，说明该振荡器与凝血酶成功结合；1:0至1:10比例时条带逐渐减慢，1:10至1:20条带变化不明显，说明该振荡器与蛋白的结合比例饱和状态在1:10左右。

[0074] 图7为体外凝血实验。a:实验组(experiment)加入实施例1制备的振荡器与与凝血酶的混合样品，对照组(control)加入等量的凝血酶样品，每支离心管在37℃水浴锅静置，每隔1分钟从水浴锅中取出一只试管，倒置，凝固的样品倒置后不会掉落，据此来判断模拟血液的凝固情况。实验结果说明，实验组中振荡器捕获凝血酶，降低了环境中游离凝血酶的浓度，与对照组相比延长了凝血时间；b:检测每支离心管中的吸光度，随着血液凝固，吸光度逐渐上升，实验组与对照组相比到达同样的吸光度需要更长的时间，证明了实验组凝血效率的降低。

[0075] 本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。