一种卡巴他赛磷脂组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种卡巴他赛磷脂组合物、及其制备方法和应用。所述卡巴他赛磷脂组合物包括卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇。该卡巴他赛磷脂组合物解决了药物不稳定、临床使用前配制步骤繁琐、现有脂质制剂体内外稳定性差等问题，提高药物在体内循环时间，具有一定的靶向功能，使药物富集于肿瘤部位，降低毒副作用，大大提高了生物利用度。

权利要求

1.一种卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，包括卡巴他赛脂质复合物、磷脂和胆固醇，所述卡巴他赛脂质复合物由卡巴他赛和负电荷磷脂组成，卡巴他赛和负电荷磷脂的质量比为1:1～1:30；所述卡巴他赛、磷脂和胆固醇之间的质量比为1:(5～30):(0.2～10)；所述卡巴他赛磷脂组合物的粒径为50～300nm，其中，所述卡巴他赛磷脂组合物由包括以下步骤的制备方法得到：

(1)将卡巴他赛和负电荷磷脂加到有机溶剂中，20～80℃下搅拌0.5～2小时，得到澄清透明的溶液，取出溶液进行旋转蒸发或喷雾干燥以除去有机溶剂，即得卡巴他赛脂质复合物；

(2)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，40～80℃旋转蒸发或喷雾干燥除去有机溶剂，加入水形成混悬液，在压力为10000～30000psi下高压均质或挤出后，即得卡巴他赛磷脂组合物；或(3)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中得有机相，将其注入到水中在转速5000～30000rpm下高速搅拌，在压力为10000-30000psi下高压均质或挤出，即得卡巴他赛磷脂组合物。

2.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，

所述负电荷磷脂选自磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺中的任意一种或几种；

所述磷脂酰甘油选自心磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰甘油；

所述磷脂酰乙醇胺选自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。

3.根据权利要求2所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述磷脂酰甘油为二硬脂酰磷脂酰甘油。

4.根据权利要求2所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述磷脂酰乙醇胺为聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。

5.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、氢化卵磷脂、鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱中的任意一种或几种。

6.根据权利要求5所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述磷脂为氢化大豆磷脂。

7.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述卡巴他赛磷脂组合物的粒径为50～200nm。

8.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述卡巴他赛磷脂组合物的药物包封率大于80％。

9.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述卡巴他赛在卡巴他赛磷脂组合物中的浓度不低于1mg/mL。

10.根据权利要求1所述的卡巴他赛磷脂组合物，其特征在于，所述卡巴他赛磷脂组合物进一步包含冻干保护剂，所述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、麦芽糖、白蛋白中的一种或多种，所述冻干保护剂的用量为每1重量份的磷脂加1～50重量份的冻干保护剂。

11.权利要求1-10中任一项所述卡巴他赛磷脂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将卡巴他赛和负电荷磷脂加到有机溶剂中，20～80℃下搅拌0.5～2小时，得到澄清透明的溶液，取出溶液进行旋转蒸发或喷雾干燥以除去有机溶剂，即得卡巴他赛脂质复合物；

(2)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，40～80℃旋转蒸发或喷雾干燥除去有机溶剂，加入水形成混悬液，在压力为10000～30000psi下高压均质或挤出后，即得卡巴他赛磷脂组合物；或(3)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中得有机相，将其注入到水中在转速5000～30000rpm下高速搅拌，在压力为10000-30000psi下高压均质或挤出，即得卡巴他赛磷脂组合物。

12.权利要求11所述卡巴他赛磷脂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将卡巴他赛和负电荷磷脂加到有机溶剂中，20～80℃下搅拌0.5～2小时，得到澄清透明的溶液，取出溶液进行旋转蒸发或喷雾干燥以除去有机溶剂，即得卡巴他赛脂质复合物；

(2)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，40～80℃旋转蒸发或喷雾干燥除去有机溶剂，加入含有冻干保护剂的水溶液形成混悬液，在压力为10000～30000psi下高压均质或挤出后，即得卡巴他赛磷脂组合物；或(3)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中得有机相，将其注入到含有冻干保护剂的水中，在转速5000～30000rpm下高速搅拌，在压力为10000-30000psi下高压均质或挤出，即得卡巴他赛磷脂组合物。

13.如权利要求11或12所述的卡巴他赛磷脂组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)和(3)中的有机溶剂各自独立地为选自氯仿、甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚和丙酮中一种或几种。

14.如权利要求13所述的卡巴他赛磷脂组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)和(3)中的有机溶剂各自独立地为选自氯仿、甲醇和乙醇中一种或几种。

15.如权利要求1-10中任一项所述的卡巴他赛磷脂组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

16.如权利要求15所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为前列腺癌、非小细胞肺癌、胃癌或乳腺癌。

17.如权利要求15所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为耐药性肿瘤，所述耐药性肿瘤为耐药性前列腺癌、耐药性非小细胞肺癌、耐药性胃癌或耐药性乳腺癌。

说明书

一种卡巴他赛磷脂组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种卡巴他赛磷脂组合物。同时，本发明还涉及所述卡巴他赛磷脂组合物的制备方法及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

背景技术

[0002] 卡巴他赛是一种半合成紫杉烷类化合物，其前体物从紫杉树针叶中提取而获得，化学名称为4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧基-1-羟基-7β，10β-二甲氧基-9-氧代紫杉-11-烯-13α-基(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸酯。美国FDA于2010年6月17日批准其上市，与泼尼松联用治疗既往用含多西他赛治疗方案的激素难治性转移性前列腺癌(Hormone-refractory metastatic prostate cancer，HRPC)患者。大规模III期癌症试验显示，接受多烯紫杉醇为基础的化疗、且疾病进展的去势治疗失败转移性前列腺癌男性患者，用卡巴他赛治疗可显著延长总生存期，使死亡风险降低了30％。

[0003] 卡巴他赛作为微管抑制剂，能与微管蛋白结合，促使微管双聚体装配成微管，阻止其去多聚化过程，抑制微管分解使细胞阻滞于G2和M期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。紫杉类化合物中多西他赛和紫杉醇对P糖蛋白具有很高的亲和力，因此容易耐药。与多西他赛相比，卡巴他赛对P糖蛋白的亲和力低，且卡巴他赛通过血脑屏障的能力强于多西他赛和紫杉醇，此外，卡巴他赛即使对多西他赛不敏感的肿瘤模型也显示出广谱的体内抗肿瘤活性。与其它紫杉醇类药物相比，该药发生药物耐受性的机率低，可用于治疗多药耐药性肿瘤。

[0004] 目前，上市的卡巴他赛注射液是由法国Sanofi-Aventis公司研制，商品名为“Jevtana”，为两支西林瓶的组合包装，一支为60mg卡巴他赛溶于1.5mL吐温80溶液中，另一支为溶剂，为5.7mL 13％(w/w)乙醇水溶液，这种制剂在向病人中输注前还需要两步稀释过程。在第一步中，必须将含有卡巴他赛和吐温80的小药瓶与含有13％乙醇溶液的另一个小药瓶混合；在第二步中，将该混合溶液用盐水或5％葡萄糖稀释，稀释后需在24小时内使用，否则将会产生沉淀。这样使得该药物注射液在临床使用中存在一些问题：(1)吐温80在临床应用中易产生不良反应并引起较多的并发症，较为常见的包括严重的过敏反应、体液潴留等，因此在使用前均须使用抗组胺类药物和非甾体抗炎药物进行预处理，即使处理后，患者仍有可能出现不同程度的过敏反应，需随时进行观察。此外，吐温80还具有溶血性、黏性大，且不能与聚氯乙烯输送装置一起使用(倾向于浸出高毒性的邻苯二甲酸二乙基己酯)等问题，因此给临床应用带来诸多不便和安全性问题。(2)药物使用前的配制过程过于繁琐，不便于病人的使用。因此，急需开发一种方便临床使用、质量可控、稳定性好、高效、低毒的卡巴他赛新剂型降低毒副作用，充分发挥其抗肿瘤活性。

[0005] 针对卡巴他赛上市制剂存在的问题，制剂领域内的专业人员提出了不少的解决方案：中国专利CN103768018A公开了一种卡巴他赛脂质体注射剂及其制备方法，该脂质体主要通过薄膜分散法制备而成，该工艺只适合实验室规模制备脂质体，难以实现工业化生产。中国专利CN104473873A公布了一种卡巴他赛长循环脂质体注射液及其制备方法，该脂质体处方中含表面活性剂聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)，可能带来一些安全隐患；另外该处方组成中不含胆固醇，会大大降低脂质体体内外的稳定性，进而影响疗效。中国专利CN104306333A公开了一种卡巴他赛脂质微球注射液及其制备方法，处方组成包含了表面活性剂(吐温类)和两亲性聚氨基酸，临床使用中仍有可能产生过敏、溶血等不良反应。中国专利CN103393632A和CN104224750A均公开了卡巴他赛白蛋白纳米制剂，白蛋白纳米制剂本身存在体内外稳定性差且易被内皮网状系统清除等缺点，因而限制了该系统药效上的提高。
中国专利CN104856973A公开了卡巴他赛胶束载药系统，该系统除了载体材料本身安全性存在问题外，胶束制剂在体内的不稳定性是该系统临床应用的另一大障碍。

[0006] 脂质体作为药物载体，既起到了对药物的保护作用，又提高了药物对机体特定部位的靶向性，因此在提高药效方面具有很多优越的特性。已公开的卡巴他赛脂质体虽然较市售注射液有一定优势，但存在以下缺陷：(1)脂质体体内外稳定性差，长期贮存过程中脂质体易聚集；脂质体进入体内后，由于血液中白蛋白、调理素、抗体等各种因素的作用以及所用脂质相变温度低于体温等原因，包封药物快速泄露，大大削弱脂质体制剂的优势，限制其疗效的发挥。(2)所采用的脂质体制备方法及工艺难以实现工业化生产，且制得的脂质体粒径难以控制，分布不均匀，包封率低、稳定性差。(3)现有脂质体处方中还含有表面活性剂，仍存在安全性问题。因此，对于卡巴他赛这个特定的药物来说，必须针对其现有制剂出现的问题，寻找特定的制剂及制备工艺，以实现提高制剂稳定性及疗效、降低毒副作用的目的。考虑到卡巴他赛结构中含有大量的酯键，易水解、不稳定，本专利公开的新型卡巴他赛磷脂组合物，将卡巴他赛和负电荷磷脂制成脂质复合物，一方面，卡巴他赛脂质复合物不仅提高了卡巴他赛的化学稳定性，还利用卡巴他赛和负电荷磷脂之间的相互作用增加了卡巴他赛磷脂组合物制剂的稳定性，降低药物的泄露，解决了目前卡巴他赛脂质体制剂体内外稳定性差的问题；另外，针对目前卡巴他赛脂质体制剂均采用薄膜分散法制备难以实现工业化生产的问题，本发明公开了采用喷雾干燥工艺制备磷脂组合物的方法。

发明内容

[0007] 针对现有技术的不足，本发明的目的之一是为临床提供一种稳定的卡巴他赛磷脂组合物，此卡巴他赛磷脂组合物，不含吐温-80，大大降低卡巴他赛现有制剂的不良反应。

[0008] 本发明的另一目的是提供一种上述卡巴他赛磷脂组合物的制备方法。

[0009] 本发明所述卡巴他赛磷脂组合物包括卡巴他赛脂质复合物、磷脂和胆固醇，所述卡巴他赛脂质复合物由卡巴他赛和负电荷磷脂组成，两者质量比为1:1～30。所述卡巴他赛、磷脂和胆固醇之间的质量比为1:(5～50):(0～25)，优选为1:(5～30):(0.2～10)。

[0010] 所述负电荷磷脂选自磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺中的任意一种或几种，磷脂酰甘油可选自心磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和二油酰磷脂酰甘油(DOPG)，优选为二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)；磷脂酰乙醇胺可选自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)、聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DMPE)、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)，优选为聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)，其中所述PEG的分子量为1000-5000Da，优选地，所述PEG分子量为2000Da。

[0011] 所述磷脂选自大豆磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、氢化卵磷脂(HEPC)、鞘磷脂(SM)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)和二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)中的一种或几种，优选为氢化大豆磷脂(HSPC)。

[0012] 卡巴他赛磷脂组合物的粒径会影响其在体内的循环时间，为使卡巴他赛磷脂组合物在体内消除速度变慢并保持较高的血药浓度，从而发挥长效作用。因此，在本发明实施例中，所述卡巴他赛磷脂组合物的粒径为50～300nm，优选为50～200nm。

[0013] 本发明的卡巴他赛磷脂组合物中，药物包封率大于80％，以便脂质制剂能通过增强渗透和滞留作用(EPR效应)聚集在肿瘤组织，减少在其它正常组织的分布，从而提高药效，降低毒性。

[0014] 本发明的卡巴他赛磷脂组合物中卡巴他赛的浓度不低于1mg/mL。

[0015] 所述卡巴他赛磷脂组合物进一步包括冻干保护剂，其用量按磷脂重量比计算，1重量份的磷脂加1～50重量份的冻干保护剂。在本发明优选实施例中，所述冻干保护剂为选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、麦芽糖、白蛋白中的一种或多种。

[0016] 本发明另一方面提供了制备卡巴他赛磷脂组合物的方法，其包括以下步骤：

[0017] (1)将卡巴他赛和负电荷磷脂加到有机溶剂中，20～80℃下搅拌0.5～2小时，得到澄清透明的溶液，取出溶液进行旋转蒸发或喷雾干燥以除去有机溶剂，即得卡巴他赛脂质复合物；

[0018] (2)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，40～80℃旋转蒸发或喷雾干燥除去有机溶剂，加入水形成混悬液，在10000～30000psi压力下高压均质或进行高压挤出后，即得卡巴他赛磷脂组合物；或

[0019] (3)将卡巴他赛脂质复合物、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中得有机相，将其注入到水中高速搅拌，高速搅拌的转速为5000～30000rpm，在10000～30000psi压力下高压均质或进行挤出处理后，即得卡巴他赛磷脂组合物。

[0020] 进一步地，在步骤(2)或步骤(3)的水中加入选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖和麦芽糖、白蛋白中的一种或多种作为冻干保护剂，其用量按磷脂重量比计算，1重量份磷脂加1～50重量份冻干保护剂。

[0021] 本发明卡巴他赛磷脂组合物的制备方法中，所述步骤(1)、(2)和(3)中的有机溶剂各自独立的选自氯仿、甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚和丙酮中一种或几种，优选为氯仿、甲醇和乙醇中的一种或几种。

[0022] 本发明还提供了一种上述卡巴他赛磷脂组合物在制备用于治疗肿瘤或耐药性肿瘤的药物中的用途。

[0023] 在优选实施方案中，所述肿瘤包括但不限于前列腺癌、非小细胞肺癌、胃癌或乳腺癌。

[0024] 在优选实施方案中，所述肿瘤为耐药性肿瘤，所述耐药性肿瘤包括但不限于耐药性前列腺癌、耐药性非小细胞肺癌、耐药性胃癌或耐药性乳腺癌。

[0025] 术语“肿瘤”是指肿瘤性细胞的集合体。术语“肿瘤性细胞”是指具有不受正常的细胞生长调控机制调控的具有异常生长表型的细胞。由于肿瘤性细胞不一定在任何时间点上都复制，因此术语“肿瘤性细胞”包括活跃复制的细胞以及临时处于静息状态(G1或G0)不复制的细胞。局灶化的肿瘤性细胞群被称为肿瘤。如上面所提到的，本文所用的术语肿瘤也指弥散性恶性疾病，如白血病，这种疾病就没有局灶化的实质肿瘤块。肿瘤可以是恶性的，也可以是良性的。恶性肿瘤也被称为癌。在优选实施方案中，肿瘤是指上皮癌，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、肾癌、胃癌、膀胱癌或卵巢癌，或者胃肠道的任何癌。

[0026] 本发明与现有技术相比具有以下优点：

[0027] 本发明将负电荷磷脂与卡巴他赛制备成脂质复合物，再与磷脂、胆固醇制备成卡巴他赛磷脂组合物，可通过负电荷磷脂与卡巴他赛之间的相互作用，增加药物在卡巴他赛磷脂组合物中的体内外稳定性，大大减少药物在存放过程或体内循环过程中药物的泄露，从而有助于提高疗效。这一技术优势在其它相关专利文献中未见报道。

[0028] 采用磷脂组合物作为卡巴他赛的载体，将药物包封于磷脂组合物中，能明显提高药物在体内的化学稳定性，更好的发挥抗肿瘤作用；因卡巴他赛磷脂组合物属纳米制剂范畴，能显著延长药物在血液中的循环时间，改善其体内分布，增加药物在肿瘤部位的聚集，提高药效，降低毒副作用，从而提高治疗指数。

[0029] 本发明的卡巴他赛磷脂组合物的粒径为50～200nm，能有效穿透肿瘤血管，通过增强渗透和滞留作用(EPR效应)聚集在肿瘤部位，实现被动靶向作用。

[0030] 本发明卡巴他赛磷脂组合物的制备可采用注入法或喷雾干燥法结合高压均质或挤出工艺实现，较现有制备方法更易实现工业化生产，并能解决现有制备技术粒径大且不均匀的问题，更好控制产品的质量。

附图说明

[0031] 图1为根据本发明实施例1制备的卡巴他赛磷脂组合物复溶后的粒径分布图；

[0032] 图2为根据本发明实施例2制备的卡巴他赛磷脂组合物复溶后的zeta电位图；

[0033] 图3为根据本发明实施例1制备的卡巴他赛磷脂组合物的药效测试结果图；

[0034] 图4为根据本发明实施例1制备的卡巴他赛磷脂组合物在耐药性肺癌的药效测试结果图。

具体实施方式

[0035] 下面结合具体实例来进一步描述本发明，这些实例仅是示范性的，并不对本发明的范围构成任何限制。

[0036] 在以下实施例中，所有原料和辅料采用市售产品，其中卡巴他赛购自上海佰世凯化学科技有限公司公司；HSPC、DPPC、DMPC、DSPC、DOPC、大豆磷脂、卵磷脂、DSPG、DMPG、DPPG、DOPG、PEG-DPPE、PEG-DSPE、PEG-DMPE、胆固醇均购自上海艾韦特医药科技有限公司。

[0037] 粒径测定仪(型号：Nano-ZS90)购自英国Malvern公司；高压均质机(型号：M-110)购自美国Microfluidics公司；冷冻干燥剂(型号：RD85S4)购自美国Millrock公司；喷雾干燥仪(型号：B-290)购自瑞士BUCHI公司。

[0038] 实施例1卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0039] 称取60mg卡巴他赛、300mg DSPG加入10mL氯仿:甲醇(9:1，v/v)中于60℃搅拌0.5h，至溶液澄清透明，旋转蒸发得卡巴他赛脂质复合物。

[0040] 取上述卡巴他赛脂质复合物、1200mg HSPC、120mg胆固醇，用40mL氯仿:甲醇(9:1，v/v)溶液溶解，经喷雾干燥(入口温度：45℃)得白色颗粒，加入30mL含10wt％蔗糖的水溶液水化，然后在20000psi压力下高压均质5次，即得淡蓝色带乳光的卡巴他赛磷脂组合物，分装至西林瓶中，冷冻干燥(预冻：-35℃5h，初级干燥：-30℃10h，二次干燥：4℃10h)即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶后，测定卡巴他赛磷脂组合物粒径、电位及包封率，其粒径(见图1)、电位(见图2)及包封率分别为83.4nm、-64.3mv和86.2％。

[0041] 实施例2卡巴他赛磷脂组合物注射液的制备

[0042] 称取60mg卡巴他赛、600mg DMPG加入20mL氯仿:甲醇(1:1，v/v)中40℃搅拌1h，至溶液澄清透明，喷雾干燥(入口温度：55℃)得卡巴他赛脂质复合物。

[0043] 取上述卡巴他赛脂质复合物、1200mg大豆磷脂、200mg胆固醇于250mL圆底烧瓶中，用40mL氯仿:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下经减压干燥除去有机溶剂，在圆底烧瓶壁形成脂膜，加入30mL纯水水合，依次经0.2μm、0.1μm微孔滤膜过滤器挤出各4次，即得卡巴他赛磷脂组合物注射液，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为80.5nm和86.7％。

[0044] 实施例3卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0045] 称取60mg卡巴他赛、1200mg DPPG加入20mL二氯甲烷:甲醇(1:1，v/v)中60℃搅拌1h，至溶液澄清透明，喷雾干燥(入口温度：55℃)得卡巴他赛脂质复合物。

[0046] 取上述卡巴他赛脂质复合物、1800mg卵磷脂、200mg胆固醇于250mL圆底烧瓶中，用40mL二氯甲烷:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下经减压干燥除去有机溶剂，在圆底烧瓶壁形成脂膜，加入30mL含10wt％蔗糖及5wt％乳糖的水溶液水合，在20000psi压力下高压均质4次，将所得混悬液分装至西林瓶中，经冷冻干燥即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。将卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶后，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为
150.4nm和83.1％。

[0047] 实施例4卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0048] 称取60mg卡巴他赛、100mg DOPG加入10mL氯仿：甲醇(1:1，v/v)中60℃搅拌0.5h，至溶液澄清透明，喷雾干燥(入口温度：55℃)得卡巴他赛脂质复合物。

[0049] 取上述卡巴他赛脂质复合物、300mg DPPC、100mg胆固醇于250mL圆底烧瓶中，用20mL氯仿:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下经减压干燥除去有机溶剂，在圆底烧瓶壁形成脂膜，加入30mL含10wt％海藻糖及5wt％甘露醇的水溶液水合，在20000psi压力下高压均质4次，将所得混悬液分装至西林瓶中，经冷冻干燥即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。将卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶后，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为
110.3nm和87.8％。

[0050] 实施例5卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0051] 称取60mg卡巴他赛、1000mg PEG-DPPE加入10mL乙醇中55℃搅拌0.5h，至溶液澄清透明，经旋转蒸发得卡巴他赛脂质复合物。

[0052] 取上述卡巴他赛脂质复合物、2000mg DMPC、100mg胆固醇于250mL圆底烧瓶中，用20mL乙醇溶解，于60℃下经减压干燥除去有机溶剂，在圆底烧瓶壁形成脂膜，加入20mL含
10wt％蔗糖及2.5wt％麦芽糖的水溶液水合，在20000psi压力下高压均质4次，将所得混悬液分装至西林瓶中，经冷冻干燥即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。将卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶后，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为180.3nm和85.1％。

[0053] 实施例6卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0054] 称取60mg卡巴他赛、400mg PEG-DSPE加入10mL乙醇中50℃搅拌40min，至溶液完全澄清透明，喷雾干燥(入口温度：55℃)得卡巴他赛脂质复合物。

[0055] 将上述脂质复合物、DSPC1200mg、胆固醇400mg于250mL圆底烧瓶中，以20mL无水乙醇溶解后经喷雾干燥(入口温度：45℃)得白色颗粒，加入30mL10wt％蔗糖水溶液水合变成白色脂质悬液，依次经0.45μm、0.22μm、0.1μm微孔滤膜整粒(各3次)，将最终分散物分装入西林瓶中，然后冷冻干燥即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。将卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为90.3nm和83.9％。

[0056] 实施例7卡巴他赛磷脂组合物冻干粉的制备

[0057] 称取60mg卡巴他赛、500mg PEG-DMPE加入10mL乙醇中50℃搅拌40min，至溶液完全澄清透明，喷雾干燥(入口温度：55℃)得卡巴他赛脂质复合物。

[0058] 将上述脂质复合物、DOPC 2400mg、胆固醇400mg加入3mL无水乙醇溶解后并于60℃保温，加入相同温度的30mL10wt％蔗糖水溶液，在转速20000rpm下高速搅拌3min，再在15000psi压力下高压均质3次，将最终分散物分装入西林瓶中，然后冷冻干燥即得卡巴他赛磷脂组合物冻干粉。将卡巴他赛磷脂组合物冻干粉加水复溶，测得卡巴他赛磷脂组合物粒径和包封率分别为170.7nm和82.9％。

[0059] 实施例8卡巴他赛磷脂组合物的稳定性

[0060] 取实施例1中的卡巴他赛磷脂组合物冻干粉适量，密封，于冰箱4℃放置，于0、1、2、3、6月取样，对粒径、包封率、含量等指标进行测定，评价卡巴他赛磷脂组合物的稳定性。含量测定以及有关物质检测均采用，高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈、甲醇、水的混合液为流动相，检测波长为230nm；有机溶剂残留采用气相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤE)，选用PEG-20毛细管柱，N2为载气，结果见表1。结果表明本发明的卡巴他赛磷脂组合物在放置6个月后，各项质量指标与0月相比无明显变化，表明本发明磷脂组合物稳定性良好，具有潜在临床应用价值。

[0061] 表1 本发明卡巴他赛磷脂组合物稳定性

[0062]

[0063]

[0064] 实施例9卡巴他赛磷脂组合物的急性毒性研究

[0065] 利用实施例1中所述的制剂评价卡巴他赛磷脂组合物的毒性。

[0066] 取体重18～22g性别一致的昆明小鼠60只(购自中国科学院上海药物研究所实验动物中心)，随机分成6组，每组10只，分别尾静脉注射卡巴他赛磷脂组合物和卡巴他赛注射液，组间剂量按等比级数排列，比值1∶0.8，观察并记录给药10天内各组动物的反应和死亡率，用简化机率单位法计算LD50，其95％的可信限分别为：

[0067] 卡巴他赛注射液 LD5095％的可信限＝60.4±1.2mg/kg，

[0068] 卡巴他赛磷脂组合物 LD5095％的可信限＝140.7±1.6mg/kg。

[0069] LD50毒性实验结果表明，卡巴他赛磷脂组合物与卡巴他赛注射液相比，毒性明显降低。

[0070] 实施例10卡巴他赛磷脂组合物的药动学研究

[0071] 将实施例1的卡巴他赛磷脂组合物制剂加5％葡萄糖注射液复溶，卡巴他赛浓度约为2mg/mL。参考Jevtana说明书配制卡巴他赛注射液作为参比制剂，并将其以5％葡萄糖注射液稀释至2mg/mL备用。

[0072] 将体重100～200g的12只SD大鼠(购自中国科学院上海药物研究所实验动物中心)随机分成甲乙2组，实验前禁食一夜。甲组为对照组，于右后股静脉注射卡巴他赛注射液(2mg/mL)；乙组为受试组，于右后股静脉注射卡巴他赛磷脂组合物，分别于0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24小时眼眶取血，取血量约0.3mL，置于肝素化离心管中，于转速
10000rpm下离心10min，取100μL血浆，加入400μL甲醇，涡旋1min，-20℃放置1h用以沉淀蛋白，然后于转速20000rpm下离心10min。取上清液进样测定血液中卡巴他赛药物浓度。药代动力学参数用WinNonlin Professional v6.3(Pdayarsight,USA)软件采用非房室模型分析处理，结果见表2。

[0073] 表2 本发明卡巴他赛磷脂组合物和卡巴他赛注射液的药动学参数

[0074] 参数 卡巴他赛磷脂组合物 注射液Kel(L/kg) 0.47±0.02* 0.98±0.05
t1/2(h) 8.37±0.17* 2.57±0.14
AUC0-24(h*μg/L) 9372±216* 3478±173
AUC0-∞(h*μg/L) 9732±338* 3491±281

[0075] 注：Kel为消除速度常数，t1/2为半衰期，AUC为血药浓度时间曲线下面积，*代表与注射液相比具有显著性差异。

[0076] 结果表明：卡巴他赛磷脂组合物的t1/2、AUC0-24和AUC0-∞分别是参比制剂卡巴他赛注射液的3.26、2.69和2.79倍，具有显著性差异；Kel是参比制剂的0.48倍，具有显著差异；这说明在同样剂量条件下，药物被包裹在卡巴他赛磷脂组合物内后延长了药物在血液中的循环时间，使药物在体内消除速度变慢并保持了较高的血药浓度，从而有可能发挥长效作用。卡巴他赛磷脂组合物改变了卡巴他赛在大鼠体内的药动学性质，具有一定的缓释和长循环特征。

[0077] 实施例11卡巴他赛磷脂组合物的药效学研究

[0078] Balb/c裸鼠(购自中国科学院上海药物研究所实验动物中心)适应环境5天，将对6
数生长期的PC-3A细胞消化后制成5×10 /mL细胞悬液，在Balb/c裸鼠右前肢皮下注射
0.1mL细胞悬液，建立荷瘤模型。待小鼠肿瘤平均体积长至100mm3左右时，将裸鼠随机分为3组，每组10只。各组分别于第1、4、7天通过尾静脉注射给药，给药剂量为卡巴他赛注射液
5mg/kg，实施例1中的卡巴他赛磷脂组合物5mg/kg，和生理盐水(对照组)，用卡尺测量各裸鼠肿瘤的长径(a)及短径(b)，按(a×b2)/2公式计算肿瘤体积。

[0079] 由图3可以看出，卡巴他赛磷脂组合物及卡巴他赛注射液对裸鼠PC-3A前列腺癌均有较好的抑制作用，相同给药方式，同剂量的磷脂组合物组较卡巴他赛注射液5mg/kg组有更好的抑瘤效果(P<0.05)，表明卡巴他赛磷脂组合物具有更好的抗肿瘤效果。

[0080] 实施例12卡巴他赛磷脂组合物的药效学研究

[0081] Balb/c裸鼠(由中国科学院上海药物研究所实验动物中心提供)适应环境5天，将对数生长期的A549/T细胞(购自上海博谷生物科技有限公司)消化后制成1×108/mL细胞悬液，在Balb/c裸鼠右前肢皮下注射0.1mL细胞悬液，建立荷瘤模型。待小鼠肿瘤平均体积长至50-100mm3左右时，将裸鼠随机分为3组，每组10只。各组分别于第1、4、7天通过尾静脉注射给药，给药剂量为卡巴他赛注射液10mg/kg，实施例1中制备的卡巴他赛磷脂组合物10mg/kg，和生理盐水(对照组)，用卡尺测量各裸鼠肿瘤的长径(a)及短径(b)，按(a×b2)/2公式计算肿瘤体积。

[0082] 由图4可以看出,卡巴他赛注射液和卡巴他赛磷脂组合物对裸鼠耐药性肺癌均有较好的抑制作用，两组制剂肿瘤体积与对照组相比均显著降低(P<0.05，0.01)，同剂量的磷脂组合物较卡巴他赛注射液组具有更好的抑瘤效果(P<0.05)，表明卡巴他赛磷脂组合物在一定程度上可逆转肿瘤的多药耐药。

[0083] 以上，仅为本发明的示意性描述，本领域技术人员应该知道，在不偏离本发明的工作原理的基础上，可以对本发明作出多种改进，这均属于本发明的保护范围。