五味子酸性多糖及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种五味子酸性多糖及其制备方法和应用，属于天然产物活性成分技术领域。该五味子酸性多糖通过以下方法制备得到：五味子多糖提取：取五味子，加入水作为提取溶剂，在80‑100℃下提取1‑8hr，得提取液，将所述提取液浓缩至加入量的1/3‑1/7,去除沉淀，得上清液，于所述上清液中加入乙醇，使上清液中乙醇的体积百分浓度为70‑80％，静置，收集沉淀，即得五味子多糖；五味子酸性多糖提取：取所述五味子多糖，以DEAE‑纤维素为固定相，以浓度为0‑1mol/L的氯化钠水溶液为流动相，进行洗脱，分离纯化得到五味子酸性多糖。通过上述方法制备得到的五味子酸性多糖具有抗氧化损伤、改善学习记忆、降血糖及治疗肝损伤的作用。

权利要求

1.一种五味子酸性多糖在制备用于改善记忆力的药物中的应用；所述五味子酸性多糖为酸性多糖SCP-A-2；

所述酸性多糖SCP-A-2通过以下方法制备得到：

五味子多糖提取：取五味子，按照每克五味子加入5-8ml水的量加入提取溶剂水，在90-

100℃下提取4-6hr，得提取液，将所述提取液在70-90℃下浓缩至加入量的1/4-1/6,去除沉淀，得上清液，于所述上清液中加入体积百分浓度为90-95％的乙醇溶液，使上清液中乙醇的体积百分浓度为70-80％，静置，收集沉淀，所述沉淀依次用体积百分浓度为95％、100％的乙醇溶液洗涤，干燥，即得五味子多糖；

五味子酸性多糖提取：取所述五味子多糖，溶于水中，上样于Cl-型DEAE-纤维素离子交换层析柱，先用蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再用浓度为0.5mol/L的NaCl水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，即得五味子酸性多糖SCP-A；

五味子酸性多糖分离纯化：取5mg所述五味子酸性糖SCP-A，溶于1mL蒸馏水中，上平衡好的柱体积为20mL的Cl-型DEAE-纤维素离子交换层析柱，先用40mL蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再分别用0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的氯化钠水溶液NaCl水溶液各20mL进行梯度洗脱，流速1mL/min，分别收集洗脱液，回收溶剂，即分别制备得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、粉剂、合剂、丸剂或滴丸。

说明书

五味子酸性多糖及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及天然产物活性成分技术领域，特别是涉及一种五味子酸性多糖及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 五味子系木兰科植物五味子的成熟果实，是国家中药现代化科技产业基地的五大品种之一，特别是北五味子，是五味子中的极品，具有敛肺滋阴，生津止泻，宁心安神等功效，已经被列入国家药典和保健食品可用原料的名单。

[0003] 氧化还原反应是机体应答内外环境的重要生命过程。自由基和自由基反应遍及于所有的生命系统,其产生、淬灭、利用和损伤作用是生命活动过程中几乎同时进行的对立统一过程。机体的内环境通过各种各样的氧化性物质和抗氧化物质及其有关酶系统的综合作用,使氧化损伤-抗氧化防御间维持于一个相对恒定的氧化还原状态。当抗氧化防御系统处于不平衡状态时，就不能将自由基清除干净，自由基不断在体内堆积，过多的自由基将会攻击体内的生物大分子，对细胞、组织及器官造成永久性的损伤，使其结构和功能发生老化，引起感染以及各种退行性疾病。而脑组织是高耗氧器官，脑细胞代谢过程中产生较多活性氧自由基，随着时间的积累，氧化产物的增多，清除机制有限，导致脑老化，引起氧化应激损伤，进而引起神经细胞死亡，最终导致大脑退行性改变。

[0004] 近年来，我国逐渐步入老龄化社会，由机体氧化所致神经退行性疾病的发病率亦呈逐年上升趋势，但是虽然对该病的治疗研究和临床经验逐渐增多，但目前尚无理想的防治药物，因此寻找具有提高机体抗氧化能力的药物意义重大。

[0005] 人类记忆障碍是一个重要的医学和心理学问题。这种现象在人类各个年龄段均有发生，包括青少年记忆障碍以及老年人痴呆症等。尤其值得注意的是我国已经步入老龄化国家行列，老年人口大多承受着记忆减退的痛苦，以记忆障碍为重要特征的阿尔茨海默病已成为老年人群中继心脏病、肿瘤和中风之后的第四大致死疾病。因此，开发研制出安全、有效具有改善记忆功能的中药保健食品具有重大意义。

[0006] 并且，近年来，在社会经济迅速发展下，一方面人们生活水平不断提高，饮食结构发生改变，高脂肪高胆固醇饮食的摄入比例不断增加；另一方面，人们生活节奏不断变快，作息时间越来越不规律，疏于运动，导致我国糖尿病的患病率逐年提高。糖尿病作为一种慢性病，治疗周期长，容易引发多种并发症和病情反复等特点。糖尿病分为Ⅰ型糖尿病，Ⅱ型糖尿病。现有的降血糖药物，比如罗格列酮，阿卡波糖，胰岛素，格列本脲等，均具有不同程度的副作用，并且不能从根本上改善胰腺功能。

[0007] 同时，随着人们生活水平的不断提高，国民人均摄入酒量也在增长。长期饮酒容易引起酒精性肝病，严重危害身体健康。酒精性肝损伤是由于大量饮酒所致的肝脏疾病，其发病率高，后果严重，加之酒精中毒对神经系统、生殖系统的影响，使酒精性肝损伤已经成为一种严重危害人民健康的疾病。近年来我国随着生活条件的改变，酗酒呈增多趋势，由酒精所致肝损害的发病率亦呈逐年上升趋势，但是虽然对该病的治疗研究和临床经验逐渐增多，但目前除戒酒和支持治疗外尚无理想的防治药物，因此寻找对酒精性肝损伤有保护作用的药物意义重大。

发明内容

[0008] 基于此，有必要针对上述问题，提供一种五味子酸性多糖，该五味子酸性多糖具有抗氧化损伤、改善学习记忆、降血糖及治疗肝损伤的作用。

[0009] 一种五味子酸性多糖的制备方法，包括以下步骤：

[0010] 五味子多糖提取：取五味子，加入水作为提取溶剂，在80-100℃下提取1-8hr，得提取液，将所述提取液浓缩至加入量的1/3-1/7,去除沉淀，得上清液，于所述上清液中加入乙醇，使上清液中乙醇的体积百分浓度为70-80％，静置，收集沉淀，即得五味子多糖；

[0011] 五味子酸性多糖提取：取所述五味子多糖，以DEAE-纤维素为固定相，以浓度为0-1mol/L的氯化钠水溶液为流动相，进行洗脱，分离纯化得到五味子酸性多糖。

[0012] 通过上述方法制备得到的五味子酸性多糖具有抗氧化损伤、改善学习记忆、降血糖及治疗肝损伤的作用。

[0013] 在其中一个实施例中，所述五味子酸性多糖提取步骤中，分离纯化得到五味子酸性多糖的具体方法为：取所述五味子多糖，溶于水中，上样于Cl-型DEAE-纤维素离子交换层析柱，先用蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再用浓度为0.05-1mol/L的NaCl水溶液梯度洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，即得五味子酸性多糖SCP-A。以上述方法制备得到的五味子酸性多糖，具有较好的活性。

[0014] 在其中一个实施例中，该制备方法还包括五味子酸性多糖分离纯化步骤，所述五味子酸性多糖分离纯化步骤为：取所述五味子酸性多糖，以Cl-型DEAE-纤维素为固定相，先用蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再分别用0.08-0.12mol/L、0.18-0.22mol/L、0.28-0.32mol/L、0.48-0.52mol/L的氯化钠水溶液为流动相进行洗脱，分别制备得到五味子酸性多糖SCP-A-
1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4。采用上述方法对五味子酸性多糖进行细分纯化，针对不同的应用，提高了所述五味子多糖的有效性。

[0015] 在其中一个实施例中，所述五味子酸性多糖分离纯化步骤中，取5mg所述五味子酸性糖，溶于1mL蒸馏水中，上平衡好的柱体积为20mL的Cl-型DEAE-纤维素离子交换层析柱，先用40mL蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，再分别用用0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的氯化钠水溶液NaCl水溶液各20mL进行线形梯度洗脱，流速1mL/min，分别收集洗脱液，回收溶剂，即分别制备得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4。

[0016] 一个实施例中，所述五味子多糖提取中，取五味子，按照每克五味子加入5-8ml水的量加入提取溶剂水，在90-100℃下提取4-6hr，得提取液，将所述提取液在70-90℃下浓缩至加入量的1/4-1/6,去除沉淀，得上清液，于所述上清液中加入体积百分浓度为90-95％的乙醇溶液，使上清液中乙醇的体积百分浓度为70-80％，静置，收集沉淀，所述沉淀依次用体积百分浓度为95％、100％的乙醇溶液洗涤，干燥，即得五味子多糖；

[0017] 本法明还公开了上述的五味子酸性多糖的制备方法制备得到的五味子酸性多糖。

[0018] 该五味子酸性多糖具有抗氧化损伤、改善学习记忆、降血糖及治疗肝损伤的作用。

[0019] 本法明还公开了上述的五味子酸性多糖在制备用于抗氧化、改善记忆力、降血糖和/或抗肝损伤的药物或保健品中的应用。

[0020] 在其中一个实施例中，以上述的制备方法制备得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4；

[0021] 其中，当所述五味子酸性多糖在制备用于抗氧化的药物或保健品时，所述五味子酸性多糖为酸性多糖SCP-A-1；

[0022] 当所述五味子酸性多糖在制备用于改善记忆力的药物或保健品时，所述五味子酸性多糖为酸性多糖SCP-A-2；

[0023] 当所述五味子酸性多糖在制备用于降血糖的药物或保健品时，所述五味子酸性多糖为酸性多糖SCP-A-3；

[0024] 当所述五味子酸性多糖在制备用于抗肝损伤的药物或保健品时，所述五味子酸性多糖为酸性多糖SCP-A-1。

[0025] 针对不用的应用，选用不同细分成分的五味子酸性多糖，更具针对性，具有较好的效果。

[0026] 在其中一个实施例中，所述药物或保健品的剂型为片剂、颗粒剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、粉剂、合剂、丸剂或滴丸。

[0027] 上述剂型均可采用常规辅料和制剂工艺制备得到。

[0028] 本法明还公开了一种药物组合物，包括作为活性成分的上述的五味子酸性多糖，以及药学上可接受的载体或辅料。

[0029] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0030] 本发明的五味子酸性多糖的制备方法，具有步骤简化、工艺简单的特点，可用作工业生产使用。且采用该制备方法制备得到的五味子酸性多糖，具有抗氧化损伤、改善学习记忆、降血糖及治疗肝损伤的作用。

[0031] 并且，该制备方法还进行了进一步的细化，将五味子酸性多糖分离纯化得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4，针对不用的应用，更有针对性，具有最佳的效果。

附图说明

[0032] 图1为实施例2中不同五味子酸性多糖对亚油酸自氧化体系抑制结果示意图；

[0033] 图2为实施例2中不同五味子酸性多糖的还原能力示意图。

具体实施方式

[0034] 为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

[0035] 除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

[0036] 实施例1

[0037] 五味子酸性多糖，通过以下方法制备得到：

[0038] 一、五味子多糖提取。

[0039] 取五味子1.5kg，加入蒸馏水10L(即料液比为1:6.7)，浸泡过夜，煮沸(约100℃)5h，得提取液，提取液在80℃下浓缩至2L，离心(4500rpm，15min)，弃去沉淀，得上清液。向上清液加入体积百分浓度为95％的乙醇溶液，使上清液中乙醇终浓度为75％，静置沉淀过夜，离心(4500rpm，15min)，收集沉淀。沉淀依次用95％乙醇和无水乙醇洗涤，常规干燥，得粉末状五味子多糖。

[0040] 二、五味子酸性多糖。

[0041] 1、分离纯化。

[0042] 取所述五味子多糖，以DEAE-纤维素(购自：Whatman公司型号DE-52)为固定相，以浓度为0-1mol/L的氯化钠水溶液为流动相，进行洗脱，具体方法如下：

[0043] 取5mg五味子多糖，溶于1mL蒸馏水中，上平衡好的DEAE-纤维素离子交换层析柱(20mL，Cl-型)，首先用40mL蒸馏水洗脱，即得五味子中性糖SCP-N。再0.5mol/L的氯化钠水溶液80mL进行洗脱，流速1mL/min，收集洗脱液，回收溶剂，即制备得到五味子酸性多糖SCP-A。以苯酚-硫酸法检测洗脱液中糖含量，间羟基联苯法测定洗脱液中糖醛酸含量。

[0044] 结果显示，蒸馏水能将大部分五味子中性多糖SCP-N从DEAE-纤维素柱上洗脱下来，0.5M NaCl能将大部分五味子酸性多糖SCP-A洗脱下来。

[0045] 所以通过离子交换柱层析可以大量制备出五味子中性糖SCP-N和酸性糖SCP-A。

[0046] 2、成分分析。

[0047] 2.1、苯酚-硫酸法测定糖含量。

[0048] 采用苯酚-硫酸法进行糖含量测定。

[0049] 标准曲线制备：用移液管量取0.1g/L标准Glc(葡萄糖)溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL转于玻璃试管中，加蒸馏水补至1.0mL，每个浓度重复三次，分别向每支试管中加入6％的苯酚试剂0.5mL，浓硫酸2.5mL，迅速振荡均匀，冷却至室温，在λ为490nm处测定吸光度A。以吸收度A为纵坐标，糖含量C为横坐标，得标准曲线A＝k C。

[0050] 样品中糖含量测定：取浓度0.1g/L左右的样品溶液1mL，加入苯酚试剂0.5mL，浓硫酸2.5mL，按标准曲线制备方法之操作，测定吸收度。根据标准曲线和样品吸光值计算含量。

[0051] 2.2、间羟基联苯法测定糖醛酸含量测定。

[0052] 间羟基联苯试剂：称取30mg间羟基联苯，溶于0.5％氢氧化钠水溶液中，并定容至10mL，4℃避光保存。

[0053] 饱和氢氧化钾：称取5g氢氧化钾，加入2mL蒸馏水，充分搅拌溶解，上部清液即为饱和氢氧化钾。

[0054] 氨基磺酸试剂：称取3.9g氨基磺酸，加蒸馏水5mL，滴加饱和氢氧化钾水溶液，充分振荡至氨基磺酸完全溶解，冷却至室温，再继续滴加饱和氢氧化钾水溶液至pH 2.5，用蒸馏水将体积补充至10mL，室温保存备用。

[0055] 0.1g/L D-GalA标准溶液：称取10mg D-GalA(D-半乳糖醛)，溶解于蒸馏水中，并定容至100mL。

[0056] 标准曲线制备：移液器分别量取0.1g/L D-GalA标准溶液0μL、50μL、100μL、200μL、300μL、400μL转于玻璃试管中，加蒸馏水补至400μL，每个浓度重复三个样品。向每支试管中加入氨基磺酸试剂40μL，摇匀，再向各管加入浓硫酸2.5mL，振荡均匀，沸水浴煮沸20min。冷却至室温后，向各管中加入间羟基联苯试剂40μL，摇匀，室温放置15min。在λ525nm处测定吸光度A。以吸收度A为纵坐标，D-半乳糖醛含量(μg)C为横坐标，得标准曲线A＝k C。

[0057] 样品中糖醛酸含量测定：取样品溶液，按标准曲线制备方法之操作，测定吸收度，根据标准曲线和样品浓度计算其中的糖醛酸含量。

[0058] 2.3、考马斯亮蓝法测定蛋白质。

[0059] 考马斯亮蓝试剂：称取考马斯亮蓝10mg，溶解于5mL的95％乙醇中，加入10mL的85％磷酸，用蒸馏水稀释至100mL，滤纸过滤备用。最终试剂中含0.01％考马斯亮蓝G-250(w/v)，4.7％乙醇(w/v)。

[0060] 蛋白质标准溶液：储备液5mg/mL牛血清白蛋白，用时加水稀释至50μg/mL。

[0061] 标准曲线制备：移液管分别量取50μg/mL蛋白质标准溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL转入玻璃试管中，加蒸馏水补至1.0mL，每个浓度三个重复，分别向每支试管中加入考马斯亮蓝试剂4mL，迅速振荡均匀，静置5min后在λ595nm处测定吸光度A。以吸收度A为纵坐标，牛血清白蛋白含量C(μg)为横坐标，得标准曲线A＝k C。

[0062] 样品中蛋白质含量的测定：取浓度0.1g/L左右的样品溶液1mL，按标准曲线制备方法之操作，测定吸收度，根据标准曲线和样品浓度计算其中的蛋白质含量。

[0063] 2.4、单糖组成分析。

[0064] 称取多糖样品2mg，加入含有1M盐酸的无水甲醇溶液1mL，充N2封管，80℃水解16小时，空气泵吹干后，加入2M三氟乙酸1mL，120℃水解1小时，加入少量乙醇，60℃水浴干燥，重复3～5次，完全蒸除三氟乙酸。

[0065] 向完全酸水解后获得的干燥样品中加入PMP试剂(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)0.5mL和0.3M的NaOH溶液0.5mL，待样品充分溶解后取其中的0.1mL于小离心管中，70℃水浴
30min。10000rpm离心5min后，加入0.3M盐酸溶液0.05mL和蒸馏水0.05mL，充分混匀。加入
1mL三氯甲烷，混匀后抽提剩余的PMP试剂，吸去三氯甲烷层，保留水层。用0.22μm滤膜过滤后，加入适量蒸馏水稀释后，待HPLC检测。

[0066] 采用Shimadzu  HPLC系统(LC-10ATvp泵和SPD-10AVD紫外光检测器)，DIKMAInertsil ODS-3色谱柱(4.6×150mm)，流动相为PBS(0.1M,p H 7.0-乙腈82:18(v/v)，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，检测波长为245nm。

[0067] 3、成分分析结果。

[0068] 采用上述分析方法对制备得到的五味子酸性多糖进行分析，经过理化性质分析和单糖组成分析，结果如下表所示。

[0069] 表1.单糖组成分析

[0070]

[0071]

[0072] *得率是指所得SCP-N或SCP-A的质量相对于层析上样质量的比值。

[0073] 从上述结果中可以看出，从五味子多糖中可分离得到五味子中性多糖SCP-N和五味子酸性多糖SCP-A，其中五味子中性多糖SCP-N的得率为47.00％,酸性糖SCP-A的得率为27.00％；而中性糖主要由Glc组成，酸性糖主要由GalA和Clc组成。

[0074] 三、五味子酸性多糖分离纯化。

[0075] 取所述五味子酸性多糖SCP-A，以DEAE-纤维素为固定相，分别以浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L和0.5mol/L的氯化钠水溶液为流动相，进行洗脱，具体方法如下：

[0076] 取5mg五味子多糖，溶于1mL蒸馏水中，上平衡好的DEAE-纤维素离子交换层析柱(20mL，Cl-型)，首先用40mL蒸馏水洗脱，再分别用0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的氯化钠水溶液NaCl水溶液各20mL进行梯度洗脱，流速1mL/min，分别收集洗脱液，回收溶剂，即分别制备得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4，苯酚-硫酸法检测洗脱液中糖含量，间羟基联苯法测定洗脱液中糖醛酸含量。

[0077] 结果显示，用0.1M NaCl、0.2M NaCl、0.3M NaCl和0.5M NaCl能将酸性糖SCP-A分为四个级分洗脱下来。说明可以通过离子交换柱层析，大量制备出五味子酸性糖SCP-A-1、SCP-A-2、SCP-A-3和SCP-A-4四个级分。即分别制备得到五味子酸性多糖SCP-A-1、五味子酸性多糖SCP-A-2、五味子酸性多糖SCP-A-3和五味子酸性多糖SCP-A-4。

[0078] 2、成分分析。

[0079] 采用上述分析方法对制备得到的四种五味子酸性多糖进行分析，经过理化性质分析和单糖组成分析，结果如下表所示。

[0080] 表2 四种酸性多糖的成分分析

[0081]

[0082] *得率是指所得不同成分的质量相对于层析上样质量的比值。

[0083] 实施例2

[0084] 体外抗氧化实验。

[0085] 1、五味子多糖对脂质过氧化的抑制能力的研究。

[0086] 1.1、方法。

[0087] 依据亚油酸-硫氰酸铁法，对五味子酸性多糖SCP-A-1、SCP-A-2和SCP-A-3进行抗氧化活性的研究，具体如下：

[0088] 配置50ml亚油酸乳状液(310μl亚油酸、350mg吐温20与0.04mol.L-1.PH＝7.0的磷酸盐缓冲液配置成50ml)。往200μl配置好的5mM的不同五味子多糖(SCP-A-1、SCP-A-2和SCP-A-3)以及同等浓度的阳性对照VE(维生素E)，空白对照蒸馏水中，加入2.5ml亚油酸乳状液混合。

[0089] 之后置于37℃培养箱中培养72h。每隔12h对培养的所有组的供试液进行取样，每次200μl，加入2.5ml的乙醇中(75％)，之后加入300μl的硫氰酸铵(30％)，充分混匀后，加入300μl的氯化亚铁溶液(2g氯化亚铁溶于50ml的3.5％HCl中)。之反应3min后在500nm处测量其吸光度值。

[0090] 1.2、结果。

[0091] 实验结果如图1和表3所示。

[0092] 表3 五味子多糖对亚油酸自氧化体系抑制结果(N＝3)

[0093]

[0094]

[0095] 通过上述空白对照组的吸光度曲线可以得知，亚油酸体系的自氧化十分迅速，在体系中添加了3种五味子多糖及维生素E可以有效抑制亚油酸的自氧化。WSCPA-1对亚油酸氧化体系的抑制显著强于维生素E，而阳性对照维生素E的吸光值小于WSCPA-1，说明WSCPA-1对亚油酸体系的氧化抑制率强于维生素E。

[0096] 2、五味子多糖还原活性实验。

[0097] 2.1、方法。

[0098] 采用Oyaizu法进行五味子酸性多糖SCP-A-1、SCP-A-2和SCP-A-3的还原活性的测定，取上步配置好的不同五味子多糖(SCP-A-1、SCP-A-2和SCP-A-3)待测液，加入0.2mol.L-1、pH值6.6的磷酸钠缓冲液1.0ml及1％的铁氰化钾1.0ml，于50℃水浴中反应20min后急速冷却；加入10％的三氯乙酸1.0ml,3 000r.min-1离心10min；取上清液2ml,加入蒸馏水2ml，0.1％三氯化铁溶液0.5ml；10min后于700nm测定其吸光值。

[0099] 2.2、结果。

[0100] 实验结果如图2和表4所示。

[0101] 表4 五味子酸性多糖的还原能力(N＝3)

[0102]

[0103]

[0104] 从上述结果中可以看出，3种多糖都具有还原能力，吸光度随着多糖浓度的增加有显著的增加，而WSCPA-1的还原能力要强于维生素E，表明WSCPA-1具有最佳的抗氧化能力。

[0105] 实施例3

[0106] 改善学习记忆实验。

[0107] 1、避暗实验。

[0108] 1.1、实验动物。

[0109] 健康ICR雄性小鼠，体重20±2g，由吉林大学实验动物研究中心提供，许可证号为SCXK-(吉)2016-0005，分笼后放于安静、温湿度适宜、通风良好的环境中，自由饮水，合理摄食，适应所处环境7天后开始实验。

[0110] 1.2、实验方法。

[0111] 将ICR雄性小鼠随机分组，正常对照组(CON,灌胃给予蒸馏水)、模型组(MOD,灌胃给予蒸馏水，腹腔注射东莨菪碱5mg/kg)、五味子酸性多糖组(SCP-A,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-1组(SCP-A-1,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-2组(SCP-A-2,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-3组(SCP-A-3,10mg/kg)，每组15只。给药剂量为0.1ml/10g，每日一次。小鼠进行为期30天的连续灌胃给药，于末次给药30min后进行行为学实验。

[0112] 于灌胃第29天及第30天开始进行避暗试验。第29天开始训练，在训练前30min进行灌胃给药，灌胃给药20min后，空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水，模型组和其它各组小鼠腹腔注射5mg/kg氢溴酸东莨菪碱。腹腔注射10min后，将小鼠放入避暗仪中面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。以小鼠进入洞口到达暗室受到错误时计时器记录的时间即为潜伏期。本实验对小鼠训练5min，并记录在5min内小鼠的错误次数。于灌胃给药第30天进行第二次试验，给药方法同第29天。记录每只鼠的潜伏期以及在5min内出现的错误次数。

[0113] 1.3、实验结果

[0114] 实验结果如下表所示。

[0115] 表5.各组小鼠避暗试验结果( n＝15)

[0116]

[0117] 注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；

[0118] 从上述结果中可以看出，与空白组比较，模型组小鼠潜伏期明显缩短(P<0.01)，错误次数明显增加(P<0.05)，表明造模成功。与模型组相比，SCP-A-2组小鼠避暗潜伏期明显延长(P<0.01)，SCP-A-2组的小鼠错误次数明显减少(P<0.05)，提示SCP-A-2组具有最佳的改善小鼠记忆作用。

[0119] 2、水迷宫实验。

[0120] 2.1、实验动物。

[0121] 健康ICR雄性小鼠，体重20±2g，由吉林大学实验动物研究中心提供，许可证号为SCXK-(吉)2016-0005，分笼后放于安静、温湿度适宜、通风良好的环境中，自由饮水，合理摄食，适应所处环境7天后开始实验。

[0122] 2.2、实验方法。

[0123] 将ICR雄性小鼠随机分为5组，正常对照组(CON,灌胃给予蒸馏水)、模型组(MOD,灌胃给予蒸馏水，腹腔注射东莨菪碱5mg/kg)、五味子酸性多糖组(SCP-A,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-1组(SCP-A-1,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-2组(SCP-A-2,10mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-3组(SCP-A-3,10mg/kg)，每组15只。给药剂量为0.1ml/10g，每日一次。小鼠进行为期30天的连续灌胃给药，于末次给药30min后进行行为学实验。

[0124] 于灌胃给药第25天进行水迷宫试验，在训练前30min进行灌胃给药,灌胃给药20min后，空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水，对模型组和其它各组小鼠进行腹腔注射东莨菪碱5mg/kg。腹腔注射10min后，将小鼠放在Morris水迷宫视频跟踪测试系统WMT-100中，设置小鼠的训练时间设定为120s，在120s内未达到终点的小鼠按120s记录。第一次实验之前将小鼠放在平台附近，使其自动爬上3次。以后每次训练前将小鼠放在平台附近，使其自主爬上到平台一次。每隔24h训练1次，训练期间继续给药，给药方法同第25天。采集给药第29天的实验数据。给药第30天把平台去掉统计小鼠空间搜索能力，给药方法同第25天。并记录小鼠穿越平台次的数实验结果。

[0125] 2.3、实验结果。

[0126] 实验结果如下表所示。

[0127] 表6.各组小鼠水迷宫试验结果( n＝15)

[0128]

[0129] 注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；

[0130] 从上述结果中可以看出，与空白组相比，模型组小鼠找到平台时间延长(P<0.01)，经过平台次数减少(P<0.01)，提示造模成功。与模型组相比，SCP-A-2组小鼠找到平台时间明显缩短(P<0.05)，经过平台次数明显增加(P<0.01)，提示SCP-A-2组具有改善小鼠记忆作用。

[0131] 实施例4

[0132] 降糖实验。

[0133] 1、实验动物。

[0134] 同实施例3。

[0135] 2、方法。

[0136] 取小鼠，随机取10只作为空白对照组，其余小鼠空腹12h，腹腔注射40mg/kg的链脲佐菌素(STZ)溶液(0.1mol的枸橼酸缓冲液)，连续注射5d，每次注射之前需要禁食12h。1周后，眼内眦取血，测定禁食12h后的空腹血糖值，取血糖值大于8mmol/L的小鼠既为造模成功。

[0137] 将造模成功的小鼠随机分组，每组10只，一组作为模型对照组，其余组分别为五味子酸性多糖组(SCP-A,40mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-1组(SCP-A-1,40mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-2组(SCP-A-2,40mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-3组(SCP-A-3,40mg/kg)，空白对照组和模型对照组灌胃给予蒸馏水，其余给药组每天灌胃给药1次，连续15d，末次给药后将各组小鼠空腹12h，眼球取血，分离血清，葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。

[0138] 2、结果。

[0139] 实验结果如下表所示。

[0140] 表7.各组小鼠空腹血糖含量( n＝6)

[0141]

[0142] 注：与空白组比较，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，###P<0.001；

[0143] 从上述结果中可以看出，与空白组相比，模型组小鼠血糖明显增加，提示造模成功。

[0144] 与模型组相比，SCP-A-2和SCP-A-3组小鼠血糖水平均显著下降(P<0.05或P<0.001)，而SCP-A-3能够极显著降低小鼠的高血糖，并能够达到正常值；说明SCP-A-3具有降糖的作用。

[0145] 实施例5

[0146] 抗肝损伤实验。

[0147] 1、实验动物。

[0148] 同实施例3。

[0149] 2、方法。

[0150] 取小鼠，随机分组，每组10只，分别为正常对照组(Control)、模型组(Model)、五味子酸性多糖组(SCP-A，20mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-1组(SCP-A-1，20mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-2组(SCP-A-2，20mg/kg)、五味子酸性多糖SCP-A-3组(SCP-A-3，20mg/kg)。常规饲料喂养，自由饮水。给药组给予五味子酸性多糖进行灌胃，正常对照组和模型组给予同体积蒸馏水灌胃，每日一次，连续15天。末次给药1小时后，模型组及给药组小鼠给予50％乙醇12mL/kg灌胃，正常对照组小鼠给予同体积蒸馏水灌胃，12h后禁食不禁水。处死，检测各项指标。

[0151] 所述模型组的造模方法为：给予小鼠50％乙醇，按照12mL/kg剂量灌胃，采用酶法以南京建成生物工程研究所的试剂盒测定血清中的AST、ALT。

[0152] 2、结果。

[0153] 实验结果如下表所示。

[0154] 表8.各组小鼠血清中ALT和AST含量( n＝7)

[0155]

[0156]

[0157] 注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；

[0158] 从上述结果中可以看出，与空白组相比，模型组小鼠血清AST和ALT水平均显著增高(P<0.01)，说明小鼠一次性灌胃50％酒精可引起小鼠肝细胞损伤，提示造模成功。

[0159] 与模型组相比，SCP-A-1和SCP-A-2组小鼠血清中ALT、AST水平均显著下降(P<0.05或P<0.01)，提示SCP-A-1和SCP-A-2提示其对酒精诱导的小鼠肝损伤具有一定的保护作用。而SCP-A和SCP-A-3对小鼠血清中ALT和AST水平均无明显影响；说明SCP-A-1的护肝作用最好。

[0160] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

[0161] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。