一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法

摘要

本发明公开了一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，属于植物保护和昆虫养殖技术领域。所述方法利用培养皿培养的平菇菌丝饲养迟眼蕈蚊，实现继代繁殖，包括培养基制作、平菇菌丝接种培养、迟眼蕈蚊种虫获得和继代饲养的步骤，培养基制作和平菇菌丝接种是在超净工作台上完成。本发明利用菌丝饲养迟眼蕈蚊，避免了依靠新鲜寄主植物饲养受季节限制的缺点。本发明的饲养方法节省人工，操作简单。迟眼蕈蚊的一个发育周期只需要操作2‑3次，极大的节省了工时。

权利要求

1.一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，其特征在于直接用长满平菇菌丝的培养皿为容器饲养迟眼蕈蚊，包括PDA培养基制作，平菇菌丝接种、培养，迟眼蕈蚊种虫获得和迟眼蕈蚊继代饲养的步骤；

具体如下；

步骤一：PDA培养基制作；

(1)称取成品PDA培养基39g、1000mL水倒入烧杯中，边倒边搅拌，得到培养基溶液；

(2)将溶解好的培养基溶液装到三角瓶中，用封口膜和皮筋封好口，121℃灭菌20分钟；

(3)灭菌完成后温度降到50～60℃时，在培养基溶液中加入乳酸；

(4)将加好乳酸的培养基溶液倒入培养皿中，将培养皿中培养基溶液吹干后，得到干燥培养基备用；

步骤二：平菇菌丝接种、培养；

(1)菌种活化：用接种环刮取试管中的平菇菌丝，接种到具有干燥培养基的培养皿上；

将接种好的培养皿放在25℃培养箱中，24小时黑暗培养；

(2)继代培养：将培养皿中长满菌丝的干燥培养基分割成若干小块，接种到新的具有干燥培养基的培养皿上，在25℃培养箱中进行24小时黑暗培养；

步骤三：迟眼蕈蚊种虫获得，采用如下两种方式：

在菇棚内收集被迟眼蕈蚊为害的菇棒，挑取菇棒上的迟眼蕈蚊四龄幼虫或蛹，放入步骤二中继代培养后的长满菌丝的培养皿内；将接入迟眼蕈蚊的培养皿放入25℃培养箱中黑暗培养，四龄幼虫培养5～7天后，蛹培养3～4天后，成虫羽化；让羽化后的成虫在长满菌丝的培养皿内自由交配产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫；

或者用吸虫器在迟眼蕈蚊为害严重的菇棚内收集腹部较鼓的雌虫和雄虫，放入步骤二中继代培养后的长满菌丝的培养皿内饲养，在25℃培养箱中黑暗培养1～2天后成虫产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫；步骤四：迟眼蕈蚊继代饲养；

(1)用步骤二制备的继代培养后的长满菌丝的培养皿饲养步骤三中的迟眼蕈蚊第一代幼虫即种虫，幼虫孵化后8～12天化蛹；

迟眼蕈蚊的第一代幼虫将长满菌丝的培养皿内的平菇菌丝取食完后，用解剖刀或小镊子将带有幼虫的培养基划成若干块，分别放入新的长满菌丝的培养皿内，继续饲养；

(2)迟眼蕈蚊化蛹后，用勾线笔将蛹挑入新的长满菌丝的培养皿内，进行继代繁殖。

2.根据权利要求1所述的一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，其特征在于：培养基制作和平菇菌丝接种、培养过程中要注意无菌条件，避免杂菌污染。

3.根据权利要求1所述的一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，其特征在于：通过步骤一和步骤二获得的长满平菇菌丝的培养皿需放在4～6℃条件下冷藏保存，供迟眼蕈蚊饲养用。

说明书

一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，属于植物保护和昆虫养殖技术领域。

背景技术

[0002] 眼蕈蚊科(Sciaridae)属于双翅目(Diptera)长角亚目(Nematocera)眼蕈蚊总科(Sciaroidea)，种类丰富，分布广泛，喜欢潮湿阴暗的环境，适应能力强。大部分种群的幼虫生活在枯死的树木、真菌和动物的粪便中，有的幼虫也生活在洞穴、菜地、温室中。眼蕈蚊生活周期通常为3～4周，成虫寿命3～5天，卵期4～7天，幼虫期9～l 7天，蛹期3～5天；雌虫一般可产卵70～200粒，卵多产于土缝间的缝隙、植株基部与叶鞘缝隙中。

[0003] 迟眼蕈蚊(Bradysia spp.)是眼蕈蚊科中研究较多、危害最严重的属之一，全世界已知的有455种，中国已记录的有131种；分布广泛、取食范围广，可为害多种蔬菜和食用菌，严重时可导致作物绝收。幼虫多在植物根茎及根部周围土壤缝隙中群集越冬，北方越冬期为10月中下旬～11月中下旬，于翌年3月中下旬开始化蛹，4月上中旬达到羽化高峰；南方越冬期为12月中下旬，于翌年2月下旬开始化蛹，3月中旬达到羽化高峰。4～6月、9月下旬～11月虫量多，呈春秋2季为危害高峰，7～8月因高温干旱导致虫量骤减。

[0004] 迟眼蕈蚊幼虫主要取食为害植物的地下部分和食用菌的菌丝体、子实体等，还可传播病害；成虫具有较强的趋光性，虽不取食但可传播病原菌、线虫和螨类等，造成间接为害。迟眼蕈蚊个体小、繁殖速度快、为害隐蔽，防治困难且寄主范围广，已经成为农业生产上亟需解决的问题。尤其是在食用菌生产上，迟眼蕈蚊可为害平菇、茶树菇、双孢菇等多种食用菌，严重影响食用菌的产量和品质。而且目前国内已登记的能在食用菌上使用的杀虫剂较少；食用菌生长周期短，长期不合理的使用农药易造成产品农药残留超标，使害虫产生抗药性。因此需要开展试验筛选出对食用菌迟眼蕈蚊效果较好的生物农药和高效、低毒、低残留的化学农药来指导生产用药。而在药剂筛选和综合防治研究中，需要大量虫龄一致、发育整齐的幼虫作为试虫。目前迟眼蕈蚊的人工饲养多以新鲜的寄主植物或离体根茎为饲料，有季节限制且成本较高，也有采用人工饲料或花生、土豆、大豆等食物为饲料进行规模饲养迟眼蕈蚊的，但操作较复杂，费时费工。

发明内容

[0005] 针对现有的迟眼蕈蚊的饲养方法，为了更好的满足食用菌迟眼蕈蚊研究的试验需求，实现迟眼蕈蚊的大规模饲养，发明人经过长期实验，提供了一种利用平菇菌丝作为饲料饲养迟眼蕈蚊的方法。本发明能够实现迟眼蕈蚊的周年大量饲养，而且操作简单，节省工时、节约成本，适合在实验室内获得大量发育一致的迟眼蕈蚊幼虫供试验研究。

[0006] 本发明提供的一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，利用培养皿培养的平菇菌丝饲养迟眼蕈蚊，实现继代繁殖，包括培养基制作-平菇菌丝培养-迟眼蕈蚊种虫获得-迟眼蕈蚊继代饲养的步骤，其中培养基制作和平菇菌丝培养是在超净工作台上完成。具体步骤如下：

[0007] 步骤一：PDA培养基制作。

[0008] (1)称取成品PDA培养基39g、1000mL水倒入烧杯中，边倒边搅拌，得到培养基溶液；

[0009] 优选的，所述的成品PDA培养基和水可以在沸腾的水浴锅中加热，促进溶解。

[0010] (2)将溶解好的培养基溶液分装到4个500mL三角瓶中，用封口膜和皮筋封好口，121℃灭菌20分钟。

[0011] (3)灭菌完成后温度降到50～60℃时，在培养基溶液中加入乳酸。每1000mL培养基溶液中加入乳酸200μL，摇匀。所述乳酸的质量百分比浓度为25％。

[0012] (4)将加好乳酸的培养基溶液倒入直径9cm的培养皿中，将培养皿中培养基溶液吹干后，得到干燥培养基备用。

[0013] 步骤二：平菇菌丝接种、培养。

[0014] (1)菌种活化。用接种环刮取试管中的平菇菌丝，接种到具有干燥培养基的培养皿上。将接种好的培养皿放在25℃培养箱中，24小时黑暗培养，5天左右菌丝长满可进行扩大培养。

[0015] (2)继代培养。将培养皿中长满菌丝的干燥培养基分割成若干小块，接种到新的具有干燥培养基的培养皿上，在25℃培养箱中进行24小时黑暗培养。长满菌丝后的培养皿放入冰箱中冷藏保存(温度4～6℃)，供迟眼蕈蚊饲养用。

[0016] 注：培养基制作和平菇菌丝接种过程中注意严格无菌条件，避免杂菌污染。

[0017] 步骤三：迟眼蕈蚊种虫获得。

[0018] 在菇棚内收集被迟眼蕈蚊为害的菇棒，挑取菇棒上的迟眼蕈蚊四龄幼虫或蛹，放入步骤二中继代培养后的长满菌丝的培养皿内；将接入迟眼蕈蚊的培养皿放入25℃培养箱中黑暗培养，四龄幼虫培养5～7天后，蛹培养3～4天后，成虫羽化。让羽化后的成虫在长满菌丝的培养皿内自由交配产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫。

[0019] 也可用吸虫器在迟眼蕈蚊为害严重的菇棚内收集腹部较鼓的雌虫和雄虫，放入步骤二中继代培养后的长满菌丝的培养皿内饲养，在25℃培养箱中黑暗1～2天后成虫产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫。

[0020] 步骤四：迟眼蕈蚊继代饲养。

[0021] (1)用步骤二制备的继代培养后的长满菌丝的培养皿饲养步骤三中的迟眼蕈蚊第一代幼虫即种虫，幼虫孵化后8～12天化蛹。

[0022] (2)迟眼蕈蚊的第一代幼虫即种虫将长满菌丝的培养皿内的平菇菌丝取食完后，用解剖刀或小镊子将带有幼虫的培养基划成若干块，分别放入新的长满菌丝的培养皿内，继续饲养。

[0023] (3)迟眼蕈蚊化蛹后，用勾线笔将蛹挑入新的长满菌丝的培养皿内，进行继代繁殖。

[0024] 注：25℃条件下，蛹期和卵期分别3～4天，幼虫期8～12天，可根据试验需求选取不同时期的迟眼蕈蚊幼虫进行试验。

[0025] 本发明具有如下优点：

[0026] (1)本发明利用菌丝饲养迟眼蕈蚊，避免了依靠新鲜寄主植物饲养受季节限制的缺点。

[0027] (2)本发明的饲养方法节省人工，操作简单。迟眼蕈蚊的一个发育周期只需要操作2～3次，极大的节省了工时。

附图说明

[0028] 图1为本发明提供的室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法流程图。

具体实施方式

[0029] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。

[0030] 本发明提供一种室内大量饲养迟眼蕈蚊的方法，如图1所示流程，具体包括如下步骤：

[0031] 步骤一：PDA培养基制作。

[0032] (1)用电子秤秤取成品PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂)39g，倒入2000mL烧杯中。取1000mL水倒入烧杯中，边倒边搅拌。可放在沸水浴锅中加热，促进溶解。

[0033] (2)将溶解好的培养基分装到4个500mL三角瓶中，用封口膜和皮筋封好口，121℃灭菌20分钟。

[0034] (3)灭菌完成后温度降到50～60℃时，取出培养基，在超净工作台中操作，加入乳酸。每1000mL培养基加入乳酸200μL，摇匀。所述乳酸的质量百分比浓度为25％。

[0035] (4)在超净工作台内，将加好乳酸的培养基倒入直径9cm的培养皿中，培养基吹干后得到具有干燥培养基的培养皿备用。

[0036] 步骤二：平菇菌丝接种、培养。

[0037] (1)菌种活化。在超净工作台内用接种环刮取试管中的平菇菌丝，接种到步骤一的具有干燥培养基的培养皿上，保证无菌环境，避免杂菌污染。将接种好的培养皿放在25℃培养箱中，24小时黑暗培养，5天左右菌丝长满可进行扩大培养。

[0038] (2)继代培养。在超净工作台内将长满菌丝的培养基分割成若干小块，接种到新的干燥培养基上，在25℃培养箱中进行24小时黑暗培养。长满菌丝的培养皿放入冰箱中冷藏保存，供迟眼蕈蚊饲养用。

[0039] 注：培养基制作和平菇菌丝接种过程中注意严格无菌条件，避免杂菌污染。

[0040] 步骤三：迟眼蕈蚊种虫获得。

[0041] 所述迟眼蕈蚊种虫获得通过如下两种方式中的任意一种实现：

[0042] (1)在菇棚内收集被迟眼蕈蚊为害的菇棒，带回实验室。挑取菇棒上的迟眼蕈蚊四龄幼虫或蛹，放入长满菌丝的培养皿内；将接入迟眼蕈蚊的长满菌丝的培养皿放入25℃培养箱中黑暗培养，四龄幼虫培养5～7天后，蛹培养3～4天后，成虫羽化。让羽化后的成虫在长满菌丝的培养皿内自由交配产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫。

[0043] (2)也可用吸虫器在迟眼蕈蚊为害严重的菇棚内收集腹部较鼓的雌虫和雄虫，放入步骤二中继代培养后的长满菌丝的培养皿内饲养，在25℃培养箱中黑暗培养1～2天后成虫产卵，孵化的第一代幼虫作为种虫。

[0044] 步骤四：迟眼蕈蚊继代饲养。

[0045] (1)用长满菌丝的培养皿饲养迟眼蕈蚊第一代幼虫，即步骤三中获得的种虫，幼虫孵化后8～12天化蛹。

[0046] (2)迟眼蕈蚊幼虫将长满菌丝的培养皿内的平菇菌丝取食完后，用解剖刀或小镊子将带有幼虫的培养基划成若干块，分别放入新的长满菌丝的培养皿内，继续饲养。

[0047] (3)迟眼蕈蚊化蛹后，用勾线笔将蛹挑入新的长满菌丝的培养皿内，进行继代繁殖。

[0048] 注：25℃条件下，迟眼蕈蚊的蛹期和卵期分别3～4天，幼虫期8～12天，可根据试验需求选取不同时期的迟眼蕈蚊幼虫进行试验。

[0049] 在25℃条件下，用盆栽韭菜苗饲养迟眼蕈蚊，完成一代(从卵到成虫)需要23～25天，每盆韭菜苗接入5对迟眼蕈蚊成虫时可获得150～200头幼虫；用新鲜土豆为饲料饲养迟眼蕈蚊，完成一代需要20～23天，每盒接入5对迟眼蕈蚊成虫时可获得200～300头幼虫。本发明提供的方法饲养迟眼蕈蚊，完成一代需要14～20天，每个培养皿中接入5对迟眼蕈蚊成虫时可获得400～500头幼虫。

[0050] 本发明提供的方法饲养材料为平菇菌丝，容易获得，没有季节性限制；饲养容器为培养皿，占空间小，培养箱内可同时做大量培养皿进行周年繁殖；与其他方法相比，本发明提供的方法易操作、省工时，周期短，成活率高，可获得大量发育一致的幼虫供试验。