一株荧光假单胞菌pf27及其在植物促生中的应用

摘要

本发明公开了一株荧光假单胞菌pf27及其在植物促生中的应用。本发明提供了一株荧光假单胞菌pf27，并制备得到微生物菌剂pf27。通过实验证明微生物菌剂pf27处理后对植物的株高、根长等有明显地提高，对植株具有一定的促生作用，经pf27处理的作物与对照组相比，促生效果超21.55％，最高可达829.14％，具有广谱、高效促进植物生长的作用，尤其能够促进茄科蔬菜类农作物生长、提高其品质。本发明解决了化学肥料等其它方法效果不佳或者有残留等问题，而且有助于促进农业可持续发展，具有较好的应用前景。

权利要求

1.一株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27，其保藏编号为CGMCC No. 

14105。

2.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在促进植株生长中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

3.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在制备促进植株生长的产品中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

4.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在增加植物鲜重和/或鲜重生物量中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

5.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在制备增加植物鲜重和/或鲜重生物量的产品中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

6.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27，其保藏编号为CGMCC No. 14105。

7.荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或含有其的菌剂在制备提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度的产品中的应用；

所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

8.一种产品，其活性成分为权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27或其菌悬液或含有其的菌剂；

所述产品具有如下1）-3）中任一种功能：

1）促进植株生长；

2）增加植物鲜重和/或鲜重生物量；

3）提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度。

9.一种促进植物生长的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27或其菌悬液处理植物幼苗。

说明书

一株荧光假单胞菌pf27及其在植物促生中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株荧光假单胞菌pf27及其在植物促生中的应用。

背景技术

[0002] 集约化生产带来的连作障碍问题已经严重影响到农作物的产量和品质、植株生理特征和土壤微生物群落结构以及植物病虫害猖獗等一系列问题，严重影响到农业的种植效益和健康发展。化学肥料的大范围的过量施用对环境和人体健康造成了极大伤害，已成为影响环境、人类健康及社会发展的重要因素。近年来，由于化学农药和化学肥料大规模的生产和无限制的大量使用，对人类生活环境和农林牧产品造成污染，危害了人畜健康和水土等环境资源，制约了农业生产的可持续发展，己成为当前严重的社会问题之一。为此，利用农业生态系中有益微生物，防治植物虫害、病害，提高作物生长、增加作物产量日益成为人们研究的热点。植物的生长发育与周围环境中的微生物有着密切关系，植物的生长势常取决于植物与微生物之间的互作结果。在植物--微生物系统中，微生物既与植物的地上部分(如叶围)又与地下部分相联系，从而影响着土壤的结构、土壤中养分的可利用性及产生一些对植物有益或有害的代谢产物。

[0003] 过多地偏施单一性质的几种化肥容易导致作物的营养失调，化肥大多是含有各种不同的盐类，其中氮、磷、钾等化学物质极易被土壤固结，在土壤中积累，土质盐碱化，造成土壤养分失衡，影响和阻碍农作物对所吸收养分物质的转化吸收，使果蔬生长性状低劣，作物口感和品质变差，质量下降，如蔬菜吃起来不香、瓜果吃起来不甜、口感差，且易腐烂，不宜存放。土壤中一类微生物如荧光假单胞菌、木霉、芽孢杆菌等可以借助其代谢过程或代谢产物改善植物生长条件，如增加养分，分泌激素，刺激植物根系发育等，诱导植物产生对植物病害如晚疫病、镰刀菌引起的根腐病害的防御反应。微生物所产生的次生代谢产物中，含有对植物生长发育具有刺激作用的物质。马铃薯根际荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的群落动力学以及优势菌株的数量及其对马铃薯生长的影响，为把温室试验所取得的促进植物生长的效果应用于田间提供了基础和依据。微生物体产生的聚合物具有抗干旱、降低水分胁迫、改善土壤结构、供应植物有机营养和调节离子活性的能力，微生物在其生命活动期间能溶解土壤中植物难以利用的矿物元素，并把它们转化成具促生活性作用的物质，从而帮助植物吸收各种矿质元素。土壤中含有很多钾细菌和磷细菌，它们能够将土壤矿物无效态的钾和磷释放出来，供植物生长发育用。微生物能促使根系周围的有机物形成腐殖酸，提供植物的抗逆性，降解土壤中污染物，减少对植物的毒性，增加土壤中腐殖酸含量，促进植物生长发育。因此，人们迫切需要更安全有效的代替产品。近年来，微生物制剂因具有环境友好、促生增产、防病等特点而备受关注。利用土壤中有益微生物开发成微生物肥料是近年来的研发热点。

发明内容

[0004] 本发明的一个目的是提供一株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

[0005] 本发明提供的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27的保藏编号为CGMCC No.14105。

[0006] 本发明的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27的分类命名为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens，该菌株已于2017年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.14105。

[0007] 本发明的另一个目的是提供荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂的新用途。

[0008] 本发明提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在促进植株生长中的应用。

[0009] 本发明还提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在制备促进植株生长的产品中的应用。

[0010] 本发明还提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在增加植物鲜重和/或鲜重生物量中的应用。

[0011] 本发明还提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在制备增加植物鲜重和/或鲜重生物量的产品中的应用。

[0012] 本发明还提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度中的应用。

[0013] 本发明还提供了荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂在制备提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度的产品中的应用。

[0014] 上述应用中，所述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens具体可为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27。

[0015] 本发明还有一个目的是提供一种产品。

[0016] 本发明提供的产品的活性成分为上述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂；

[0017] 所述产品具有如下1)-3)中任一种功能：

[0018] 1)促进植株生长；

[0019] 2)增加植物鲜重和/或鲜重生物量；

[0020] 3)提高植物株高和/或茎粗和/或根数量和/或叶片数量和/或叶片面积和/或最高叶片生长高度。

[0021] 本发明的最后一个目的是提供一种促进植物生长的方法。

[0022] 本发明提供的促进植物生长的方法包括如下步骤：用上述荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens pf27或其菌剂处理植物幼苗。

[0023] 上述方法中，所述处理植物幼苗的菌剂浓度为1×105CFU/mL。

[0024] 上述应用或上述产品或上述方法中，所述菌剂的具体制备方法如下：将荧光假单胞菌pf27在KB培养液中进行培养，得到pf27菌液，将pf27菌液离心，收集沉淀；用灭菌水将所述沉淀稀释至浓度为1×109-1×1010CFU/mL，得到所述菌剂。

[0025] 上述应用或上述产品或上述方法中，所述植物为茄科植物或十字花科植物或禾本科植物。所述茄科植物具体可为番茄和马铃薯；所述十字花科植物具体可为甘蓝、快菜和大白菜；所述禾本科植物具体可为小麦和玉米。

[0026] 本发明通过对已有菌株的再次开发，筛选到荧光假单胞菌pf27，并制备得到微生物菌剂pf27。通过实验证明微生物菌剂pf27处理后对植物的株高、根长等有明显地提高，对植株具有一定的促生作用，经pf27处理的作物与对照组相比，促生效果超21.55％，最高可达829.14％，具有广谱、高效促进植物生长的作用，尤其能够促进茄科蔬菜类农作物生长、提高其品质。本发明解决了化学肥料等其它方法效果不佳或者有残留等问题，而且有助于促进农业可持续发展，具有较好的应用前景。

附图说明

[0027] 图1为基于16s rDNA序列构建的pf27系统发育树。

[0028] 图2为微生物菌剂pf27对茄科作物番茄的促生效果。A.左图对照组茄科作物番茄中杂9号植株生长的状态，右图pf27菌剂处理下番茄植株的生长状态，图片为植株移植后21天拍摄；B.pf27菌剂处理下番茄的植株株高与对照组数据统计；C.pf27菌剂处理下番茄的植株叶片总数与对照组植株叶片总数数据统计；D.pf27菌剂处理下番茄植株鲜重与对照植株鲜重数据统计；E.pf27菌剂处理下番茄植株直径(茎粗)与对照组植株直径(茎粗)数据统计；F.pf27菌剂处理下番茄植株顶端2片新叶面积与对照组数据统计，所有数据统计植株移栽后33天，n＝9，3次重复，注：*表示在0.05水平上差异显著，**表示在0.01水平上差异显著，***表示在0.001水平上差异显著，同下。

[0029] 图3为微生物菌剂pf27对茄科作物马铃薯的促生效果。A.左图对照组茄科作物马铃薯植株生长的状态，右图pf27菌剂处理下马铃薯植株的生长状态，图片为移栽后4周拍摄；B.pf27菌剂处理下马铃薯的植株株高与对照组植株数据统计；C.pf27菌剂处理下马铃薯植株叶片总数与对照组数据统计；D.pf27菌剂处理下马铃薯植株生根数目与对照组植株生根数目数据统计；E.pf27菌剂处理下马铃薯的植株根长度与对照组植株根长度数据统计；F.pf27菌剂处理下马铃薯和对照组植株产薯情况比较；G.pf27处理下马铃薯和对照组植株产薯总重量数据统计，n＝6，3次重复。

[0030] 图4为微生物菌剂pf27对十字花科作物甘蓝的促生效果。A.左图对照组十字花科甘蓝植株，右图pf27菌剂处理下甘蓝植株的生长状态，图片拍摄于植株移植后33天；B.pf27菌剂处理下甘蓝植株顶端2片新叶面积与对照组植株面积数据统计，每株植株统计2片顶端新叶；C.pf27菌剂处理下甘蓝与对照组植株叶片总数数据统计；D.pf27处理下甘蓝植株鲜重与对照组植株鲜重数据统计；E.pf27菌剂处理下甘蓝植株直径(茎粗)与对照组植株直径(茎粗)比较，n＝9，3次重复。

[0031] 图5为微生物菌剂pf27对十字花科作物四季青快菜的促生效果。A.左图对照组四季青快菜植株生长的状态，右图pf27菌剂处理下四季青快菜植株的生长状态，图片拍摄于植株移植后22天；B.pf27菌剂处理四季青快菜与对照组植株叶片总数目数据统计；C.pf27菌剂处理下四季青快菜植株鲜重与对照组植株鲜重；D.pf27处理下四季青快菜植株顶端2片新叶面积与对照组植株面积，每株统计2片顶端新叶，n＝9，3次重复。

[0032] 图6为微生物菌剂pf27对十字花科作物大白菜的促生效果的影响。A.左图为对照组大白菜北京新3号植株生长状态，右图为pf27菌剂处理下大白菜植株的生长状态，图片拍摄于植株移植后22天；B.pf27菌剂处理下大白菜与对照组植株叶片总数数据统计；C.pf27菌剂处理下大白菜植株鲜重与对照组植株鲜重；D.pf27菌剂处理下大白菜植株顶端2片新叶面积与对照组植株面积，每株统计2片顶端新叶，n＝8，3次重复。

[0033] 图7为微生物菌剂pf27对十字花科作物的促生效果的影响。A.右图pf27菌剂处理下十字花科作物甘蓝植株总量，左图为对照组甘蓝植株总量，n＝9；B.右图pf27菌剂处理下十字花科四季青快菜植株总量，左图对照甘蓝植株总量，n＝9；C.右图pf27菌剂处理下十字花科大白菜北京新3号植株总量，左图对照甘蓝植株总量，n＝8；D.甘蓝，四季青快菜和大白菜北京新3号生物量变化统计。

[0034] 图8为微生物菌剂pf27对禾本科作物小麦的促生效果的影响。A.左图对照组禾本科小麦JN17植株生长状态比较，右图pf27菌剂处理下小麦植株生长状态，n＝9；B.pf27菌剂处理下和对照组禾本科植株小麦JN17植株叶片最低高度(Low)和最高高度(High)差异的统计，n＝9，图片拍摄于播种后27天后。

[0035] 图9为微生物菌剂pf27对禾本科作物玉米的促生效果的影响。A.左图对照组禾本科植物玉米Mo17植株生长趋势图，右图pf27菌剂处理下禾本科植物玉米Mo17植株，图片拍摄移栽后22天，n＝9，3次重复；B.pf27菌剂处理下和对照组禾本科植株玉米Mo17植株茎粗的比较；C.pf27菌剂处理下和对照组禾本科植株玉米Mo17植株茎的比较；D.pf27菌剂处理下禾本科植物玉米Mo17和对照组玉米植株株高的比较；E.pf27菌剂处理下禾本科植物玉米Mo17和对照组玉米植株茎粗的比较。

[0036] 保藏说明

[0037] 菌种名称：荧光假单胞菌

[0038] 拉丁名：Pseudomonas fluorescens

[0039] 菌株编号：pf27

[0040] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

[0041] 保藏机构简称：CGMCC

[0042] 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

[0043] 保藏日期：2017年5月8日

[0044] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No.14105

具体实施方式

[0045] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0046] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0047] 下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

[0048] 下述实施例中的用到的细菌分离培养基如下：

[0049] MEA培养基：Malt extract 30g，Mycological peptone 5g，琼脂粉15g，pH5.4；

[0050] 牛肉膏蛋白胨培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂粉12g，水1000ml，pH 7.2-7.4；

[0051] LB培养基：氯化钠10g，蛋白胨10g，酵母提取物5g，琼脂粉12g，水1000ml，pH 7.0；

[0052] KB培养基：蛋白胨20g，K2HPO4 1.5g，甘油8ml，MgSO4 0.74g，H2O补足到1L，pH 7.0；固体培养基加琼脂粉12g。

[0053] 实施例1、pf27菌株的分离与鉴定

[0054] 一、pf27菌株的分离

[0055] pf27分离自云南省普洱市疣粒野生稻区根际土壤(北纬22。33’56”，100。35’12”，海拔737米)。具体分离方法如下：将采自疣粒野生稻区的根际土壤，挑取根系，刮取根际土，称-6量5g，无菌条件下放进已准备好的灭菌三角瓶中，用灭菌水梯度稀释到10 倍，设置3个重复。将梯度稀释的土壤样品取200μl分别涂到MEA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基和KB培养基平板上，分别在28℃，37℃培养箱中培养，每天观察菌落的生长状态，结果显示稀释为10-5、10-6倍时平板上基本上没有菌落长出，而稀释为10-4倍时，平板上能长出单一的菌落，并挑取在KB培养基上长出单一的菌落，将其命名为pf27菌株，然后在KB液体培养基中扩大培养，做进一步的菌株鉴定。

[0056] 二、pf27菌株的鉴定

[0057] 1、pf27菌株的形态鉴定

[0058] pf27菌株在KB培养基上培养24h～48h后可形成橙色菌落，菌落状态呈圆形，表面光滑有凸起边缘整齐，较粘稠，易挑起。

[0059] 2、pf27菌株的分子鉴定

[0060] 提取pf27菌株的DNA，采用通用引物Eubac27F/Eubac1492R进行PCR扩增，得到含有pf27菌株16S rDNA保守区的PCR产物。引物序列如下：

[0061] Eubac27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；

[0062] Eubac1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。

[0063] 将PCR产物经TA克隆连接到pEASY-T3(购买自北京全式金生物有限公司)，以通用引物在英潍捷基公司测序。

[0064] 测序结果表明：PCR产物的核苷酸序列如序列1所示。将测序所得序列与NCBI数据库进行blast比对后，通过MEGA5.1软件对pf27和其他代表22种不同假单胞菌种的荧光假单胞模式菌株进行系统发育分析，系统发育树如图1所示。

[0065] 综合上述鉴定结果，确定pf27菌株名称为荧光假单胞菌，其分类命名为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens，该菌株已于2017年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.14105。

[0066] 实施例2、微生物菌剂pf27的制备

[0067] 将实施例1中获得的荧光假单胞菌pf27在KB培养基中振荡培养，在28℃，200rpm条件下振荡培养12-16h，然后4000rpm离心20min，弃上清液，收集菌体菌体沉淀，再用灭菌水将菌体沉淀进行稀释，制成微生物菌剂pf27(菌剂pf27)，微生物菌剂pf27成品中pf27活菌总浓度为1×109-1×1010CFU/mL。

[0068] 实施例3、微生物菌剂pf27对茄科作物番茄幼苗的促生效果

[0069] 一、实验方法

[0070] 将中杂9号番茄种子(中蔬种业科技(北京)有限公司生产)用3％NaClO溶液消毒10min后用，ddH2O清洗6次，得到消毒后种子。然后将消毒后种子均匀铺在灭菌的蛭石泥炭土基质(蛭石和泥炭土按照1:1的比例混匀，121℃高压灭菌，20min)发苗，在26℃，12h:12h光照：黑暗条件下培养种子萌发，待种子萌发生长到两片真叶时，分别移栽到均匀添加菌剂pf27(使用浓度为每kg蛭石泥炭土基质混合物为添加50ml OD值为1的菌液，菌液使用终浓度在1×105CFU/mL)和对照的营养穴中，番茄苗移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，放置在温室中生长(条件：光照时间12h，温度26℃，相对湿度50％)。继续放置上述条件下培养，每个培养盆中移栽1株幼苗，每个处理27个重复。以不添加任何菌剂作为对照(Control)。移栽33天后统计每一株植物的株高、叶片数、番茄植株鲜重、番茄植株茎粗、番茄顶端2片新叶叶面积，并计算生物量增加。生物量增加(％)＝(处理组植株鲜重–对照组植株鲜重)/对照组植株鲜重×100％。

[0071] 二、促生效果统计

[0072] 结果如图2所示。微生物菌剂pf27对番茄幼苗能够产生明显的促生效果，与对照组相比，微生物菌剂pf27处理后番茄植株的平均株高增加了18％、叶片数增加23％、植物直径(茎粗)是对照组的2.5倍，而pf27处理的叶片面积增加达到5倍之多，番茄植株的生物量增加达到771.16％。

[0073] 实施例4、微生物菌剂pf27对茄科作物马铃薯幼苗的促生效果

[0074] 一、实验方法

[0075] 将购买自北京首航超市内的土豆挑选后放置在潮湿黑暗的环境中，经过一周后，挑选出芽一致的健康土豆的芽，用70％的酒精灭菌消毒刀片将其切下。然后将幼芽移栽到均匀添加菌剂pf27(50ml/Kg，菌液终浓度在105CFU/mL)的塑料花盆(规格上口直径:14厘米，下口直径9.5厘米，高度12.5厘米)和灭菌的蛭石基质(按照1:1比例混匀，121℃高压灭菌，20min)中，表面覆盖一层保鲜膜保湿，待其长出子叶后将其去掉，放置在温室中生长(条件：光照时间12h，温度26℃，相对湿度50％)。以不添加任何菌剂作为对照(Control)，每个处理16株苗，3次重复。移栽28天后统计马铃薯的株高、叶片数、根的长度，根数目以及马铃薯结薯情况，并计算生物量增加。生物量增加(％)＝(处理组植株鲜重–对照组植株鲜重)/对照组植株鲜重×100％。

[0076] 二、促生效果统计

[0077] 结果如图3所示，微生物菌剂pf27能够显著促进马铃薯幼苗的生长，表现在马铃薯的株高增加多达4倍，与对照相比，叶片数和根数目分别增加114％和50％。在无化学肥料的使用情况下，微生物菌剂pf27处理的马铃薯产薯量显著增加，统计结果表明微生物菌剂pf27对马铃薯的生物量增加达到1115.15％。

[0078] 实施例5、微生物菌剂pf27对十字花科作物甘蓝的促生效果

[0079] 一、实验方法

[0080] 按照实施例3中的实验方法对甘蓝品种京丰一号(中国农业科学院蔬菜花卉研究所)的种子进行催芽，直到长出2片真叶将幼苗移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，继续放置上述条件下培养，每个培养盆中移栽1株幼苗，每个处理9个重复，重复3次，以不添加任何菌剂作为对照(Control)。移栽33天后统计每一株植物的叶片数、植株鲜重、甘蓝植株茎粗、甘蓝顶端2片新叶叶面积，并计算生物量增加。生物量增加(％)＝(处理组植株鲜重–对照组植株鲜重)/对照组植株鲜重×100％。

[0081] 二、促生效果统计

[0082] 结果如图4所示，微生物菌剂pf27能够显著促进甘蓝幼苗的生长，主要体现在甘蓝的叶片数、茎粗和鲜重与对照相比，都有显著的增加，叶面积与对照相比极显著性的增加。在无化学肥料的使用情况下，微生物菌剂pf27处理的甘蓝的鲜重生物量的统计结果显示微生物菌剂pf27对甘蓝的生物量增加达到400.00％。

[0083] 实施例6微生物菌剂pf27对十字花科作物快菜的促生效果

[0084] 一、实验方法

[0085] 按照实施例3中的实验方法对快菜品种四季快菜1号(国家蔬菜工程技术研发中心)的种子进行催芽，直到长出2片真叶将幼苗移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，继续放置上述条件下培养，每个培养盆中移栽1株幼苗，每个处理9个重复，重复3次，以不加任何菌液作为对照。移栽22天后统计每一株植物的叶片数、植株鲜重、快菜顶端2片新叶叶面积，并计算生物量增加。生物量增加(％)＝(处理组植株鲜重–对照组植株鲜重)/对照组植株鲜重×100％。

[0086] 二、促生效果统计

[0087] 结果如图5所示，微生物菌剂pf27能够显著促进快菜幼苗的生长，主要体现在快菜的叶片数、鲜重和叶面积，与未做任何处理的对照组相比，都有显著的增加。在无化学肥料的使用情况下，微生物菌剂pf27处理的四季青快菜的鲜重生物量的统计结果显示微生物菌剂pf27对快菜的生物量增加达到137.27％。

[0088] 实施例7、微生物菌剂pf27对十字花科作物大白菜的促生效果影响

[0089] 一、实验方法

[0090] 按照实施例3中的实验方法对大白菜品种北京新3号(国家蔬菜工程技术研发中心)的种子进行催芽，直到长出2片真叶将幼苗移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，继续放置上述条件下培养，每个培养盆中移栽1株幼苗，每个处理9个重复，重复3次，以不加任何菌液作为对照。移栽22天后统计每一株植物的叶片数、植株鲜重、大白菜顶端2片新叶叶面积，并计算生物量增加。生物量增加(％)＝(处理组植株鲜重–对照组植株鲜重)/对照组植株鲜重×100％。

[0091] 二、促生效果统计

[0092] 结果如图6所示，微生物菌剂pf27能够促进大白菜幼苗的生长，主要体现在大白菜的叶片数与未做任何处理的对照组相比显著性增加，鲜重和叶面积在短期内暂时无显著性的差异。在无化学肥料的使用情况下，微生物菌剂pf27处理的大白菜的鲜重生物量的统计结果显示微生物菌剂pf27对大白菜的生物量增加达到9.72％。

[0093] 十字花科的甘蓝、四季青快菜和大白菜的促生效果比较结果如图7所示，微生物菌剂pf27对十字花科的甘蓝、四季青快菜有显著的促生的效果，但是对大白菜北京新3号的的促生效果确并不明显，说明此pf27菌剂只适合部分十字花科作物。

[0094] 实施例8、微生物菌剂pf27对禾本科作物小麦促生的效果

[0095] 一、实验方法

[0096] 首先将小麦种子济南17(JN17)用3％NaClO溶液消毒10min后用，ddH2O清洗6次，得到消毒后种子，然后将消毒后的种子均匀铺在放有一层无菌滤层的大平板上，灭菌的ddH2O滤纸保持湿润，放置在37℃培养箱过夜催芽，待小麦种子的胚萌发后，按照实施例3中的实验方法，将其移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，继续放置在室温条件下培养，每个培养盆中均匀移栽数株种子，每个处理9个重复，重复3次，以不加任何菌液作为对照。移栽27天后观察小麦生长趋势，统计小麦幼苗的最低叶片和最高叶片的高度趋势变化。

[0097] 二、促生效果统计

[0098] 结果如图8所示，微生物菌剂pf27能够促进小麦幼苗早期的生长，主要体现在与未做任何处理的对照组相比，小麦幼苗叶片的最低生长高度不存在显著的差异，但是最高叶片的生长高度明显高于对照组。

[0099] 实施例9、微生物菌剂pf27对禾本科作物玉米的促生效果

[0100] 一、实验方法

[0101] 首先将玉米种子Mo17(自交玉米系，由中国科学院动物研究所张晓明研究员惠赠)用3％NaClO溶液消毒10min后用，ddH2O清洗6次，得到消毒后种子，然后将消毒后种子均匀铺在放有一层无菌滤层的大平板上，灭菌的ddH2O滤纸保持湿润，放置在37℃培养箱过夜催芽，待玉米种子的胚和根萌发后，按照实施例3中的实验方法，将其移栽到育苗穴盘中(穴盘规格上口直径9厘米，下口直径6厘米，高度8厘米)，继续放置在室温条件下培养，每个培养盆中均匀移栽1株发育无差异的玉米种子，每个处理9个重复，重复3次，以不加任何菌液作为对照。

[0102] 移栽22天后统计每一玉米植株的茎粗和株高。

[0103] 二、促生效果统计

[0104] 结果如图9所示，微生物菌剂pf27能够显著促进玉米幼苗的生长，主要体现在玉米植株的高度和直径(茎粗)，与未做任何处理的对照组相比，微生物菌剂pf27处理的茎粗有极显著性差异。微生物菌剂pf27处理的玉米植株的茎粗是对照组的1.6倍。