一种多组样本组织共包埋方法

摘要

一种多组样本组织共包埋方法是，取新鲜的、与待测样本同源的雄性动物阴囊皮肤组织，切成设定大小的皮块，将皮下组织和脂肪剔除干净，浸泡在4‑6%多聚甲醛溶液中24小时以上，然后常规脱水，浸蜡，固定在支撑板上，于0℃环境下冷却，冷却后将浸蜡的动物皮在0℃环境下按使用需要切成设定大小和形状的动物皮块，将上述动物皮块按一定角度竖直设置成多个预埋区。将多个样本组织分别设置在样本组织包埋区内，然后用石蜡灌封成一整体结构。将样本组织薄膜吸附于多聚赖氨酸包被的载玻片上，60℃干燥箱中烤片2小时，常规脱蜡。本发明提高了对样本组织的检测和分析精度，减少人为操作造成的误差，提高了工作效率。

权利要求

1.一种多组样本组织共包埋方法，其特征在于包括下述步骤：

（1）、制备样本组织包埋骨架：

取同种属雄性动物阴囊皮，切成设定大小的皮块，脱毛后再用手术刀将皮下组织和脂肪剔除干净，浸泡在4-6%多聚甲醛溶液中24小时以上，然后常规脱水，浸蜡，将浸蜡后的动物皮展平，固定在支撑板上，于0℃环境下冷却，冷却后将浸蜡的动物皮在0℃环境下按使用需要切成设定大小和形状的动物皮块，并按包埋样本组织数量需要，将上述动物皮块按一定角度竖直设置和对应连接成至少具有二个样本组织包埋区的样本组织包埋骨架，备用；

（2）、将待包埋的组织切成多个设定大小和形状的样本组织，将多个样本组织分别设置在步骤（ 1） 制成的样本组织包埋骨架的样本组织包埋区内，同时将每一块样本组织固定在样本组织包埋骨架内与之相邻的隔断用动物皮上；然后用石蜡灌封成一整体结构，构成包埋多相样本组织石蜡块；

上述包埋多相样本组织石蜡块，沿冠状面切片，每张切片中样本组织与动物皮间隔排列，每张切片中样本组织被动物皮分隔成多个长方形、多个正方形、多个三角形或花瓣状排列；

（3）、将样本组织薄膜吸附于多聚赖氨酸包被的载玻片上，并于标记处做好组别位置标记；

（4）、60℃干燥箱中烤片2小时，常规脱蜡，进行相关实验技术的后续操作，即可。

2.根据权利要求1所述的一种多组样本组织共包埋方法，其特征在于所述的样本骨架中的间隔用动物皮块伸出石蜡体外。

说明书

一种多组样本组织共包埋方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于包埋生物组织的石蜡体，特别是涉及一种多组样本组织共包埋方法，能同时分析、观察、检测或试验多组样本生物组织，提高了工作效率，减少人为误差。

背景技术

[0002] 石蜡包埋技术是石蜡切片技术的前期组织处理技术之一。石蜡切片技术已有300多年的历史，是组织学常规技术中应用最为广泛的一项技术。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于生物学等许多其他学科领域的研究中。通常将病变组织包埋在石蜡块里，用切片机切成薄片，再根据科研过程中的不同需求进行染色，借助于显微镜观察切片中病理变化、特殊染色细胞、组织形态、蛋白表达、细胞凋亡等，进而得出支撑科研假说的实验结果。绝大部分的形态学相关实验技术均以石蜡切片为基础。例如：免疫组织化学技术、病理切片HE染色技术、免疫荧光单标技术、免疫荧光双标技术、原位核酸杂交技术、原位分子杂交技术、特殊染色技术（胶原纤维染色技术、弹性纤维染色技术、网状纤维染色、肌组织染色技术、神经元（细胞）尼氏体染色技术）等。

[0003] 但是目前石蜡切片，切片后每一片只能包埋一个组织细胞，从而降低了观察，研究组织病变的速度和效率。

发明内容

[0004] 本发明的目的，是提供一种多组样本组织共包埋方法，本发明制备的包埋隔断式石蜡块，切片后能同时包埋多组样本组织，提高了对样本组织的检测和分析精度，减少人为操作造成的误差，提高了工作效率。

[0005] 一种多组样本组织共包埋方法，其特征在于包括下述步骤：

[0006] 1、制备样本组织包埋骨架：

[0007] 取新鲜的、与待测样本同源的雄性动物阴囊皮肤组织，切成设定大小的皮块，脱毛后再用手术刀将皮下组织和脂肪剔除干净，浸泡在4-6%多聚甲醛溶液中24小时以上，然后常规脱水，浸蜡，将浸蜡后的动物皮展平，固定在支撑板上，于0℃环境下冷却，冷却后将浸蜡的动物皮在0℃环境下按使用需要切成设定大小和形状的动物皮块，并按包埋样本组织数量需要，将上述动物皮块按一定角度竖直设置和对应连接成至少具有二个样本组织包埋区的样本组织包埋骨架，备用。

[0008] 2、将待包埋的组织切成多个设定大小和形状的样本组织，将多个样本组织分别设置在步骤1制成的样本组织包埋骨架的样本组织包埋区内，同时将每一块样本组织固定在样本组织包埋骨架内与之相邻的动物皮上。然后用石蜡灌封成一整体结构，构成包埋多相样本组织石蜡块。

[0009] 上述包埋多相样本组织石蜡块，沿冠状面切片，每张切片中样本组织及动物皮间隔呈多个长方形、多个正方形、多个三角形或花瓣状排列。

[0010] 3、样本骨架中的间隔用动物皮可以伸出石蜡体外，以便于识别不同的包埋区。

[0011] 4、将样本组织薄膜吸附于多聚赖氨酸包被的载玻片上，并于标记处做好组别位置等相关标记。

[0012] 5、60℃干燥箱中烤片2小时，常规脱蜡，进行相关实验技术的后续操作，即可。

[0013] 本发明的优点：

[0014] 1．各组间可比性更高。

[0015] 2．后续实验反应条件完全一致。

[0016] 3．照片拍摄的曝光度等影响实验结果的参数设定完全一致。

[0017] 4．各组组织检测前处于同一基线。

[0018] 5．实验结果的形态学照片更可信。

[0019] 6．同种属实验动物皮肤做间隔，消除脱片等后顾之忧。

附图说明

[0020] 图1是5mm×12mm皮肤块示意图。

[0021] 图2是皮肤块切口位置示意图。

[0022] 图3是多组共包埋装置组合示意图。

[0023] 图4是多组共包埋装置俯视示意图。

[0024] 图5是共包埋蜡块结构立体示意图。

[0025] 图6是共包埋蜡块中组织排列平面图。

[0026] 图7 、图8、图9、图10和图11是不同构型的共包埋装置平面图。

具体实施方式

[0027] 一种多组样本组织共包埋方法，包括下述步骤：

[0028] 1 样本组织包埋骨架的制备

[0029] 1.1取同物种雄性动物阴囊部皮肤组织（2cm×1cm），并浸泡于4%多聚甲醛固定24小时以上。

[0030] 1.2 将上述处理好的动物皮固定好，进行常规脱水、固定好浸蜡，浸蜡后立即将动物皮展平并固定于泡沫板上，0℃环境中冷却。

[0031] 1.3 修整皮块，用手术刀将皮块修整为：0.5cm×1cm，长方形（如图1所示）。

[0032] 1.4在长方形皮块距离一侧宽边5mm处，垂直长边做0.25cm长的切口，并略微扩展切口宽度，切口另一侧长边变为7mm。（如图2所示）。

[0033] 1.5 根据实验分组选取皮肤块，切口相对，插入对向皮肤组织中，制成样本组织包埋骨架（如图3、4所示）。

[0034] 1.6将待包埋组织常规脱水，透明，浸蜡，根据上述隔断形状，修整组织块，将制备好的多个待包埋组织块分别设置在样本组织包埋骨架中的包埋区内，并用0.2mm×15mm规格的大头针将待包埋组织块固定在与之相邻的隔断用动物皮上，然后用石蜡灌封成一整体结构。并记录组别位置。包埋后蜡块中组织位置如图5、图6所示。

[0035] 1.7、沿石蜡块的冠状面进行切片，即得。其截面形状为具有四个包埋区，且在四个包埋区内包埋有四个样本组织的切片。将切片吸附于多聚赖氨酸包被的载玻片上，并于标记处做好组别位置等相关标记。60℃干燥箱中烤片2小时，常规脱蜡，进行相关实验技术的后续操作。切片后，组织分布如图6所示。

[0036] 1.8 根据实验分组不同，可设计不同构型的皮肤隔断，各切片平面图如图7、图8、图9、图10和图11所示。

[0037] 附图中虚线边框为包埋后蜡块边界；各个构型中两条较长隔断围成的区域命名为第一象限，逆时针排列分别为第二象限、第三象限、第四象限、第五象限……以便区分标记不同组别。

[0038] 对于4组样本及以上的隔断制作，将第一象限的两个边分别制作成：第一象限与末尾象限间隔设定为7mm；第一象限与第二象限间隔设定为6mm。这样设计后，在捞片过程中，无需记录反正面，顺序已固定。