一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器

摘要

本发明公开了一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器，属于快速检测技术领域。本发明是将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附时间为50～210s，然后将展青霉素分子印迹丝网印刷电极水平插入便携式电化学检测器卡槽内，记录扫描中的电流峰值，根据已知展青霉素的浓度与电流峰值之间的标准曲线I(μA)＝‑21.111log C(mol L‑1)–125.74(R2＝0.9907)进行计算，最后将测得的样品中展青霉素的浓度显示在LED屏上。本发明的传感器精确度高，稳定性高，可重复性高。

权利要求

1.一种检测展青霉素的方法，其特征在于，所述方法是先制备展青霉素分子印迹丝网印刷电极，然后利用电化学传感器进行检测；所述展青霉素分子印迹丝网印刷电极是先在工作丝网印刷电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，然后在工作丝网印刷电极表面电镀沉积金纳米粒子，再通过金硫键修饰对巯基苯胺；将得到的修饰了对巯基苯胺的丝网印刷电极浸置在与展青霉素具有相似结构的模板分子溶液中，孵育一段时间，再置于电聚合液中，电镀聚合，洗脱模板分子，工作丝网印刷电极表面形成分子印迹聚合物膜，即得到分子印迹丝网印刷电极；

所述在电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，是制备含有壳聚糖和碳量子点的碳量子点---壳聚糖修饰液，然后吸取修饰液滴加到工作电极上，干燥；

所述电镀沉积金纳米粒子，具体是：将工作电极置于2.43mmol·L-1氯金酸和0.1mol·L-1硫酸溶液中，在电位-0.2V电压下，电沉积时间为120s，以完成电镀；

所述通过金硫键修饰对巯基苯胺，具体是：将电镀沉积金纳米粒子后的丝网印刷电极浸置于60mmol·L-1对巯基苯胺乙醇溶液中，室温浸泡24h，之后用乙醇和水彻底清洗去除未吸附的对巯基苯胺，氮气吹干备用；

所述模板分子溶液的浓度为10mmol·L-1；

所述电镀聚合具体是：将静电吸附后的丝网印刷电极浸入10mL含有60mmol·L-1对巯基苯胺，50mmol·L-1四丁基高氯酸铵，10mmol·L-1模板分子和0.2g·L-1氯金酸，采用循环伏安法扫描，电聚合电压为：-0.2V～1.2V，扫描速率为：50mv/s，扫描圈数为：15；

所述模板分子为2-吲哚酮；

所述方法是将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附200s，然后将展青霉素分子印迹丝网印刷电极水平插入电化学检测器中；

检测器在设置一定的电压下，由对电极发出电子流经电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流值会被记录，根据产生的电流峰值与标准样品中展青霉素的浓度的标准曲线，最终计算得到待测样品中展青霉素的浓度；

所述标准曲线的获得方法是：制备含有不同已知浓度的展青霉素电导液，滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，并插入到电化学检测器中，检测电子从对电极，经过电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流峰值，以展青霉素浓度为横坐标，峰电流值为纵坐标，即得到标准曲线；其中电导液中展青霉素浓度范围：1×10-12～1×10-9mol·L-1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，电化学检测器的电压设置范围：0.0V～

0.2V，记录扫描中的电流峰值；展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线I(μA)＝-

21.111log C(mol·L-1)–125.74，R2＝0.9907。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有待测样品的电导液是待测样品溶-1 3/4 -1液与2.5mmol·L [Fe(CN)6] 和0.1mol·L KCl溶液的混合。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电化学检测器为便携式电化学检测器，是简易式电化学工作站，配备LED显示屏，展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线已内置于便携式电化学检测器程序中，待测样品中目标物质浓度能显示于LED显示屏上。

5.一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器，其特征在于，包括外插型一次性展青霉素分子印迹丝网印刷电极和便携式电化学检测器，其运行方式是将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附时间为50～

200s，然后将一次性电极水平插入便携式电化学检测仪卡槽内，检测读数；所述便携式电化学检测器的电压设置范围：0.0V～0.2V，记录扫描中的电流峰值，根据展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线进行计算，最后将测得的样品中展青霉素的浓度显示在LED屏上；

所述展青霉素分子印迹丝网印刷电极是先在工作丝网印刷电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，然后在工作丝网印刷电极表面电镀沉积金纳米粒子，再通过金硫键修饰对巯基苯胺；将得到的修饰了对巯基苯胺的丝网印刷电极浸置在与待测物质具有相似结构的模板分子溶液中，孵育一段时间，再置于电聚合液中，电镀聚合，洗脱模板分子，工作丝网印刷电极表面形成分子印迹聚合物膜，即得到分子印迹丝网印刷电极；

所述在电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，是制备含有壳聚糖和碳量子点的碳量子点---壳聚糖修饰液，然后吸取修饰液滴加到工作电极上，干燥；

所述电镀沉积金纳米粒子，具体是：将工作电极置于2.43mmol·L-1氯金酸和0.1mol·-1L 硫酸溶液中，在电位-0.2V电压下，电沉积时间为120s，以完成电镀；

所述通过金硫键修饰对巯基苯胺，具体是：将电镀沉积金纳米粒子后的丝网印刷电极浸置于60mmol·L-1对巯基苯胺乙醇溶液中，室温浸泡24h，之后用乙醇和水彻底清洗去除未吸附的对巯基苯胺，氮气吹干备用；

-1

所述模板分子溶液的浓度为10mmol·L ；

所述电镀聚合具体是：将静电吸附后的丝网印刷电极浸入10mL含有60mmol·L-1对巯基苯胺，50mmol·L-1四丁基高氯酸铵，10mmol·L-1模板分子和0.2g·L-1氯金酸，采用循环伏安法扫描，电聚合电压为：-0.2V～1.2V，扫描速率为：50mv/s，扫描圈数为15；

所述的模板分子为2-吲哚酮。

说明书

一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器

技术领域

[0001] 本发明涉及一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器，属于快速检测技术领域。

背景技术

[0002] 展青霉素(Patulin，Pat)，又称展青霉毒素、棒曲霉素、珊瑚青霉毒素，它是由曲霉和青霉等真菌产生的一种次级代谢产物，展青霉素具有广谱的抗生素特点。然而，由于它的毒性作用，对胃具有刺激作用，导致反胃和呕吐，毒理学试验表明，展青霉素具有影响生育、致癌和免疫等毒理作用，同时也是一种神经毒素。展青霉素具有致畸性，对人体的危害很大，导致呼吸和泌尿等系统的损害，使人神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭。展青霉素首先在霉烂苹果和苹果汁中发现，广泛存在于各种霉变水果和青贮饲料中。鉴于展青霉素的严重危害性，目前世界上已有十几个国家制定了水果及其制品中展青霉素的最高限量标准。国际上建议人类食用的苹果产品中的展青霉素残留量小于50μg/kg，而很多国家将果汁中的展青霉素残留量调整在更为严格的范围。2004年4月，由欧盟委员会通过的果汁准入新标准已在欧盟各成员国施行。果汁、特别是苹果汁及含苹果汁的酒精饮料中，展青霉素最大限量为50μg/kg，固体苹果产品中，展青霉素最大限量为25μg/kg，儿童用苹果汁和婴儿食品中，展青霉素最大限量为10μg/kg。相对于我国国家标准GB14974-2003《苹果和山楂制品中展青霉素限量》中的相应规定(50μg/kg)，欧盟新的标准对我国的苹果汁质量提出了更高的要求。
与其他真菌毒素不同，现在还没有商品化的展青霉素ELISA试剂盒。展青霉素霉素检测的常见方法包括薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC)。其中，HPLC结合紫外检测器分析检测展青霉素已经逐渐成为常规的方法。然而传统的HPLC方法的样品处理方法以及产品中共存的干扰物5-羟甲基糠醛严重影响了展青霉素检测的速度和准确性。所以，研究开发检测速度快、精确度高、检测限低并具有较高特异性的检测方法势在必行。

发明内容

[0003] 针对现有技术存在的上述不足，本发明提供了一种用于快速检测的便携式展青霉素分子印迹丝网印电化学传感器并将其用于展青霉素检测。

[0004] 本发明的第一个目的是提供一种分子印迹丝网印刷电极，所述子印迹丝网印刷电极是先在工作丝网印刷电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，然后在工作丝网印刷电极表面电镀沉积金纳米粒子，再通过金硫键修饰对巯基苯胺；将得到的修饰了对巯基苯胺的丝网印刷电极浸置在与待测物质具有相似结构的模板分子溶液中，孵育一段时间，再置于电聚合液中，电镀聚合，洗脱模板分子，工作丝网印刷电极表面形成分子印迹聚合物膜，即得到分子印迹丝网印刷电极。

[0005] 在一种实施方式中，所述在电极表面修饰碳量子点和壳聚糖，是制备含有壳聚糖和碳量子点的碳量子点---壳聚糖修饰液，然后吸取修饰液滴加到工作电极上，干燥。

[0006] 在一种实施方式中，所述电镀沉积金纳米粒子，具体是：将工作电极置于2.43mmol·L-1氯金酸和0.1mol·L-1硫酸溶液中，在电位-0.2V电压下，电沉积时间为120s，以完成电镀。

[0007] 在一种实施方式中，所述通过金硫键修饰对巯基苯胺，具体是：将电镀沉积金纳米粒子后的丝网印刷电极浸置于60mmol·L-1对巯基苯胺乙醇溶液中，室温浸泡24h，之后用乙醇和水彻底清洗去除未吸附的对巯基苯胺，氮气吹干备用。

[0008] 在一种实施方式中，所述模板分子溶液的浓度为10mmol·L-1。

[0009] 在一种实施方式中，所述电镀聚合具体是：将静电吸附后的丝网印刷电极浸入-1 -1 -110mL含有60mmol·L 对巯基苯胺，50mmol·L 四丁基高氯酸铵，10mmol·L 模板分子和
0.2g·L-1氯金酸，采用循环伏安法扫描，电聚合电压为：-0.2V-1.2V，扫描速率为：50mv/s，扫描圈数为：15。

[0010] 在一种实施方式中，所述待测物质为展青霉素，模板分子为2-吲哚酮。

[0011] 本发明的第二个目的是提供一种检测展青霉素的方法，所述方法是利用本发明分子印迹丝网印刷电极制备电化学传感器进行检测。

[0012] 在一种实施方式中，所述方法是将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附50～210s，然后将展青霉素分子印迹丝网印刷电极水平插入电化学检测器中；检测器在设置一定的电压下，由对电极发出电子流经电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流值会被记录，根据产生的电流峰值与标准样品中展青霉素的浓度的标准曲线，最终计算得到待测样品中展青霉素的浓度。

[0013] 在本发明的一种实施方式中，所述标准曲线的获得方法是：制备含有不同已知浓度的展青霉素电导液，滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，并插入到电化学检测器中，检测电子从对电极，经过电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流峰值，以展青霉素浓度为横坐标，峰电流值为纵坐标，即得到标准曲线；其中电导液中展青霉素浓度范围：1×10-12～1×10-9molL-1。

[0014] 在一种实施方式中，电化学检测器的电压设置范围：0.0V～0.2V，记录扫描中的电流峰值；展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线I(μA)＝-21.111logC(molL-1)–125.74(R2＝0.9907)。

[0015] 在一种实施方式中，所述标准曲线已内置于电化学检测器程序中，展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线I(μA)＝-21.111logC(molL-1)–125.74(R2＝0.9907).。进行计算，最后将测得的样品中展青霉素浓度显示在LED屏上。

[0016] 在一种实施方式中，所述电化学检测器为便携式电化学检测器，是简易式电化学工作站，配备LED显示屏，展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线已内置于便携式电化学检测器程序中，待测样品中目标物质浓度能显示于LED显示屏上。

[0017] 在本发明的一种实施方式中，所述含有待测样品的电导液是待测样品溶液与2.5mmol·L-1[Fe(CN)6]3/4和0.1mol·L-1KCl溶液的混合。

[0018] 在本发明的一种实施方式中，所述电导液是待测样品溶液与导电溶液(2.5mmol·L-1[Fe(CN)6]3/4和0.1mol·L-1KCl溶液)按照体积比1:9混合。

[0019] 在本发明的一种实施方式中，所述含有待测样品的电导液滴加到分子印迹丝网印刷电极表面的体积是60μL。

[0020] 在本发明的一种实施方式中，所述静置吸附时间为200s。

[0021] 在本发明的一种实施方式中，所述方法，还包括先插入标准品分子印迹丝网印刷电极，根据标准曲线校正便携式电化学检测器的检测结果，然后再插入滴加有待测样品的展青霉素分子印迹丝网印刷电极检测待测样品中展青霉素浓度。

[0022] 在本发明的一种实施方式中，所述方法是插入两个以上的标准品分子印迹丝网印刷电极对检测器进行校正。

[0023] 本发明的第三个目的是提供一种便携式展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器，包括外插型一次性展青霉素分子印迹丝网印刷电极和便携式电化学检测器，其运行方式是将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附时间为50～200s，然后将一次性电极水平插入便携式电化学检测仪卡槽内，检测读数；所述便携式电化学检测器的电压设置范围：0.0V～0.2V，记录扫描中的电流峰值，根据展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线进行计算，最后将测得的样品中展青霉素的浓度显示在LED屏上。

[0024] 在本发明的一种实施方式中，所述展青霉素分子印迹丝网印刷电极的制备方法如前面所述。

[0025] 在本发明的一种实施方式中，所述分子印迹丝网印刷电极，包括电极基片、接线端子、电极连线、工作电极、对电极、绝缘层；所述工作电极表面电镀了展青霉素分子印迹聚合物膜。

[0026] 在本发明的一种实施方式中，所述分子印迹丝网印刷电极，电极基片为一次性消费基片，工作电极，对电极与参比电极由电极连线导出，形成凸型三线式插口，可插入便携式电化学检测器，检测读数。

[0027] 在本发明的一种实施方式中，所述分子印迹丝网印刷电极，其电极基片印制了接线端子、电极连线与工作电极连成一体的一条电极基体和接线端子、电极连线与对电极连成一体的另一条电极基体，两条电极连线相互平行，电极连线在电极基体的中间部分，其表面涂覆一层PVC绝缘体。

[0028] 在本发明的一种实施方式中，所述分子印迹丝网印刷电极，工作电极的形状为圆形块状，对电极的形状为与工作电极同心相离的半圆环形块状，工作电极表面电镀聚合展青霉素分子印迹膜。

[0029] 本发明的优点和效果：

[0030] (1)便携式检测器主要突出快速、小巧、灵敏三大特征。应用范围广泛，只需要更改分子印迹膜，重新设置标准曲线，可以完成大多数能够制备分子印迹的化学物质的检测。

[0031] (2)本发明在修饰材料上进行了创新，碳量子点是一种粒径小于10nm、微观近乎准球形、有荧光性能的碳纳米颗粒。具备天然的的环境友好性和生物相容性，同时碳量子点表面丰富的官能团不仅使其具有良好的溶剂分散性，而且易于其它功能化修饰。采用碳量子点，壳聚糖，金纳米粒子三重修饰，改善了丝网印刷电极的稳定性，提高了灵敏度；本发明检测的目标物展青霉素具有一定的电化学活性，在电聚合过程种，结构可能会有一定的改变，因此在此理论基础上，本发明采用了与展青霉素具有相似结构的2-吲哚酮作为模板分子，进行电镀聚合，结果也表明在此方法基础上的分子印迹丝网印刷电极传感器对展青霉素具有很高的选择性。

[0032] (3)可以用于多种物质的检测，只需要替换电镀聚合不同被检测物的分子印迹模板分子，就可以制备得到各种需要检测的分子印迹膜的丝网印刷电极，在有已知浓度标准物分子印迹丝网印刷电极片的设置下，可以使得便携式电化学检测仪得到校正，然后检测所需要检测的分子印迹模板分子的量。同时每次检验都需要更换分子印迹丝网印刷电极片，避免重复使用带来的不稳定性。

[0033] (4)丝网印刷电极表面复合修饰纳米碳材料和电镀纳米金，用于增强而后电镀聚合的分子印迹聚合膜的接触比表面积，同时增加电子传递速率，而增大灵敏度。

[0034] (5)采用分子印迹聚合膜来作为识别靶点，检测特异性强，同时分子印迹电化学传感器兼具有可以实现现场检测，不受样品颜色、浊度的影响，样品可以不经复杂处理、无需分离的优点。结合能够快速灵敏检测的电化学分析方法，加上丝网印刷电极的低成本、高性能，使得能够快速、便捷的检测样品中的展青霉素。

[0035] (6)本发明的检测仪是一种能够真正的解决市场需要，能够满足工商部门，质检机构，科研高校等机构的检测需要的快速检测产品，可用于生产经营企业、质控人员、进出口检商、政府管理部门、医院甚至个人家庭的使用，适用于食品工业、饲料行业、环境保护、医学药筛和生物化学等领域。

附图说明

[0036] 图1：展青霉素分子印迹丝网印刷电极片的制备示意图；

[0037] 图2：复合修饰碳量子点，壳聚糖，金纳米粒子的电化学行为表征；(a)SPE，(b)AuNPs/SPE，(c)AuNPs/CS/SPE，(d)AuNPs/CS-CDs/SPE，扫描速度：0.05Vs；

[0038] 图3：(A)丝网印刷分子印迹聚合膜在2molL-1H2SO4中洗脱不同时间的DPV响应值(B)丝网印刷分子印迹膜在2.5×10-10molL-1展青霉素中孵育不同时间后的DPV响应值；

[0039] 图4：便携式展青霉素分子印迹电化学传感器结构图；(a)工作电极；(b)对电极；(c)参比电极；(d)绝缘层；(e)电极基片；(f)导电银浆；

[0040] 图5：便携式展青霉素分子印迹电化学传感器标准曲线检测：丝网印刷分子印迹膜在不同浓度展青霉素中孵育200s后的DPV响应值(a–k)1×10-13，5×10-13，1×10-12，5×10-12，1×10-11，5×10-11，1×10-10，5×10-10，1×10-9,，5×10-9和1×10-8molL-1；

[0041] 图6：便携式展青霉素分子印迹电化学传感器选择性；在展青霉素及其类似物溶液中孵育200s后的电流变化值；其中，Patulin代表展青霉素，HMP代表5-羟甲基糠醛，AOH代表交联孢酚、AME代表交链孢霉甲基醚。具体实施方案

[0042] 下面是对本发明进行具体描述。

[0043] 实施例1展青霉素分子印迹丝网印刷电极的制备

[0044] 展青霉素分子印迹丝网印刷电极的制备示意图如图1所示。具体制备方法如下：

[0045] (1)在工作丝网印刷电极表面修饰碳量子点：取碳量子点溶液(7ml)加入1.0％的壳聚糖乙酸溶液(3ml)，制备成碳量子点---壳聚糖修饰液，然后吸取10μL滴加到工作电极上，室温干燥。

[0046] (2)在工作丝网印刷电极表面电镀沉积金纳米粒子，电镀方法：工作电极置于2.43mmol·L-1氯金酸和0.1mol·L-1硫酸溶液中，在电位-0.2V电压下，电镀时间为120s，以完成电镀；

[0047] (3)通过金硫键修饰对巯基苯胺，修饰方法：将电镀沉积金纳米粒子的丝网印刷电极浸置于60mmol·L-1对巯基苯胺乙醇溶液中，室温浸泡24h，之后用乙醇和水彻底清洗去除未吸附的对巯基苯胺，氮气吹干备用；

[0048] (4)再将修饰了对巯基苯胺的丝网印刷电极浸置10mmol·L-12-吲哚酮溶液中，室温孵育4h，乙醇和超纯水洗涤后，氮气吹干备用；再将静电吸附后的丝网印刷电极浸入10mL含有60mmol·L-1对巯基苯胺，50mol·L-1四丁基高氯酸铵，10mol·L-12-吲哚酮和0.2g·L-1氯金酸，采用循环伏安法扫描，电聚合电压为：-0.2V-1.2V，扫描速率为：50mv/s，扫描圈数为：15；

[0049] (5)最后洗脱模板分子，将电聚合展青霉素分子印迹膜的丝网印刷电极浸置于2mol·L-1H2SO4中浸泡12min，然后将丝网印刷电极用超纯水淋洗，以完成展青霉素分子印迹膜的丝网印刷电极的制备。

[0050] 将含有待测样品的电导液60～100μL滴加到展青霉素分子印迹丝网印刷电极表面，静置吸附时间为50～200s，然后将一次性电极水平插入便携式电化学检测仪卡槽内，检测读数；所述便携式电化学检测器的电压设置范围：0.0V～0.2V，记录扫描中的电流峰值，根据展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线进行计算，最后将测得的样品中展青霉素的浓度显示在LED屏上。

[0051] 本发明的展青霉素分子印迹电化学传感技术与其他展青霉素检测方法的结果比较：

[0052] 根据与已经报道的其他展青霉素检测方法(如表1所示)，本发明方法制备的传感器具有较大的检测范围，且具有较低的检出限。

[0053] 表1展青霉素检测方法比较

[0054]

[0055] 实施例2展青霉素分子印迹丝网印刷电极的制备条件对检测效果的影响[0056] (1)复合修饰碳量子点，壳聚糖，金纳米粒子的电化学行为表征

[0057] 为了提高丝网印刷裸电极的稳定性和灵敏度，本发明对裸电极进行了三重修饰碳量子点，壳聚糖和金纳米粒子。如图2所示，通过对比裸电极SPE，金纳米粒子/裸电极AuNPs/SPE，壳聚糖/金纳米粒子/裸电极AuNPs/CS/SPE，碳量子点—壳聚糖/金纳米粒子/裸电极AuNPs/CS-CDs/SPE的CV响应值发现，经过碳量子点—金纳米粒子双重修饰的电极CV响应值最高，导电性最好。

[0058] (2)洗脱条件以及孵育时间的优化

[0059] 本方法中首先选择醋酸，硫酸和硝酸作为洗脱溶剂，结果表明醋酸不能有效的敲除模板分子，而硝酸则容易将印记膜洗脱过度，因此选择硫酸作为有效的洗脱溶剂。设置一系列的不同浓度的硫酸溶液对聚合印记膜进行洗脱，在浓度为2mol·L-1时，模板分子能够从印迹聚合物中有效脱除。设置不同的洗脱时间，通过DPV峰值电流优化洗脱时间(如图3)。随着洗脱时间的增加，印记丝网印刷电极在[Fe(CN)6]3-/4-的电流响应逐渐增大并在12min分钟达到最大，之后保持稳定，这是由于随着洗脱时间的延长，模板分子的溶出而留下的印记位点逐渐增多，印迹位点作为传质通道使[Fe(CN)6]3-/4-扩散到电极表面产生的峰电流逐渐增大，当洗脱时间超过12分钟，峰电流保持稳定，说明模板分子已全部或有效溶出，再增加洗脱时间，印记膜可能遭到破坏，因此选择12分钟作为洗脱时间。

[0060] 孵育时间会影响目标物在印记膜上的吸附。为了确定目标物展青霉素的检测最佳时间，将印记丝网印刷电极在2.5×10-10molL-1中孵育不同时间。随着富集时间的延长，印记丝网印刷电极在[Fe(CN)6]3-/4-的响应逐渐减小并在200s达到稳定(如图3)。表明目标物分子的吸附达到饱和，这是由于目标物展青霉素通过氢键作用重新进入到印记膜中与其结构相匹配的孔穴中，导致电极表面的空穴减少，因此选择展青霉素的最佳孵育时间为200s。

[0061] 实施例3展青霉素分子印迹丝网印刷电极的应用

[0062] 所述便携式展青霉素分子印迹电化学检测仪结构图如图4所示，构造如下：.[0063] 分子印迹丝网印刷电极包括电极基片、导电银浆、电极连线、工作电极、对电极、绝缘层；所述工作电极表面电镀了分子印迹聚合物膜；电极基片为一次性消费基片，工作电极，对电极与参比电极由电极连线导出，形成凸型三线式插口，可插入便携式电化学检测器，检测读数。其电极基片印制了接线端子、电极连线与工作电极连成一体的一条电极基体和接线端子、电极连线与对电极连成一体的另一条电极基体，两条电极连线相互平行，电极连线在电极基体的中间部分，其表面涂覆一层PET绝缘体。工作电极的形状为圆形块状，对电极的形状为与工作电极同心相离的半圆环形块状，工作电极表面电镀聚合展青霉素分子印迹膜。

[0064] 便携式电化学检测仪为已设定电压的简易式电化学工作站，配备由LED显示屏，用于记录由对电极流出的电子，流经样品或电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流值。该电流会被电化学检测器记录，通过与标准浓度的展青霉素分子印迹丝网印刷电极制备得到的标准曲线计算，以浓度的形式显示在LED显示屏上。

[0065] 其中，展青霉素浓度与峰电流之间的标准曲线已内置于检测器程序。

[0066] 该标准曲线的绘制方法：制备不同已知浓度(浓度范围：1×10-12～1×10-9molL-1)的展青霉素分子印迹丝网印刷电极插入到检测器中，检测电子从对电极，经过电导液，再从工作电极流回工作站时形成的电流峰值，电化学检测器的电压设置范围：0.0V～0.2V，采用差脉冲伏安法(DPV)模式，记录扫描中的电流峰值；以展青霉素浓度为横坐标，峰电流值为纵坐标，即得到标准曲线，如图5所示，得到的标准曲线方程为：

[0067] I(μA)＝-21.111logC(molL-1)–125.74(R2＝0.9907).，检测限为7.57×10-13molL-1。

[0068] 将得到的标准曲线通过计算机程序内置于检测器，即得到展青霉素专用便携式电化学检测器。

[0069] 检测待测样品时，先使用2个以上展青霉素标准品分子印迹丝网印刷电极进行校正，然后在检测待测样品溶液。便携式检测器可以根据内部设定的标准曲线，最终直接将待测样品中展青霉素的浓度显示在检测器的LED显示屏上。

[0070] 实施例4便携式展青霉素传感器的性能测试

[0071] 样品测试步骤如下：

[0072] 首先用标准(已知浓度的展青霉素)分子印迹丝网印刷电极插入到便携式检测器，校正便携式检测器的检测结果。然后将苹果汁样品与电导液等体积混合，电导液的配置：2.5mmol·L-1[Fe(CN)6]3/4和0.1mol·L-1KCl溶液，滴加苹果汁样品与电导液混合液60μL在制备好的展青霉素分子印迹膜的丝网印刷电极表面，静置吸附时间为：100s，电压设置范围：0.0V～0.2V，记录扫描中的电流峰值，根据内置于展青霉素专用便携式检测器内的展青霉素浓度与电流峰值之间的标准曲线进行计算，最后将测得的样品中展青霉素的浓度显示在LED屏上。检测结果如表2所示。

[0073] 表2青霉素传感器的性能测试

[0074]

[0075] 从表2可以看出，回收率在96.0％-98.7％，说明本发明的检测展青霉素含量的方法，精确度高，稳定性高，可重复性高。

[0076] 展青霉素分子印迹丝网印刷电化学传感器(MIM)的选择性：

[0077] 传感器的选择性是基于模板和结合位点之间特异性的相互作用，这是传感器定性定量检测目标物的重要因素。本方法中选择了展青霉素的三种结构类似物5-羟甲基糠醛、交联孢酚、交链孢霉甲基醚作为干扰物进行选择性实验测试。(图6)印迹电极分别置于1×10-12～1×10-9molL-15-羟甲基糠醛、交联孢酚、交链孢霉甲基醚和展青霉素溶液中孵育
200s后检测DPV电流响应。选择ΔI/I0作为分析指标来评价传感器的选择性，其中ΔI＝I0-Ic，如图所示在浓度范围内展青霉素引起了[Fe(CN)6]3/4峰电流的明显改变(ΔI/I0从0.18变化至0.71)，而其它结构类似物几乎不引起[Fe(CN)6]3/4峰值电流的改变。这说明制备的MIM传感器对目标物分子展青霉素具有良好的选择性。

[0078] 虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。