一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用，本发明分别用大枣、银耳子实体、枸杞子、三七，三七为提取过三七总皂苷的废渣，提取大枣多糖、银耳多糖、枸杞多糖、中性三七多糖，收率分别为6.5‑6.9%、12.0‑21.0%、2.8‑4.4%、0.32‑0.42%。硫酸‑蒽酮法测定多糖含量分别为48‑58%、37‑41%、28‑34%、80‑94%。本配方有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害。

权利要求

1.一种大枣复合多糖组合物，采用多种原料提取物混合制作而成，其特征在于：由以下重量份的提取物制成:大枣多糖提取物0.5-5份、枸杞多糖提取物0.5-5份、银耳多糖提取物

0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。

2.根据权利要求1所述的大枣复合多糖组合物，其特征在于：包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物4.5份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物4.5份、中性三七多糖提取物1份。

3.根据权利要求1所述的大枣复合多糖组合物，其特征在于：包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物2份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物2份、中性三七多糖提取物2份。

4.根据权利要求1所述的大枣复合多糖组合物，其特征在于：还包括药用辅料。

5.根据权利要求1所述的大枣复合多糖组合物，其特征在于：其剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液中的任意一种。

6.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）大枣多糖的提取；

（2）枸杞多糖的提取；

（3）银耳多糖的提取；

（4）中性三七多糖的提取；

（5）按照重量配比混合上述提取物，分装。

7.根据权利要求6所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中大枣多糖的提取具体方法为：大枣粉碎，加入多倍量水浸泡，多次回流提取，弃去滤渣合并滤液，浓缩，加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

8.根据权利要求7所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述醇沉的具体方法为：分离过滤的滤液，浓缩至相对密度1.06，加入3倍95%乙醇至含醇量75%，醇沉时间为24h。

9.根据权利要求7所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述多次回流提取的具体方法为：加入8-10倍量的水，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入5-10倍量的二次水回流提取2-4h，滤除溶液，再加入4-6倍量的三次水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液。

10.根据权利要求6所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中枸杞多糖的提取具体方法为：枸杞加入多倍量水浸泡，多次回流提取，合并滤液，浓缩，分离过滤溶液，浓缩后加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

11.根据权利要求10所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述多次回流提取的具体方法为：初次加入9-11倍量水浸泡12小时，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入4-10倍量的水回流提取2-4h，二次滤除溶液，之后再加入3-5倍量的水三次回流提取2-

4h，弃去滤渣合并滤液。

12.根据权利要求6所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中银耳多糖的提取具体方法为：银耳加入多倍量水浸泡，多次回流提取，合并滤液，浓缩，加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

13.根据权利要求12所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述多次回流提取的具体方法为：初次加入48-52倍量水浸泡12小时，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入30-40倍量的水回流提取3-5h，二次滤除溶液，合并滤液。

14.根据权利要求6所述的大枣复合多糖组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中中性三七多糖是由提取过三七总皂苷的废渣，经水提醇沉，DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化后所得。

15.根据权利要求1至5中任一项所述的大枣复合多糖组合物在制备提高免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠药品中的应用。

16.根据权利要求1至5中任一项所述的大枣复合多糖组合物在制备提高免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠保健食品中的应用。

17.根据权利要求1至5中任一项所述的大枣复合多糖组合物在制备治疗恶性肿瘤化疗后白细胞减少药品方面的应用。

说明书

一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 据世界卫生组织的网站(http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/zh/)2015年2月癌症实况报道第297号显示：癌症是全球发病和死亡的主要原因。在184个国家和地区中，中国恶性肿瘤发病率总体而言位居中等偏上水平，发病人数约占全球的21.8％。随着人口老龄化加剧和社会经济发展，工业化、城市化进程加快，环境因素、生活方式不断改变，我国肿瘤防控形势严峻。

[0003] 近年来，随着生物技术的发展，肿瘤免疫疗法成为继肿瘤手术，放疗，化疗，靶向治疗后的最有希望能成功治愈癌症的手段，这几年更是取得了重大进展，目前，以靶向PD-1/PD-L1的抗体治疗，在黑色素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、膀胱癌以及淋巴瘤等多种恶性肿瘤都展示出很好的疗效。Science、Nature都将恶性肿瘤免疫治疗作为突破性进展给予报道。

[0004] 肿瘤化疗过程中容易引起白细胞减少，临床目前常用促白细胞药物，如利血生、鲨肝醇等，作用缓慢，效果不显著。而注射类药物G-CSF等虽升白作用显著，但存在反跳现象，大剂量应用时会出现骨痛、发热等副反应，且价格相对昂贵。故急切需求疗效确切、质优价廉、副作用小的药物。

[0005] 中医从恢复机体阴阳平衡的角度去治疗疾病(包括肿瘤)的传统理念，与现代医学肿瘤免疫疗法从调节人体免疫功能来实现内环境稳态的思路有异曲同工之妙。中医认为“邪之所凑，其气必虚”，病邪之所以能侵犯人体大部分是因为人自身的阴阳失调，免疫力下降。通过药物来纠正阴阳、扶正固本才是治病的根本。人参、黄芪、灵芝等很多富含多糖的补益类中药广泛应用于包括肿瘤在内的各种疾病。

[0006] 多糖广泛存在于动物、植物和微生物中。作为生命物质的组成成分之一，它广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节，如免疫细胞间信息的传递与感受，细胞的转化、分裂及再生等活动。多糖具有抗病毒、抗感染、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、降血糖、保肝、调节免疫等生理活性。大量药理及临床研究表明，多糖是一种免疫调节剂，它能激活免疫受体，提高机体的免疫功能，实现抗肿瘤的功能。

[0007] 专利申请号为201210532229.0的发明专利公开了提供一种有助于增强免疫力的养生保健食品配方及其制备方法。它包括下列重量份数比的原料：枸杞子1000份、黄精1000份、茯苓1000份、山药1500份、桑葚1000份、大枣1000份、阿胶600份、银耳600份。该发明制备工艺采用传统水煎提取方法，功能单一，在提高免疫力方面效果不明显。

发明内容

[0008] 为了克服现有技术的不足，本发明提供本发明一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用，本发明分别用大枣、银耳子实体、枸杞子、三七，三七为提取过三七总皂苷的废渣，提取大枣多糖、银耳多糖、枸杞多糖、中性三七多糖，收率分别为6.5-6.9％、12.0-21.0％、2.8-4.4％、0.32-0.42％，硫酸-蒽酮法测定多糖含量分别为48-58％、37-41％、28-
34％、80-94％。本配方有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害。

[0009] 本发明提供了如下的技术方案：

[0010] 一种大枣复合多糖组合物，采用多种原料提取物混合制作而成，包括大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物和银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物。

[0011] 优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物0.5-5份、枸杞多糖提取物0.5-5份、银耳多糖提取物0.5-5份、中性三七多糖提取物0-5份。

[0012] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物4.5份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物4.5份。

[0013] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物4.5份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物4.5份、中性三七多糖提取物1份。

[0014] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物2份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物2份。

[0015] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物2份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物2份、中性三七多糖提取物2份。

[0016] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份。

[0017] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0018] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物2份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份。

[0019] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物2份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0020] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物3份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份。

[0021] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物3份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0022] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物4份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份。

[0023] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物4份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0024] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物2份、银耳多糖提取物1份。

[0025] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物2份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0026] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物3份、银耳多糖提取物1份。

[0027] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物3份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0028] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物4份、银耳多糖提取物1份。

[0029] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物4份、银耳多糖提取物1份、中性三七多糖提取物1份。

[0030] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物2份。

[0031] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物2份、中性三七多糖提取物1份。

[0032] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物3份。

[0033] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物3份、中性三七多糖提取物1份。

[0034] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物4份。

[0035] 上述任一方案优选的是，包括以下重量份的提取物:大枣多糖提取物1份、枸杞多糖提取物1份、银耳多糖提取物4份、中性三七多糖提取物1份。

[0036] 上述任一方案优选的是，还包括药用辅料。药用辅料包括蔗糖、淀粉、麦芽糊精、蜂蜜、苯甲酸酸钠、羟苯乙酯、硬脂酸镁、蛋白糖等。

[0037] 上述任一方案优选的是，其剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液中的任意一种。

[0038] 本发明还提供上述大枣复合多糖组合物的制备方法，包括以下步骤：

[0039] (1)大枣多糖的提取；

[0040] (2)枸杞多糖的提取；

[0041] (3)银耳多糖的提取；

[0042] (4)中性三七多糖的提取；

[0043] (5)按照重量配比混合上述提取物，分装。

[0044] 上述任一方案优选的是，所述步骤(1)中大枣多糖的提取具体方法为：大枣粉碎，加入多倍量水浸泡，多次回流提取，弃去滤渣合并滤液，浓缩，加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

[0045] 上述任一方案优选的是，所述醇沉的具体方法为：分离过滤的滤液，浓缩至1.06，加入3倍95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h。

[0046] 上述任一方案优选的是，所述多次回流提取的具体方法为：加入8-10倍量的水，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入5-10倍量的二次水回流提取2-4h，滤除溶液，再加入4-6倍量的三次水回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液。

[0047] 上述任一方案优选的是，所述步骤(2)中枸杞多糖的提取具体方法为：枸杞加入多倍量水浸泡，多次回流提取，合并滤液，浓缩，分离过滤溶液，浓缩后加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

[0048] 上述任一方案优选的是，所述多次回流提取的具体方法为：初次加入9-11倍量水浸泡12小时，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入4-10倍量的水回流提取2-4h，二次滤除溶液，之后再加入3-5倍量的水三次回流提取2-4h，弃去滤渣合并滤液。

[0049] 上述任一方案优选的是，所述步骤(3)中银耳多糖的提取具体方法为：银耳加入多倍量水浸泡，多次回流提取，合并滤液，浓缩，加入乙醇醇沉，抽去上清液得到沉淀并干燥，得干燥粉末。

[0050] 上述任一方案优选的是，所述多次回流提取的具体方法为：初次加入48-52倍量水浸泡12小时，初次回流提取5-8h，滤除溶液，再加入30-40倍量的水回流提取3-5h，二次滤除溶液，合并滤液。

[0051] 上述任一方案优选的是，所述步骤(4)中中性三七多糖是由提取过三七总皂苷的废渣，经水提醇沉，DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化后所得。

[0052] 上述任一方案优选的是，所述步骤(5)中分装之前还包括向混合提取物中加入麦芽糊精，混匀之后，加入95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装。分装时可以直接分装也可以压片后再分装。

[0053] 本发明还提供上述大枣复合多糖组合物在提高免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠中的应用。

[0054] 本发明还提供上述大枣复合多糖组合物应用于保健食品。

[0055] 本发明还提供上述大枣复合多糖组合物应用于化妆品。

[0056] 本发明还提供上述大枣复合多糖组合物应用于日化用品。本配方中的大枣为鼠李科植物枣的成熟果实。中医中药理论认为，大枣具有补虚益气、养血安神、健脾和胃等作用，是脾胃虚弱、气血不足、倦怠无力、失眠多梦等患者良好的保健营养品。大枣多糖具有多种药理活性，大枣多糖是大枣补气生血的主要活性成分，大枣多糖对人体内的各种活性氧均具有抗氧化作、修复肝损伤、抗疲劳作用、免疫活性、改善肠道、抑制肿瘤细胞及促进钙的吸收。

[0057] 枸杞，是我国传统名贵中药材，素有“红宝”美称，富含植物多糖、蛋白质、维生素等营养成分。枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。已明确该多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。具有促进T、B、CTL、NK和巨噬细胞等免疫功能，促进IL-2、IL-3和TNFβ等细胞因子产生。增强荷瘤、化疗与辐射损伤小鼠免疫功能及调节神经内分泌免疫调节(NIM)网络的作用。

[0058] 银耳(Tremella fuciformisBerk)，俗称白木耳，子实体中得到银耳多(Tremellam)是一种酸性杂多糖，其主链结构是由α-(1→3)糖苷键连接的甘露聚糖，支链由葡萄糖醛酸和木糖组成。为担子菌多糖类免疫增强剂，具有改善机体免疫功能及提升白细胞的作用。可显著提高实验动物网状内皮细胞的吞噬功能，有促进非特异性免疫作用，提高免疫球蛋白、血清总补体的水平。可预防和治疗由放射与抗肿瘤药物(如CTX)引起的骨髓抑制，也能促进肝脏内蛋白质的合成。

[0059] 本发明以生产中提取过三七皂苷的三七废渣为原料，采用水提醇沉法，得到中性三七粗粗多糖，采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化三七粗多糖，得到中性三七多糖PNPS I，研究其对人牙周膜干细胞的影响，证明中性三七多糖PNPS I促进牙周膜干细胞的作用较为明显，在提高人体免疫力方面作用突出。

[0060] 本发明提供一种大枣复合多糖组合物及其制备方法和应用，分别用大枣、银耳子实体、枸杞子、三七，三七为提取过三七总皂苷的废渣，提取大枣多糖、银耳多糖、枸杞多糖、中性三七多糖，收率分别为6.5-6.9％、12.0-21.0％、2.8-4.4％、0.32-0.42％，硫酸-蒽酮法测定多糖含量分别为48-58％、37-41％、28-34％、80-94％。本配方有助于免疫力低下者及肿瘤患者增强免疫力，改善精神萎靡、体虚乏力、食欲降低、恶心呕吐、便溏泄泻、烦躁失眠等症状，有效减轻放化疗及手术对肿瘤病人的危害。

附图说明

[0061] 图1为中性三七多糖PNPSI的高效凝胶渗透色谱图。

具体实施方式

[0062] 为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技术人员在本发明的基础上做出的任何非实质性的修改，都应属于本发明的保护范围。

[0063] 实施例1

[0064] 本发明由下述原料制成，大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物及药学上可接受的药用辅料组成。药用辅料包括蔗糖、淀粉、麦芽糊精、蜂蜜、苯甲酸酸钠、羟苯乙酯、硬脂酸镁、蛋白糖等。

[0065] 本发明的大枣复合多糖组合物，包括大枣多糖提取物0.5-5kg、枸杞多糖提取物0.5-5kg和银耳多糖提取物0.5-5kg、中性三七多糖提取物0-5kg，加入适宜药用辅料，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。分装制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液等口服剂型。

[0066] 本发明1袋大枣复合多糖组合物中，成人推荐用量为：一天2-3次，一次1-2袋。

[0067] 本发明大枣复合多糖组合物的制备方法，包括如下的步骤：

[0068] (1)大枣多糖提取物的提取及含量测定

[0069] 称取大枣400公斤，粉碎，加入8倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入4倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至1.06，加入3倍95％乙醇至含醇量75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得干燥粉末27.60公斤，得率为6.90％。精密称取粉末适量，硫酸-蒽酮法测定大枣多糖含量为57.17％。

[0070] (2)枸杞多糖提取物的提取及含量测定

[0071] 称取枸杞400公斤，加入10倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入5倍量的水回流提取4h，滤除溶液，药材再加入4倍量的水回流提取4h，弃去滤渣合并滤液，浓缩至密度至1.06，加入3倍95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得干燥粉末11.20公斤，得率为2.80％。精密称取粉末适量，硫酸-蒽酮法测定枸杞多糖含量为33.50％。

[0072] (3)银耳多糖提取物的提取及含量测定

[0073] 称取银耳400公斤，加入50倍量水浸泡12小时，回流提取8h，滤除溶液，药材再加入30倍量的水回流提取4h，滤除溶液，合并滤液，浓缩至密度至1.06，加入3倍95％乙醇至乙醇量为75％，醇沉时间为24h，抽去上清液得沉淀并干燥，得干燥粉末47.84公斤，得率为
11.96％。精密称取粉末适量，硫酸-蒽酮法测定银耳多糖含量为37.00％。

[0074] (4)中性三七多糖的提取及含量测定

[0075] (4.1)三七粗多糖的提取：称取提取过三七总皂苷的废渣1kg，第一次加入10倍量水，沸水浴煮8h，收集滤液，第二次加入5倍量水，沸水浴8h。合并两次滤液，4500rpm离心5min，取上清。80℃旋转浓缩至原体积的1/8，静置24h，离心，弃沉淀，缓慢加入三倍无水乙醇，边加边搅拌，4℃放置12h，抽滤得沉淀。75％乙醇洗涤沉淀数次，将乙醇挥发干后用适量水溶解，离心，收集上清，加入三倍无水乙醇，4℃放置12h，抽滤得沉淀，75％乙醇洗涤沉淀，
50℃烘箱烘干，即得三七粗多糖。

[0076] (4.2)DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化粗多糖

[0077] (4.2.1)装柱：湿法装柱，柱子塞入棉花，柱内加入蒸馏水并保持一小段液位，玻璃棒按压棉花祛除气泡。用玻璃棒引导匀浆沿柱内壁缓慢倒入柱内，不能产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，用水清洗层析柱边沿。装柱时不能有断层，然后用蒸馏水平衡，柱规格为2.4×40cm。

[0078] (4.2.2)上样：三七粗多糖溶于少量蒸馏水中，配制成30mg/mL，4500rpm离心10min，上清液0.45μm滤头过滤，上样。上样时，将层析柱出液口打开，待蒸馏水下移至柱床表面时，关闭出液口，用滴管沿柱内壁加入三七多糖溶液，打开出液口，让样品液全部流入柱子内部，并用少量蒸馏水冲洗柱内壁，然后行洗脱。

[0079] (4.2.3)洗脱：用水洗脱，洗脱约5倍柱体积，流速为0.8mL/min，每管接2mL，减压浓缩至1/10的体积。

[0080] (4.2.4)透析：把透析袋剪成每段约10cm，放于蒸馏水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，蒸馏水洗干净。透析袋可以使用三次，第二次用2％NaHCO3和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。分别将浓缩后的洗脱液装于分子量14000的透析袋中，约1/2体积，用透析夹夹紧透析袋两端，放于蒸馏水中透析36h，每4h换一次水。

[0081] (4.2.5)冷冻干燥：将洗脱液收集于50mL离心管，装约16mL，-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机36h，取出后加入约1mL蒸馏水溶解，摇匀。-40℃预冻12h，放于冷冻干燥机24h。取出后封口于干燥器中保存。蒽酮-硫酸法测定中性三七多糖PNPS I，PNPS I(中性三七多糖)含量93.6％，得率28.9％，数均分子量为11170，重均分子量为31590，多分散性系数D(Mw/Mn)为2.828，中性三七多糖PNPS I的高效凝胶渗透色谱图如图1所示。

[0082] (4.3)MTT法测定中性三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响

[0083] 采用常规细胞培养法培养细胞。取7代对数生长期的人牙周膜干细胞，计数后调细胞浓度，接种于96孔板，100个/孔，每孔90μl，CO2培养箱培养12小时后分别加中性三七多糖(PNPS I)以及三七粗多糖溶液各10μl，使作用于细胞的终浓度为6.72mg/ml、4.48mg/ml、2.24mg/ml、1.12mg/ml、560ug/ml、280ug/ml、140ug/ml、70ug/ml，每个浓度设6个平行孔，阴性对照为等体积MEM-ALPHA培养液，加生理盐水10μl。48小时后，加MTT溶液(5mg/ml)20μl每孔，继续培养4小时，每孔加入150μlDMSO充分溶解，用酶标仪测定各孔的A570值。计算不同浓度的A570的OD值，实验结果见表1：

[0084] 表1三七多糖对人牙周膜干细胞体外增殖的影响实验结果(n＝6)

[0085]

[0086] 注：*P<0.05；**P<0.01

[0087] 由表1中数据可知，中性三七多糖PNPSⅠ在浓度35～1120ug/ml，对人牙周膜干细胞具有明显的增殖促进作用；相对于三七粗多糖，中性三七多糖PNPSⅠ对人牙周膜干细胞的增殖促进作用更为显著。

[0088] 实施例2大枣复合多糖颗粒剂

[0089]

[0090] 加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。

[0091] 本实施例中的大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物的制备方法均和实施例1相同。

[0092] 实施例3大枣复合多糖片剂

[0093]

[0094] 加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装。

[0095] 本实施例中的大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物的制备方法均和实施例1相同。

[0096] 实施例4大枣复合多糖片剂

[0097]

[0098] 加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，压片，包薄膜衣，分装。

[0099] 本实施例中的大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物的制备方法均和实施例1相同。

[0100] 实施例5大枣复合多糖颗粒剂

[0101]

[0102]

[0103] 加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。

[0104] 本实施例中的大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物的制备方法均和实施例1相同。

[0105] 实施例6大枣复合多糖颗粒剂

[0106]

[0107] 加麦芽糊精适量，混匀，加95％的乙醇适量，过14目筛网制粒，烘干，过20目筛网整理，分装成1000袋。

[0108] 本实施例中的大枣多糖提取物、枸杞多糖提取物、银耳多糖提取物、中性三七多糖提取物的制备方法均和实施例1相同。

[0109] 实施例7

[0110] 大枣复合多糖组合物治疗恶性肿瘤化疗后白细胞减少的疗效观察

[0111] 7.1资料与方法

[0112] 7.1.1资料

[0113] 选取2015年6月～2016年6月恶性肿瘤化疗后引起的白细胞减少患者(均由病理证实)，排除使用其他升白药物者，KPS评分均≥60分，共计50例纳入本次研究。随机分为观察和对照组各10例，观察组中男4例，女6例，平均年龄(54.2±7.3)岁，乳腺癌4例、宫颈癌2例、大肠癌2例、肺癌2例。

[0114] 对照组A中男5例，女5例，平均年龄为(53.9±10.6)岁，乳腺癌2例、肝癌3例、大肠癌1例、肺癌3例、胃癌1例。对照组B中男6例，女4例，平均年龄为(54.1±9.3)岁，乳腺癌2例、肝癌3例、大肠癌1例、肺癌2例、胃癌2例。对照组C中男5例，女5例，平均年龄为(53.6±10.9)岁，乳腺癌1例、肝癌3例、大肠癌2例、肺癌4例。对照组D中男6例，女4例，平均年龄为(53.7±10.8)岁，乳腺癌3例、肝癌4例、胃癌3例。

[0115] 四组在性别组成、平均年龄、KPS评分、肿瘤类别均无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

[0116] 7.1.2治疗方法

[0117] 观察组予实施例2中制备的大枣复合多糖组合物(大枣多糖4.5g、枸杞多糖1.0g、银耳多糖0.5g、中性三七多糖0.5g)早晚各1次，一次两袋，连服3周。

[0118] 对照组A予鲨肝醇100mg，利血生20mg，3次/d，连服3周。治疗期间严密观察各种并发症的发生。

[0119] 对照组B服用专利申请号为201210532229.0的发明专利实施例1制备的产品，每日两次，连服三周。

[0120] 对照组C服用实施例5制备的大枣复合多糖颗粒剂，每日两次，连服三周。

[0121] 对照组D服用实施例6制备的大枣复合多糖颗粒剂，每日两次，连服三周。

[0122] 7.1.3观察指标及疗效评价标准

[0123] 治疗期间每周2次检查外周血常规。据卫生部《药物临床研究指导原则》中制定的升高白细胞疗效标准，显效：WBC总数>4.0×109/L，能维持疗效至停药1周，临床症状显著减轻或消失；有效：WBC总数<4.0×109/L，比治疗前上升(0.5-1.0)×109/L，能维持疗效至停药1周，临床症状好转；无效：WBC总数增高<0.5×109/L，临床症状无好转。

[0124] 7.2治疗结果

[0125] 治疗后数据结果见表2，观察组相对对照组A、对照组B、对照组C、对照组D的治疗效果更为显著。观察组无不良反应发生。

[0126] 表2治疗后效果数据

[0127]

[0128] 临床目前常用促白细胞药物，如利血生、鲨肝醇等，作用缓慢，效果不显著。而注射类药物G-CSF等虽升白作用显著，但存在反跳现象，大剂量应用时会出现骨痛、发热等副反应，且价格相对昂贵。故急切需求疗效确切、质优价廉、副作用小的药物。

[0129] 由表2中的数据可知，化疗后出现白细胞降低的患者，应用实施例2制备的大枣复合多糖组合物后，腰膝酸软、头晕眼花、神疲乏力、食少纳呆等脾肾亏虚症状有明显改善，KPS评分较用药前有明显提高。对照组A、对照组B和对照组C、对照组D治疗后的效果不明显。

[0130] 上述结果表明大枣复合多糖组合物能在一定程度上治疗肿瘤化疗引起的白细胞减少，从而保证化疗的正常进行，延长患者生存期。