MALT1靶向抑制物在制备MALT1依赖性肿瘤治疗药物中的应用

摘要

本发明涉及MALT1靶向抑制物在制备MALT1依赖性肿瘤治疗药物中的应用。本发明人从大量的化合物中筛选到一个具有抑制MALT1功能化合物，为临床治疗MALT1依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤提供了有潜力的药物。

权利要求

1.化合物或其药学上可接受的盐在制备MALT1抑制剂中的用途；其中，所述的化合物的结构式是：

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的MALT1抑制剂预防或治疗MALT1依赖性肿瘤。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的MALT1依赖性肿瘤包括：弥漫性大B细胞淋巴瘤。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的弥漫性大B细胞淋巴瘤是活化B细胞型弥漫性大B细胞淋巴瘤。

5.如权利要求1-4任一所述的用途，其特征在于，所述的化合物通过抑制MALT1，进而抑制CARMA1或其家族蛋白、BCL10和MALT1组成的CBM复合物，从而发挥预防或治疗作用。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的CARMA1的家族蛋白包括：CARMA2，CARMA3，CARD9。

说明书

MALT1靶向抑制物在制备MALT1依赖性肿瘤治疗药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物医药领域，更具体地，本发明涉及MALT1靶向抑制物在制备MALT1依赖性肿瘤治疗药物中的应用。

背景技术

[0002] 弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤，根据其基因表达图谱的不同可将其分为三个亚型：生发中心B细胞型(Germinal center B cell like DLBCL，GCB-DLBCL)、活化B细胞型(Activated B cell like DLBCL，ABC-DLBCL)和原发纵膈B细胞型(Primary mediastinal B cell lymphoma，PMBL)。其中ABC-DLBCL的恶性程度最高，对现有免疫化学疗法有强烈的耐药性。经典的R-CHOP治疗后，GCB-DLBCL的五年存活率能达到76％，而ABC-DLBCL的五年存活率只有30％左右，因此，寻找能有效治疗ABC-DLBCL的药物和治疗方法是临床上急需解决的问题。研究表明ABC-DLBCL的重要特征是NF-κB信号通路的持续激活，由于该信号通路的活化在B细胞内具有促进B细胞的增殖和存活，抑制凋亡的作用，其持续性激活可能是造成ABC-DLBCL亚型预后较差的重要原因，提示抑制NF-κB信号的持续性激活是治疗ABC-DLBCL的关键。但是，由于NF-κB在各组织和器官中广泛表达，是具有广泛重要作用的转录因子，其被活化后进入细胞核与目标DNA相结合，参与调节大量基因的转录和表达，直接抑制NF-κB将导致严重的毒副作用，因此NF-κB本身并不适合作为药物治疗相关靶点。

[0003] 研究表明，由CARMA1(也被称为CARD11)、BCL10以及MALT1组成的CBM复合物在淋巴细胞中介导NF-κB的激活具有重要的作用。在ABC-DLBCL肿瘤细胞中常常可见CARMA1，BCL10和MALT1基因的突变或转位，导致CARMA1，BCL10和MALT1的活性增强或是处于持续活化的状态，进而引起NF-κB的过度活化以及肿瘤的发生。RNA干扰实验表明CBM复合物对于ABC-DLBCL细胞的存活和增殖非常重要，抑制CBM的表达能选择性地杀死ABC-DLBCL细胞(V.N.Ngo等，A loss-of-function RNA interference screen for molecular targets in cancer.,Nature,vol.441,no.7089,pp.106–110,2006)。因此，选择性地阻碍CBM信号将是治疗ABC-DLBCL的一个非常有前景的策略。在CBM复合物中，CARMA1和BCL10都是支架蛋白，不具有酶活性，而MALT1是一种类似caspase的蛋白酶，可以通过其酶切活性灭活A20和CYLD等NF-κB的负调控因子，从而促进NF-κB的活化(I.S.Afonina等，MALT1-a universal soldier:multiple strategies to ensure NF-κB activation and target gene expression.,FEBS J.,vol.282,pp.1-12,2015)。在ABC-DLBCL中，MALT1常常呈持续性活化状态并导致NF-κB信号通路的持续激活，特异性地抑制MALT1的活性能够减少生长因子和肿瘤抑制子的产生，从而导致ABC-DLBCL细胞死亡和生长抑制(U.Ferch等，Inhibition of MALT1 protease activity is selectively toxic for activated B cell-like diffuse large B cell lymphoma cells.,J.Exp.Med.,vol.206,no.11,pp.2313-2320,2009；S.Hailfinger等，Essential role of MALT1 protease activity in activated B cell-like diffuse large B-cell lymphoma.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,vol.106,no.47,pp.19946-19951,2009)。更重要的是，MALT1敲除小鼠没有特殊的表型，没有对小鼠造成生理上的严重伤害(A.A.Ruefli-Brasse等Regulation of NF-κB-Dependent Lymphocyte Activation and Development by Paracaspase,”Science(80-.).,vol.302,no.5650,pp.1581-1584,2003)，预示着特异性地抑制MALT1并不会对患者产生严重的副作用。因此，MALT1是治疗ABC-DLBCL的非常具有潜力的安全有效的药物靶点。

[0004] 近年来，寻找MALT1的靶向抑制剂以期治疗ABC-DLBCL已成为研究热点。虽然有一些抑制剂已被发现，但是它们本身存在的一些不足限制了这些抑制剂作为临床药物的进一步开发利用。Z-VRPR-FMK是一种多肽抑制剂，可以特异地、不可逆地抑制MALT1的活性(F.Rebeaud等，The proteolytic activity of the paracaspase MALT1 is key in T cell activation.，Nat.Immunol.,vol.9,no.3,pp.272-281,2008)，但是它的细胞渗透性不高；吩噻嗪的衍生物是MALT1的变构抑制剂，但是由于其同时也是多巴胺受体的拮抗剂，因此可能会产生诸如脱靶效应等副作用；MI-2是近年来发现的一个重要MALT1的小分子抑制剂，能够不可逆地抑制酶活性(L.Fontan等，MALT1 small molecule inhibitors specifically suppress ABC-DLBCL in vitro and in vivo.，Cancer Cell,vol.22，no.6，pp.812-24，2012)，但是由于其溶解性和稳定性的问题，仍然需要进一步优化；而β-拉帕醌虽然可以在体外抑制MALT1的活性，但是其对ABC-DLBCL细胞的半生长抑制率浓度(IG50)在1-10uM，杀伤或抑制作用需要进一步优化和提高(S.M.Lim等，Identification ofβ-Lapachone Analogs as Novel MALT1 Inhibitors To Treat an Aggressive Subtype of Diffuse Large B-Cell Lymphoma，J.Med.Chem.,p.acs.jmedchem.5b01415，2015)。

[0005] 因此，寻找新颖的MALT1抑制剂对于靶向治疗恶性肿瘤ABC-DLBCL具有重要意义。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供MALT1靶向抑制物在制备MALT1活性依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗药物中的应用。

[0007] 在本发明的第一方面，提供化合物或其药学上可接受的盐或前体在制备MALT1抑制剂中的用途；其中，所述的化合物是：

[0008]

[0009] 在另一优选例中，所述的MALT1抑制剂预防或治疗MALT1活性依赖性肿瘤。

[0010] 在另一优选例中，所述的MALT1活性依赖性肿瘤包括但不限于活化B细胞型(ABC-DLBCL)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

[0011] 在另一优选例中，所述的化合物通过抑制MALT1，进而抑制CARMA1或其家族蛋白、BCL10和MALT1组成的CBM复合物，从而发挥预防或治疗作用。

[0012] 在另一优选例中，所述的CARMA1的家族蛋白包括(但不限于)：CARMA2，CARMA3，CARD9。

[0013] 在本发明的另一方面，提供一种制备MALT1抑制剂的方法，所述方法包括：将化合物与药学上可接受的载体混合，获得MALT1抑制剂；所述的化合物的结构式是：

[0014]

[0015] 本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

[0016] 图1、LZ-MALT1的凝胶过滤层析峰形图及峰产物的SDS-PAGE胶结果图。

[0017] 图2、阳性对照Z-VRPR-FMK对MALT1的抑制效果。

[0018] 图3、小分子化合物WX28抑制MALT1的剂量-反应曲线。

[0019] 图4、WX28对DLBCL细胞的生长抑制作用。

具体实施方式

[0020] 本发明人通过深入的研究和筛选，从大量的化合物中筛选到一个具有抑制MALT1功能化合物，所述的化合物抑制作用显著。本发明为临床治疗MALT1依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤提供了有潜力的药物。

[0021] 化合物及其用途

[0022] 本领域已经确定，MALT1是一种类似Caspase的酶，它的蛋白酶切活性对恶性肿瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤、特别是ABC-DLBCL型淋巴瘤的肿瘤细胞存活非常重要，抑制其活性能够有效地、选择性地抑制并杀伤ABC-DLBCL肿瘤细胞。因此，可以确定，抑制MALT1的物质(MALT1抑制剂)能够预防或治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤、特别是ABC-DLBCL型淋巴瘤。

[0023] 本发明人前期建立了能快速、有效地检测MALT1酶活性的方法，并将之应用于高通量筛选MALT1小分子抑制剂。通过高通量筛选3万个小分子化合物，本发明人筛选并进一步验证、确认了1个IC50小于1nM并有良好剂量-反应曲线的小分子化合物。所述的小分子化合物被称为WX28，其结构式如下：

[0024]

[0025] 本发明还包括WX28的异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐，只要它们与WX28具有相同或基本相同的功能。所述的“药学上可接受的盐”是指化合物与无机酸、有机酸、碱金属或碱土金属等反应生成的盐。这些盐包括(但不限于)：(1)与如下无机酸形成的盐：如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸；(2)与如下有机酸形成的盐，如乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸、马来酸、或精氨酸。其它的盐包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以酯、氨基甲酸酯，或其它常规的“前体药物”的形式。化合物具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。

[0026] 所述的“化合物的前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成本发明的化合物，或含有本发明的化合物的盐或溶液。

[0027] 本领域人员应理解，在得知了本发明化合物的结构以后，可通过多种本领域熟知的方法、利用公知的原料，来获得本发明的化合物，比如化学合成或从生物(如动物或植物)中提取的方法，这些方法均包含在本发明中。

[0028] 合成的化合物可以进一步通过柱层析法、高效液相色谱法等方式进一步纯化。

[0029] 基于本发明人的新发现，本发明提供了本发明的化合物或其异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐的用途，用于制备MALT1抑制剂。

[0030] 所述的MALT1抑制剂预防或治疗MALT1活性依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤，特别是活化B细胞型(ABC-DLBCL)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

[0031] 如本文所用，术语“MALT1依赖性肿瘤”与“MALT1活性依赖性肿瘤”或“依赖于MALT1活性的肿瘤”可互换使用。

[0032] 药物组合物

[0033] 本发明还提供了一种用于抑制MALT1的药物组合物，含有：(a)有效量的本发明所述的WX28化合物、或其异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体或赋形剂。所述的药物组合物可用于预防或治疗MALT1依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤，特别是活化B细胞型(ABC-DLBCL)弥漫性大B细胞淋巴瘤。

[0034] 本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

[0035] 本发明中，“药学上可接受的载体”是用于将本发明的化合物、其异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

[0036] 在本发明中，所述的药物组合物含有按照重量比例为0.0001-50％的本发明的化合物，其异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐。较佳的，所述的药物组合物含有按照重量比例为0.001-20％的本发明的化合物，其异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐。本发明的化合物作为活性成分的有效施用剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。

[0037] 本发明所述的药物组合物的剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物机体的剂型都是可以的。比如可以是粉针剂、注射剂。根据治疗的方便性及需求，本领域人员可以选择方便应用的剂型。本发明的化合物或其药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。

[0038] 筛选方法

[0039] 本发明建立了荧光发光法检测MALT1的活性，对3万多个小分子化合物进行高通量筛选。经过筛选与验证，得到了本发明的能够有效抑制MALT1的酶活性的小分子化合物。

[0040] 因此，本发明还提供一种筛选MALT1抑制剂的方法，所述方法包括：(1)将MALT1的类Caspase结构域片段与亮氨酸拉链二聚体片段融合，获得LZ-MALT1重组融合蛋白；(2)将候选物质与步骤(1)的重组融合蛋白以及MALT1作用底物接触；(3)检测(2)的体系中生成的AMC荧光基团的荧光值，若是加入候选物质后荧光值发生显著性降低，则该候选物质是MALT1抑制剂。

[0041] 在本发明的优选方式中，在进行筛选时，为了更易于观察到酶与底物相互作用的改变，还可设置对照组，所述的对照组可以是不添加所述候选物质的所述的重组融合蛋白以及MALT1作用底物的相互作用体系。

[0042] 在本发明的优选方式中，在进行筛选时，还设置阳性对照，以阳性对照产生的荧光值作为参考，从而提高的筛选的准确度。

[0043] 作为本发明的优选方式，所述的方法还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以进一步选择和确定对于抑制MALT1、进而抑制MALT1依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤效果更为显著的物质。

[0044] 利用本发明所述的筛选方法获得的抑制MALT1的潜在物质可构成一个筛选库，以便于人们最终可以从中筛选出对于抑制MALT1、进而抑制MALT1依赖性肿瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤效果更为显著的物质。

[0045] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

[0046] 实施例1、LZ-MALT1蛋白表达和纯化

[0047] 因为全长的MALT1和它的类caspase结构域(340-789个氨基酸)在生理溶液中是作为单体存在，酶切活性较低，MALT1需要形成二聚体才能更好地发挥酶切活性。经过分析研究，本发明人将MALT1的类caspase结构域(340-789)片段与亮氨酸拉链二聚体片段融合，构建成了LZ-MALT1的体外重组蛋白。

[0048] MALT1(340-789)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:1)：

[0049] AKDKVALLIGNMNYREHPKLKAPLVDVYELTNLLRQLDFKVVSLLDLTEYEMRNAVDEFLLLLDKGVYGLLYYAGHGYENFGNSFMVPVDAPNPYRSENCLCVQNILKLMQEKETGLNVFLLDMCRKRNDYDDTIPILDALKVTANIVFGYATCQGAEAFEIQHSGLANGIFMKFLKDRLLEDKKITVLLDEVAEDMGKCHLTKGKQALEIRSSLSEKRALTDPIQGTEYSAESLVRNLQWAKAHELPESMCLKFDCGVQIQLGFAAEFSNVMIIYTSIVYKPPEIIMCDAYVTDFPLDLDIDPKDANKGTPEETGSYLVSKDLPKHCLYTRLSSLQKLKEHLVFTVCLSYQYSGLEDTVEDKQEVNVGKPLIAKLDMHRGLGRKTCFQTCLMSNGPYQSSAATSGGAGHYHSLQDPFHGVYHSHPGNPSNVTPADSCHCSRTPDAFISS[0050] 亮氨酸拉链二聚体片段由GCN4(251-281)的氨基酸组成，序列如下第3-33位(以下序列中“HM”限制酶位点序列)：

[0051] HMKQLEDKVEELLSKNYHLENEVARLKKLVGER(SEQ ID NO:2)；

[0052] 在GCN4(251-281)拉链片段与MALT1(340-789)片段之间有由“GSGSGSGS(SEQ ID NO:3)”组成的间隔片段，用来隔开这两个片段，以避免空间位阻。形成LZ-MALT1。

[0053] 前述获得的LZ-MALT1(340-789)的扩增产物在Nde1/Not1酶切位点插入pET-28a质粒中(购自Novagen)中，获得含有融合片段的重组质粒。

[0054] 将前述获得的重组质粒转化到Rosetta细胞株中表达，通过Ni-NTA(Qiagen，Valencia，CA)亲和层析初步纯化，再通过凝胶过滤色谱柱Superdex 200HR 10/300(GE Healthcare，UK)进一步纯化，收集目的蛋白LZ-MALT1。

[0055] 如图1显示，在12-14mL左右的位置开始出现目的蛋白峰，用SDS-PAGE胶验证此峰形下的蛋白确实是LZ-MALT1，纯度为95％以上。将获得的LZ-MALT1蛋白储存在含20mM Tris(pH 7.5)，150mM NaCl和5mM DTT的缓冲液中。

[0056] 实施例2、LZ-MALT1特异性小分子抑制剂的高通量筛选

[0057] 本发明人建立的筛选体系中包含LZ-MALT1和Ac-LVSR-AMC，其中Ac-LVSR-AMC是MALT1的作用底物，MALT1可以识别LVSR位点并进行切割，释放出的AMC基团能发出荧光，因此可通过检测到的荧光值来表征MALT1的酶活性。为确定最佳的高通量筛选的反应条件，本发明人设置了一系列LZ-MALT1浓度(25nM，50nM，100nM，200nM等)和底物浓度(62.5uM，125uM，250uM等)，做二维正交实验，每隔30秒检测并记录荧光值，结果如图2所示，荧光值与时间呈现线性关系，随着底物浓度的增加，反应信号增加，随着酶浓度增加，反应信号也相应增加，进一步证明了纯化的LZ-MALT1是有很好的活性的，可以用于后续的高通量筛选。

[0058] Ac-LVSR-AMC：由上海强耀生物合成。

[0059] 本发明人用Z因子来评估筛选质量，Z因子是一种评价数据变异程度和反应动态范围的系数，计算公式是：1-3*(σp+σn)/(|μp-μn|)，其中σp/n是阳/阴性对照的标准差值，μp/n是阳/阴性对照的平均值，其中Z因子大于0.5代表实验可有效地区分信号与噪音，可用于高通量筛选(S.Inst and B.Parent,“A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screeining assays,”J.Biomol.Screen.,vol.4,no.2,pp.67–74,1999)。

[0060] 综合考虑高通量筛选的效果和酶和底物用量，本发明人最终选择了25nM LZ-MALT1和80μM Ac-LVSR-AMCc的组合，以Z-VRPR-FMK作为阳性对照，以只含有底物的BufferA作为阴性对照，反应90分钟后，Z因子为0.699，在最佳的0.5-1的范围内。

[0061] 基于上述研究，高通量筛选反应体系建立如下：将如表1所示量的材料添加到Buffer A(20mM HEPES pH 7.5，10mM KCl，1.5mM MgCl2，1mM EDTA，1mM DTT，0.01％Triton X-100)中，20μl/孔。

[0062] 表1

[0063] LZ-MALT1 25nMAc-LVSR-AMC 80μM
待测试化合物 10μM

[0064] 反应在384孔板(Greiner Bio One，Wemmel，Belgium，Catalogue#784076)中进行反应，用Envision Multilabel Reader(Perkin-Elmer，Waltham，MA)检测反应荧光信号，发射波长和激发波长分别是360nm和465nm。为了不遗漏慢速结合的抑制剂，LZ-MALT1和待测化合物先在室温预孵育30分钟，然后再加入底物Ac-LVSR-AMC，在加入Ac-LVSR-AMC后的0分钟和90分钟时分别检测并记录信号。为排除化合物的自发光效应，用两个时间点信号的差值(T90-T0)来表征MALT1的活性。

[0065] 最终抑制率的公式为：[待测化合物荧光(T90-T0)-阴性对照荧光(T90-T0)]/[阳性对照荧光(T90-T0)-阴性对照荧光(T90-T0)]*100。

[0066] 其中，用已知的MALT1抑制剂50nM Z-VRPR-FMK为阳性对照，只含有底物的BufferA为阴性对照。以40％的抑制率作为阈值进行筛选。

[0067] 结果，总共筛选了化合物库(获自药明康德)中30007个化合物。

[0068] 实施例3、化合物的效果验证

[0069] 对于实施例2筛选获得的小分子化合物通过剂量-反应实验验证这些化合物的效果，以半数抑制率浓度(IC50)小于20μM并有良好剂量反应曲线为标准。

[0070] 从这些化合物中，获得1个抑制作用强、剂量-反应曲线呈S型、IC50小于1nM的小分子化合物作为MALT1抑制剂，如图3和表2。

[0071] 表2

[0072]

[0073] 表2的化合物能够有效地在体外抑制MALT1的活性，是有效的MALT1抑制剂，可应用于临床治疗ABC-DLBCL的靶向药物。

[0074] 实施例4、候选化合物对ABC-DLBCL细胞系特异性地生长抑制作用

[0075] MALT1的活性对于ABC-DLBCL细胞的增殖具有重要作用，而且ABC-DLBCL细胞和GCB-DLBCL细胞对于MALT1的阳性抑制剂Z-VRPR-FMK的敏感性是不一样的。

[0076] WX28是在体外酶活抑制实验中IC50值最低、效果最好的小分子抑制剂。本发明人进一步通过细胞增殖抑制实验来验证其抑制效果。

[0077] 为了检验本发明的筛选获得的小分子化合物WX28对ABC-DLBCL是否具有选择性地抑制作用，本发明人采用不同浓度梯度(0.01uM，0.1uM，1uM，10uM，100uM)的WX28作用于两种ABC-DLBCL细胞株即HBL-1、TMD8和一种GCB-DLBCL细胞株OCI-LY1(各细胞株均购自ATCC)上，0h和72h后测定细胞数量。

[0078] 细胞增殖抑制实验结果显示，化合物WX28能发挥抑制作用，并且抑制ABC-DLBCL细胞株TMD8细胞的能力最为理想，如图4。

[0079] 因此，化合物WX28具有高效的抑制细胞生长的潜力。

[0080] 讨论

[0081] ABC-DLBCL是目前恶性程度最高的淋巴瘤，对目前临床上常用的免疫化学R-CHOP疗法有强烈的耐药性。它的特点之一是具有促生长、抗凋亡作用的NF-κB信号通路的持续激活，因此，理论上来说，寻找靶向药物来阻碍ABC-DLBCL中的NF-κB信号是治疗ABC-DLBCL的有效方法。但是，由于NF-κB是具有广泛重要生物活性的转录因子，本身并不适合作为治疗靶点。

[0082] 在B细胞中，抗原结合BCR后诱导Src家族激酶磷酸化CD79A和CD79B的ITAM结构域的酪氨酸，接着，酪氨酸激酶Syk通过结合到磷酸化的ITAM上被激活，从而引发了包括布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase，BTK)、磷酸酶Cγ(phospholipase Cγ)以及蛋白激酶Cβ(protein kinase Cβ，PKC-β)在内的信号级联反应。PKC-β使CARM1发生磷酸化，促使它招募BCL10和MALT1，形成CBM复合物，从而激活IκB激酶(IKK)，最后激发了NF-κB信号通路。另一方面，激活的MALT1通过其酶活性切割灭活A20、CYLD等NF-κB负反馈抑制剂，进一步促进NF-κB信号通路的活化。在ABC-DLBCL的肿瘤细胞中常见以上信号通路分子的突变或是转位，例如CARMA1突变、CD79A/B突变、BCL10和MALT1基因的转位等，导致NF-κB信号通路的持续性活化。

[0083] 由上可见，CBM复合体在介导NF-κB活化中有重要作用。而CBM复合体中唯一具有酶活性的MALT1蛋白是近年来开发治疗ABC-DLBCL的靶向药物的热门分子靶点：首先，抑制MALT1的活性可以有效抑制NF-κB的信号，从而选择性抑制甚至杀伤ABC-DLBCL细胞，说明靶向MALT1酶活的治疗有效性；其次，MALT1敲除的小鼠除了在T细胞和B细胞的激活方面表现出一部分缺陷，在其他方面都表型正常，提示靶向MALT1酶活来治疗ABC-DLBCL的副作用会比较小；第三，MALT1的类caspase结构域在人类基因中是唯一的，抑制MALT1不会产生由于抑制其他结构相似的蛋白等造成的广泛副作用。

[0084] 近年来，寻找MALT1的靶向抑制剂已成为研究热点，但是已有的一些化合物抑制剂本身均存在不同的问题，成药性差，很难用于进一步的临床开发。因此，开发更有效的成药性更好的MALT1抑制剂对治疗ABC-DLBCL有重要意义。

[0085] 本发明人通过建立高通量筛选的模型，对30007个小分子进行了高通量筛选，从中获得一个IC50小于1nM的化合物WX28。本发明为开发MALT1的靶向药物来治疗ABC-DLBCL提供了良好的基础和保障。

[0086] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。