石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用

摘要

本发明属于中药材的活性成份石斛酚的医药新用途，具体地说是涉及石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。动物试验结果表明：石斛酚对于动脉粥样硬化模型小鼠主动脉粥样斑块形成具有明显的预防和改善作用。利用石斛酚配以相关辅料，用常规的制剂方法可制成针对性预防和治疗动脉粥样硬化的保健品或药物。

权利要求

1.石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

2.石斛酚在制备预防动脉粥样硬化药物中的应用。

3.石斛酚在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

4.根据权利要求1 3任一所述的应用，其特征在于，将石斛酚配以相应剂型的辅料制成~口服液、注射剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂、滴丸、颗粒剂、悬浮剂、乳剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的胶囊剂为软胶囊。

说明书

石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药材的活性成份石斛酚的医药新用途，具体地说是涉及石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

背景技术

[0002] 动脉粥样硬化(Atherosclerosis)性心血管疾病是目前世界上最常见的死因之一。在中国，目前心血管疾病诱导的死亡人数约占全部死亡人数的1/3，且其发生率和死亡率在逐年增高。动脉粥样硬化发病机制复杂，诱因众多，其形成是一个复杂的过程。流行病学资料提示，血清低密度脂蛋白胆固醇水平与动脉粥样硬化的发生呈正相关，而高密度脂蛋白中的胆固醇是将胆固醇逆向运输至肝脏处理，可降低机体胆固醇水平，从而抵抗动脉粥样硬化。目前主流学术观点认为炎症反应学说对动脉粥样硬化的病理机制解释的较为全面。炎症反应学说认为从血管内皮细胞损伤到出现临床心血管事件的整个过程中，炎性细胞因子，如细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等，参与的炎症反应都发挥着重要作用。因此，调节血脂代谢和抑制血管炎症反应对于开发动脉粥样硬化治疗药物提供了重要的思路。

[0003] 目前，国内外对动脉粥样硬化的临床治疗主要使用3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂(他汀类)，但其诱发的肌毒性(肌病、横纹肌溶解症)和肝酶改变等不良反应进一步限制了其临床应用。因此，寻找和开发安全有效的抗动脉粥样硬化药物就显得尤为重要。

[0004] 石斛酚(Gigantol)，一种联苄类酚性物质，提取于石斛的根部，是石斛的药用有效成分之一。目前已发现一些证据阐明了石斛具有多种生物学活性，包括增强机体免疫力、帮助胃部消化、抗白内障、调节血糖、抗肿瘤等作用。通过对石斛酚抗白内障机理研究发现，石斛酚可以通过抑制诱导型一氧化氮合酶及其特异结合位点的活性从而达到抗白内障的效果。

[0005] 迄今为止，尚未见以石斛酚为预防和治疗动脉粥样硬化药物的相关报道。

发明内容

[0006] 技术问题：提供石斛酚在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

[0007] 技术方案：石斛酚及其组合物在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用在本发明的保护范围之内。

[0008] 石斛酚及其组合物在制备预防动脉粥样硬化药物中的应用在本发明的保护范围之内。

[0009] 石斛酚及其组合物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用在本发明的保护范围之内。

[0010] 石斛酚组合物是以相应剂型的辅料制成口服液、注射剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸、颗粒剂、溶液、悬浮剂、乳剂或微囊剂。也可以将石斛酚作为预防动脉粥样硬化的保健品。

[0011] 本发明提供的技术方法可以为石斛酚单一成分，也可以是含有石斛酚为基本有效成分以及药学上可接受的辅助剂组成的药物。

[0012] 有益效果：

[0013] 本发明提供了对动脉粥样硬化具有预防和治疗作用的石斛酚制备药剂(保健品或药物)，用于预防和治疗动脉粥样硬化。本发明具有如下明显的进步和优点：

[0014] 1、成分明确(石斛酚)；2、目标明确(动脉粥样硬化)；3、调节作用明确(明显改善和治疗作用)。

[0015] 通过经典的动脉粥样硬化动物模型展开药理学实验，研究结果显示，石斛酚能够显著降低血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，显著降低胆固醇在血管壁内膜的沉积，抑制粥样斑块形成，减少主动脉斑块炎性细胞因子表达。该实验结果证实了石斛酚对动脉粥样硬化确切的预防和治疗作用。本发明的药物，毒性较小，安全性较高。

附图说明

[0016] 图1对照组、模型组、石斛酚组、阿伐他汀组血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇检测结果。++P<0.01，+++P<0.001与对照组比较；***P<0.001与模型组比较。

[0017] 图2对照组、模型组、石斛酚组、阿伐他汀组主动脉根部粥样斑块油红O染色结果。+++P<0.001与对照组比较；**P<0.01，***P<0.001与模型组比较。

[0018] 图3对照组、模型组、石斛酚组、阿伐他汀组主动脉大体油红O染色结果。+++P<0.001与对照组比较；**P<0.01，***P<0.001与模型组比较。

[0019] 图4模型组和石斛酚组主动脉细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达结果。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与模型组比较。

具体实施方式

[0020] 根据下述实施例，可以更好地理解本实用新型。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

[0021] 实施例1：石斛酚对动脉粥样硬化模型小鼠血脂及主动脉斑块形成的影响。

[0022] 1、实验动物：ApoE-/-小鼠，5-7周，雄性。

[0023] 2、药物配制：选用石斛酚含量为25mg/片的用于动脉粥样硬化的预防或治疗的片剂(除石斛酚外，其余成分均为制备片剂的常规辅料，如淀粉、糖粉、乳糖、糊精、麦芽糊精和可压性淀粉)，超声分散于0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)中，用于灌胃给药，给药剂量为25mg/kg。

[0024] 3、实验仪器：高速冷冻离心机，ABI Step one荧光定量PCR仪、冰冻切片机，酶标仪，光学显微镜等。

[0025] 实验方法：

[0026] (1)分组及处理：动物适应环境1周后，随机分为对照组、模型组、石斛酚组和阿伐他汀组，每组8只。对照组给予普通饲料，主要成分为蛋白质(24.4％)，碳水化合物(63.3％)和油脂(12.3％)。模型组、石斛酚组、阿伐他汀组给予高脂饲料，主要成分为蛋白质(23％)，碳水化合物(45％)、油脂(20％)和胆固醇(1.25％)。在建立模型的同时，石斛酚组和阿伐他汀组每天分别灌胃给予石斛酚(25mg/kg)和阿伐他汀(10mg/kg)。对照组和模型组每天灌胃等体积的0.5％羧甲基纤维素钠。给药时间与建立疾病模型时间相同，均为18周。

[0027] (2)收集血液样本，用于检测生化指标：总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇。

[0028] (3)动物处死冰台上分离主动脉及心脏，主动脉经70％乙醇固定后油红O染色，心脏经OCT包埋，冰冻切片机切片(8μM)，油红O染色，60％异丙醇调色，苏木精复染，盐酸酒精分化，流水反蓝。显微镜观察主动脉整体和主动脉根部粥样斑块，应用Image J软件统计主动脉粥样斑块面积占主动脉内膜总面积百分比以及主动脉根部粥样斑块面积。

[0029] (4)采用TRIZOL提取模型组和石斛酚组主动脉总RNA，逆转录合成cDNA，使用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达情况。引物序列如下，ICAM-1(F：5'-GGAAGGGAGCCAAGTAACTGTGAAG-3'，R：5'-GAGCGGCAGAGCAAAAGAAGC-3')，VCAM-1(F：5'-TGTAGTTCTTTGACAGTCTCCCT-3'，R：5'-GTTTGGCTCCAGACATTTACC-3')，MCP-1(F：5'-GTGCTGACCCCAAGAAGGAATG-3'，R：5'-TGAGGTGGTTGTGGAAAAGGTAGTG-3')，GAPDH(F：5'-AAGAAGGTGGTGAAGCAGG-3'，R：5'-GAAGGTGGAAGAGTGGGAGT-3')。实验中所用内参为GAPDH。反应的总体系为20μl，包括：2μl cDNA、1μl引物混合液、10μL iTaqTM UniversalGreen Supermix、DEPC水补足至20μl。反应程序为：Step 1：95℃ 5min；Step 2：95℃ 15s；
-△△Ct
Step 3：60℃ 1min；Step 2-Step 3：40个循环。按照2 法计算基因相对表达量。

[0030] 4、实验结果：

[0031] 如附图1所示：与对照组相比，模型组ApoE-/-小鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平显著升高，高密度脂蛋白胆固醇水平无显著差异；与模型组相比，石斛酚显著降低ApoE-/-小鼠血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平，升高ApoE-/-小鼠血浆高密度脂蛋白胆固醇水平，甘油三酯水平无显著影响，说明石斛酚能显著改善高脂饮食诱导的血脂代谢紊乱，且部分指标优于阳性对照药物阿伐他汀。

[0032] 如附图2所示：与对照组相比，模型组ApoE-/-小鼠主动脉根部粥样斑块面积显著增加，说明动脉粥样硬化小鼠模型成功建立。与模型组相比，石斛酚组ApoE-/-小鼠主动脉根部粥样斑块面积显著降低，提示石斛酚能显著减少高脂饮食诱导的主动脉根部粥样斑块形成。

[0033] 如附图3所示：与对照组相比，模型组ApoE-/-小鼠主动脉粥样斑块面积占主动脉内膜总面积百分比显著升高，进一步确证动脉粥样硬化小鼠模型成功建立。与模型组相比，石斛酚组ApoE-/-小鼠主动脉粥样斑块面积占主动脉内膜总面积百分比显著降低，提示石斛酚能显著减少高脂饮食诱导的主动脉粥样斑块形成。

[0034] 如附图4所示：与模型组相比，石斛酚组ApoE-/-小鼠主动脉ICAM-1、VCAM-1和MCP-1mRNA表达水平显著降低，表明石斛酚能有效抑制主动脉斑块炎性细胞因子表达，减轻主动脉斑块炎症反应。

[0035] 通过血液生化指标、油红O染色及qPCR检测结果表明，石斛酚对于动脉粥样硬化模型小鼠主动脉粥样斑块形成具有明显的抑制作用，其治疗作用可能是通过改善血脂代谢紊乱和抑制主动脉斑块炎症反应。

[0036] 实施例2：

[0037] 将石斛酚按照常规制剂方法，加入水及适量增溶剂(聚乙二醇400)溶解，分装，灭菌，制备成石斛酚含量为25mg/mL的动脉粥样硬化预防或治疗用口服液；

[0038] 将石斛酚按照常规制剂方法，软胶囊材质选用明胶和山梨醇，制备成石斛酚含量为25mg/粒的动脉粥样硬化预防或治疗用胶囊；

[0039] 将石斛酚按照常规制剂方法，加入赋形剂环糊精，混合均匀，制粒，压片，制备成石斛酚含量为25mg/片的动脉粥样硬化预防和治疗用片剂。

[0040] 实施例3：石斛酚安全性评价。

[0041] 小鼠急性毒性试验采用单次口服固定剂量方法：选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量，每个剂量10只昆明种小鼠，5-7周，雌雄各半。小鼠给药前12小时禁食不禁水。实验中以灌胃方式对小鼠进行给药，给药后连续观察2周。结果发现石斛酚各剂量组均无小鼠死亡，除高剂量组(2000mg/kg)部分小鼠在24小时内出现轻微毒性反应外，其余各剂量组小鼠均未发现毒性反应症状，说明石斛酚毒性较小，安全性较高。