一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物及提取方法

摘要

本发明公开了一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物及提取方法，从青竹标中分离得到6种色原酮苷类化合物：5‑羟基‑2‑甲基‑7‑O‑α‑L‑鼠李糖色原酮苷；5‑羟基‑2‑甲基‑7‑O‑β‑D‑木糖色原酮苷；5‑羟基‑2‑甲基‑7‑O‑[6‑OAc‑β‑D‑葡萄糖基‑(1‑3)]‑α‑L‑鼠李糖色原酮苷；5‑羟基‑2‑甲基‑7‑O‑[β‑D‑葡萄糖基‑(1‑2)]‑α‑L‑鼠李糖色原酮苷；2‑羟甲基‑5,7‑二羟基‑11‑O‑β‑D‑阿拉伯糖色原酮苷；2‑羟甲基‑5,7‑二羟基‑11‑O‑β‑D‑阿拉伯糖色原酮苷；5,7‑二羟基‑2‑甲基‑8‑C‑β‑D‑葡萄糖色原酮苷。该提取方法，原料来源广泛，制备工艺简单，经济、安全，得率高，所得的6个新化合物均具有抗炎活性，而且毒副作用低，具有良好的药用前景。

权利要求

1.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅰ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±

1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

(5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为20:80的流动相进行制备得到化合物Ⅰ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为210nm；

化合物Ⅰ的结构式为

2.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅱ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)45±11％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±

1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

(5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅱ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm；

化合物Ⅱ的结构式为

3.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅲ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为10:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH、60±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)60±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到9个洗脱部位；

(5)将步骤(4)第6个洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅲ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm；

化合物Ⅲ的结构式为

4.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅳ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

(5)将步骤(4)MeOH洗脱的第6洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅳ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm；

化合物Ⅳ的结构式为

5.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅴ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)40±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

(5)将步骤(4)MeOH洗脱的第13洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅴ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm；

化合物Ⅴ的结构式为

6.一种色原酮苷类化合物的提取方法，其特征是，提取化合物Ⅵ的步骤为：(1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

(2)将乙酸乙酯萃取物溶解于 甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

(3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH进行洗脱；

(4)将步骤(3)12±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

(5)将步骤(4)MeOH洗脱的第5洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅵ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm；

化合物Ⅵ的结构式为

7.如权利要求1～6任一所述的提取方法，其特征是，步骤(1)中所述的青竹标粗提取物采用95％乙醇进行加热回流提取。

8.如权利要求1～6任一所述的提取方法，其特征是，步骤(1)所述青竹标粗提取物加入水中进行超声分散。

说明书

一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物及提取方法

技术领域

[0001] 本发明涉及色原酮苷类化合物及其制备方法技术领域，具体涉及一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物及提取方法。

背景技术

[0002] 色原酮苷类化合物是一类分布广泛于多种科属中的活性物质，具有抗炎、镇痛、抗血小板凝集、抗氧化、抑制组胺释放等作用。炎性反应是由多种介质参与、炎性因子与机体不断斗争直至达到一个平衡的复杂过程，而中药是通过多途径，多环节发挥抗炎作用的。中药化学成分多样，药理活性广泛，具有多效性及不良反应少等特点，有着非常重要的开发利用价值。

[0003] 青竹标(Scindapsus officinalis Schott)别名密腺崖角藤、水蜈蚣、爬树龙、金竹标，天南星科岩角藤的全株，主要分布于云南、贵州、广西，是一种在当地应用广泛的珍稀民族药。《云南中草药选》记载其具有祛瘀镇痛、润肺止咳的功效，可治跌打损伤、骨折、风湿麻木、支气管炎、百日咳；《广西药植名录》记载其“消肿，止痛，治跌打，风湿，痈疮”；《贵州药植目录》记载其“去瘀生新，镇痛”。关于从青竹标中分离纯化的新色原酮苷类化合物及提取方法，经文献检索，尚未见研究报道。

发明内容

[0004] 为了解决现有技术的不足，本发明的目的之一是提供一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物，具有抗炎活性。

[0005] 为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

[0006] 一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物，为化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ或化合物Ⅵ；其中，

[0007] 化合物Ⅰ的结构式为

[0008] 化合物Ⅱ的结构式为

[0009] 化合物Ⅲ的结构式为

[0010] 化合物Ⅳ的结构式为

[0011] 化合物Ⅴ的结构式为

[0012] 化合物Ⅵ的结构式为

[0013] 本发明的目的之二是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅰ的步骤为：

[0014] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0015] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

[0016] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

[0017] (4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0018] (5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为20:80的流动相进行制备得到化合物Ⅰ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为210nm。

[0019] 本发明的目的之三是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅱ的步骤为：

[0020] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0021] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

[0022] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0023] (4)将步骤(3)45±11％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0024] (5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅱ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0025] 本发明的目的之四是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅲ的步骤为：

[0026] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0027] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1进行；

[0028] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为10:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH、60±1％MeOH进行洗脱；

[0029] (4)将步骤(3)60±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到9个洗脱部位；

[0030] (5)将步骤(4)第6个洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅲ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0031] 本发明的目的之五是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅳ的步骤为：

[0032] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0033] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0034] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

[0035] (4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0036] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第6洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅳ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0037] 本发明的目的之六是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅴ的步骤为：

[0038] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0039] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0040] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH进行洗脱；

[0041] (4)将步骤(3)40±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0042] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第13洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅴ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0043] 本发明的目的之七是提供一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅵ的步骤为：

[0044] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0045] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0046] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH进行洗脱；

[0047] (4)将步骤(3)12±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0048] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第5洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅵ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0049] 本发明的目的之八是提供一种上述色原酮苷类化合物或上述提取方法制备的色原酮苷类化合物在制备抗炎药物中的应用。

[0050] 本发明的有益效果：

[0051] 上述从青竹标中分离纯化的新色原酮苷类化合物及其制备方法，以青竹标为原料，来源广泛，制备工艺简单，经济、安全，得率高，所得的6个新化合物均具有抗炎活性，其中中化合物Ⅲ具有较好的抗炎活性，化合物Ⅴ具有中等的抗炎活性，而且毒副作用低，具有良好的药用前景。

附图说明

[0052] 构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。

[0053] 图1为5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷的1H NMR；

[0054] 图2为5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷的13C NMR；

[0055] 图3为5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷的HRESI-MS阳离子图；

[0056] 图4为5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷的1H NMR；

[0057] 图5为5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷的13C NMR；

[0058] 图6为5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷的HRESI-MS阳离子图；

[0059] 图7为5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的1H NMR；

[0060] 图8为5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的13C NMR；

[0061] 图9为5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的HRESI-MS阳离子图；

[0062] 图10为5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的1H NMR；

[0063] 图11为5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的13C NMR；

[0064] 图12为5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷的HRESI-MS阳离子图；

[0065] 图13为2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷的1H NMR；

[0066] 图14为2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷的13C NMR；

[0067] 图15为2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷的HRESI-MS阳离子图；

[0068] 图16为5,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷的1H NMR；

[0069] 图17为5,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷的13C NMR；

[0070] 图18为5,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷的HRESI-MS阴离子图。

具体实施方式

[0071] 应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

[0072] 需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

[0073] 本申请中的百分含量若未作具体说明，均为体积百分含量。

[0074] 本申请中的洗脱程序采用了大孔树脂柱为开放式，流速不固定，时间不固定。

[0075] 正如背景技术所介绍的，现有技术中存在没有从青竹标中分离纯化的新色原酮苷类化合物及提取方法的记载，为了解决如上的技术问题，本申请提出了一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物及提取方法。

[0076] 本申请的一种典型实施方式，提供了一种从青竹标中分离纯化的色原酮苷类化合物，为化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ或化合物Ⅵ；其中，[0077] 化合物Ⅰ的结构式为 命名为5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷；

[0078] 化合物Ⅱ的结构式为 命名为5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷；

[0079] 化合物Ⅲ的结构式为 命名为5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷；

[0080] 化合物Ⅳ的结构式为 命名为5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷；

[0081] 化合物Ⅴ的结构式为 命名为2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷；

[0082] 化合物Ⅵ的结构式为 命名为,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷。

[0083] 本发明的第二种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅰ的步骤为：

[0084] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0085] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

[0086] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

[0087] (4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0088] (5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为20:80的流动相进行制备得到化合物Ⅰ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为210nm。

[0089] 本发明的第三种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅱ的步骤为：

[0090] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0091] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1进行；

[0092] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为15:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0093] (4)将步骤(3)45±11％MeOH洗脱部位通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH、30±1％MeOH、45±1％MeOH进行洗脱；

[0094] (5)将步骤(4)45±1％MeOH洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅱ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0095] 本发明的第四种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅲ的步骤为：

[0096] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0097] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1进行；

[0098] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为10:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH、60±1％MeOH进行洗脱；

[0099] (4)将步骤(3)60±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到9个洗脱部位；

[0100] (5)将步骤(4)第6个洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅲ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0101] 本发明的第五种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅳ的步骤为：

[0102] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0103] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0104] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH进行洗脱；

[0105] (4)将步骤(3)30±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0106] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第6洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为18:82的流动相进行制备得到化合物Ⅳ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0107] 本发明的第六种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅴ的步骤为：

[0108] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0109] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0110] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩前流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、30±1％MeOH、40±1％MeOH进行洗脱；

[0111] (4)将步骤(3)40±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0112] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第13洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅴ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0113] 本发明的第七种典型实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物的提取方法，提取化合物Ⅵ的步骤为：

[0114] (1)将青竹标粗提取物分散至水中，依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取，再将萃取后的乙酸乙酯有机相去除溶剂获得乙酸乙酯萃取物；

[0115] (2)将乙酸乙酯萃取物溶解与甲醇中，通过硅胶色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱以CH2Cl2-MeOH体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1进行；

[0116] (3)将步骤(2)梯度洗脱体积比为5:1的洗脱部位的浓缩后流份通过C18吸附树脂色谱，依次用5±1％MeOH、12±1％MeOH进行洗脱；

[0117] (4)将步骤(3)12±1％MeOH洗脱部位通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，MeOH进行洗脱；

[0118] (5)将步骤(4)MeOH洗脱的第5洗脱部位用CH3CN与H2O的体积比为28:72的流动相进行制备得到化合物Ⅵ，制备条件为流速为3mL/min，检测波长为252nm。

[0119] 为了更好得到青竹标的粗提物，本申请优选的，步骤(1)中所述的青竹标粗提取物采用95％乙醇进行加热回流提取。

[0120] 进一步优选的，所述青竹标粗提物的提取过程为，取青竹标药材，粉碎，95％乙醇加热回流提取，固液比为1:3，提取三次，时间分别为2h、1h、1h，合并滤液，减压旋蒸，冷冻干燥，得青竹标粗提物。

[0121] 为了将青竹标粗提取物更均匀的分散至水中，本申请优选的，步骤(1)所述青竹标粗提取物加入水中进行超声分散。

[0122] 本申请上述步骤(5)制备化合物Ⅰ～Ⅵ采用的仪器为半制备高效液相色谱仪。

[0123] 本申请中所述的浓缩前流份和浓缩后流份是指在进行梯度洗脱时，每个梯度冲洗CH2Cl2-MeOH的体积为V，将每1/2V合并浓缩为1个流份，即每个梯度合并浓缩为2个浓缩流份，前1/2V为浓缩前流份，后1/2V为浓缩后流份。

[0124] 本申请的第八种实施方式，提供了一种上述色原酮苷类化合物或上述提取方法制备的色原酮苷类化合物在制备抗炎药物中的应用。

[0125] 为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本申请的技术方案。

[0126] 实施例

[0127] 化合物Ⅰ-Ⅵ的制备方法，步骤如下：

[0128] (1)取青竹标药材5kg，粉碎，95％乙醇加热回流提取，固液比为1:3，提取三次，时间分别为2h，1h，1h，合并滤液，减压旋蒸，冷冻干燥，得青竹标粗提物1kg；

[0129] (2)将总粗提物加入适量水超声打散，分别用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，萃取液过滤，减压浓缩分别得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取部位；

[0130] (3)将所得的乙酸乙酯部位180g溶解于甲醇中，加入200～300目硅胶300g拌样，挥干溶剂，以体积比CH2Cl2-MeOH(100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1→1:1→0:1)进行梯度洗脱，得到各洗脱部位，浓缩，每个梯度合并为前后2个流份(每个梯度冲洗5000mL，每2500mL合并浓缩为1个流份，即每个梯度合并为2个流份，前2500mL为前流份，后2500mL为后流份)。

[0131] (4)将CH2Cl2-MeOH(15:1)前流份再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、12％、30％、45％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的30％MeOH部位再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、12％、30％、45％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的45％MeOH部位使用Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪进行制备，AB两-1
流动相分别设定为CH3CN和H2O，CH3CN和H2O的体积比为20:80(v/v)，流速为3mL min ，检测波长为210nm，每次进样80μL，得到化合物Ⅰ55mg。

[0132] (5)将CH2Cl2-MeOH(15:1)后流份再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、12％、30％、45％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的45％MeOH部位再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、12％、30％、45％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的45％MeOH部位用CH3CN/H2O(18:82,v/v)进行制备(制备仪器为Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪；流速：3mL min-1；检测波长：252nm)得到化合物Ⅱ110mg。

[0133] (6)将CH2Cl2-MeOH(10:1)前流份再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、30％、40％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的60％MeOH部位再通过SepadexLH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到9个洗脱部位。将第6个洗脱部位用CH3CN/H2O(28:72,v/v)进行制备(制备仪器为Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪；流速：3mL min-1；检测波长：252nm)得到化合物Ⅲ60mg。

[0134] (7)将CH2Cl2-MeOH(5:1)前流份再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、30％、40％、60％、80％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的30％MeOH部位再通过SepadexLH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到9个洗脱部位。将第6个洗脱部位用CH3CN/H2O(18:82,v/v)进行制备(制备仪器为Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪；流速：3mL min-1；检测波长：252nm)得到化合物Ⅳ80mg。将C18柱的40％MeOH部位再通过Sepadex LH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到18个洗脱部位。将第13个洗脱部位用CH3CN/H2O(28:72,v/v)进行制备(制备仪器为Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪；流速：3mL min-1；检测波长：252nm)得到化合物Ⅴ180mg。

[0135] (8)将CH2Cl2-MeOH(5:1)后流份再通过C18吸附树脂色谱，依次用5％、12％、30％、60％、100％MeOH进行洗脱，得到各洗脱部位。将C18柱的12％MeOH部位再通过SepadexLH-20凝胶柱色谱，用MeOH进行洗脱，得到7个洗脱部位。将第5个洗脱部位用CH3CN/H2O(18:82,v/v)进行制备(制备仪器为Shimadzu LC-6AD半制备高效液相色谱仪；流速：3mL min-1；检测波长：252nm)得到化合物Ⅵ430mg。

[0136] 结构鉴定：对分离得到的单体成分应用Agilent 5973N质谱仪和Burker 400MHz核磁共振波谱仪分别进行MS，NMR谱的测定，所得核磁数据见表1-2，鉴定6个新色原酮苷类化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的结构。

[0137] 化合物Ⅰ：5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征+如图1～3所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 339.1030[M+H] (calcd for C16H19O8，
339.1035),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅰ的分子式为C16H18O8。IR显示有羟基(3400cm-1)，共轭羰基(1667cm-1)和双键(1624,1581,1508cm-1)的吸收峰。1H NMR谱显示2-甲基-5,7-二氧基取代的色原酮类化合物的特征性信号：δH 2.38(3H,s,Me-11)，6.26(1H,s,H-3)，6.67(1H,d,J＝2.4Hz,H-8)，6.43(1H,d,J＝2.4Hz,H-6)，12.82(s,OH-5)。此外，1H NMR谱还给出了1个糖的端基氢信号：δH 4.91(1H,d,J＝10.0Hz,H-1')以及1个双峰甲基信号：δH 1.11(3H,d,J＝6.0Hz,H-6')。13C和HSQC、HMBC谱显示化合物Ⅰ共有16个碳原子，其中
11个碳为苷元信号，6个碳为糖信号。比较化合物Ⅰ和5,7-dihydroxy-2-methyl chromone的1H和13C NMR数据，发现两者结构类似，主要的区别在于5,7-dihydroxy-2-methyl chromone的C-7有OH取代，而化合物Ⅰ的C-2位无OH取代，通过化合物Ⅰ的去羟基化位移C-6(+
0.7)，C-7(-2.7)，C-8(+0.1)和C-10(+0.4)可进一步证明此结论。将化合物Ⅰ进行酸水解，经GC检测出含有一个L-rhamnose。糖的连接位置由HMBC谱确定：δH 4.91(H-1'ofα-L-rhamnose)与δC 161.5(C-7)相关。综上所述，化合物Ⅰ的结构确定为5-羟基-2-甲基-7-O-α-L-鼠李糖色原酮苷。

[0138] 化合物Ⅱ：5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征如图4～6所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 325.2520[M+H]+(calcd for C15H17O8，325.0879),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅱ的分子式为C15H16O8。IR显示有羟基(3350cm-1)，共轭羰基(1669cm-1)和双键(1623,1580,1509cm-1)的吸收峰。比较化合物Ⅱ和Ⅰ
1 13
的 H NMR和 C NMR谱数据，发现两者结构类似，主要的区别在于C-7位连接的糖链。将化合物Ⅱ进行酸水解，经GC检测出含有一个D-xylose。糖的连接位置由HMBC谱确定：δH 5.06(H-
1'ofβ-D-xylose)与δC 163.1(C-7)相关。综上所述，化合物Ⅱ的结构确定为5-羟基-2-甲基-7-O-β-D-木糖色原酮苷。

[0139] 化合物Ⅲ：5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征如图7～9所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 543.1794[M+H]+(calcd for C24H31O14，543.1669),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅲ的分子式为C24H30O14。IR显示有羟基(3395cm-1)，羰基(1742cm-1)，共轭羰基(1669cm-1)和双键(1625,1590,1505cm-1)的吸收峰。比较化合物Ⅲ和Ⅰ、Ⅱ的1H NMR和13C NMR谱数据，发现两者结构类似，主要的区别在于C-7位连接的糖链和化合物Ⅲ中多出1个CH3CO-官能团[δH 1.99(3H,s,CH3CO-),δC 21.1(CH3CO-)和170.6(CH3CO-)]。1H NMR谱给出了2个糖的端基氢信号：5.55(1H,s,H-1')和4.40(1H,d,J＝8.0Hz,H-1")以及1个双峰甲基信号：δH1.15(3H,d,J＝
5.6Hz,H-6')。将化合物Ⅲ进行酸水解，经GC检测出含有1个L-rhamnose和1个D-glucose。糖和CH3CO-的连接位置由HMBC谱确定：δH 1.99(3H,s,CH3CO-)与64.1(C-6")，4.40(H-1"ofβ-D-glucose)与δC 82.1(C-3')，5.55(H-1'ofα-L-rhamnose)与δC 161.9(C-7)相关。综上所述，化合物Ⅲ的结构确定为5-羟基-2-甲基-7-O-[6-OAc-β-D-葡萄糖基-(1-3)]-α-L-鼠李糖色原酮苷。

[0140] 化合物Ⅳ：5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征如图10～12所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 501.1561[M+H]+(calcdfor C22H29O13，501.1563),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅳ的分子式为C22H28O13。IR显示有羟基(3409cm-1)，共轭羰基(1665cm-1)和双键(1626,1590,1502cm-1)的吸1 13
收峰。比较化合物Ⅳ和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的 H NMR和 C NMR谱数据，发现两者结构类似，主要的区别在于C-7位连接的糖链。1H NMR谱给出了2个糖的端基氢信号：5.55(1H,s,H-1')和4.43(1H,d,J＝8.0Hz,H-1")以及1个双峰甲基信号：δH 1.21(3H,d,J＝5.6Hz,H-6')。将化合物Ⅲ进行酸水解，经GC检测出含有1个L-rhamnose和1个D-glucose。糖链的连接位置由HMBC谱确定：δH 4.40(H-1"ofβ-D-glucose)与δC 81.2(C-2')，5.55(H-1'ofα-L-rhamnose)与δC 
161.9(C-7)相关。综上所述，化合物Ⅳ的结构确定为5-羟基-2-甲基-7-O-[β-D-葡萄糖基-(1-2)]-α-L-鼠李糖色原酮苷。

[0141] 化合物Ⅴ：2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征如图13～15所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 341.1627[M+H]+(calcd forC15H17O9，341.0828),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅴ的分子式为C15H16O9。IR显示-1 -1 -1 1有羟基(3400cm )，共轭羰基(1662cm )和双键(1630,1589,1515cm )的吸收峰。HNMR谱显示2-羟甲基-5,7-二羟基取代的色原酮类化合物的特征性信号：δH 4.73(1H,d,J＝15.6Hz,Ha-11)，4.59d(1H,d,J＝15.6Hz,Hb-11)，6.20(1H,s,H-8)，6.36(1H,s,H-6)，6.53(1H,s,H-
3)，10.00(s,7-OH)，12.82(s,OH-5)。此外，1H NMR谱还给出了1个糖的端基氢信号：δH 4.47
13
(1H,d,J＝6.8Hz,H-1')。C和HSQC、HMBC谱显示化合物Ⅴ共有15个碳原子，其中11个碳为苷元信号，5个碳为糖信号。比较化合物Ⅴ和5,7-dihydroxy-2-hydroxymethyl chromone的1H和13C NMR数据，发现两者结构类似，主要的区别在于5,7-dihydroxy-2-hydroxymethyl chromone的C-11有OH取代，而化合物Ⅴ的C-11位无OH取代，通过化合物Ⅴ的去羟基化位移C-11(+6.6)可进一步证明此结论。将化合物Ⅴ进行酸水解，经GC检测出含有一个D-arabinose。糖的连接位置由HMBC谱确定：δH 4.47(H-1'ofβ-D-arabinose)与δC 66.1(C-11)相关。综上所述，化合物Ⅴ的结构确定为2-羟甲基-5,7-二羟基-11-O-β-D-阿拉伯糖色原酮苷。

[0142] 化合物Ⅵ：5,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷，黄色粉末，其化学结构表征如图16～18所示，HR-ESIMS给出分子离子峰m/z 353.0851[M-H]+(calcd for C16H17O9，353.0984),结合1H NMR和13C NMR谱推测化合物Ⅴ的分子式为C16H18O9。IR显示有羟基(3385cm-1)，共轭羰基(1664cm-1)和双键(1623,1593,1517cm-1)的吸收峰。1H NMR谱显示2-甲基-5,7-二羟基-8-碳苷的色原酮类化合物的特征性信号：δH 2.35(3H,s,Me-11)，6.19(1H,s,H-3)，6.26(1H,s,H-6)，10.70(s,7-OH)，13.00(s,5-OH)。此外，1H NMR谱还给出了1个糖的端基氢信号：δH 4.63(1H,d,J＝9.2Hz,H-1')。13C和HSQC、HMBC谱显示化合物Ⅵ共有
16个碳原子，其中11个碳为苷元信号，6个碳为糖信号。比较化合物Ⅵ和5,7-dihydroxy-2-methyl chromone的1H和13C NMR数据，发现两者结构类似，主要的区别在于5,7-dihydroxy-
2-methyl chromone的C-8无取代，而化合物Ⅵ的C-8位有碳苷取代，通过化合物Ⅵ的苷化位移C-7(-1.5)，C-8(+10.2)，和C-9(-5.0)可进一步证明此结论。将化合物Ⅵ进行酸水解，经GC检测出含有一个D-glucose。糖的连接位置由HMBC谱确定：δH 4.63(H-1'ofβ-D-glucose)与δC 105.0(C-8)相关。综上所述，化合物Ⅵ的结构确定为5,7-二羟基-2-甲基-8-C-β-D-葡萄糖色原酮苷。

[0143] 表1.化合物Ⅰ～Ⅵ的1H NMR光谱数据(400MHz,DMSO-d6,δppm,J,Hz)

[0144]

[0145] 表2.化合物Ⅰ～Ⅵ的13C NMR光谱数据(400MHz,DMSO-d6,δppm)

[0146]

[0147]

[0148] 药理学实验：

[0149] 化合物对细胞的毒性：用MTT法进行评价，将上述24孔板弃去培养液，每孔加入新鲜配置的含0.50mg/mL MTT的无血清培养基，37℃下继续培养30min后，除去上清夜。每孔加入50μL DMSO溶解formazan沉淀。在Perkin Elmer EnSpire型酶标仪上测定570nm处的光密度值。

[0150] 抗炎活性：取RAW264.7小鼠巨噬细胞，计数，按5×105/孔接种于24孔细胞培养板。采用含有10％牛胎血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基，将细胞在37℃、
5％CO2饱和湿度的培养箱中贴壁12h。实验分为空白对照组，LPS组，给药组和DEX组，对照组中只加入培养基，LPS组中只加入1μg/mL的LPS，DEX组中加入1μg/mL的LPS和10μM的地塞米松，给药组中加入1μg/mL的LPS和10μM的待测样品，在37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养24h。取出上清液60μL,加入Griess试剂10分钟后，用酶标仪570nm测定OD(光密度)值，根据NO标准曲线计算NO生成量。

[0151] 表3.6个化合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞NO释放的抑制作用

[0152]

[0153] 结论：采用MTT法测定6个化合物对LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞的毒性，并测定对细胞NO释放的抑制作用，检测结果如表3所示，6个化合物均对LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖无抑制作用，对LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞的NO释放表现出不同程度的抑制作用。

[0154] 以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。