含硒大分子荧光探针及其制备方法

摘要

本发明涉及一种含硒大分子荧光探针的制备方法，包括以下步骤：将邻位卤代苯甲醛、二硒化钠在有机溶剂中，在90‑120℃下反应，得到2,2′‑二醛基二苯基二硒醚；将2,2′‑二醛基二苯基二硒醚与2,4‑二甲基吡咯在催化剂的作用下进行反应，然后向其中加入氧化剂继续反应，再加入有机碱和络合剂，反应后得到2,2′‑二氟硼二吡咯二苯基二硒醚，以上反应在20‑40℃下进行；将2,2′‑二氟硼二吡咯二苯基二硒醚与含双键化合物在20‑70℃下进行自由基聚合反应，得到含硒大分子荧光探针。本发明还公开了一种采用上述方法所制备的含硒大分子荧光探针。本发明的方法，首先制备出含硒的二硒醚，然后利用其调控单体的聚合，得到含硒大分子荧光探针，并将其用于氧化物的检测。

权利要求

1.一种含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将邻位卤代苯甲醛、二硒化钠在有机溶剂中，在90-120℃下反应，得到2,2′-二醛基二苯基二硒醚；

(2)将所述2,2′-二醛基二苯基二硒醚与2,4-二甲基吡咯在催化剂的作用下在溶剂中进行反应，然后向其中加入氧化剂继续反应，再加入有机碱和络合剂，反应后得到2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚，以上反应在20-40℃下进行；所述催化剂为三氟乙酸和/或乙酸；

所述氧化剂为2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌和/或四氯苯醌；所述络合剂为三氟化硼乙醚；

(3)将所述2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚与含碳-碳双键化合物在20-70℃下进行自由基聚合反应，得到所述含硒大分子荧光探针；所述含碳-碳双键化合物为苯乙烯、聚乙二醇双马来酸单酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸羟乙酯或N-异丙基丙烯酰胺。

2.根据权利要求1所述的含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述邻位卤代苯甲醛为邻氯苯甲醛、邻溴苯甲醛和邻碘苯甲醛中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述邻位卤代苯甲醛与二硒化钠的摩尔比为2：1-10。

4.根据权利要求1所述的含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述有机碱为三乙胺和/或N,N-二异丙基乙胺。

5.根据权利要求1所述的含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述2,2′-二醛基二苯基二硒醚、2,4-二甲基吡咯、氧化剂、有机碱和络合剂的摩尔比为1：

2-6：2-4：15-22：15-22。

6.根据权利要求1所述的含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚与含碳-碳双键化合物的摩尔比为1:1-1000。

7.权利要求1-6中任一项所述的制备方法所制备的含硒大分子荧光探针。

说明书

含硒大分子荧光探针及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及有机化学合成领域，尤其涉及一种含硒大分子荧光探针及其制备方法。

背景技术

[0002] 生物体在进行有氧呼吸的过程中，会产生多种活性氧自由基，这些自由基会产生相应的生理学和病理学作用。在可控范围内，活性氧自由基可以与还原型物质作用，来调节细胞信号传递。如果这些活性氧自由基的含量失去控制，会对蛋白质、脂质、核酸产生损害，进而有可能引发多种疾病。由于活性氧自由基的半衰期短，在体力浓度很低，因此实时检测生物体系中活性氧自由基的水平，成为科学家们的研究重点。活性氧自由基的荧光检测手段灵敏度高、设备简单、有利于生物样品的测定，目前已经很多荧光探针成功应用于活性氧自由基的检测。

[0003] 硒元素是人体中一种重要的微量元素。自十九世纪七十年代以来，科学家首次在细胞内的酶中发现了硒元素，并确认硒元素是抗氧化还原酶的活性位点的重要组成部分，此后有机硒化学取得了飞速发展。由于其抗氧化、抗癌及抗菌能力，有机硒化合物在制药方面、药物化学、细菌酶学等方面得到了广泛研究。最近，利用硒元素的氧化还原特性，有机硒化合物在化学计量型荧光探针及化学传感器方面被深入研究，多种有机硒化合物被合成并应用于检测活性氧自由基(ROS)、活性氮自由基(RNS)及生物硫醇。在化学传感领域，含硒荧光探针是一种重要的高效动态检测方式。

[0004] 目前，小分子含硒荧光探针已经得到了较为广泛的发展。2007年有文章报道了一种含硒荧光探针，将Se-N键引入到荧光染料罗丹明6G中，虽然荧光探针本身荧光较弱，但Se-N键断开时，恢复母体罗丹明6G的结构，从而使荧光增强。该荧光探针具有较高的选择性，但荧光背景高，信噪比低，适用范围小。2009年还出现了一种以罗丹明110为母体的基于Se-N键的荧光探针，该探针的针对性强，检测迅速并且信噪比高，成功应用于生物细胞成像。2013年中国科学院大连化物所合成了一种二硒醚类的氧化还原可逆有机硒荧光探针，该探针灵敏度高，选择性好，并且对硫醇的检测具有可逆性。2014年，有文章报道了一种BODIPY类型的二硒醚，实现了对KO2的检测。该探针信噪比低，对KO2有较高的选择性，在生物硫醇的条件下实现了可逆。

[0005] 但是，含硒小分子荧光探针具有水溶性、稳定性较差的缺点。而含硒大分子荧光探针的研究仍未有报道。

发明内容

[0006] 为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种含硒大分子荧光探针及其制备方法，使用本发明的方法制备的含硒大分子荧光探针，在目标检测物存在条件下，具有明显的荧光强度变化。

[0007] 本发明提供了一种含硒大分子荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

[0008] (1)将邻位卤代苯甲醛、二硒化钠(Na2Se2)在有机溶剂中，在90-120℃下反应10-50h，得到2,2′-二醛基二苯基二硒醚；

[0009] (2)将2,2′-二醛基二苯基二硒醚与2,4-二甲基吡咯在催化剂的作用下在溶剂中反应3-12h，然后向其中加入氧化剂继续反应10-60min，再加入有机碱和络合剂，反应1-12h后得到2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚，以上反应在20-40℃下进行；

[0010] (3)将2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚与含碳-碳双键化合物在40-70℃下进行自由基聚合反应，得到含硒大分子荧光探针。

[0011] 进一步地，在步骤(1)和步骤(2)中，反应在保护气氛下进行。

[0012] 进一步地，在步骤(1)中，邻位卤代苯甲醛为邻氯苯甲醛、邻溴苯甲醛和邻碘苯甲醛中的一种或几种。

[0013] 进一步地，在步骤(1)中，有机溶剂为六甲基磷酰三胺(HMPA)、四氢呋喃(THF)和N,N-二甲基丙烯基脲(DMPU)中的一种或几种。

[0014] 进一步地，在步骤(1)中，邻位卤代苯甲醛与二硒化钠的摩尔比为2：1-10。

[0015] 步骤(1)的反应路线如下：

[0016] 其中，X为Cl、Br或I。

[0017] 进一步地，在步骤(2)中，溶剂为二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷和四氢呋喃(THF)中的一种或几种。

[0018] 进一步地，在步骤(2)中，氧化剂为2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌(DDQ)和/或四氯苯醌。

[0019] 进一步地，在步骤(2)中，有机碱为三乙胺(TEA)和/或N,N-二异丙基乙胺(DIEA)。

[0020] 进一步地，在步骤(2)中，络合剂为三氟化硼乙醚。

[0021] 进一步地，在步骤(2)中，2,2′-二醛基二苯基二硒醚、2,4-二甲基吡咯、氧化剂、有机碱和络合剂的摩尔比为1：2-6：2-4：15-22：15-22。

[0022] 进一步地，在步骤(2)中，催化剂为三氟乙酸(TFA)和/或乙酸。

[0023] 步骤(2)的反应路线如下：

[0024]

[0025] 进一步地，在步骤(3)中，反应在高压汞灯照射下，无氧的密闭条件下进行。

[0026] 进一步地，在步骤(3)中，反应时间为2-60h。

[0027] 进一步地，在步骤(3)中，含碳-碳双键化合物为苯乙烯、聚乙二醇双马来酸单酯(PEGMA)、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸羟乙酯或N-异丙基丙烯酰胺。优选地，含碳-碳双键化合物为苯乙烯或聚乙二醇双马来酸单酯(PEGMA)。

[0028] 进一步地，PEGMA的分子量为100-2000g/mol。

[0029] 进一步地，在步骤(3)中，2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚与含双键化合物的摩尔比为1:1-1000。

[0030] 本发明还提供了一种采用上述制备方法所制备的含硒大分子荧光探针。

[0031] 本发明制备的含硒大分子荧光探针能够检测氧化物，如超氧化钾(KO2)。

[0032] 借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

[0033] 本发明的方法，将含硒荧光探针引入到大分子中，制备了含硒大分子荧光探针；并可根据实际需要，合成具有不同水溶性的荧光探针；本发明制备的含硒大分子荧光探针能够对目标检测物做出荧光响应，且在响应过程中，含硒大分子荧光探针具有明显的荧光强度变化。

[0034] 上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

[0035] 图1是本发明实施例1中，2,2′-二醛基二苯基二硒醚的核磁共振氢谱；

[0036] 图2是本发明实施例1中，2,2′-二醛基二苯基二硒醚的核磁共振碳谱；

[0037] 图3是本发明实施例1中，2,2′-二醛基二苯基二硒醚的核磁共振硒谱；

[0038] 图4是本发明实施例1中，Se-BODIPY的核磁共振氢谱；

[0039] 图5是本发明实施例1中，产物Fl-PS-Fl的核磁共振氢谱；

[0040] 图6是本发明实施例1中，产物Fl-PS-Fl在氧化前后的荧光测试结果；

[0041] 图7是本发明实施例1中，产物Fl-PS-Fl在氧化前后发射强度随时间的变化曲线；

[0042] 图8是本发明实施例2中，产物PPEGMA500的核磁共振氢谱；

[0043] 图9是本发明实施例2中，产物PPEGMA500在氧化前后的荧光测试结果；

[0044] 图10是本发明实施例2中，产物PPEGMA500在氧化前后发射强度随时间的变化曲线。

具体实施方式

[0045] 下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

[0046] 本发明以下实施例中所使用的试剂如下：

[0047] 硒粉，上海美兴化学试剂公司，化学纯；氢氧化钠，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；硼氢化钠，永华科技(江苏)有限公司，分析纯；四丁基溴化铵，国药集团化学试剂有限公司，分析纯；丙酮，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；乙醚，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；邻氯苯甲醛，安耐吉化学，99％；六甲基磷酰三胺(HMPA)，安耐吉化学，99％；石油醚，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；乙酸乙酯，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；2,4-二甲基吡咯，安耐吉化学，97％；三氟乙酸，上海麦克林生物化学有限公司，99％；2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌，上海麦克林生物化学有限公司，98％；三乙胺，安耐吉化学，99.5％；三氟化硼乙醚，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，98％；苯乙烯，国药集团化学试剂有限公司，分析纯；聚乙二醇甲基丙烯酸酯(分子量500)，上海麦克林生物化学有限公司；四氢呋喃(THF)，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯；二氯甲烷，永华科技(江苏)有限公司，分析纯，乙腈，上海麦克林生物化学有限公司，99.9％。

[0048] 本发明以下实施例中所使用的测试仪器及测试方法如下：

[0049] 通过Bruker 300MHz核磁仪测试核磁氢谱(1H NMR)，将待测小分析试样以CDCl3-d377
(氘代氯仿)为溶剂，四甲基硅烷(TMS)为内标溶解后进行测试；核磁硒谱( Se NMR)是通过Agilent 400MHz核磁仪进行测试；荧光光谱(FS)测试是通过将化合物溶于相应溶液中，在光栅狭缝5nm，PMT 400v下进行测试。

[0050] 实施例1

[0051] (1)二硒化钠的合成：

[0052] 将NaOH(0.4mol)加入到500ml三口烧瓶中，加入150ml水使之溶解，搅拌下加入硒粉(0.4mol)，四丁基溴化铵(2.5mmol)，得到反应液。将硼氢化钠(0.85mol)和氢氧化钠(0.04mol)加入到烧杯中，加入5ml水使之溶解，并将其分批加入到上述反应液中，加料完毕后，于室温下反应1h，然后升温至90℃反应0.5h。将反应溶液倒入500ml烧杯中，自然冷却后置于冰箱冷藏，抽滤析出的固体，依次用丙酮洗，乙醚洗，得到的红棕色针状固体，即为产物二硒化钠。上述反应的反应路线图如下：

[0053]

[0054] (2)2,2′-二醛基二苯基二硒醚的合成

[0055] 先将50ml三口烧瓶通氩气十分钟，排除空气，然后，将邻氯苯甲醛(50mmol)，二硒化钠(30mmol)加入50mL三口烧瓶中，加入20ml六甲基磷酰三胺作溶剂，保持通氩气，室温下搅拌2h后，升温至120℃回流反应40h。自然冷却后，水洗并用乙酸乙酯萃取(20mL×3次)，取有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发，除掉溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:EA＝3:1)，得到黄色固体，即为产物2,2′-二醛基二苯基二硒醚。以上反应的反应路线图如下：

[0056]

[0057] 图1-3分别是2,2′-二醛基二苯基二硒醚的核磁共振氢谱(CDCl3-d3作溶剂)，核磁共振碳谱(CDCl3-d3作溶剂)以及核磁共振硒谱(DMSO-d6作溶剂)。

[0058] (3)2,2′-二氟硼二吡咯二苯基二硒醚(Se-BODIPY)的合成

[0059] 先将三口烧瓶通氩气两个小时，排除空气然后，将2,2′-二醛基二苯基二硒醚(0.5mmol)加入50ml三口烧瓶中，加入25ml干燥的二氯甲烷作为溶剂，加入2,4-二甲基吡咯(2.4mmol)，催化量的三氟乙酸(TFA)。室温下搅拌6h后，将2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌(DDQ，1.1mmol)加入到体系中，室温搅拌45min，加入三乙胺(Et3N，10.9mmol)，搅拌10min，缓慢加入三氟化硼乙醚(BF3.Et2O，10.9mmol)，室温反应3h，TLC点板跟踪。后处理用水洗，二氯甲烷(DCM)萃取(25mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发剥离溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:DCM＝3:1)，得到红色的固体，即为所要的产物Se-BODIPY。Figure 4是该化合物的核磁共振氢谱(CDCl3-d3作溶剂)。以上反应的合成路线图如下：

[0060]

[0061] 图4是Se-BODIPY的核磁共振氢谱(CDCl3-d3作溶剂)。

[0062] (4)室温下称取Se-BODIPY(0.2mmol)置于2ml安瓿瓶中，加入苯乙烯(12.0mmol)，冷冻抽气三次，除氧后封口，于高压汞灯下搅拌反应48h，结束反应。用1ml四氢呋喃溶解，甲醇沉淀，抽滤后置于真空烘箱中作干燥处理。得到含硒大分子荧光探针，将其命名为Fl-PS-Fl。

[0063] 以上反应的合成路线图如下，其中n＝44：

[0064]

[0065] 图5为Fl-PS-Fl的核磁共振氢谱，从图中可以看出，在2.53ppm处有明显信号峰，归属为Se-BODIPY参与聚合后的甲基峰；在5.91ppm处有信号峰，归属为Se-BODIPY参与聚合后吡咯上的氢信号峰；在3.94ppm处的信号峰归属为聚合后与硒原子相连的苯乙烯聚合后的氢信号峰。通过以上分析能够说明Se-BODIPY成功调控了苯乙烯的聚合，得到大分子荧光探针。

[0066] 将Fl-PS-Fl在KO2存在下进行荧光及荧光响应测试。通过荧光分光光度计对得到的聚合物氧化前后进行结构和性能的表征，结果如图6-7。测试均在Fl-PS-Fl的浓度为10-3M下进行，溶剂为四氢呋喃：水＝15:1的混合溶液，氧化剂KO2以固体形式加入，为聚合物用量的10倍，室温下检测(λEx/λEm 560/568nm)。

[0067] 图6为Fl-PS-Fl在氧化前后的荧光测试结果，从图6中可以看出，聚合物Fl-PS-Fl本身荧光发射很弱，加入KO2瞬间，荧光发射强度增大，但是荧光发射强度不能稳定在较强的状态，加入KO2 1.6h后，荧光发射强度减弱。图7为Fl-PS-Fl在氧化前后发射强度随时间的变化曲线，从图中可看出，在加入氧化剂KO2的瞬间，荧光发射强度增强，在一定时间之后，荧光发射强度发生猝灭，直到稳定至初始值。造成荧光猝灭的原因是，Se原子被氧化变成硒亚砜，硒砜的亲水性比硒醚更强，在测试所用的混合溶液中，形成聚集体，导致荧光猝灭。

[0068] 实施例2

[0069] 步骤(1)-(3)与实施例1相同。

[0070] (4)室温下称取Se-BODIPY(0.2mmol)置于5ml安瓿瓶中，加入PEGMA500(分子量为500g/mol，12.0mmol)，冷冻抽气三次，除氧后封口，于高压汞灯下搅拌反应48h，结束反应。
用1ml四氢呋喃溶解，乙醚沉淀，离心后获得聚合物，置于真空烘箱中作干燥处理，得到含硒大分子荧光探针，将其命名为PPEGMA500。以上反应的反应路线图如下，其中，n＝280：

[0071]

[0072] 图8为PPEGMA500的核磁共振氢谱，从中可以看出，在2.58ppm处有明显信号峰，归属为Se-BODIPY参与聚合后的甲基峰；在5.99ppm处有信号峰，归属为Se-BODIPY参与聚合后吡咯上的氢信号峰；7.06-7.21及7.32-7.82ppm处的信号峰归属为聚合后与硒原子相连的苯环上的氢信号峰。以上结果表明Se-BODIPY成功调控了PEGMA500的聚合。

[0073] 将PPEGMA500在KO2存在下进行荧光及荧光响应测试。通过荧光分光光度计对得到的聚合物氧化前后进行结构和性能的表征，结果如图9-10。测试均在PPEGMA500的浓度为10-3M下进行，溶剂为乙腈：水＝70:30的混合溶液，氧化剂KO2以固体形式加入，室温下检测(λEx/λEm 499/520nm)。

[0074] 图9为PPEGMA500在氧化前后的荧光测试结果，从图9中可以看出，聚合物PPEGMA500本身荧光发射很弱，加入KO2后，荧光发射强度约增大至初始值的4倍，并保持稳定。图10为PPEGMA500在氧化前后发射强度随时间的变化曲线，从图中可看出，氧化剂KO2用量不同(10倍当量、8倍当量、5倍当量)，荧光变化有所不同。氧化剂用量越大，荧光响应速率越快，荧光响应强度越大，而且在相当长的时间内荧光发射强度保持稳定。

[0075] 实施例1和2中，分别利用具有不同性质的单体，合成了具有不同亲水性能的含硒大分子荧光探针，如Fl-PS-Fl为疏水性物质，PPEGMA500为亲水性物质，两者可应用于不同的检测体系。Fl-PS-Fl可检测油性介质中的氧化物，而PPEGMA500可用于水相或生物体系中氧化物的检测。可根据实际需要，将不同的荧光探针在不同使用条件下检测氧化物KO2。

[0076] 实施例3

[0077] 将50ml三口烧瓶通氩气十分钟，排除空气，然后，将邻溴苯甲醛(20mmol)，实施例1合成的二硒化钠(40mmol)加入50mL三口烧瓶中，加入20mL四氢呋喃作溶剂，保持通氩气，室温下搅拌2h后，升温至90℃回流反应40h。自然冷却后，水洗并用乙酸乙酯萃取(20mL×3次)，取有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发，除掉溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:EA＝3:1)，得到黄色固体，即为产物2,2′-二醛基二苯基二硒醚。

[0078] 将三口烧瓶通氩气两个小时，排除空气然后，将2,2′-二醛基二苯基二硒醚(1mmol)加入50ml三口烧瓶中，加入25ml干燥的二氯甲烷作为溶剂，加入2,4-二甲基吡咯(6mmol)，催化量的三氟乙酸。室温下搅拌6h后，将四氯苯醌(4mmol)加入到体系中，室温搅拌45min，加入N,N-二异丙基乙胺(15mmol)，搅拌10min，缓慢加入三氟化硼乙醚(BF3.Et2O，15mmol)，室温反应3h，TLC点板跟踪。后处理用水洗，二氯甲烷(DCM)萃取(25mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发剥离溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:DCM＝3:1)，得到红色的固体，即为所要的产物Se-BODIPY。

[0079] 室温下称取Se-BODIPY(1mmol)置于2ml安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸羟乙酯(1000mmol)，冷冻抽气三次，除氧后封口，于高压汞灯下搅拌反应60h，结束反应。用1ml四氢呋喃溶解，甲醇沉淀，抽滤后置于真空烘箱中作干燥处理，得到含硒大分子荧光探针。

[0080] 实施例4

[0081] 将50ml三口烧瓶通氩气十分钟，排除空气，然后，将邻碘苯甲醛(10mmol)，实施例1合成的二硒化钠(50mmol)加入50mL三口烧瓶中，加入20mlDMPU作溶剂，保持通氩气，室温下搅拌2h后，升温至120℃回流反应10h。自然冷却后，水洗并用乙酸乙酯萃取(20mL×3次)，取有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发，除掉溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:EA＝3:1)，得到黄色固体，即为产物2,2′-二醛基二苯基二硒醚。

[0082] 将三口烧瓶通氩气两个小时，排除空气然后，将2,2′-二醛基二苯基二硒醚(1mmol)加入50ml三口烧瓶中，加入25ml干燥的三氯甲烷作为溶剂，加入2,4-二甲基吡咯(2mmol)，催化量的三氟乙酸。室温下搅拌6h后，DDQ(2mmol)加入到体系中，室温搅拌45min，加入三乙胺(22mmol)，搅拌10min，缓慢加入三氟化硼乙醚(BF3.Et2O，22mmol)，室温反应3h，TLC点板跟踪。后处理用水洗，二氯甲烷(DCM)萃取(25mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发剥离溶剂后硅胶柱层析分离(洗脱液PE:DCM＝3:1)，得到红色的固体，即为所要的产物Se-BODIPY。

[0083] 室温下称取Se-BODIPY(1mmol)置于2ml安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸羟乙酯(500mmol)，冷冻抽气三次，除氧后封口，于高压汞灯下搅拌反应2h，结束反应。用1ml四氢呋喃溶解，甲醇沉淀，抽滤后置于真空烘箱中作干燥处理，得到含硒大分子荧光探针。

[0084] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。