GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用

摘要

本发明公开了GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用，GW3965为选择性LXR激动剂，作用于LXRα和LXRβ，其显著的药效使其具有开发成肾损伤防治药的潜能，也可以成为肾损伤防治新药的研究方向。

权利要求

1.GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用。

说明书

GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用

技术领域

[0001] 本发明属于化合物新应用领域，具体涉及GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用。

背景技术

[0002] 肾脏作为人体重要脏器，肩负维持体内水盐代谢平衡及内环境稳定，其相关疾病严重威胁人类健康。以肾损伤疾病为例，发达国家肾脏疾病发病率为6.5％-10％，而中国部分地区发病率高达8％-12％。自2005年，我国进行肾脏替代治疗的尿毒症患者约有6万例，并以每年大于11％的速率增长，成为临床常见的危重病，其中急性肾损伤病死率高达30％。因此，积极开发安全有效、成本低廉的相关疾病预防和/或治疗药物意义重大。

[0003] GW3965是一种有效的、选择性LXR激动剂，作用于LXRα和LXRβ，无细胞试验中EC50分别为190和30nM。现代药理学研究表明，GW3965对脑卒中和心肌缺血均有较好的保护和治疗作用，GW3965可保护脑神经、增加脑血流，同时抑制炎症反应，达到脑保护作用。目前，GW3965对肾脏损伤的疗效尚无报道。

[0004] 目前尚无明确的防治肾损伤的药物。以肾损伤为例，其治疗方案：1)维持体内电解质平衡的药物治疗；2)透析治疗；3)肾脏替换治疗，由于无明确的肾脏损伤救治药物，肾损伤后的移植率高。同时，由于无明确的预防肾损伤药物，无法控制肾损伤的发病率，进一步加重了肾损伤对人类健康的危害。

发明内容

[0005] 针对现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用。

[0006] 例如：GW3965用于制备降低肾内致炎细胞因子TNF-α水平或肾内致炎细胞因子IL-1α水平制剂的应用。

[0007] 还有：GW3965用于制备升高肾内抗炎细胞因子IL-10水平制剂的应用。

[0008] 再如：GW3965用于制备降低肾血尿素氮制剂的应用。

[0009] 另外：GW3965用于制备降低肾血肌酐制剂的应用。

[0010] 本发明的有益效果体现在：

[0011] 1)本发明所述的GW3965属于核受体LXRs的激动剂，靶向明确，毒副作用低；

[0012] 2)本发明能有效改善肾脏损伤，维持和修复肾脏功能；

[0013] 3)本发明所述GW3965具有开发成为肾保护药物的潜质，或作为基础/前体药物，用于研制新型肾保护药物，为肾保护药物提供新的思路与研究结构。

附图说明

[0014] 图1为大鼠不同处理后，各组大鼠生存率的变化，Ctrl为假手术组，I/R为模型组(未经处理)，I/R+GW10mg/kg为GW3965的10mg/kg给药组，I/R+GW30mg/kg为GW3965的30mg/kg给药组；**表示与假手术组相比p＜0.01，#表示与模型组相比p＜0.05，##表示与模型组相比p＜0.01；

[0015] 图2为大鼠不同处理后肾脏组织病理切片的变化，A：假手术组病理切片图(Sham)；B：模型组病理切片图(I/R)；C：GW3965给药病理切片图(I/R+GW3965)；

[0016] 图3大鼠不同处理后BUN(血尿素氮)的变化(X±SD，n＝6)，**表示与假手术组相比p＜0.01；#表示与模型组相比p＜0.05，##表示与模型组相比p＜0.01；

[0017] 图4大鼠不同处理后Scr(血肌酐)的变化(X±SD，n＝6)，**表示与假手术组相比p＜0.01，##表示与模型组相比p＜0.01；

[0018] 图5为大鼠不同处理后致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1α)，以及抗炎细胞因子白细胞介素-10(IL-10)的变化(X±SD，n＝6)，**表示与假手术组相比p＜0.01，#表示与模型组相比p＜0.05，##表示与模型组相比p＜0.01。

[0019] 以下结合说明书附图和具体实施方式对本发明做具体说明。

具体实施方式

[0020] 肾缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury，IRI)是指肾组织缺血时和其后恢复血液灌注时器官功能不能恢复正常，甚至发生更为严重的组织损伤或器官功能衰竭。肾脏由于其组织结构和功能的特殊性，是对缺血再灌注损伤敏感的器官之一。在临床上常见于失血或中毒性休克、弥散性血管内凝血、肾移植、肾部分切除、肾实质切开取石等手术过程中。肾缺血再灌注损伤是急性肾功能衰竭的主要原因之一，也是移植排斥反应，尤其是慢性排斥反应的重要原因。

[0021] 肾脏为高灌注器官，对缺血以及缺血再灌注都很敏感，恢复灌注可使肾脏功能损伤持续加重，容易发生缺血再灌注损伤。IRI临床上常见于失血或中毒性休克、弥散性血管内凝血、肾移植、肾部分切除、肾实质切开取石等手术过程中，是急性肾功能衰竭的主要原因之一，也是移植排斥反应，尤其是慢性排斥反应的重要原因。以细胞因子为主的炎症介质所介导的炎症反应在缺血性急性肾功能衰竭发生机制中的重要作用，缺血性急性肾功能衰竭患者存在炎症反应的活动。几乎所有肾脏固有细胞具有产生细胞因子的功能，同时又是细胞因子生物学作用的靶细胞。体内的细胞因子可分为2类，即促炎细胞因子(pro-inflammatory cytokines)和抑炎细胞因子(anti-inflammatory cytokines)。正常情况下，抑炎因子和促炎因子之间处于动态平衡，而当缺血再灌注发生时，这种动态平衡被打破，促炎因子的过度表达导致了炎症、细胞凋亡等一系列再灌注损伤的发生。其中TNF-α是缺血再灌注损伤炎症反应中重要的始动因子，能使组织细胞溶解、提高中性粒细胞的吞噬和趋化能力、诱发IL-1、IL-6等促炎因子的产生，从而扩大组织炎症反应并造成组织更大的损伤。而IL-10是炎症反应中重要的抗炎因子，它能抑制炎性细胞的激活、迁移和粘附进而抑制炎性因子的合成和释放。TNF-α参与肾脏IRI的早期反应。研究表明，TNF-α介导组织损伤主要通过以下途径：(1)促进血管内皮细胞黏附白细胞，TNF-α能诱生或上调血管内皮细胞的黏附分子，由此促进血管内皮对白细胞的黏附。(2)促进血管内皮细胞分泌血小板激活因子、集落刺激因子等炎性介质激活白细胞。(3)促进中性粒细胞表达补体受体1和3，从而增强中性粒细胞对内皮细胞的黏附，尚可直接刺激中性粒细胞释放超氧阴离子、过氧化氢等；TNF-α可激活巨噬细胞释放IL-1，IL-6，通过激活巨噬细胞释放IL-1，IL-6，IL-8，PGE2以及TNF-α等，说明TNF-α能以自分泌的形式激活单核-巨噬细胞，与其他细胞因子之间既可相互诱生，又可共同诱生，参加炎症损伤。

[0022] 白细胞介素1是一种重要的急性炎性因子，是体内炎性因子级联反应中的始动因子，在IRI过程中起着重要的作用。有研究表明。肾脏缺血再灌注后，激活的中性粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞及肾小管上皮细胞分泌IL-1增加，IL-1促进肾小管上皮细胞的凋亡。

[0023] 血清学生化标志物如血尿素氮、肌酐等指标来进行缺血性急性肾功能衰竭诊断，但是这些标志物是在肾脏缺血损伤过程开始超过24h后才会出现异常增高。于IL-1β、TNF-α在缺血性急性肾功能衰竭早期的血清和肾组织中即有表达和释放，因此TNF-α、IL-1β可作为缺血性急性肾功能衰竭的早期生化监测标志物。

[0024] 血尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物，血清尿素氮主要经肾小管分泌而随尿液排出体外，是肾功能主要指标之一。。肌酐是小分子物质，可通过肾小球滤过，在肾小管内很少吸收。血清肌酐的浓度变化主要由肾小球的滤过能力(肾小球滤过率)来决定。滤过能力下降，则肌酐浓度升高。血肌酐高出正常值多数意味肾脏受损，血肌酐能较准确的反应肾实质受损的情况。

[0025] 下面结合附图和实施例对本发明作详细说明。

[0026] 实施例一中GW3965购自Selleckchem公司，购买的是GW3965HCl，Molecular Weight(MW):618.51，结构如下：

[0027]

[0028] 实施例一：GW3965对大鼠肾缺血再灌注(RI/R)损伤的保护作用。

[0029] SD大鼠30只，体重220-280g，购自第四军医大学动物实验中心。大鼠分笼饲养(环境温度为24℃，湿度为60％-70％)。30只大鼠随机分为以下几组(n＝6)：假手术组、模型组以及GW3965给药组(含高、中、低3个剂量组)，术前6h禁食、自由饮水。各组大鼠经10％水合氯醛腹腔注射麻醉，背卧固定，然后GW3965给药组进行大鼠腹腔注射GW3965水溶液，GW3965分别按高低3个剂量(30mg/kg、10mg/kg和1mg/kg)给药，假手术组和模型组注射生理盐水。

[0030] 给药后30min，各组大鼠眼眶采血1.0mL，再进行右肾切除术；大鼠背部右肾处切口，找出右肾分离后切除；切除后进行双层缝合。GW3965给药组和模型组进行分离结扎左肾主动脉手术手术；从背部左肾处切口，找出左肾，分离左肾主动脉，结扎左肾主动脉30min后松开，然后进行双层缝合。术后4h、10h各组大鼠进行眼眶采血(约1.0mL)；术后24h各组大鼠摘取左肾，并采集血样1.5mL。左肾平均分为两半保存，一半做组织切片，一半送检做病理切片。

[0031] GW3965给药组(含高、中、低3个剂量组)，三个剂量分别为30mg/kg、10mg/kg及1mg/kg，图1的生存率中，GW3965给药组中高低2个剂量均表现出显著提高肾缺血再灌注大鼠生存率，具有浓度依赖性。小剂量1mg/kg基本无效(未在图中显示)，大剂量30mg/kg与中剂量10mg/kg的效果差别不大，故之后选择中剂量10mg/kg进行后续的实验。

[0032] 结果见图2-图4，给予GW3965治疗，再灌注24h大鼠的BUN(血尿素氮)、Scr(血肌酐)明显下降，水平接近假手术组。同时病理切片显示：GW3965给药(10mg/kg)后的组织坏死面积显著小于模型组，同时炎症损伤也显著低于模型组。由图5可知，GW3965给药(10mg/kg)可显著降低炎性细胞因子TNF-α、IL-1α，升高抗炎细胞因子IL-10至近正常水平。由此推测，GW3965防治缺血再灌注肾损伤可能通过降低炎性损伤，减少细胞凋亡实现。

[0033] GW3965为可用于预防肾损伤的小分子化合物，其显著的药效使其具有开发成肾损伤防治药的潜能，也可以成为肾损伤防治新药的研究方向。