一种改进的番茄根系根结和卵块的染色方法

摘要

本发明提供一种改进的番茄根系根结和卵块的染色方法，包括：1)将番茄根系先用次氯酸钠水溶液浸泡处理，水洗除去残留的次氯酸钠；2)将步骤1)中处理后的番茄根系浸泡在酸性品红水溶液中，密封，低温放置；3)将步骤2)中处理后的番茄根系取出，用水冲洗褪色，将褪色后的样品放入甘油中保存，即可。相较于传统方法来说，本发明的改进方法具有操作步骤简便、耗时短、褪色效果好等优点。

权利要求

1.一种番茄根系根结和卵块的染色方法，包括下述步骤：

1)将番茄根系先用次氯酸钠水溶液浸泡处理，水洗除去残留的次氯酸钠；

2)将步骤1)中处理后的番茄根系浸泡在酸性品红水溶液中，密封，低温放置；

3)将步骤2)中处理后的番茄根系取出，用水冲洗褪色，将褪色后的样品放入甘油中保存，即可；

步骤1)中，所述次氯酸钠水溶液中，次氯酸钠的质量浓度为1.0％-1.5％；

所述浸泡处理的时间为3-5min；

所述水洗除去残留的次氯酸钠的操作为：先将次氯酸钠水溶液浸泡处理后的根系用自来水冲洗30s，然后转入蒸馏水中浸泡15min；

步骤2)中，所述酸性品红水溶液的浓度为每1000mL蒸馏水中含有酸性品红3-4g；

所述低温放置的温度为0-4℃，时间为8-12小时；

步骤3)中，所述冲洗用水为去离子水；

所述冲洗的时间为3-5min。

2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于：所述方法在进行步骤1)中的操作之前，还包括将番茄根系从营养钵中取出，并用自来水将根系清洗干净至表面无基质的操作。

说明书

一种改进的番茄根系根结和卵块的染色方法

技术领域

[0001] 本发明涉及到一种番茄根系根结和卵块染色方法的改进。

背景技术

[0002] 番茄最早产于厄瓜多尔、秘鲁、维多利亚等地，为茄科番茄属，一年生或多年生草本植物。一直到19世纪人们才发现番茄可以食用并且营养丰富。随后便在世界各地被普遍种植，到现在为止已成为我国重要的水果型蔬菜之一。

[0003] 根结线虫病对番茄危害严重。根结线虫二龄幼虫(J2)从接近伸长区的部位进入植物根部，向维管束移动，找到合适的部位后，用口针刺穿头部附近的5-7个细胞并将食道腺分泌物注入，诱导这些细胞形成巨细胞。随着巨细胞的形成，线虫附近的根组织细胞增生增厚，从而使植株的根向外凸起，这样就会形成根结。线虫主要侵染植物侧根及须根，形成串状的小根结，初期为黄白色，微透明，光滑质软，后期为褐色且粗糙易腐烂，影响番茄植株的正常生长。

[0004] J2从接近分生区部位进入植物组织，向着根尖的中柱移动。伴随着根尖细胞的发育和伸长，其可以迁移到根的成熟区，找到合适的取食位点后，定居下来发育成为三龄幼虫(J3)，刺激头部周围的4-5个薄壁细胞形成大型多核的、新陈代谢活跃的巨细胞，并逐渐形成适合自己生活需要的维管组织，以便于其从巨大细胞中摄取植物营养，直至发育为成虫。雄虫会离开取食位点，雌虫会产卵。卵块会继续孵化成J2,再次侵染植物的根组织。在寄主植物和线虫长期互作的过程中，宿主植物会有某些防御措施来抵抗线虫入侵或破坏线虫的发育。

[0005] 实验中，常常统计植株的根结数和卵块数来说明植株对根结线虫的抗性强弱。为了较方便的统计根结数和卵块数，需要对根结和卵块进行染色，常用的方法为次氯酸钠-酸性品红染色法，但是传统方法的酸性品红溶液由碱性品红、乙酸和蒸馏水配制而成且染色和褪色时均需要煮沸，褪色时间较长。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种改进的番茄根系根结和卵块的染色方法。

[0007] 本发明所提供的番茄根系根结和卵块的染色方法，包括下述步骤：

[0008] 1)将番茄根系先用次氯酸钠水溶液浸泡处理，水洗除去残留的次氯酸钠；

[0009] 2)将步骤1)中处理后的番茄根系浸泡在酸性品红水溶液中，密封，低温放置；

[0010] 3)将步骤2)中处理后的番茄根系取出，用水冲洗褪色，将褪色后的样品放入甘油中保存，即可。

[0011] 上述方法在进行步骤1)中的操作之前，还包括将番茄根系从营养钵中取出，并用自来水将根系清洗干净至表面无基质的操作。

[0012] 上述方法步骤1)中，所述次氯酸钠水溶液中，次氯酸钠的质量浓度可为1.0％-1.5％。

[0013] 所述浸泡处理的时间可为3-5min。

[0014] 所述水洗除去残留的次氯酸钠的具体操作为：先将次氯酸钠水溶液浸泡处理后的根系用自来水冲洗30s，然后转入蒸馏水中浸泡15min。

[0015] 上述方法步骤2)中，所述酸性品红水溶液的浓度为每1000mL蒸馏水中含有酸性品红3-4g，具体可为3.5g。

[0016] 所述低温放置的温度可为0-4℃，具体可为4℃，时间可为8-12小时，具体可为8小时。

[0017] 上述方法步骤3)中，所述冲洗用水具体可为去离子水。

[0018] 所述冲洗的时间可为3-5min，具体可为5min。

[0019] 与传统试验相比，改进后的方法在染色、褪色过程中不需要煮沸，耗时短；所用试剂次氯酸钠和酸性品红，比传统方法中所用试剂(次氯酸钠、碱性品红、冰醋酸)少，且无刺激性气味；褪色较传统方法明显，图片拍摄效果好。

附图说明

[0020] 图1为本发明的改进的次氯酸钠-酸性品红染色与传统的次氯酸钠-酸性品红染色的效果对比图。其中A为传统次氯酸钠-酸性品红染色，褪色5min的效果图；B为传统次氯酸钠-酸性品红染色，褪色7d的效果图；C为本发明改进的次氯酸钠-酸性品红染色，褪色5min的效果图。

具体实施方式

[0021] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

[0022] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0023] 实施例

[0024] 采用本发明的改进的染色方法对根系进行染色，具体操作为：

[0025] 1.从营养钵中小心取出植株根系，用自来水将根系清洗干净至表面无基质；

[0026] 2.将洗净的根系放在质量浓度1.5％的次氯酸钠溶液中浸泡4min后，用自来水冲洗30s并转入蒸馏水中浸泡15min以去除残留的次氯酸钠；

[0027] 3.将根系转入盛有100mL蒸馏水的烧杯中，加入3.5g的酸性品红；

[0028] 4.用封口膜将烧杯封住，然后放入4℃冰箱8小时；

[0029] 5.取样品出，用去离子水冲洗5分钟褪色；

[0030] 6.褪色后，将样品放入甘油中保存便于拍照和计数。

[0031] 图1C为褪色5min的效果图。

[0032] 对比例

[0033] 采用传统的染色方法对根系进行染色，具体操作为：

[0034] 从营养钵中小心取出植株根系，用自来水将根系清洗干净至表面无基质。将洗净的根系放在质量浓度1.5％的次氯酸钠溶液中浸泡4min后，用自来水冲洗30s并转入蒸馏水中浸泡15min以去除残留的次氯酸钠。将根系转入盛有100ml蒸馏水的烧杯中，加入3ml的酸性品红溶液(3.5g碱性品红固体先溶于250ml乙酸中，再加入750ml的蒸馏水混匀)，煮沸1-5min(时间根据根结上色的情况而定，以大部分的根结被染成红色为准，若长时间不易上色，可再向烧杯中添加少量酸性品红溶液)，冷却后用自来水冲洗根系表面的残留的品红，然后转移到盛有100ml酸性甘油(甘油中加几滴5mol/L HCl)的烧杯中加热褪色0.5-1h，最后将根转入甘油:乳酸:蒸馏水(1:1:1)中，根褪色后即可见根结和卵块处红色较深，此时便可对根上的根结数和卵块数进行统计。

[0035] 图1A为传统次氯酸钠-酸性品红染色，褪色5min的效果图；

[0036] 图1B为传统次氯酸钠-酸性品红染色，褪色7d的效果图。

[0037] 从图中可以看出传统染色，褪色5min后，效果不明显，根结和根组织都为红色，褪色7天后，根组织基本为无色，根结和卵块仍为红色，褪色效果较好，方便观察和计数。而用本发明的改进后的染色方法染色，褪色5min后，效果明显，根结和卵块被染成红色，根组织基本无色，对比明显。