本发明涉及一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法，所述方法包括如下步骤：S1：将光催化抗菌材料待测样品涂覆于载体上；S2：选取黑曲霉ATCC 9372和白色念珠菌ATCC 10231，并采用第3～5代的24h内培养物作为菌种；然后用磷酸盐缓冲液稀释数倍，选取浓度为5.0×105cfu/mL～10.0×105cfu/mL的菌液作为试验用菌液；S3：滴加0.4mLS2所述试验用菌液至S1待测样品表面，并用薄膜覆盖使菌液在试样表面分布均匀；分别设置0接触时间空白对照组、明条件试验组、暗条件试验组以及明条件空白对照组和暗条件空白对照组。本发明提供的检测方法可以填补国内光催化抗菌材料在可见光下抗真菌检测技术领域的空白，极大促进光催化抗菌材料在各种环境中的合理应用。
1.一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：将2～3mL光催化抗菌材料待测样品涂覆于载体上；
S2：选取黑曲霉ATCC 9372和白色念珠菌ATCC 10231，并采用第3～5代的24h内培养物作为菌种；然后用磷酸盐缓冲液稀释数倍，选取浓度为5.0×105cfu/mL～10.0×105cfu/mL的菌液作为试验用菌液；
S3：滴加0.4mL S2所述试验用菌液至S1待测样品表面，并用薄膜覆盖使菌液在试样表面分布均匀；分别设置0接触时间空白对照组、明条件试验组、暗条件试验组以及明条件空白对照组和暗条件空白对照组；
明条件试验组的光照强度为1800～2400Lux，明条件和暗条件的培养条件控制为：温度
27～29℃、相对湿度RH＞90％，培养时间为4～24h；培养结束后用磷酸盐缓冲液洗脱，洗脱完全后取1mL洗脱液进行计数；
活菌数以N计，数值以cfu表示，按如下公式计算：N＝C×D×V
a)空白对照样0h接触时间的活菌数满足如下条件：式中：L最大—活菌数的最大对数值；
b)0接触时间空白对照样的平均活菌数应为(2.0～4.0)×105cfu；
c)明条件、暗条件的3个空白对照样经8h～24h培养后的活菌数应不小于1.0×10cfu；
试验成立条件下，以抗真菌率以R总计，数值以％表示，按如下公式计算：式中：
C0-明条件下对照样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
C1-明条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
光催化抗菌材料在可见光照射下的抗真菌贡献值以R光计，数值以％计算，按如下公式计算：式中：
B1-暗条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu。
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，S1中，所述载体为5cm×5cm的玻片。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，S3中，试验开始前在待测样品表面做灭菌活化处理。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，S3中，磷酸盐缓冲液的用量为20mL。
5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，S1中，采用喷涂或涂抹的方式将所述待测样品涂覆于载体上。
6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，S2中，选取第3代24h内的白色念珠菌作为菌种。
7.权利要求1～6任一所述检测方法在光催化抗菌涂料、漆膜或板材领域的应用。
一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及光催化材料的抗菌检测技术领域，具体地，涉及一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法。
背景技术
[0002] 光催化材料是一种以纳米级TiO2为代表的具有光催化功能的光半导体材料的总称。光催化材料在光照下会产生光催化反应，产生出具有极强氧化还原能力的羟自由基和负氧离子，由于这些羟自由基和负氧离子可破坏细菌的细胞膜和固化病毒的蛋白质，因而光催化材料具有良好的杀菌消毒作用。在涂料中加入纳米TiO2制成的抗菌纳米复合涂料能有效杀死大肠杆菌、黄色葡萄球菌等有害细菌、并防止感染，具有抗菌效果好、功效长、广谱抗菌、对人及动物无毒性等优点，被广泛应用于医院病房、手术室以及家庭卫生间等细菌密集、易繁殖的场所。
[0003] 真菌污染一直以来都是建筑家居材料的主要污染，其造成的经济损失也不可估量。目前我国现有国标GB/T 23763-2009及GB/T 30706-2014中只提供了光催化材料抗细菌性能的检测方法，对于光催化材料抗真菌性能的检测方法未有提及；现有专利或论文中也未公开关于光催化材料抗真菌性能的检测方法。
[0004] 因此，很有必要研究一种适用于光催化抗菌材料的抗真菌性能的检测方法。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法，本发明提供的检测方法可以填补国内光催化抗菌材料在可见光下抗真菌检测技术领域的空白，极大促进光催化抗菌材料在各种环境中的合理应用。
[0006] 本发明的另一目的在于提供上述检测方法在光催化抗菌涂料、漆膜或板材领域的应用。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] 一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法，所述方法包括如下步骤：
[0009] S1：将光催化抗菌材料待测样品涂覆于载体上；
[0010] S2：选取黑曲霉 ATCC 9372和白色念珠菌 ATCC 10231，并采用第3～5代的24h内培养物作为菌种；然后用磷酸盐缓冲液稀释数倍，选取浓度为5.0×105cfu/mL～10.0×105cfu/mL的菌液作为试验用菌液；
[0011] S3：滴加0.4mLS2所述试验用菌液至S1待测样品表面，并用薄膜覆盖使菌液在试样表面分布均匀；分别设置0接触时间空白对照组、明条件试验组、暗条件试验组以及明条件空白对照组和暗条件空白对照组；
[0012] 明条件试验组的光照强度为1800～2400Lux，明条件和暗条件的培养条件控制为：温度( 28±1 )℃、相对湿度RH＞90％，培养时间为4～24h；培养结束后用磷酸盐缓冲液洗脱，洗脱完全后取1mL洗脱液进行计数；
[0013] 活菌数以N计，数值以cfu表示，按如下公式计算：
[0014] N=C×D×V
[0015] 式中：
[0016] C-平板菌落数，单位为cfu；
[0017] D-稀释倍数；
[0018] V-洗脱液体积，单位为mL；
[0019] 试验成立条件为：
[0020] a）空白对照样0h接触时间的活菌数满足如下条件：
[0021] ≤0.2
[0022] 式中：L最大—活菌数的最大对数值；
[0023] L最小—活菌数的最小对数值；
[0024] L平均—三个试样的活菌数对数的平均值。
[0025] b）0接触时间空白对照样的平均活菌数应为(2.0 4.0)×105cfu。~
[0026] c）明条件、暗条件的3个空白对照样经8h 24h培养后的活菌数应不小于1.0×~103cfu。
[0027] 试验成立条件下，以抗真菌率以R总计，数值以%表示，按如下公式计算：
[0028] R总=
[0029] 式中：
[0030] C0-明条件下对照样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
[0031] C1-明条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
[0032] 光催化抗菌材料在可见光照射下的抗真菌贡献值以R光计，数值以%计算，按如下公式计算：
[0033] R光=
[0034] 式中：
[0035] B1-暗条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu。
[0036] 优选地，S1中，所述载体为5cmm×5cm的玻片。
[0037] 优选地，S1中，所述样品的用量为2～3mL。
[0038] 优选地，S3中，试验开始前在待测样品表面做灭菌活化处理。
[0039] 优选地，S3中，磷酸盐缓冲液的用量为20mL。
[0040] 优选地，S1中，采用喷涂或涂抹的方式将所述待测样品涂覆于载体上。
[0041] 优选地，S2中，选取第3代24h内的白色念珠菌作为菌种。
[0042] 上述检测方法在光催化抗菌涂料、漆膜或板材领域的应用也在本发明的保护范围之内。
[0043] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0044] 本发明提供的检测方法能够更清晰地辨明光催化产品的杀菌机制，对光催化产品的实际产品应用具有重要的指导意义。该方法填补了国内光催化抗菌材料在可见光下抗真菌检测技术领域的空白，极大促进光催化抗菌材料在各种环境中的合理应用。
[0045] 本发明提供的检测方法使用范围广，不但适用于各消毒检验部门、科研院所的实验室还适用于企业的研发部门和质控部门和社会公共检测机构。各部门机构均可依据此方法开展光催化抗菌产品抗真菌性能的检测工作，用于评价抗真菌效果；还有助于各用户企业全面评估光催化抗菌产品是否适合本企业产品的使用环境，可信度高。该方法适用于不同类型的光催化抗菌材料如光催化抗菌涂料、漆膜、板材等，具有较大的推广应用价值。
具体实施方式
[0046] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
[0047] 实施例1
[0048] 本实施例以光催化抗菌涂料为例，真菌选择为白色念珠菌，拟考察抗菌作用时间为8h。
[0049] 具体检测操作步骤如下：
[0050] 一种光催化抗菌材料抗真菌性能的检测方法，所述方法包括如下步骤：
[0051] S1：选取5cm×5cm的玻片作为载体，取3mL的样品采用涂抹方式，将样品涂于载体之上；
[0052] S2：试验菌选取第3代24h内的白色念珠菌ATCC 10231作为菌种；然后用磷酸盐缓冲液稀释数倍，选取浓度为5.0×105cfu/mL～10.0×105cfu/mL的菌液作为试验用菌液；
[0053] S3：试验开始前在紫外条件下对待测样品表面灭菌活化24h，取出后静置2h，然后滴加0.4mL稀释菌液至S1待测样品表面，并用薄膜覆盖使菌液在试样表面分布均匀；分别设置0接触时间空白对照组、明条件试验组、暗条件试验组以及明条件空白对照组和暗条件空白对照组，各组分别设置3个平行试验；
[0054] 明条件试验组的光照强度为1800Lux，明条件和暗条件的培养条件控制为：温度( 28±1 )℃、相对湿度RH＞90％，培养时间为8h；培养结束后用20mLPBS洗脱，取1mL进行计数。
[0055] 活菌数以N计，数值以cfu表示，按如下公式计算：
[0056] N=C×D×V
[0057] 式中：
[0058] C-平板菌落数，单位为cfu；
[0059] D-稀释倍数；
[0060] V-洗脱液体积，单位为mL；
[0061] 试验成立条件为：
[0062] a）空白对照样0h接触时间的活菌数满足如下条件：
[0063] ≤0.2
[0064] 式中：L最大—活菌数的最大对数值；
[0065] L最小—活菌数的最小对数值；
[0066] L平均—三个试样的活菌数对数的平均值。
[0067] b）0接触时间空白对照样的平均活菌数应为(2.0 4.0)×105cfu。~
[0068] c）明条件、暗条件的3个空白对照样经8h 24h培养后的活菌数应不小于1.0×~103cfu。
[0069] 试验成立条件下，以抗真菌率以R总计，数值以%表示，按如下公式计算：
[0070] R总=（C0-C1）/C0×100
[0071] 式中：
[0072] C0-明条件下对照样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
[0073] C1-明条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu；
[0074] 光催化抗菌材料在可见光照射下的抗真菌贡献值以R光计，数值以%计算，按如下公式计算：
[0075] R光=（B1-C1）/B1×100
[0076] 式中：
[0077] B1-暗条件下光催化样片经培养后的活菌计数的数值，单位为cfu。
[0078] 试验结果如下表1。
[0079] 表1 光催化抗菌材料抗真菌性能的检测结果
[0080]
[0081] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求。
