本发明涉及一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，该方法包括以下步骤：1)将电子烟烟液和异丙醇混合并进行超声提取，过滤，得到待检测溶液；2)对步骤1)所得待检测溶液采用超高效合相色谱串联质谱进行分析，即得。本发明的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，前处理简单，测定快速，灵敏度较高，属于烟草生物碱手性物质测定的较优方法；该方法不使用手性位移试剂，可以实现电子烟液中烟碱和降烟碱这两种生物碱手性异构体的同时拆分，分析效率高，环境友好。
1.一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将电子烟烟液和异丙醇混合并进行超声提取，过滤，得到待检测溶液；
2）对步骤1）所得待检测溶液采用超高效合相色谱串联质谱进行分析，即得；
分析时色谱条件为：色谱柱：Trefoil CEL1柱；柱温：10℃；进样量：1 µL；流动相A：CO2，流动相B：含0.1～0.2vol% NH3·H2O的甲醇溶液，流速为1 mL/min；系统背压为1500 psi；补偿溶剂为含0.1 vol %甲酸的甲醇溶液，流速为0.2 mL/min；
色谱阶段的洗脱梯度程序为：0min，流动相A、流动相B的体积百分比为96%：4%；1.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为88%：12%；2.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为74%：
26%；4.0min，流动相A、流动相B的体积百分比为64%：36%；4.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为96%：4%；5.0min，流动相A、流动相B的体积百分比为96%：4.0%。
2.如权利要求1所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤1）中，所述超声提取的超声功率为100W，提取时间为3～5min。
3.如权利要求1所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤1）中，所述过滤采用0.22μm有机相滤膜。
4.如权利要求1所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤1）中，每0.1～0.2g电子烟烟液对应异丙醇的加入量为10～20mL。
5.如权利要求4所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤1）中，过滤得到滤液，取滤液10～30μL并使用异丙醇稀释至10mL，得到待检测溶液。
6.如权利要求1所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤2）中，分析时质谱条件为：离子源：电喷雾电离源，温度：150℃；毛细管电压：3.0 kV；去溶剂气温度：300℃；去溶剂气流速：650 L/h；反吹气流速：50 L/h。
7.如权利要求6所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，质谱分析采用多反应监测模式，参数设为：S-(-)-烟碱，保留时间2.04min，母离子163.02m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为129.97 m/z、36V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为116.96m/z、36V、26V；
R-(+)-烟碱，保留时间2.23min，母离子163.02m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为129.97 m/z、36V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为116.96m/z、36V、26V；
S-(-)-降烟碱，保留时间3.87min，母离子149.07m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为79.9 m/z、30V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为132.0m/z、30V、12V；
R-(+)-降烟碱，保留时间3.96min，母离子149.07m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为79.9 m/z、30V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为132.0m/z、30V、12V。
8.如权利要求1～7任一项所述的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，其特征在于，步骤2）中，对一对手性对映体，采用面积归一法对不同手性异构体的相对含量进行计算。
一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法
技术领域
[0001] 本发明属于烟碱和降烟碱的手性分析领域，具体涉及一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法。
背景技术
[0002] 生物碱是烟草植株中存在的一类重要的化学成分，其中烟碱在烟草中占总生物碱95％以上的含量，降烟碱占2～3％，还有新烟碱和假木贼碱，这4类生物碱构成了烟草的主要生物碱。值得注意的是，这4类物质的分子结构均具有手性中心，存在手性对映体。
[0003] 目前，有非常多的报道探究烟碱向降烟碱转化的机理。烟碱向降烟碱的转化与许多因素相关，如温度、pH、生物酶、基因突变等，这种转化会对烟叶品质和烟草特有亚硝胺的含量产生一系列的影响。虽然烟碱和降烟碱都存在手性对映体，这种转化与不同手性构型之间的关系至今仍未揭示。这一方面是缺乏快速有效的烟碱和降烟碱的手性分析方法，另一方面则是由于烟草生物碱的生物合成和代谢机理非常复杂，而这也是烟草科学一直以来主要的研究方向。
[0004] 电子烟烟液是一种人工调配的液体，将其加至烟弹中，抽吸时能够部分模拟烟草的口感，电子烟商家都声称烟液中只添加了烟草成分中的烟碱，但是在实际样品的检测中，还能够检出其它的生物碱。这些生物碱究竟是人为添加还是在包装储存中的转化，则不得而知。对于电子烟烟液中烟碱和降烟碱的手性拆分，可以更好的了解不同生物碱之间变化的规律，以及这种变化与手性对映体之间的内在联系，对于烟草生物碱在人体内的毒理学和转化机理研究具有重要的意义。
[0005] 关于烟碱手性拆分的方法有光学极化检测法、核磁共振法(1H-NMR、13C-NMR)、二维液相色谱法、二维气相色谱质谱法、气相色谱质谱法、毛细管电泳-非标记内在成像法等，如申请公布号为CN104297409A的专利公开了一种电子烟烟液中烟碱的手性分析方法，其是使用手性固定相毛细管柱通过气相色谱-质谱联用仪分析其中的烟碱手性对映体。
[0006] 目前，对于烟碱和降烟碱的同时手性拆分只有圆二色谱法、中心切割二维气相色谱法等，上述分析方法普遍存在着灵敏度不高、耗时较长或环境不友好(涉及到手性位移试剂的使用)的弊端。
发明内容
[0007] 本发明的目的在于提供一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，从而解决现有分析方法存在的分离效率低、环境不友好的问题。
[0008] 为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
[0009] 一种电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，包括以下步骤：
[0010] 1)将电子烟烟液和异丙醇混合并进行超声提取，过滤，得到待检测溶液；
[0011] 2)对步骤1)所得待检测溶液采用超高效合相色谱串联质谱进行分析，即得。
[0012] 本发明的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，前处理简单，测定快速，灵敏度较高，属于烟草生物碱手性物质测定的较优方法；该方法不使用手性位移试剂，可以实现电子烟液中烟碱和降烟碱这两种生物碱手性异构体的同时拆分，分析效率高，环境友好。
[0013] 步骤1)中，所述超声提取的超声功率为100W，提取时间为3～5min。
[0014] 步骤1)中，所述过滤采用0.22μm有机相滤膜。
[0015] 步骤1)中，每0.1～0.2g电子烟烟液对应异丙醇的加入量为10～20mL。优选的，过滤得到滤液，取滤液10～30μL并使用异丙醇稀释至10mL，得到待检测溶液。
[0016] 步骤1)中，向电子烟烟液中加入待测物标样，得到加标电子烟烟液，再与异丙醇进行混合。
[0017] 步骤2)中，色谱分析时，流动相A为CO2，流动相B为含0.1～0.2vol％NH3·H2O的甲醇溶液，流速为1mL/min；补偿溶剂为含0.1vol％甲酸的甲醇溶液，流速为0.2mL/min；系统背压为1500psi。
[0018] 优选的，分析时色谱条件为：色谱柱：Trefoil CEL1柱；柱温：10℃；进样量：1μL；流动相A：CO2，流动相B：含0.1～0.2vol％NH3·H2O的甲醇溶液，流速为1mL/min；系统背压为1500psi；补偿溶剂为含0.1vol％甲酸的甲醇溶液，流速为0.2mL/min。
[0019] 进一步优选的，色谱阶段的洗脱梯度程序为：0min，流动相A、流动相B的体积百分比为96％：4％；1.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为88％：12％；2.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为74％：26％；4.0min，流动相A、流动相B的体积百分比为64％：36％；4.5min，流动相A、流动相B的体积百分比为96％：4％；5.0min，流动相A、流动相B的体积百分比为96％：4.0％。
[0020] 步骤2)中，分析时质谱条件为：离子源：电喷雾电离源，温度：150℃；毛细管电压：3.0kV；去溶剂气温度：300℃；去溶剂气流速：650L/h；反吹气流速：50L/h。
[0021] 优选的，质谱分析采用多反应监测模式，参数设为：
[0022] S-(-)-烟碱，保留时间2.04min，母离子163.02m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为129.97m/z、36V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为116.96m/z、36V、26V；
[0023] R-(+)-烟碱，保留时间2.23min，母离子163.02m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为129.97m/z、36V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为116.96m/z、36V、26V；
[0024] S-(-)-降烟碱，保留时间3.87min，母离子149.07m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为79.9m/z、30V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为132.0m/z、30V、12V；
[0025] R-(+)-降烟碱，保留时间3.96min，母离子149.07m/z，定量子离子、锥孔电压、碰撞能分别为79.9m/z、30V、18V，定性子离子、锥孔电压、碰撞能分别为132.0m/z、30V、12V。
[0026] 步骤2)中，对一对手性对映体，采用面积归一法对不同手性异构体的相对含量进行计算。该步骤中，调出选择性离子谱图，采用Masslynn软件的积分功能对每一对旋光异构体进行分别积分，可以得到不同旋光体的峰面积，采用面积归一化法可以计算得到同一物质不同手性化合物之间的含量比值。
[0027] 本发明的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，利用超临界流体色谱的体系粘度低、扩散和传质速率高的优点对手性对映体进行快速拆分，在5min的时间内可以实现两对对映体的同时拆分，结合串联色谱进行检测，进一步提高了整个测定方法的灵敏度，极大提高了分析效率。
附图说明
[0028] 图1为本发明实施例1的手性拆分方法所提取的S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的离子色谱图；
[0029] 图2为本发明实施例1的手性拆分方法所提取的S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱的离子色谱图。
具体实施方式
[0030] 下面结合附图和具体实施例对本发明的实施方式作进一步说明。以下实施例中，0.1vol％NH3·H2O的甲醇溶液是指将市售氨水(NH3·H2O，浓度为30vol％)和甲醇混合，NH3·H2O的体积百分比为0.1％；0.1vol％甲酸的甲醇溶液是将甲酸和甲醇混合，甲酸的体积百分比为0.1％；其他体积百分比的含义相同。
[0031] 实施例1
[0032] 本实施例的电子烟烟液中烟碱和降烟碱的同时手性拆分测定方法，包括以下步骤：
[0033] 1)试验用阳性样品(加标样)的制作：取0.2g的电子烟烟液样品至50mL玻璃瓶中，加入1mL的混合标准溶液(含有S-烟碱、R-烟碱、S-降烟碱、R-降烟碱，浓度分别为12.8mg/mL、169.8μg/mL、56μg/mL、56μg/mL)，经过涡旋振荡10min后在室温下放置5h；
[0034] 2)样品前处理：称取0.1g加标后的电子烟烟液于50mL的具塞三角瓶中，加入15mL异丙醇，将三角瓶置于超声仪中，以100W功率超声提取4min，然后用0.22μm有机相滤膜进行过滤，取20μL滤液并用异丙醇稀释定容至10mL的容量瓶中，得到待检测溶液；
[0035] 3)对步骤2)所得待检测溶液采用超高效合相色谱串联质谱(UPC2-MS/MS)进行分析测定，其中，色谱条件为：色谱柱：Trefoil CEL1柱；柱温：10℃；进样量：1μL；流动相A：CO2，流动相B：含0.1vol％NH3·H2O的甲醇溶液；流速：1mL/min；背压：1500psi；补偿溶剂：
0.1vol％甲酸的甲醇溶液；流速：0.2mL/min；洗脱梯度程序如表1所示：
[0036] 表1 洗脱梯度程序
[0037]
[0038]
[0039] 质谱条件为：离子源：电喷雾电离源(ESI)，温度：150℃；毛细管电压：3.0kV；去溶剂气温度：300℃；去溶剂气流速：650L/h；反吹气流速：50L/h；多反应监测模式(MRM)，MRM参数设定如表2所示：
[0040] 表2 MRM参数
[0041]
[0042] (注：*为定量离子。)
[0043] 采用面积归一化法对不同手性异构体的含量比例进行测定。
[0044] 本实施例可由不同通道同时得到如图1和图2所示的离子色谱图，根据离子色谱图分别进行积分，得到S-烟碱的峰面积为472594.03，R-烟碱的峰面积为4710.10，则可得到S-烟碱占总烟碱含量为99.01％，R-烟碱占总烟碱含量为0.99％；S-降烟碱的峰面积为675.58，R-降烟碱的峰面积为797.79，则S-降烟碱占总降烟碱含量为45.85％，R-降烟碱占总降烟碱含量为54.15％。
