一种金钱松试管苗培育方法

摘要

本发明提供一种金钱松试管苗培育方法，属于珍稀祼子植物组织培养育苗技术领域。金钱松试管苗培育方法包括以下步骤1)取材；2)纸桥液体培养；3)中间繁殖体增殖；4)生根培养；5)炼苗移栽。上述金钱松试管苗培育方法使金钱松种子的萌发率、成苗率及成活率高，可以大规模的生产金钱松。

权利要求

1.一种金钱松试管苗培育方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)取材：取一年生金钱松实生苗2.0-3.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净并消毒得培养基苗；

2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出所述液体培养基，将所述培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带1-2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；所述液体培养基由基本培养基+玉米素0.5-1㎎/L+胺鲜酯0.1-0.5㎎/L+硫脲5-10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50-100㎎/L+葡萄糖2-5㎎/L组成；所述基本培养基由硝酸钾

2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L组成；

3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，并生长成试管苗，所述液体分化培养基与所述液体培养基的组成相同；

4)生根培养：当试管苗生长到2-3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为23-25℃的条件下，进行生根培养；所述生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉30-50㎎/L+谷氨酸

50-100mg/L组成；所述1/2基本培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L组成；

5)炼苗移栽：当试管苗形成2-3㎝长的根时，转移到常温下炼苗3-5天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡1-2min，移栽至消毒后的基质中，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在23-25℃，湿度控制在80％-90％。

2.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤1)中，所述消毒是将洗净后的所述嫩枝用70％酒精漂洗30-38s，用无菌水冲洗3-5次，然后在10-12％过氧化氢溶液里浸泡5-10min，用无菌水冲洗3-5次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡20-30分钟，用无菌水冲洗3-5次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得所述培养基苗。

3.根据权利要求2所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤2)和步骤3)中的光照条件为：光照强度1000—2000Lx，光照时间16-18h/d。

4.根据权利要求3所述的金钱松试管苗培育方法,其特征在于：所述光照以日光灯加上白炽灯为混合光源。

5.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤5)中，所述基质为

1：1蛭石和腐殖土混合物。

6.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：所述生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉40㎎/L+谷氨酸75mg/L组成。

7.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤5)中所述基质采用多菌灵消毒。

说明书

一种金钱松试管苗培育方法

技术领域

[0001] 本发明属于珍稀祼子植物组织培养育苗技术领域，具体地说，涉及一种金钱松试管苗培育方法。

背景技术

[0002] 金钱为裸子植物门松柏目松科，稀有种。金钱松具有较高的经济、药用、观赏和科学研究价值。由于它树干挺拔，树冠宽大，树姿端庄、秀丽，秋叶金黄，能比较好地表达季相变化，为世界各国植物园广为引种，具有广阔的应用市场前景。金钱松属植物为著名的古老残遗植物，金钱松是我国特有的单种属植物，珍贵稀有树种，由于其特殊的分类地位，金钱松成为植物系统发育重要研究对像。这一宝贵的植物遗产被定为国家二级保护植物，对研究松科的系统发育有一定科学意义。林业部门已把金钱松列为长江中下游地区海拔1500米以下山地丘陵的优良造林树种，许多城市和植物园已引种栽培。

[0003] 金钱松的繁殖主要扦插和播种育苗，因金钱松分布零星，个体稀少，结实有明显的间歇性，目前种子奇缺，进口需要大量的外汇，这是制约金钱松发展重要因素。扦插育苗，由于金钱松体内含树脂、松油，扦插过程中的插穗切口易被分泌物污染影响生根成活。随着植物克隆技术运用在园林花卉植物苗木培育方面，取得越来越多的成功，许多乔木植物的克隆技术也日趋成熟，但是，金钱松的试管苗培育几乎处于空白和起步阶段。

发明内容

[0004] 针对现有技术中上述的不足，本发明提供一种金钱松试管苗培育方法，通过该方法使金钱松种子的萌发率、成苗率及成活率高，可以大规模的生产金钱松。

[0005] 为了达到上述目的，本发明采用的解决方案是：

[0006] 一种金钱松试管苗培育方法，包括以下步骤：1)取材：取一年生金钱松实生苗2.0-3.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净并消毒得培养基苗；

[0007] 2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出液体培养基，将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带1-2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；液体培养基由基本培养基+玉米素0.5-1㎎/L+胺鲜酯0.1-0.5㎎/L+硫脲5-10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50-100㎎/L+葡萄糖2-5㎎/L组成；

[0008] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，并生长成试管苗，液体分化培养基与液体培养基的组成相同；

[0009] 4)生根培养：当试管苗生长到2-3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为23-25℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉30-50㎎/L+谷氨酸50-100mg/L组成；

[0010] 5)炼苗移栽：当试管苗形成2-3㎝长的根时，转移到常温下炼苗3-5天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡1-2min，移栽至消毒后的基质中，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在23-25℃，湿度控制在80％-90％。

[0011] 本发明提供的金钱松试管苗培育方法的有益效果是，根据金钱松生长特性和细胞组织结构特点，以及其体内含有树脂、树胶等物质，导致培养物易褐变和生根难的特点，制备了液体培养基及生根培养基的配方，液体培养基及生根培养基含较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素，矿质盐浓度较高，适合金钱松这类含树脂类木本植物的培养生长，同时并配合金钱松试管苗培育方法，有效解决了金钱松试管苗生产过程中的污染、褐变以及难分化难生根等问题，通过金钱松试管苗培育方法使金钱松种子的萌发率、成苗率及成活率高，可以大规模的生产金钱松。

具体实施方式

[0012] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0013] 对本发明提供的金钱松试管苗培育方法作进一步描述：

[0014] 一种金钱松试管苗培育方法包括以下步骤：

[0015] 1)取材：取一年生金钱松实生苗2.0-3.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净并消毒得培养基苗，消毒的具体步骤将洗净后的嫩枝用70％酒精漂洗30-38s，用无菌水冲洗3-5次，目的是为了洗净酒精，其中酒精浓度不能太高或太低，消毒杀菌的效果都不好，然后在10-12％过氧化氢溶液里浸泡5-10min，用无菌水冲洗3-5次，目的是为了洗净过氧化氢；然后用20㎎/L农用链霉素浸泡20-30分钟，其中农用链霉素是一种抗菌素药剂，杀菌谱广，对多种细菌、真菌均有杀菌作用，用无菌水冲洗5次目的是为了洗净农用链霉素，采用酒精、过氧化氢及农用链霉素对嫩枝进行逐步杀菌，达到很好的消毒杀菌效果，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得培养基苗，主要目的是为了通过无菌干滤纸吸去嫩枝上残留水分。

[0016] 2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出所述液体培养基，将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带1-2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖，其中，光照采用日光灯加上白炽灯为混合光源，光照条件为：光照强度1000—2000Lx，光照时间16-18h/d。

[0017] 液体培养基由基本培养基+玉米素0.5-1㎎/L+胺鲜酯0.1-0.5㎎/L+硫脲5-10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50-100㎎/L+葡萄糖2-5㎎/L组成；其中，玉米素是存在于高等植物的一种天然植物细胞分裂素类物质，对细胞的分裂、生长和愈伤组织形成有很好的促进作用，胺鲜酯是生长素类物质，能促进细胞分裂伸长、加速生长点的生长、分化，能激活优良基因充分发挥作用，硫脲是一种弱细胞激动素，具有延缓细胞组织衰老，打破休眠，促进萌发、杀菌、提高搞病性等多方面作用。

[0018] 基本培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L组成。

[0019] 采用纸桥液体培养，营养物质能通过滤纸均衡而持久的供给培养物，减少污染，有利培养物健康分化生长，能有效解决了金钱松试管苗生产过程中的污染、褐变以及难分化难生根等问题。

[0020] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，并生长成试管苗，液体分化培养基与液体培养基的组成相同即液体分化培养基由基本培养基+玉米素0.5-1㎎/L+胺鲜酯0.1-0.5㎎/L+硫脲5-10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50-100㎎/L+葡萄糖2-5㎎/L组成；光照的条件与步骤2)中光照的条件相同。

[0021] 4)生根培养：当试管苗生长到2-3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为23-25℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉30-50㎎/L+谷氨酸50-100mg/L组成，优选的，生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉40㎎/L+谷氨酸
75mg/L组成，1/2基本培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L组成。

[0022] 5)炼苗移栽：当试管苗形成2-3㎝长的根时，转移到常温下炼苗3-5天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡1-2min，移栽至消毒后的基质中，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在23-25℃，湿度控制在80％-90％，其中，基质为1：1蛭石和腐殖土混合物，并用多菌灵消毒该基质。

[0023] 实施例1

[0024] 一种金钱松试管苗培育方法，包括以下步骤：

[0025] 1)取材：取一年生金钱松实生苗2.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净，将洗净后的嫩枝用70％酒精漂洗30s，用无菌水冲洗3次，然后在10％过氧化氢溶液里浸泡5min，用无菌水冲洗3次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡20分钟，用无菌水冲洗3次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得培养基苗；

[0026] 2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出液体培养基，将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带1根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，液体培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素0.5㎎/L+胺鲜酯0.1㎎/L+硫脲5㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50㎎/L+葡萄糖2㎎/L组成，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，光照强度1000Lx，光照时间16h/d，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；

[0027] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，光照强度1000Lx，光照时间16h/d，并生长成试管苗，液体分化培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素0.5㎎/L+胺鲜酯0.1㎎/L+硫脲5㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50㎎/L+葡萄糖2㎎/L组成；

[0028] 4)生根培养：当试管苗生长到2㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为23℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L+2号ABT生根粉30㎎/L+谷氨酸50mg/L组成；

[0029] 5)炼苗移栽：当试管苗形成2㎝长的根时，转移到常温下炼苗3天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡1min，移栽至消毒后的基质中，基质为1：1蛭石和腐殖土混合物，并用多菌灵消毒，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在23℃，湿度控制在80％。

[0030] 实施例2

[0031] 一种金钱松试管苗培育方法，包括以下步骤：

[0032] 1)取材：取一年生金钱松实生苗3.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净，将洗净后的嫩枝用70％酒精漂洗38s，用无菌水冲洗5次，然后在12％过氧化氢溶液里浸泡10min，用无菌水冲洗5次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡30分钟，用无菌水冲洗5次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得培养基苗；

[0033] 2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出液体培养基，将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，液体培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素1㎎/L+胺鲜酯0.5㎎/L+硫脲10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质100㎎/L+葡萄糖5㎎/L组成，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，光照强度2000Lx，光照时间18h/d，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；

[0034] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，光照强度2000Lx，光照时间18h/d，并生长成试管苗，液体分化培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素1㎎/L+胺鲜酯0.5㎎/L+硫脲10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质100㎎/L+葡萄糖5㎎/L组成；

[0035] 4)生根培养：当试管苗生长到3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为25℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L+2号ABT生根粉50㎎/L+谷氨酸100mg/L组成；

[0036] 5)炼苗移栽：当试管苗形成3㎝长的根时，转移到常温下炼苗5天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡2min，移栽至消毒后的基质中，基质为1：1蛭石和腐殖土混合物，并用多菌灵消毒，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在25℃，湿度控制在90％。

[0037] 实施例3

[0038] 一种金钱松试管苗培育方法，包括以下步骤：

[0039] 1)取材：取一年生金钱松实生苗3.5㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净，将洗净后的嫩枝用70％酒精漂洗35s，用无菌水冲洗4次，然后在11％过氧化氢溶液里浸泡8min，用无菌水冲洗4次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡35分钟，用无菌水冲洗4次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得培养基苗；

[0040] 2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出液体培养基，将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，液体培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素0.8㎎/L+胺鲜酯0.3㎎/L+硫脲8㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质80㎎/L+葡萄糖3㎎/L组成，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，光照强度1500Lx，光照时间17h/d，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；

[0041] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，光照强度1500Lx，光照时间17h/d，并生长成试管苗，液体分化培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L+玉米素0.8㎎/L+胺鲜酯0.3㎎/L+硫脲8㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质80㎎/L+葡萄糖3㎎/L组成；

[0042] 4)生根培养：当试管苗生长到3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为24℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L+2号ABT生根粉40㎎/L+谷氨酸75mg/L组成；

[0043] 5)炼苗移栽：当试管苗形成3㎝长的根时，转移到常温下炼苗4天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡2min，移栽至消毒后的基质中，基质为1：1蛭石和腐殖土混合物，并用多菌灵消毒，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在25℃，湿度控制在90％。

[0044] 对比例1

[0045] 一种金钱松试管苗培育方法，包括以下步骤：

[0046] 1)取材：取一年生金钱松实生苗3.5㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净，将洗净后的嫩枝用70％酒精漂洗35s，用无菌水冲洗4次，然后在11％过氧化氢溶液里浸泡8min，用无菌水冲洗4次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡35分钟，用无菌水冲洗4次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得培养基苗；

[0047] 2)固体培养：将培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带2根腋芽的茎尖放置于固体培养基上，固体培养基由MS培养基+玉米素0.8㎎/L+胺鲜酯0.3㎎/L+硫脲8㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质80㎎/L+葡萄糖3㎎/L组成，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，光照强度1500Lx，光照时间17h/d，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；

[0048] 3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在分化培养基上进行光照增殖培养，光照强度1500Lx，光照时间17h/d，并生长成试管苗，分化培养基由MS培养基+玉米素0.8㎎/L+胺鲜酯0.3㎎/L+硫脲8㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质80㎎/L+葡萄糖3㎎/L组成；

[0049] 4)生根培养：当试管苗生长到3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为24℃的条件下，进行生根培养；生根培养基由1/2MS培养基+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L+2号ABT生根粉40㎎/L+谷氨酸75mg/L组成；

[0050] 5)炼苗移栽：当试管苗形成3㎝长的根时，转移到常温下炼苗4天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡2min，移栽至消毒后的基质中，基质为1：1蛭石和腐殖土混合物，并用多菌灵消毒，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在25℃，湿度控制在90％。

[0051] 实验例1

[0052] 对实施例1-3及对比例1中金钱松试管苗生长的情况进行观察记录，结果如表1所示：

[0053] 表1

[0054]

[0055] 由表1可知，采用本申请的方法及培养基的配方最适合金钱松生根，通过该方法与培养基的配方使金钱松种子的萌发率、成苗率及成活率高，可以大规模的生产金钱松。

[0056] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。