一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法

摘要

本发明公开了一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法。本发明的一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，包括如下步骤：(1)用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2～5次，再用150ml浓度0.1％的次氯酸钠循环10分钟，再用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；(2)采用半微量法测定，分别测定样品瓶、对照瓶和空白瓶，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。本发明的测定方法灵敏度好，重现性好，测定结果准确，血液污渍的吸附能力更接近于在仪器中的真实情况。

权利要求

1.一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将血液污渍制备的聚氨酯管用蠕动泵加满清洗液，静置浸泡15小时后弃去清洗液，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2 5次，再用150ml浓度0.1%的次氯酸钠循环10分钟，再~用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；

（2）用蒸馏水替代上述步骤（1）中的清洗液，重复步骤（1）的操作，作为对照管，每个样品制作两个复样，在操作过程中切记快速冲洗，用蒸馏水清洗干净的聚氨酯管作重复操作空白对照，采用半微量法测定，分别测定样品管、对照管和空白对照管，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。

2.根据权利要求1中所述的血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，其特征在于：在步骤（1）中，制备血液污渍的方法：取0.3ml新鲜抗凝血，用血细胞分析用稀释液稀释至150ml，并加入10ml血细胞分析仪溶血剂，制成血液污渍液，再取长20米以上管径3mm的聚氨酯管，一端连蠕动泵，一端插入血液污渍液中，蠕动泵另一端也插入血液污渍液中，开启蠕动泵，使血液污渍液经蠕动泵，在聚氨酯管中循环，循环15小时后，拔出蠕动泵插入血液污渍液中的一端，使血液污渍液在管路中排空，将聚氨酯管与真空泵连接，另一端暴露在空气中，开启真空泵，使聚氨酯管中的残留血液污渍通过气流吹干。

3.根据权利要求1中所述的血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，其特征在于：在步骤（2）中，清洗率的计算方法：清洗率（%）=（S-Sx）/（S-B）×100%Sx：样品管消耗酸量均值

S：对照管消耗酸量均值

B：空白管消耗酸量均值。

4.根据权利要求2中所述的血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，其特征在于：在步骤（1）中，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2次。

说明书

一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法

技术领域

[0001] 本发明属于分析仪器技术领域，具体涉及一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法。

背景技术

[0002] 血细胞分析仪又名血球分析仪，主要分为全自动或半自动血细胞分析仪，和动物血细胞分析仪，血细胞分析仪下面又分为三分类和五分类血球仪，根据测试项目不一样，又有二十一项，二十二项等不同的分类。

[0003] 现有的分析方法的缺点如下：(1)血液污渍是与血细胞分析仪中的聚氨酯管接触，仪器无玻璃材质，而标准方法中血液污渍是与玻璃材质接触，玻璃瓶和聚氨酯管对血液污渍的吸附能力是不一致的。(2)血液污渍在整个仪器中的细小管路中不停流动，而标准方法中是在大的玻璃瓶中局部流动。(3)血液污渍在仪器中的温度是室温，不可能达到80℃，80℃下加热2小时，足以使血液污渍变性，与仪器中残留的血液污渍性质不一致。(4)血液污渍在仪器中是先由新鲜抗凝血用血细胞分析仪稀释液稀释后，经血细胞分析仪溶血剂溶血后产生，再通过管路进行流动，而标准方法中血液污渍是由新鲜抗凝血和水产生，血液污渍的成分已经发生改变。

发明内容

[0004] 本发明的目的是针对上述问题，提供了一种更加符合真实情况且灵敏度高的血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法。

[0005] 为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：本发明的一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，包括如下步骤：

[0006] (1)将血液污渍制备的聚氨酯管用蠕动泵加满清洗液，静置浸泡15小时后弃去清洗液，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2～5次，再用150ml浓度 0.1％的次氯酸钠循环10分钟，再用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；

[0007] (2)用蒸馏水替代上述步骤(1)中的清洗液，重复操作，作为对照管，每个样品制作两个复样，在操作过程中切记快速冲洗，用干净的聚氨酯管作重复操作空白对照，采用半微量法测定，分别测定样品瓶、对照瓶和空白瓶，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。

[0008] 进一步地，在步骤(1)中，制备血液污渍的方法：

[0009] 取0.3ml新鲜抗凝血，用血细胞分析用稀释液稀释至150ml，并加入10ml 血细胞分析仪溶血剂，制成血液污渍液，再取长20米以上管径3mm的聚氨酯管，一端连蠕动泵，一端插入血液污渍液中，蠕动泵另一端也插入血液污渍液中，开启蠕动泵，使血液污渍液经蠕动泵，在聚氨酯管中循环，循环15小时后，拔出蠕动泵插入血液污渍液中的一端，使血液污渍液在管路中排空，将聚氨酯管与真空泵连接，另一端暴露在空气中，开启真空泵，使聚氨酯管中的残留血液污渍通过气流吹干。

[0010] 进一步地，在步骤(2)中，

[0011] 清洗率的计算方法：清洗率(％)＝(S-Sx)/(S-B)×100％

[0012] Sx：样品管消耗酸量均值

[0013] S：对照管消耗酸量均值

[0014] B：空白管消耗酸量均值。

[0015] 更进一步地，在步骤(1)中，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2次。

[0016] 进一步地，在步骤(1)中，再用150ml浓度0.1％的次氯酸钠循环10分钟。

[0017] 有益效果：本发明的测定方法灵敏度好，重现性好，测定结果准确，血液污渍的吸附能力更接近于在仪器中的真实情况。

[0018] 与现有技术相比，本发明产品具有以下优势：

[0019] 改进后的优点：

[0020] (1)选用的管路材质与仪器中使用的基本一致，使血液污渍的吸附能力更接近于在仪器中的真实情况。

[0021] (2)选用的管径大小与仪器中使用的基本一致，而增加管路长度，可以提高本方法的灵敏度。

[0022] (3)选用的温度条件与仪器基本一致，更符合血液污渍在仪器中的所处的环境。

[0023] (4)血液污渍的成分与仪器基本一致，更符合血液污渍在仪器中的成分组成。

具体实施方式

[0024] 下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步的详细说明。

[0025] 实施例1

[0026] 本发明的一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，包括如下步骤：

[0027] (1)将血液污渍制备的聚氨酯管用蠕动泵加满清洗液，静置浸泡15小时后弃去清洗液，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗3次，再用150ml浓度0.1％的次氯酸钠循环10分钟，再用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；

[0028] 制备血液污渍的方法：

[0029] 取0.3ml新鲜抗凝血，用血细胞分析用稀释液稀释至150ml，并加入10ml 血细胞分析仪溶血剂，制成血液污渍液，再取20米直径3mm的聚氨酯管，一端连蠕动泵，一端插入血液污渍液中，蠕动泵另一端也插入血液污渍液中，开启蠕动泵，使血液污渍液经蠕动泵，在聚氨酯管中循环，循环15小时后，拔出蠕动泵插入血液污渍液中的一端，使血液污渍液在管路中排空，将聚氨酯管与真空泵连接，另一端暴露在空气中，开启真空泵，使聚氨酯管中的血样通过气流蒸干。

[0030] (2)用蒸馏水替代上述步骤(1)中的清洗液，重复操作，作为对照管，每个样品制作两个复样，在操作过程中切记快速冲洗，用干净的聚氨酯管作重复操作空白对照，采用半微量法测定，分别测定样品瓶、对照瓶和空白瓶，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。

[0031] 清洗率的计算方法：清洗率(％)＝(S-Sx)/(S-B)×100％

[0032] Sx：样品管消耗酸量均值

[0033] S：对照管消耗酸量均值

[0034] B：空白管消耗酸量均值。

[0035] 本发明的半微量法的蒸馏装置。蒸馏装置中A为1000ml圆底烧瓶，B为安全瓶,C为连有氮气球的蒸馏器，D为漏斗，E为直形冷凝管，F为100ml锥形瓶， G、H为橡皮管夹。具体操作方法如下：

[0036] step1:装置的清洗：

[0037] 连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒，从D漏斗加水约50ml，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A 瓶中的水,当蒸气从冷凝管尖端冷凝而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的水反抽到B瓶，开G夹,放出B瓶中的水，关B瓶及G夹，将冷凝管尖端插入约 50ml水中，使水自冷凝管尖端反抽至C瓶,再抽至B瓶，如上法放去。如此将仪器洗涤2～3次；

[0038] step2:测定取供试品适量(约相当于含氮量1.0～2.0mg)，精密称定，置干燥的30～50ml凯氏烧瓶中，加硫酸钾(或无水硫酸钠)0.3g与30％硫酸铜溶液5 滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大火力，沸腾至溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热10分钟，放冷，加水2ml；

[0039] 取2％硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液5滴,将冷凝管尖端插入液面下。然后，将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转入 C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40％氢氧化钠溶液 10ml，用少量水再洗漏斗数次，关G夹，加热A瓶进行蒸气蒸馏，至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟后,将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏；

[0040] 馏出液用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验(空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同，约70～ 75ml)校正。每1ml硫酸滴定液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N；

[0041] 取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全, 并相应地增加40％氢氧化钠溶液的用量。

[0042] 上述新鲜抗凝血、血细胞分析仪用稀释液和溶血剂的用量根据各品牌血细胞分析仪在检测过程中的用量而定，上述用量只是参照其中一种品牌血细胞分析仪的用量，因不同品牌血细胞分析仪在检测过程中，新鲜抗凝血、稀释液和溶血剂用量不同，会造成血液污渍在仪器中的组成成分、含量及性质不同，并导致血液污渍在仪器内部残留状态和吸附强弱存在差异，所以测定不同品牌的血细胞分析仪清洗液清洗率时，应根据对应品牌血细胞分析仪在检测过程中新鲜抗凝血、稀释液和溶血剂的用量而定，为保证管内残留的血液污渍全部被清洗下来，次氯酸钠的浓度、使用量及清洗时间根据实际情况而定，使清洗液清洗率测定更加接近实际情况。

[0043] 上述所采用的聚氨酯管材料及管径大小，根据测定的清洗液品牌，参照对应仪器中管路材质及大小。

[0044] 实施例2

[0045] 实施例2与实施例1的区别在于：本发明的一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，包括如下步骤：

[0046] (1)将血液污渍制备的聚氨酯管用蠕动泵加满清洗液，静置浸泡15小时后弃去清洗液，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗2次，再用150ml浓度0.1％的次氯酸钠循环10分钟，再用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；

[0047] (2)用蒸馏水替代上述步骤(1)中的清洗液，重复操作，作为对照管，每个样品制作两个复样，在操作过程中切记快速冲洗，用干净的聚氨酯管作重复操作空白对照，采用半微量法测定，分别测定样品瓶、对照瓶和空白瓶，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。

[0048] 实施例3

[0049] 实施例3与实施例1的区别在于：本发明的一种血细胞分析仪用清洗液清洗率测定方法，包括如下步骤：

[0050] (1)将血液污渍制备的聚氨酯管用蠕动泵加满清洗液，静置浸泡15小时后弃去清洗液，用蠕动泵缓缓加入100ml蒸馏水清洗5次，再用150ml浓度0.1％的次氯酸钠循环10分钟，再用200ml蒸馏水清洗聚氨酯管，用500ml锥形瓶收集150ml次氯酸钠及200ml蒸馏水洗出液，浓缩后装入凯氏烧瓶，制得带有血液污渍的样品管；

[0051] (2)用蒸馏水替代上述步骤(1)中的清洗液，重复操作，作为对照管，每个样品制作两个复样，在操作过程中切记快速冲洗，用干净的聚氨酯管作重复操作空白对照，采用半微量法测定，分别测定样品瓶、对照瓶和空白瓶，对照消耗的滴定酸量，得到血细胞分析仪用清洗液清洗率。

[0052] 试验1

[0053] 清洗率是为了表示清洗效果而规定的指标，它是指标准污染布在洗涤前后的反射率差占其污染前后的反射率差的百分比。本发明实施例1至实施例3的数据如表1所述：

[0054]  清洗率 灵敏度
实施例1 98％ 95％
实施例2 97％ 95％
实施例3 99％ 95％

[0055] 由表1所示，本发明的实施例1至实施例3的清洗率比较高。测定方法的灵敏度高。

[0056] 以上描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。