一种紫丁香苷药物组合物及其在治疗宫颈炎中的应用

摘要

本发明涉及一种紫丁香苷药物组合物及其在治疗宫颈炎中的应用。本发明所述的紫丁香苷药物组合物，其特征在于，按照重量份计，该药物组合物含有紫丁香苷1‑3份，桂皮醛0.5‑1.5份。本发明药物组合物对大鼠宫颈炎的治疗效果优于单一组分紫丁香苷或桂皮醛对宫颈炎的治疗效果。

权利要求

1.一种治疗和/或预防妇科炎症的药物组合物，其特征在于，按照重量份计，该药物组合物由紫丁香苷1-3份，桂皮醛0.5-1.5份组成；所述紫丁香苷选自紫丁香苷和/或药学上可接受的紫丁香苷盐；桂皮醛选自桂皮醛和/或药学上可接受的桂皮醛盐；紫丁香苷与桂皮醛的质量比为2:1-4:1；所述妇科炎症选自宫颈炎、阴道炎。

2.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于还包括药学上可接受的辅料。

3.权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述药学上可接受的辅料选自表面活性剂、稳定剂、增溶剂。

4.权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

5.权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型为缓释、控释和肠溶性胶囊、片剂、混悬剂、微乳剂、亚微乳剂或注射剂。

6.权利要求1-5任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防妇科炎症药物中的应用；所述妇科炎症选自宫颈炎、阴道炎。

说明书

一种紫丁香苷药物组合物及其在治疗宫颈炎中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种紫丁香苷药物组合物及其在治疗宫颈炎中的应用。

背景技术

[0002] 紫丁香苷(Syringin)属于苯丙素类化合物，具有止血、抗炎、镇痛、增强免疫、保护肝脏、抗抑郁、抗肿瘤等药理作用，常用于止血和抗肝毒药。桂皮醛是中国传统中药材桂枝或肉桂挥发油的主要成分，为烯醛类有机化合物，具有抗炎、解热镇痛、抗肿瘤、抗菌、降糖、抗肥胖和神经保护等多种药理作用。然而，目前国家药监局并未批准任何以紫丁香苷为主要原料的新药。

[0003] 宫颈炎是妇科常见疾病之一，其病变包括子宫颈、阴道炎症及子宫颈管黏膜炎症。本发明提供一种用于治疗宫颈炎的紫丁香苷药物组合物。

发明内容

[0004] 本发明提供一种药物组合物，其特征在于，按照重量份计，该药物组合物含有紫丁香苷1-3份，桂皮醛0.5-1.5份。该药物组合物还任选包括药学上可接受的辅料(例如注射用水、药用载体、表面活性剂、稀释剂、赋形剂、抗氧剂、稳定剂、增溶剂等)。

[0005] 本发明的另一优选技术方案提供上述药物组合物，其特征在于紫丁香苷与桂皮醛的质量比为2:1-4:1。

[0006] 本发明的另一技术方案提供上述药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

[0007] 本发明的另一技术方案提供上述药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型为缓释、控释和肠溶性胶囊、片剂、混悬剂、微乳剂、亚微乳剂或注射剂。

[0008] 本发明的另一技术方案提供上述药物组合物在治疗和/或预防妇科炎症，尤其是宫颈炎、阴道炎中的应用。

[0009] 本发明的另一技术方案提供上述药物组合物在制备治疗和/或预防妇科炎症药物中的应用，尤其是在制备治疗和/或预防宫颈炎、阴道炎药物中的应用。

[0010] 本发明上述药物组合物中的紫丁香苷包括紫丁香苷以及药学上可接受的紫丁香苷盐；桂皮醛包括桂皮醛以及药学上可接受的桂皮醛盐。

[0011] 本发明药物组合物涉及的各种剂型可按照制药领域技术规范和要求(例如药典、教科书或其他现有技术中的方法，也可按照专利申请号：201710594462.4中记载的类似方法)分别制备成符合临床治疗和防治宫颈炎需求的制剂及其适宜的各种规格与剂型(包括固体制剂、液体制剂和半固体制剂)如缓释、控释和肠溶性胶囊、片剂、混悬剂、微乳剂、亚微乳剂或含有与之相同单一及多成分组合性各种注射剂。

[0012] 本发明药物组合物涉及到的剂型的制备方法，属于药剂学领域常规的制备方法，是本领域技术人员根据现有技术(例如药典、教科书及制药领域的其他技术规范)就可以实现制备，本发明对上述剂型的常规制备方法不再赘述。

[0013] 与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明提供的药物组合物对大鼠宫颈炎的治疗效果优于单一组分紫丁香苷或桂皮醛对宫颈炎的治疗效果，同时本发明提供特定比例的紫丁香苷(1-3份)和桂皮醛(0.5-1.5份)组成的药物组合物对大鼠宫颈炎的治疗效果优于其他比例的组合物(例如紫丁香苷：桂皮醛＝1：2的药物组合物)；(2)本发明通过在紫丁香苷中加入适量的桂皮醛，显著增强了紫丁香苷药物组合物对宫颈炎、阴道炎的治疗效果。

具体实施方式

[0014] 为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

[0015] 实施例1

[0016] 原料药：紫丁香苷1份、桂皮醛0.5份

[0017] 按上述重量份，取紫丁香苷10g，桂皮醛5g，与适量的常规药用辅料(优选羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁)，混匀，按照常规工艺制成片剂。

[0018] 实施例2

[0019] 原料药：紫丁香苷1份、桂皮醛1.5份

[0020] 按上述重量份，取紫丁香苷10g，桂皮醛15g，与适量的常规药用辅料(优选1％吐温-80、聚乙二醇400)，混匀，加适量水使充分溶解后，滤过，除菌，分装，冷冻干燥，即得注射用无菌粉末。

[0021] 实施例3

[0022] 原料药：紫丁香苷3份、桂皮醛0.5份

[0023] 按上述重量份，取紫丁香苷30g，桂皮醛5g，与适量的乳化剂一起加入油中，搅拌使其溶解，作为油相；将稳定剂、渗透压调节剂和抗氧化剂加入到水中，搅拌使其溶解，作为水相；将油相加入水相中，高速剪切分散，形成初乳；初乳调pH至6.0-7.5，高压匀化，得精乳，即得亚微乳剂。

[0024] 实施例4

[0025] 原料药：紫丁香苷2份、桂皮醛0.5份

[0026] 按上述重量份，取紫丁香苷20g，桂皮醛5g，与主要辅料中的行业规定允许添加量以下量的增溶剂(如吐温-80等)混合、加适量水使充分溶解后，依次加入乳化剂和正硅酸乙酯，充分搅拌混合均匀形成混合溶液A，然后将A溶液加入反应装置(装有电磁搅拌器、温度计、冷凝回流装置和滴液漏斗)，高速(500转/分)搅拌剪切10分钟，形成透明油状的初乳.在室温条件下(25℃)，将明胶溶液逐步滴加进入反应装置，主效成分在搅拌作用下形成O/W型小液滴，包裹在乳化剂胶束里面，反应2h，待正硅酸乙酯充分水解后滴加氯化钙溶液，经乳化剂胶束表面反应沉淀、包裹、固化后形成有效成分纳米胶囊，反应完全后得到有效成分为囊芯、硅酸钙为囊壁的纳米胶囊，通过调节加入正硅酸乙酯与氯化钙的量，制备不同芯壁比的有效成分纳米胶囊缓释制剂，即得。

[0027] 实施例5

[0028] 原料药：紫丁香苷1份、桂皮醛2份

[0029] 按上述重量份，取紫丁香苷10g，桂皮醛20g，按照实施例1的方法制成片剂。

[0030] 实施例6

[0031] 原料药：紫丁香苷

[0032] 取紫丁香苷10g，按照实施例1的方法制成片剂。

[0033] 实施例7

[0034] 原料药：桂皮醛

[0035] 取桂皮醛5g，按照实施例1的方法制成片剂。

[0036] 实施例8

[0037] 实验材料

[0038] 1、动物和菌毒株、细胞株：SD大鼠，SPF级，雌性，体重180-220g，购自第四军医大学实验动物中心，合格证号为SYXK(陕)2012-001。HPV16转染细胞株，ARPE-19/HPV-16细胞，美国ATCC毒菌种保藏中心馈赠，批号CRL-2502；非洲绿猴肾细胞(Vero)引株自北京协和医学院基础学院细胞中心；病毒，单纯疱疹病毒2型(HSV-2)引株自中国医学科学院生物与技术研究所，半数组织培养感染剂量(TCID50)为1×10-5.5，-80℃冰箱保存。细菌株，金黄色葡萄球菌26003、331、360、361株；白色葡萄球菌26101株；表皮葡萄球菌标准株、104、108株；大肠埃希菌44113、23、117、178株；绿脓杆菌10102、209、210、211株；乙型链球菌10、12株；变形杆菌标准株；淋球菌标准株；白色念珠菌标准株均购自中国食品药品检定研究院菌种室。

[0039] 2、药物及试剂：紫丁香苷，500克，批号20171227-2，HLPC纯度98.3％，桂皮醛500克，HLPC纯度>98％；由陕西省医药控股集团医药研究院制备。聚甲酚磺醛栓(葫芦岛国帝药业有限责任公司，批号160901.40)，阿昔洛韦片(石药集团欧意药业有限公司，批号270130812)，体外试验前用高纯水配成10g/L母液，过滤除菌后备用；Ezup柱式病毒DNA抽提试剂盒(生工生物工程股份有限公司，批号17043471Y)，SYBR Premix Ex Taq试剂盒(日本TaKaRa公司，批号AK3101)，HPV16酶联免疫试剂盒(上海泛科生物技术有限公司，批号
201606)，DMEM/F12培养基(美国Gibco公司，批号1720768)，营养肉汤(NB，北京奥博生物技术有限责任公司，批号20170905)。

[0040] 3、实验仪器：Piko Real96型荧光定量PCR仪(美国Thermo公司)，Enspire型多功能酶标仪(PerkinElmer)，IX71型倒置相差显微镜(日本Olympus公司)，731型CO2培养箱和MSC1.8型生物安全柜(购自美国Thermo公司)。

[0041] 4、引物序列：HPV16 E6基因引物，上游5'-TCAAAAGCCACTGTGTCC-3'，下游5'-TTACAGCTGGGTTTCTCT-3'，人GAPDH基因的引物，上游5'-CTCCTCCACCTTTGCGACTG-3'，下游5'-TCCTCTTGTGCTCTTGCTGG-3'，北京奥科鼎盛生物科技有限公司合成。

[0042] 实验方法

[0043] 1、紫丁香苷对HSV-2的抑制作用：取长成单层细胞的培养板接种100TCID50的病毒液，100μl/孔，置37℃-5％CO2培养箱中吸附1小时后，分别加入梯度稀释的紫丁香苷，常规设正常细胞组、病毒组和阳性药组；续培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，当病毒组细胞病变为4级(Ⅳ)时记录试验结果。细胞病变按6级标准判断：“-”，细胞生长正常，无病变出现；“±”，细胞病变少于整个单层的10％；“Ⅰ”，细胞病变约占整个单层细胞的25％以下；“Ⅱ”，细胞病变约占整个单层细胞的50％以下；“Ⅲ”，细胞病变约占整个单层细胞的75％以下；“Ⅳ”，细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。按Reed-Muench计算50％抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)即TI＝TC50/IC50。

[0044] 2、紫丁香苷对HPV16 E6基因表达的抑制作用：将ARPE-19/HPV-16细胞接种于培养瓶中，待细胞长至80％，加入梯度稀释的紫丁香苷，37℃-5％CO2培养48小时，采用DNA抽提试剂盒提取DNA。PCR反应：95℃-30秒；95℃-5秒，59℃-30秒，共55个循环；溶解曲线分析。使用sequence detection system软件分析PCR过程各检测样本的Ct值。采用ΔΔCt法计算HPV16病毒的相对表达量。

[0045] 3、紫丁香苷的体外抗菌作用：将96孔培养板内加入营养肉汤，药物孔加入等体积的药液，共设7个稀释度，另设细菌组。将37℃培养18小时的菌液，用营养肉汤稀释成每毫升含1×105个细菌，在每孔加入各菌液10μL，将培养板放入37℃培养箱内培养24小时，以浊度为指标检查各孔有无细菌生长，以不显示浊度，细菌无生长的那一孔的药液稀释度作为最低抑菌浓度(MIC)。

[0046] 4、本发明药物组合物(实施例1-7原料药)对大鼠宫颈炎的作用：实验分为HPV16感染、细菌混合感染(大肠埃希菌、淋球菌和金黄色葡萄球菌)、化学物质感染3批实验。每批试验取雌性大鼠100只，随机分为正常组、模型组、聚甲酚磺醛栓组及实施例1-7原料药组，每6 6
组10只。除正常组外，3批实验分别用密度1×10个/mL的HPV16细胞液、密度6×10个/mL的混合菌液或25％的苯酚胶浆，注入大鼠宫颈处，0.2ml/只。注入前先用针头刮擦3次，造成子宫表面损伤。每隔2日注入1次，共3次，造成感染模型；正常组在同等条件下注入蒸馏水。造模24小时后开始聚甲酚磺醛栓阴道内给药(容量为50μl/kg)；实施例1-7原料药灌胃(ig，容积为5ml/kg)，每日1次，连续12天，正常组和模型组在同等条件下给基质。末次给药后第2天解剖动物，摘取宫颈和阴道。HPV感染模型取一部分宫颈测定HPV16表达(吸光度A表示)。宫颈肉眼观察判定标准：“-”，大鼠阴道、宫颈无肿胀，无充血，颜色正常；“+”，大鼠阴道、宫颈有轻度充血，肿胀不明显，颜色正常；“Ⅱ”，大鼠阴道、宫颈有瘀血，宫颈肿胀；“Ⅲ”，大鼠阴道病变轻，但宫颈有明显瘀血，颜色暗紫色，宫颈有明显肿胀，外观宫颈较厚。阴道肉眼观察判定标：“-”，大鼠阴道上皮角化正常，未见增生，未见退行性变，结构正常；“+”，大鼠阴道上皮角化增生不明显，上皮下未见炎症；“Ⅱ”，大鼠阴道上皮有轻度增生，皮下有轻度炎症；
“Ⅲ”，大鼠阴道上皮增生明显，并有细胞分裂，有退行性变。化学物质感染模型每日观察外阴病变，并于给药后第13天解剖观察阴道、宫颈病变情况。外阴病变等级判断标准：“-”，阴道、宫颈黏膜呈粉色，无充血肿胀、无异常分泌物；“+”，阴道、宫颈黏膜轻微充血、肿胀不明显、无异常分泌物；“Ⅱ”，阴道、宫颈黏膜充血肿胀明显、有一定的分泌物；“Ⅲ”，阴道、宫颈黏膜充血肿胀明显、异常分泌物、有散在出血点或小点状糜烂。“Ⅳ”，阴道、宫颈黏膜充血明显、溃烂或有脓性分泌物、积水。

[0047] 实验结果

[0048] 1、紫丁香苷体外抗病毒作用

[0049] (1)体外抗HSV-2病毒作用：紫丁香苷在体外对HSV-2具有明显的抑制作用，其IC50为1.000μg/mL，TI为6.9(表1)。

[0050] 表1紫丁香苷体外抗HSV-2病变作用

[0051]

[0052] (2)紫丁香苷对HPV16 E6基因的抑制作用：紫丁香苷在体外对HPV16 E6基因具有明显的抑制作用，其中剂量组E6基因表达量的log值与病毒组比较具有显著性差异(表2)。

[0053] 表2紫丁香苷对HPV16 E6基因表达的抑制作用

[0054]

[0055] 与病毒组比较：*P＜0.05。

[0056] 2、紫丁香苷体外抗菌作用：紫丁香苷对金黄色葡萄球菌(26003、331、360、361号)、白色葡萄球菌26101号、表皮葡萄球菌标准株(104、108号)、乙型链球菌(10、12号)、大肠埃希菌(44113、23、117、178号)、绿脓杆菌(10102、209、210、211号)、变形杆菌标准株、淋球菌标准株、白色念珠菌标准株均具有明显的抑制作用，其最低抑菌质量浓度分别为56.56、56.56、28.28、28.28、113.12、56.56、56.56、113.12、28.28、28.28、14.14、28.28、56.56、
56.56、56.56、28.28、28.28、56.56、14.14、56.56、56.56μg/mL(表3)。

[0057] 表3紫丁香苷在体外对细菌的抑制作用

[0058]

[0059]

[0060] 3、实施例1-7原料药对HPV16感染致大鼠宫颈炎的作用

[0061] (1)对HPV16感染致大鼠慢性宫颈炎的作用：肉眼观察正常组大鼠阴道、宫颈无肿胀，无充血，颜色正常；模型组部分大鼠阴道、宫颈有明显肿胀，外观宫颈较厚，颜色较正常，病变程度与正常组比较更明显；实施例1-4原料药组对动物的阴道、宫颈从颜色到切面，病变均有显著治疗作用，治疗效果优于实施例5原料药组和实施例6原料药组(即紫丁香苷组)；实施例7原料药组(即桂皮醛组)的治疗效果不明显(表4)。

[0062] 表4肉眼下各实验组对HPV16感染致大鼠慢性宫颈炎的影响(n＝10)

[0063]

[0064] (2)对HPV16感染致大鼠阴道炎症的作用：对照组大鼠阴道结构正常；模型组阴道组织增厚、水肿和出血等明显炎症病变；实施例1-4原料药组对动物的阴道病变具有显著治疗作用(表5)。

[0065] 表5各实验组对HPV16感染致大鼠阴道炎症的影响(n＝10)

[0066]

[0067] 4、实施例1-7原料药对细菌混合感染致大鼠慢性宫颈炎的作用

[0068] (1)对细菌混合感染致大鼠慢性宫颈炎的影响：肉眼观察正常组大鼠阴道、宫颈无肿胀，无充血，颜色正常；模型组部分大鼠阴道、宫颈有明显肿胀，外观宫颈较厚，颜色表面暗紫色，切面宫颈较厚，个别动物宫腔内有少量粉色黏液渗出，病变程度与正常组比较更明显；实施例1-4原料药组阴道、宫颈从颜色到切面，病变均有显著改善，治疗效果优于实施例5原料药组和实施例6原料药组(即紫丁香苷组)；实施例7原料药组(即桂皮醛组)的治疗效果不明显(表6)。

[0069] 表6肉眼下各实验组对细菌混合感染致大鼠慢性宫颈炎的作用(n＝10)

[0070]

[0071] (2)对细菌混合感染致大鼠阴道炎的作用：对照组大鼠阴道结构正常，模型组可见阴道组织增厚、出血、肿胀等炎性病变；实施例1-4原料药组对阴道病变具有显著改善作用(表7)。

[0072] 表7各实验组对细菌混合感染致大鼠阴道炎的作用(n＝10)

[0073]

[0074] 5、对化学物质致大鼠慢性宫颈炎的作用：正常大鼠阴道、宫颈没有明显的病变，模型组大鼠出现出血、肿胀、分泌物等病变，“+”级病变为5只，“Ⅱ”级病变为4只，“Ⅲ”级病变为1只，病变程度较严重；实施例1-4原料药组显著改善大鼠阴道、宫颈的病变程度，与模型组比较具有显著差别(表8)。

[0075] 表8各实验组对苯酚胶浆致大鼠慢性宫颈炎的作用(n＝10)

[0076]

[0077] 以上实验结果，表明适量桂皮醛的加入，可显著提高紫丁香苷对各种因素造成的大鼠宫颈炎和阴道炎的治疗效果，尤其是本发明实施例1-4药物组合物的治疗效果显著。原因可能是桂皮醛通过某种作用改变了紫丁香苷的理化性质，使得其发挥出显著的抗炎活性，本发明药物组合物的药理作用是单一活性组分无法代替的，本发明取得了预料不到的技术效果。