一种纯化氯化两面针碱的方法

摘要

本发明公开一种分离纯化氯化两面针碱的方法，所述方法将两面针药材粉碎后，用酸性醇溶液回流提取，合并酸醇提取液，用酸碱调节pH值，静置，滤过；醇沉，冷藏，滤过，浓缩，得到的提取液为样品液；所得样品液与正相硅胶或氧化铝混合均匀，蒸干，通过正相硅胶或氧化铝分离纯化，用乙酸乙酯‑无水乙醇进行洗脱，溶剂回收利用，收集馏分，用甲醇溶解，通过TLC鉴定将含量高的馏分合并重结晶，得到产物为氯化两面针碱；进行HPLC测定，转移率达80％以上，结晶纯度高于90％。本发明分离纯化氯化两面针碱高效，适用于大生产且毒性小，使用溶剂少，经济，对环境污染小，纯度高。

权利要求

1.一种纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备样品液：将两面针药材粉碎后用溶剂回流提取，调节所得提取液的pH值，静置后过滤，然后醇沉后冷藏，过滤后浓缩，得到样品液；

(2)拌样：将步骤(1)所得样品液与活化的硅胶或氧化铝混合，研磨均匀后烘干，得备用样品；

(3)纯化：在填充有填料的玻璃层析柱中将备用样品填充上柱，所述玻璃层析柱中的填料为正相硅胶或氧化铝，使用乙酸乙酯和无水乙醇作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为

10:0～0:10，以50～500ml为一个馏分量接收洗脱液，接收洗脱液，通过TLC试验，合并馏分，减压至干，采用热甲醇溶解后冷藏，结晶，得纯化的氯化两面针碱；

(4)检测：采用HPLC对纯化的氯化两面针碱进行检测，色谱柱为C18柱，检测波长为

328nm，流速为0.5-1.00ml/min，进样量为10-20ul，柱温为常温，流动相采用体积比为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺＝15:20:64.5:0.5。

2.如权利要求1所述的纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，所述步骤(1)中回流提取采用的溶剂为：体积浓度为0.1％～3％的盐酸或硫酸与60％～100％的乙醇或甲醇的混合液；回流2～3次，每次回流2～5小时，每次加4～12倍量的溶剂。

3.如权利要求1或2所述的纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用酸碱调节所得提取液的pH值为1～12，然后静置12～48小时后过滤；醇沉体积浓度为70～

95％，醇沉后在4℃下冷藏12～24小时，然后进行过滤并浓缩。

4.如权利要求1所述的纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，所述步骤(3)中玻璃层析柱中的填料正相硅胶或氧化铝进行活化，活化时间为1～3小时；所述玻璃层析柱中填料的目数为100～400目。

5.如权利要求1或4所述的纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，将备用样品填充上柱前，先用乙酸乙酯为流动相反复冲压填充有填料的玻璃层析柱。

6.如权利要求1所述的纯化氯化两面针碱的方法，其特征在于，所述TLC试验条件为：对照品为氯化两面针碱对照品，展开体系采用体积比为氯仿：甲醇：浓氨＝30:1:0.2，薄层板为以0.05％～3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G或GF254，在紫外365nm下检视。

说明书

一种纯化氯化两面针碱的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种分离纯化的方法，尤其是一种利用正相硅胶或氧化铝分离纯化氯化两面针碱的方法。

背景技术

[0002] 两面针[Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC]为芸香科花椒属植物两面针的干燥根，是临床常用中药，为《中国药典》所收载。具有活血化瘀，行气止痛，祛风通铬，解毒消肿等作用，可用于治疗跌扑损伤，胃痛，牙痛、神经痛、风湿骨痛，毒蛇咬伤；外治烧烫伤等。两面针药材中主要成分为生物碱类，含量约占0.7％，其中氯化两面针碱是两面针的有效成分之一，也是两面针制剂的主要有效成分，具有抗炎、抗真菌、抗氧化、强心，降血压等作用，近代研究表明在抗肿瘤方面有较强的活性，在抗肿瘤治疗上具有一定的开发和研究价值，所以，分离纯化两面针药材中氯化两面针碱的研究具有很大的意义。

[0003] 氯化两面针碱的研究主要是药理作用、含量测定，应用等，有关分离纯化的相关研究报道比较少。

[0004] 发明名称为阳离子交换树脂分离纯化氯化两面针碱的方法，申请公布号为CN 101768163 A的发明专利提供一种利用阳离子交换树脂分离纯化氯化两面针碱的方法，通过动态或静态吸附，解吸，离心的方法得到氯化两面针碱沉淀，虽然此方法快速高效，转移率可达到85％以上，结晶纯度高于90％，但是阳离子交换树脂需要大量的酸碱处理，不利于绿色环保；经济成本高，不适应于大生产。

[0005] 名称为两面针化学成分的研究Ⅰ.具有抗癌活性生物碱的分离和生物碱丙的结构研究【作者】王馨玫【刊名】中山医学院学报，1980,1(4)：341-402.【文摘】用甲醇热回流提取，减压回收至质量的1/4放置，得黄绿色膏体，用氯仿研磨，所得沉淀用甲醇溶解，加盐酸调PH值为2，所得的淡黄绿色针晶为氯化两面针碱。实验过程使用氯仿、甲醇均为有毒试剂，对坏境污染大，不利于健康

[0006] 发明名称为一种多溶剂提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，申请公布号为CN 105125700 A的发明专利，公开了酶解预处理后用不同酸碱性、不同极性的溶剂一次提取，分别上大孔树脂进行富集，分离富集抗肿瘤的有效成分，此法使用的溶剂多，不利于实验操作。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种适用于大生产且毒性小、使用溶剂少、经济、对环境污染小的纯化氯化两面针碱的方法。

[0008] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种纯化氯化两面针碱的方法，包括以下步骤：

[0009] (1)制备样品液：将两面针药材粉碎后用溶剂回流提取，调节所得提取液的pH值，静置后过滤，然后醇沉后冷藏，过滤后浓缩，得到样品液；

[0010] (2)拌样：将步骤(1)所得样品液与活化的硅胶或氧化铝混合，研磨均匀后烘干，得备用样品；

[0011] (3)纯化：在填充有填料的玻璃层析柱中将备用样品填充上柱，所述玻璃层析柱中的填料为正相硅胶或氧化铝，使用洗脱剂进行洗脱，接收洗脱液，通过TLC试验，合并馏分，减压至干，采用热甲醇溶解后冷藏，结晶，得纯化的氯化两面针碱。

[0012] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述步骤(1)中回流提取采用的溶剂为：体积浓度为0.1％～3％的盐酸或硫酸与60％～100％的乙醇或甲醇的混合液；回流2～3次，每次回流2～5小时，每次加4～12倍量的溶剂。

[0013] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述步骤(1)中采用酸碱调节所得提取液的pH值为1～12，然后静置12～48小时后过滤；醇沉体积浓度为70～95％，醇沉后在4℃下冷藏12～24小时，然后进行过滤并浓缩。

[0014] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述步骤(3)中玻璃层析柱中的填料正相硅胶或氧化铝进行活化，活化时间为1～3小时；所述玻璃层析柱中填料的目数为100～400目。

[0015] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，将备用样品填充上柱前，先用乙酸乙酯为流动相反复冲压填充有填料的玻璃层析柱。

[0016] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，将备用样品填充上柱后，采用的洗脱剂为乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、石油醚、乙醚、正己烷、无水乙醇、甲醇中的至少一种，洗脱梯度为10:0～0:10，以50～500ml为一个馏分量接收洗脱液。

[0017] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述TLC试验条件为：对照品为氯化两面针碱对照品，展开体系采用体积比为氯仿：甲醇：浓氨＝30:1:0.2，薄层板为0.05％～3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G或GF254，在紫外365nm下检视。

[0018] 本发明中，上样为湿法或干法上样；上柱为湿法或干法上柱。

[0019] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述方法还包括检测方法：

[0020] 采用HPLC对纯化的氯化两面针碱进行检测，色谱柱为C-18柱，检测波长为328nm，流速为0.5-1.00ml/min，进样量为10-20ul，柱温为常温，流动相采用体积比为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺＝15:20:64.5:0.5，计算结果。

[0021] 作为本发明所述纯化氯化两面针碱的方法的优选实施方式，所述HPLC检测中，流速为1.00ml/min，进样量10ul，柱温为30℃。

[0022] 本发明所述纯化氯化两面针碱的方法，采用正相硅胶或氧化铝分离纯化方法，通过TLC鉴定将含量高的馏分合并重结晶，得到产物为氯化两面针碱；进行HPLC测定，转移率达80％以上，结晶纯度高于90％。本发明分离纯化氯化两面针碱的方法高效，适用于大生产且毒性小，使用溶剂少，经济，对环境污染小，纯度高。

具体实施方式

[0023] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

[0024] 实施例1

[0025] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0026] (1)将100g两面针药材粉碎，用0.5％盐酸95％乙醇溶液回流提取3次，用量依次为8倍量、6倍量、4倍量，每次回流2小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为200ml；

[0027] (2)将样品液与干燥活化的正相硅胶(100-200目，约23g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0028] (3)取玻璃层析柱(内径5cm柱身长55cm)与已活化的硅胶(约255g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置硅胶柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以150ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约2400ml；9.5:0.5收集约6750ml；9:1收集约2550ml；8:2收集约13050ml；7:3收集约2850ml；5:5收集约2400ml；0:10收集约3000ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2)，薄层板为0.05％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视，根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，65℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重122mg；

[0029] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为84％，纯度高于96％。

[0030] 实施例2

[0031] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0032] (1)将500g两面针药材粉碎，用1％盐酸80％乙醇溶液回流提取3次，用量依次为8倍量、6倍量、4倍量，每次回流3小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为1000ml；

[0033] (2)将样品液与干燥活化的正相硅胶(100-200目约105g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0034] (3)取玻璃层析柱(内径10cm柱身长88cm)与已活化的硅胶(约1410g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置硅胶柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以500ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约22500ml；9:1收集约21000ml；8:2收集约65500ml；7:3收集约8000ml；0:10收集约10000ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2),薄层板为0.1％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视。根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，
70℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重610mg；

[0035] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为82％，纯度高于94％。

[0036] 实施例3

[0037] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0038] (1)将100g两面针药材粉碎，用1％盐酸甲醇溶液回流提取3次，用量依次为8倍量、6倍量、4倍量，每次回流2小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏
12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为200ml；

[0039] (2)将样品液与干燥活化的氧化铝(100-200目，约25g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0040] (3)取玻璃层析柱(内径5cm柱身长55cm)与已活化的氧化铝(约250g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置氧化铝柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以100ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约2000ml；9:1收集约8500ml；8:2收集约12100ml；7:3收集约3200ml；5:5收集约2000ml；0:10收集约4000ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2)，薄层板为0.05％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视，根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，65℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重123mg；

[0041] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为80％，纯度高于91％。

[0042] 实施列4

[0043] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0044] (1)将100g两面针药材粉碎，用2％盐酸80％甲醇溶液回流提取3次，用量依次为8倍量、6倍量、4倍量，每次回流2小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为200ml；

[0045] (2)将样品液与干燥活化的氧化铝(100-200目，约24g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0046] (3)取玻璃层析柱(内径5cm柱身长55cm)与已活化的氧化铝(约250g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置氧化铝柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以120ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约2200ml；9:1收集约7500ml；8:2收集约12200ml；7:3收集约3300ml；5:5收集约2100ml；0:10收集约3900ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2)，薄层板为3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视，根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，65℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重119mg；

[0047] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为78％，纯度高于92％。

[0048] 实施例5

[0049] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0050] (1)将500g两面针药材粉碎，用1％盐酸80％乙醇溶液回流提取3次，用量依次为8倍量、6倍量、4倍量，每次回流3小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为1000ml；

[0051] (2)将样品液与干燥活化的氧化铝(100-200目约100g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0052] (3)取玻璃层析柱(内径10cm柱身长88cm)与已活化的氧化铝(约1500g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置硅胶柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以500ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约21500ml；9:1收集约22000ml；8:2收集约67000ml；7:3收集约8500ml；0:10收集约11000ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2),薄层板为2％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视。根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，70℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重625mg；

[0053] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为80％，纯度高于90％。

[0054] 实施列6

[0055] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0056] (1)将100g两面针药材粉碎，用3％盐酸60％乙醇溶液回流提取3次，用量依次为12倍量、10倍量、8倍量，回流时间分别为5小时、2小时、2小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为200ml；

[0057] (2)将样品液与干燥活化的氧化铝(200-400目，约26g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0058] (3)取玻璃层析柱(内径5cm柱身长55cm)与已活化的氧化铝(约245g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置氧化铝柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以100ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约1500ml；9:1收集约7300ml；8:2收集约12100ml；7:3收集约3500ml；5:5收集约2200ml；0:10收集约4000ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2)，薄层板为1％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视，根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，65℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重108mg；

[0059] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为70％，纯度高于90％。

[0060] 实施列7

[0061] 本发明纯化氯化两面针碱的方法的一种实施例，本实施例所述方法包括以下步骤：

[0062] (1)将100g两面针药材粉碎，用0.1％硫酸95％乙醇溶液回流提取2次，用量依次为8倍量、6倍量，每次回流2小时，滤过，合并三次滤液，浓缩至小体积，回收乙醇，用NaOH溶液调节PH值至7，静置12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏
12小时，滤过，滤液浓缩至小体积，用95％乙醇醇沉12小时，置4℃下冷藏12小时，滤过，滤液浓缩至20％含醇量，得到的样品液为200ml；

[0063] (2)将样品液与干燥活化的正相硅胶(200-400目，约25g)混合，不断研磨至均匀，烘干，备用；

[0064] (3)取玻璃层析柱(内径5cm柱身长55cm)与已活化的氧化铝(约250g),反复用乙酸乙酯冲压使紧密，将备用样品填充置氧化铝柱，用乙酸乙酯:无水乙醇(10:0-0:10)梯度进行洗脱，以100ml为一个馏分量接收洗脱液(10:0收集约2000ml；9:1收集约6500ml；8:2收集约11500ml；7:3收集约3500ml；5:5收集约2500ml；0:10收集约3800ml)，馏分进行TLC实验，展开体系为氯仿：甲醇：浓氨(30:1:0.2)，薄层板为1％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G，在紫外365nm下检视，根据薄层斑点结果将氯化两面针碱含量高的所有馏分进行合并，减压浓缩至干，回收溶剂，用尽量少的热甲醇溶解，置4℃下冷藏24小时，过滤，析出的结晶即为氯化两面针碱，65℃减压干燥，得到氯化两面针碱结晶重118mg；

[0065] (4)通过HPLC实验，色谱柱为C-18柱(4.6×250mm，5um)，检测波长为328nm，流速为1.00ml/min，进样量为10ul，柱温为30℃，流动相为乙腈：甲醇：3％醋酸溶液：三乙胺(15:
20:64.5:0.5)，测定转移率为77％，纯度高于91％。

[0066] 最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。