含有放线菌的生防制剂用于三七疾病的防控及使用方法

摘要

本发明涉及一种含有放线菌的生防制剂用于三七疾病的防控及使用方法，包括以下步骤：配制1L培养基；配制完成后121℃灭菌30min；按照质量比7‑10％接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为150rpm；按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；向培养基中添加20mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂。利用上述方法制备的含有放线菌的生防制剂能有效控制植物的病害、显著提高植物的产量和品质，特别适用于三七。

权利要求

1.一种含有放线菌的生防制剂的使用方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将含有放线菌的生防制剂喷洒在植物的根部的土壤处，每棵植物喷洒含有放线菌的生防制剂30-

50mL；

其中，含有放线菌的生防制剂按以下步骤制备获得：

1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4•7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01 g/L FeSO4•7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

2)按照质量百分比7%-10%接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为

150rpm；放线菌为康照1号，购自杨凌康照农业开发有限公司；

3)按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；

4)配制500 g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

5)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48 h；

6)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂。

2.根据权利要求1所述含有放线菌的生防制剂的使用方法，其特征在于，所述植物为三七。

3.根据权利要求1所述的含有放线菌的生防制剂的使用方法，其特征在于，所述生防制剂中活菌数为5×1010至6×1010个/克。

说明书

含有放线菌的生防制剂用于三七疾病的防控及使用方法

[0001] 本申请为申请号201510607650.7、申请日2015年09月23日、发明名称“一种含有放线菌的生防制剂的制备方法”的分案申请。

技术领域

[0002] 本发明涉及生防制剂的制备领域，尤其涉及一种含有放线菌的生防制剂用于三七疾病的防控及使用方法。

背景技术

[0003] 放线菌是一类生长在土壤、植物体表及内部，还有淡水或海洋中的微生物类群，是人们研究最早并广泛应用于农业生产中的微生物。目前发现的抗生素产生菌，绝大多数为放线菌，而80％以上得抗生素都来自链霉菌属。链霉菌主要存在于土壤当中，其孢子萌发后首先形成基内菌丝，接着分化成气生菌丝，气生菌丝形成孢子链，再形成成熟孢子。环境条件不适宜时链霉菌能够形成孢子，转入休眠状态，因此链霉菌能够适应多种环境。

[0004] 目前得到的放线菌主要从土壤中筛选获得。市面上，通常将对病原菌具有抑制作用的生防链霉菌制成不同的制剂，如孢子粉剂、种衣剂、菌丝体培养物等固体剂型。上述剂型有利于生防菌剂的商业化生产、运输和保存，但是使用时往往需要活化，使用不便；如果直接使用，可能防控效果受到影响。

[0005] 三七为五加科人参属植物，是中国特有的名贵中药材，也是我国最早的药食同源植物之一，尤其是三七的块根具有重要的医用价值。三七对生长的环境条件有特殊要求，适宜于冬暖夏凉的气候，不耐严寒与酷热，喜半阴和潮湿的生态环境。由于上述物种特性，需要长期遮荫种植、灌溉强度大而至土壤湿度高，土壤的结构与根际微生物群落发生着剧烈变化。有害病菌大量繁殖，从而引起作物病害的流行与爆发，造成严重减产、甚至绝收。目前为了控制三七的病害流行，通常在种植过程中使用大量农药，易引起农药残留、降低三七品质等问题。因此，提供一种适于三七的生防制剂是非常迫切而且必要的。

发明内容

[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种含有放线菌的生防制剂的制备方法，利用该种方法制备的含有放线菌的生防制剂可以适用于三七，并能有效控制三七的病害、显著提高三七的产量和品质。

[0007] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

[0008] 一种含有放线菌的生防制剂的制备方法，包括以下步骤：

[0009] 1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

[0010] 2)按照质量百分比7％-10％接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为150rpm；

[0011] 3)按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；

[0012] 4)配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

[0013] 5)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；

[0014] 6)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂。

[0015] 本发明所述含有放线菌的生防制剂的制备方法具备步骤简单、防控效果好、使用方便、见效快等有益效果，具体表现如下：

[0016] 1、本发明严格控制了培养条件，例如，选择150rpm作为培养的转速，既能够保证混匀效果好、有利于放线菌吸收营养物质，又能够不破坏放线菌自身的菌体结构；与传统的培养放线菌在培养时始终处于同一温度条件相比，本发明首次提出了先高温度培养再梯度降温的培养模式，经试验表明，本发明所述的培养模式可以提高放线菌的防控效果，提高植物(尤其是三七)的产量和品质；

[0017] 2、本发明在底料的培养基中添加的蔗糖，后期将温度降至24℃并在此温度培养12h后，又补加了红糖，经试验表明，采用这种方法制备的生防制剂中的活菌数角度，并可以显著提高放线菌活力以及防控效果，提高植物(尤其是三七)的产量和品质；

[0018] 3、本发明所述的上述方法制备的含有放线菌的生防制剂的剂型为液体，并未按照一般的生防制剂的制备方法进行干燥处理，具有以下优点：1)简化了制备工艺、降低了制备成本；2)仍然保留了较长的保存时间，将本发明制备的含有放线菌的生防制剂置于4℃可以稳定保存半年以上，猜测可能的原因是培养基的底料以及培养培养的过程中加入较多的糖类物质故渗透压较高有利于保存；3)使用方便，使用时只需要将本发明制备的生防制剂喷洒在植物的根部土壤处即可，易于放线菌发挥作用、见效较快。

[0019] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

[0020] 进一步，所述放线菌为康照1号，购自杨凌康照农业开发有限公司。

[0021] 进一步，所述生防制剂中活菌数为5×1010至6×1010个/克。

[0022] 本发明还提供利用上述的含有放线菌的生防制剂的制备方法制备的含有放线菌的生防制剂。

[0023] 上述含有放线菌的生防制剂的使用方法，以三七为例，包括以下步骤：将含有放线菌的生防制剂喷洒在植物(例如三七)的根部的土壤处，每棵植物(例如三七)喷洒含有放线菌的生防制剂30-50mL。

[0024] 本发明所述的含有放线菌的生防制剂用于植物的病虫害防控。

[0025] 本发明所述的含有放线菌的生防制剂用于三七的病虫害防控。

[0026] 本发明所述的含有放线菌的生防制剂用于提高三七的产量，尤其是提高三七块根的重量。

具体实施方式

[0027] 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

[0028] 本发明所有实施例中使用的放线菌均购自杨凌康照农业开发有限公司，名称为康照1号。以往的经验中，康照1号多用于西红柿、草莓、茄子等果蔬类植物的生物防治(牛瑞生，樊建英，赵璇，付雅丽.康照1号放线菌制剂对茄子生长及产量的影响.河北农业科学，2010,14(5)：41-42)。本发明首次将其用于三七的防控中。

[0029] 实施例1

[0030] 1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

[0031] 2)按照质量百分比7％接种放线菌(即放线菌的质量占培养基的质量的7％，下面实施例的含义也同本实施例)，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为150rpm；

[0032] 3)按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；

[0033] 4)配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

[0034] 5)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；

[0035] 6)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂，所述生防制剂中活菌数为5×1010个/克。

[0036] 实施例2

[0037] 1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

[0038] 2)按照质量百分比8％接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为150rpm；

[0039] 3)按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；

[0040] 4)配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

[0041] 5)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；

[0042] 6)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂，所述生防制剂中活菌数为5.7×1010个/克。

[0043] 实施例3

[0044] 1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

[0045] 2)按照质量百分比10％接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为24h，转速为150rpm；

[0046] 3)按照1℃/h的速率，将温度降至24℃，之后培养12h；

[0047] 4)配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

[0048] 5)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；

[0049] 6)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂，所述生防制剂中活菌数为6×1010个/克。

[0050] 实施例4

[0051] 将实施例2中步骤4)改为“配制500g/L的蔗糖溶液，过滤灭菌”；将实施例2中步骤5)改为“加入向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的蔗糖溶液，温度为24℃，培养48h”。其他步骤及培养条件均同实施例2。

[0052] 实施例5

[0053] 将实施例2中步骤5)改为“加入向培养基中添加30mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h”。其他步骤及培养条件均同实施例2。

[0054] 实施例6

[0055] 将实施例2中步骤5)改为“加入向培养基中添加120mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h”。其他步骤及培养条件均同实施例2。

[0056] 实施例7

[0057] 将实施例2中步骤1)改为“配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L红糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min”。其他步骤及培养条件均同实施例2。

[0058] 实施例8

[0059] 1)配制1L培养基，所述培养基包括以下组分：30g/L黄豆粉、8g/L淀粉、3g/L蔗糖、2g/L酵母粉、2g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.2g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L硫酸锌、0.01g/L FeSO4·7H2O，pH为7.2；配制完成后121℃灭菌30min；

[0060] 2)按照质量比8％接种放线菌，培养温度为30℃，培养时间为42h，转速为150rpm；

[0061] 3)配制500g/L的红糖溶液，过滤灭菌；

[0062] 4)向培养基中添加60mL上述过滤灭菌的红糖溶液，温度为24℃，培养48h；

[0063] 5)收集，包装，制得含有放线菌的生防制剂。

[0064] 实施例9

[0065] 将实施例2制备的含有放线菌的生防制剂置于4℃条件下，保存1年。

[0066] 为方便描述，下面以简称来代替，具体见表1。

[0067] 表1简称及其代表含义

[0068]简称 代表含义
产品1 实施例1制备的含有放线菌的生防制剂
产品2 实施例2制备的含有放线菌的生防制剂
产品3 实施例3制备的含有放线菌的生防制剂
对比1 实施例4制备的含有放线菌的生防制剂
对比2 实施例5制备的含有放线菌的生防制剂
对比3 实施例6制备的含有放线菌的生防制剂
对比4 实施例7制备的含有放线菌的生防制剂
对比5 实施例8制备的含有放线菌的生防制剂
对比6 实施例9制备的含有放线菌的生防制剂
对比7 康照1号粉剂，活菌数为5×1010个/克

[0069] 实施例10

[0070] 该实验在两年生三七地进行。

[0071] 除对比7外，上述产品均直接取30mL，分别喷洒在三七的根部的土壤处，每棵三七喷洒30mL，每种生防制剂喷洒200棵；

[0072] 将对比7溶于30mL水，其溶于水后的溶液的活菌的菌落数与30mL产品2中的菌落数大致相当，约为1.7×1012个，将对比7的溶液喷洒在三七的根部的土壤处，每棵三七喷洒30mL，喷洒200棵。

[0073] 观察并记录一年内每棵三七的生长情况，将得到的数据进行统计学处理，计算得到防病率(即使用某种生防制剂的未发病的植株数目与总的植株的百分比)，收获时统计三七的块根的重量并根据统计学方法分别计算施用不同生防制剂后每棵三七根重。上述实验结果如表2所示，表2中的“每棵三七根重”为计算均值的结果。

[0074] 表2关于防病率及根重的实验数据

[0075]

[0076] 在收获时发现，使用产品1、产品2、产品3、对比6的三七块根均外观均匀，品质上乘，要好于使用对比1至对比5、对比7的三七块根的品质。

[0077] 以上结果说明，利用本发明所述的制备方法制备的含有放线菌的生防制剂可以显著提高三七的防病效果以及显著提高三七的块根的重量。本发明制备的生防制剂在4℃保存一年仍然具有良好的效果。

[0078] 实施例11

[0079] 分别将喷洒量调整为40mL和50mL，也能够得到与实施例10类似的结果。

[0080] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。