一种治疗骨病的新工艺中药组合物

摘要

本发明提供了一种治疗骨病的中药组合物，包括天麻、防风、羌活、鸡血藤、葛根、骨碎补等成分，其中的羌活、骨碎补经菠萝蛋白酶和纤维素酶处理后乙醇回流提取。

权利要求

1.一种治疗骨病的中药组合物，由以下重量份数的成分组成：天麻50、防风100、羌活

150、鸡血藤200、葛根200、骨碎补200、黄芪150、黄柏300、三七150、寻骨风300、桂枝50、川槿皮150、大黄200、蛇床子150、大风子50、牛膝200、川芎300；该中药组合物通过以下方法制备而成：（1）将羌活、砂烫骨碎补粉碎，过120目筛，加入药粉总重量5倍的水，200U/g药粉的菠萝蛋白酶和50U/g药粉的纤维素酶，pH调至6.0，50℃下反应60min，加热至100℃灭活酶

5min，再加入药粉总重量5倍的80%食用乙醇溶液，回流提取1h；（2）将其余药材粉碎，过100目筛，浸泡于药粉总重量5倍高度纯粮酒中，密封3-6个月，过滤取滤液；

（3）将步骤（1）和步骤（2）所得的液体合并，得所述中药组合物。

2.权利要求1的中药组合物在制备治疗颈间盘和腰椎间盘突出的药物中的用途。

3.权利要求1的中药组合物在制备治疗外伤引起的骨损伤的药物中的用途。

4.权利要求1的中药组合物在制备治疗风湿性关节炎的药物中的用途。

5.权利要求1的中药组合物的制备方法，包括步骤：

（1）将羌活、砂烫骨碎补粉碎，过120目筛，加入药粉总重量5倍的水，200U/g药粉的菠萝蛋白酶和50U/g药粉的纤维素酶，pH调至6.0，50℃下反应60min，加热至100℃灭活酶5min，再加入药粉总重量5倍的80%食用乙醇溶液，回流提取1h；

（2）将其余药材粉碎，过100目筛，浸泡于药粉总重量5倍高度纯粮酒中，密封3-6个月，过滤取滤液；

（3）将步骤（1）和步骤（2）所得的液体合并，得所述中药组合物。

说明书

一种治疗骨病的新工艺中药组合物

[0001] 一技术领域

[0002] 本发明涉及中药领域，具体地说，本发明涉及一种治疗颈间盘和腰椎间盘突出、外伤引起的骨损伤、风湿性关节炎的中药组合物，其中使用了酶处理辅助羌活和骨碎补的提取过程。

[0003] 二背景技术

[0004] 骨折属于常见外伤类型。目前，西医在治疗骨折时，通常是将病患部位的骨位扶正，然后使用医疗器械将其进行内固定，或用石膏、绷带、夹板等进行外固定，慢慢的静养，必要时辅以补钙药，没有专门促进骨折恢复的药物。治疗骨折的外用中药很多，，一般基于活血化瘀的机理，但多数存在着疗效不确切、效果不够理想的缺点。

[0005] 椎间盘突出/膨出是骨科临床上的难治的慢性病之一。目前，西医的治疗以牵引、手术等物理手段为主，必要时辅以止痛药，没有专门促进椎间盘恢复的药物。中医除推拿、针灸等手段外，一般还可使用活血化瘀药物辅助治疗，临床上疗效好于西医，但仍存在疗效不确切，效果较差的缺点。

[0006] 本医院多年来实践中经常使用传统上常用于此类疾病的天麻、防风、羌活、鸡血藤、葛根、砂烫骨碎补、黄芪、黄柏、三七、寻骨风、桂枝、川槿皮、大黄、蛇床子、大风子、牛夕、川芎配置中药外用药来治疗骨损伤、椎间盘突出、滑膜炎、痛风等疾病，取得了众多患者的好评。但根据统计该药药效与其他中成药和药方并无显著区别，以传统配伍、调整用量、简单改变提取方法等手段疗效难以进一步提高，而且这样的自制药剂成分不明确，不适合标准化要求，难以大面积推广。

[0007] 三发明内容

[0008] 根据临床上增强药效的需求，申请人研究了几种主要成分中活性成分、提取方法以及植物药用部位的结构成分，发现以菠萝蛋白酶和纤维素酶处理羌活和骨碎补破坏细胞壁和某些细胞间结构（推测，具体机理待验证）后提取能出乎预料地增强活性物质提取效果，进而有效增强药效，同时不明显增加制备复杂程度和成本。

[0009] 一方面，本发明提供了一种治疗骨病的中药组合物，包括以下成分：天麻、防风、羌活、鸡血藤、葛根、骨碎补。

[0010] 进一步地，其中各成分的重量份数为：天麻50、防风100、羌活150、鸡血藤200、葛根200、骨碎补200。

[0011] 进一步地，中药组合物还包括以下成分：黄芪、黄柏、三七、寻骨风、桂枝、川槿皮、大黄、蛇床子、大风子、牛夕、川芎。

[0012] 进一步地，其中各成分的重量份数为：天麻50、防风100、羌活150、鸡血藤200、葛根200、骨碎补200、黄芪150、黄柏300、三七150、寻骨风300、桂枝50、川槿皮150、大黄200、蛇床子150、大风子50、牛夕200、川芎300。

[0013] 进一步地，中药组合物为液体制剂。

[0014] 进一步地，中药组合物通过以下方法制备而成：

[0015] （1）将羌活、砂烫骨碎补粉碎，过120目筛，加入药粉总重量5倍的水，200U/g药粉的菠萝蛋白酶和50U/g药粉的纤维素酶，pH调至6.0，50℃下反应60min，加热至100℃灭活酶5min，再加入药粉总重量5倍的80%食用乙醇溶液，回流提取1h；

[0016] （2）将其余药材粉碎，过100目筛，浸泡于药粉总重量5倍高度纯粮酒中，密封3-6个月，过滤取滤液；

[0017] （3）将步骤（1）和步骤（2）所得的液体合并，得本发明的药物组合物。

[0018] 本发明的中药组合物可用于治疗颈间盘和腰椎间盘突出、外伤引起的骨损伤、风湿性关节炎。

[0019] 另一方面，本发明提供了该中药组合物的制备方法，包括步骤：

[0020] （1）将羌活、砂烫骨碎补粉碎，过120目筛，加入药粉总重量5倍的水和200U/g药粉的菠萝蛋白酶和50U/g药粉的纤维素酶，pH调至6.0，50℃下反应60min，加热至100℃灭活酶5min，再加入药粉总重量5倍的80%食用乙醇溶液，回流提取1h；

[0021] （2）将其余药材粉碎，过100目筛，浸泡于药粉总重量5倍高度纯粮酒中，密封3-6个月，过滤取滤液；

[0022] （3）将步骤（1）和步骤（2）所得的液体合并，得本发明的药物组合物。

[0023] 四附图说明

[0024] 图1为实施例3的代表性椎间盘状态图（左：组2-4代表性状态，右：组1代表性状态）。

[0025] 五具体实施方式

[0026] 实施例1 本发明中药组合物的制备

[0027] 称取天麻50g、防风100g、羌活150g、鸡血藤200g、葛根200g、砂烫骨碎补200g、黄芪150g、黄柏300g、三七150g、寻骨风300g、桂枝50g、川槿皮150g、大黄200g、蛇床子150g、大风子50g、牛夕200g、川芎300g。

[0028] 将羌活、砂烫骨碎补，过120目筛，加入1700ml水、食品级菠萝蛋白酶1.5g（湖南利尔康生物有限公司50000U/g）和食品级纤维素酶1.7g（湖南利尔康生物有限公司，10000U/g），pH调至6.0，50℃下反应60min，加热至100℃灭活酶5min，再加入1700ml的80%食用乙醇溶液，回流提取1h。

[0029] 将其余药材粉碎，过100目筛，浸泡于12L高度（60度）纯粮酒中，密封3个月，过滤取滤液。

[0030] 将前面步骤的提取液和滤液合并，得本发明的中药组合物。

[0031] 实施例2 本发明中药组合物对兔骨折模型的效果

[0032] 选取体重2kg左右的健康雄性家兔40只，平均分为4组，用静脉麻醉后，在无菌条件下用医用手术牙科钻在两侧桡骨中上段1/3处横钻成宽约为4mm，深入骨髓的空腔形成骨损伤，缝合皮肤。制成模型。

[0033] 术后第7天开始用药：

[0034] 组1：实施例1制备的药物组合物，每日3次，每次约2ml，擦于损伤处；

[0035] 组2：云南白药酊（云南白药集团），每日3次，每次约2ml，擦于损伤处；

[0036] 组3：红药气雾剂（沈阳红药精诚药业有限公司），每日3次，喷于损伤处；

[0037] 组4：空白对照，不用药。

[0038] 连续给药6周，在第3和6周周末每组处死6只动物取损伤处（含上下段）桡骨以LUNAR骨密度仪测定骨密度。

[0039] 实验结果：

[0040]

[0041] 结果表明组1至组3的多种中药组合物均有一定的活血化瘀、促进骨愈合的效果，组1骨密度增加值最明显，显著超过组2和组3，说明本发明的中药组合物能有效促进骨愈合，效果好于现有常用外用中成药。

[0042] 实施例3本发明中药组合物对兔腰椎间盘突出模型的效果。

[0043] 选取体重2kg左右的健康雄性家兔20只，平均分为4组，用特制的布套将兔固定于颈椎屈曲60°,每天固定4h, 松解后笼中自由饲养，持续1个月制成模型。第2个月起开始用药，持续2个月，颈椎正侧位X射线观察，重点观察C4/5、C5/6、C6/7椎间盘组织。

[0044] 组1：实施例1制备的药物组合物，每日3次，每次约2ml，揉擦于患处；

[0045] 组2：蟾马正痛酊（陕西欧珂药业有限公司），每日两次，每次约2ml揉擦于患处；

[0046] 组3：归元筋骨宁湿敷剂（杭州同大药业有限公司），每两日1次贴于患处，每次12h。

[0047] 组4：空白对照，不用药。

[0048] 影像学显示，组2-4椎间盘状态没有明显差别，组1的椎间盘状态整体好于组2-4，代表性椎间盘状态图见图1（左：组2-4代表性状态，右：组1代表性状态）。

[0049] 实施例4 本发明中药组合物对大鼠关节炎模型的效果

[0050] 选取30只150g左右的健康Wistar大鼠，平均分为3组，大鼠双膝关节腔注射4％的木瓜蛋白酶溶液0.2ml，每隔3日注射1次，连续注射3次。制成模型。

[0051] 模型制成后第2日开始用药

[0052] 组1：实施例1制备的药物组合物，每日3次，每次1ml，揉擦于患处；

[0053] 组2：双醋瑞英0.009g/kg每日，一次给药；

[0054] 组3：空白对照，不用药。

[0055] 4周后，腹主动脉采血，ELISA（上海联科IL-1β ELISA试剂盒，酶标仪450nm处读数）检测IL-1β 和TGF-β1。

[0056]

[0057] 虽然无法与效果确切的西药相比，但与对象相比较，本申请的中药组合物明显能降低IL-1β水平(关节炎中主要标志物)。

[0058] 实施例5本发明中药组合物的实际临床效果

[0059] 出于隐私保密原因，病例具体情况和来源医院不做公开。

[0060] 病例选择：

[0061] 选取状况类似的男性上肢骨折病例30例，年龄20-40岁，平均分为2组。

[0062] 选取状况类似的轻度男性腰椎间盘突出病例20例，年龄40-50岁，平均分为2组。

[0063] 选取状况类似的轻度风湿性关节炎病例30例，年龄40-50岁，平均分为2组。

[0064] 治疗方案：

[0065] 全部骨折和腰椎间盘突出患者接受标准的固定和牵引治疗，骨折和腰椎间盘突出各有一组使用实施例1制备的药物组合物，每日3次，每次约10ml，擦于损伤处（骨折患者固定处理后3周开始使用，腰椎间盘突出患者自始至终每日使用）。3个月后进行观察比较。

[0066] 全部风湿性关节炎患者使用临床常用的风湿关节炎片（山西华康药业股份有限公司）治疗，其中一组加用实施例1制备的药物组合物，每日3次，每次约10ml，擦于损伤处。3个月后进行观察比较。

[0067] 疗效观察：

[0068] 临床影像学和骨密度证据表明，本申请的药物有明显的辅助骨折修复的效果（伤处平均骨密度高于未用药组15%以上）；用药的腰椎间盘突出患者的影像学和自述症状也较未用药组更好；加用本发明中药组合物的风湿性关节炎患者自述和临床评分也普遍好于单独使用风湿关节炎片的患者。

[0069] 实施例6 本发明的中药组合物药效提高机理研究

[0070] 为了证明并进一步研究本发明提出的酶处理辅助提取方法的提取效果，进行以下实验比较多种羌活和骨碎补的提取方法：

[0071] 主要检测设备：

[0072] Aglient 1100型色谱仪、753分光光度仪

[0073] 主要试剂和样品：

[0074] 紫花前胡苷、羌活醇、柚皮苷标准品购自Aladdin industrial corporation；

[0075] 样品1：按照实施例1步骤提取的羌活骨碎补提取液（为避免更多成分的影响，未与就浸泡滤液混合）；

[0076] 样品2：以8倍重量60%乙醇回流提取3次，每次1h的砂烫骨碎补提取液；

[0077] 样品3：以8倍重量80%乙醇回流提取3次，每次1h的羌活提取液；

[0078] 样品4：按照实施例1步骤，不进行酶处理，提取的羌活骨碎补提取液。

[0079] 紫花前胡苷、羌活醇、总黄酮、柚皮苷的测定方法：

[0080] 称取紫花前胡苷和羌活醇标准品各5 mg，分别置于5mL 容量瓶中，用甲醇定容配制对照品储备液。分别吸取适量对照品储备液混合并用甲醇定容于5mL 容量瓶中，制成混合对照品储备液。精密依次吸取混合对照品储备液10个不同质量浓度进行HPLC分析检测峰面积，以质量浓度为横坐标X ，平均峰面积为纵坐标Y进行线性回归，回归方程为y=83565x+28991、y=31934x+46537；

[0081] 称取柚皮苷对照品5mg, 置于50mL容量瓶中，用甲醇定容配制对照品溶液,再分别吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml于10ml容量瓶中，甲醇定容，以甲醇为空白，在283 nm 处测吸收度，以浓度为横坐标X，吸收度为纵坐标Y，回归方程为: y=0.025x+0.013；

[0082] 称取柚皮苷标准品5mg，置于5mL容量瓶中，用甲醇定容配制对照品储备液。精密依次吸取混合对照品储备液10个不同质量浓度进行HPLC分析检测峰面积，以质量浓度为横坐标X ，平均峰面积为纵坐标Y进行线性回归，回归方程为：y=28631x+62227。

[0083] 以上述标准曲线和回归方程计算各样品中的紫花前胡苷、羌活醇、羌活醇、柚皮苷（样品2仅测定总黄酮、柚皮苷，样品3仅测定紫花前胡苷、羌活醇）并计算还原为单位重量羌活和骨碎补所得活性成分重量，结果如下：

[0084]

[0085] 从上述结果中可见，本申请加入菠萝蛋白酶和纤维素酶的处理极大的提高了羌活和骨碎补中紫花前胡苷、羌活醇、羌活醇、柚皮苷的提取效率（各成分仅1h回流提取就能达到单纯回流提取3次1h效果的1.5-1.8倍，从单位重量羌活和骨碎补所得活性成分重量来看也明显高于现有文献公开的数值），同时保证了提取成本几乎不升高（食品级菠萝蛋白酶和纤维素酶价格低廉，用量也很低；总处理时间2h也低于传统3次回流提取的3h）。为药效的提高提供了有力的保证。