吲哚类化合物作为抗肿瘤侵袭、转移及组织纤维化药物的应用及药物

摘要

本发明提供以下结构式的吲哚类化合物在制备抑制细胞、组织、器官纤维化药物中的用途，还提供该吲哚类化合物在制备治疗癌症药物中的应用。其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

权利要求

1.吲哚类化合物在制备抗人肺上皮细胞或人肺成纤维细胞的纤维化药物中的应用，其特征在于，所述吲哚类化合物的结构式为：其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

2.吲哚类化合物在制备抑制肿瘤生长或抗组织纤维化药物中的应用，所述吲哚类化合物的结构式为R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基，其中，所述肿瘤为肺部肿瘤，所述抗组织纤维化中的组织为肺部组织。

说明书

吲哚类化合物作为抗肿瘤侵袭、转移及组织纤维化药物的应

用及药物

技术领域

[0001] 本发明涉及一种吲哚类化合物抗肿瘤侵袭转移及组织纤维化的应用，属于药物化学领域，特别是肿瘤和纤维化疾病治疗相关领域。

背景技术

[0002] 组织细胞的上皮-间质转化(EMT)，是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞特征的生物学过程。EMT在胚胎发育、慢性炎症、组织重建、癌症侵袭/转移和多种脏器纤维化疾病中发挥了重要作用，其主要特征为细胞黏附分子(如E-cadherin)表达减少、细胞骨架角蛋白向波形蛋白(Vimentin)转化等。通过EMT，上皮细胞丧失细胞极性、降低与基底膜的连接等上皮细胞表型，获得较高的迁移与侵袭、抗凋亡和降解细胞外基质的能力等间质细胞(如成纤维细胞)表型。EMT是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。在EMT过程中，有很多因子可以诱发细胞发生EMT，其中TGF-β1发挥了关键作用。

[0003] 成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化，是指在炎症、免疫、损伤等因子刺激下，组织中的成纤维细胞(原有或经上皮细胞EMT转化生成)通过功能和表型改变转化为具有胶原合成和收缩能力的肌成纤维细胞的生物学过程。如脏器(如肝、肺、肾等)正常组织间隙逐渐为大量肌成纤维细胞侵润、填充、替代，则最终形成基质沉积与疤痕样组织，使脏器呈纤维化病理特征。炎症损伤等条件下，一些细胞因子的产生对成纤维细胞的转分化起活化作用。其中，转化生长因子β1 (TGF-β1)的过表达是促进多种脏器纤维化发生发展的关键因素。

[0004] 在TGF-β信号通路中，TGF-β1首先结合于靶组织细胞(如肺上皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞)的TGF-βII型受体(TGFBR2)，再募集TGF-βI型受体(TGFBR1)形成受体多聚体复合物。TGFBR2 磷酸化TGFBR1位于胞内的丝氨酸残基，活化的TGFBR1又可磷酸化细胞内受体相关Smad蛋白，如Smad 2/3。磷酸化的受体相关Smad 蛋白与Smad4结合进入细胞核，参与DNA转录与信号调控，并激活下游靶基因的转录和表达。

发明内容

[0005] 课题组前期合成了一系列吲哚类化合物并申请了名为“吲哚类衍生物及其合成方法”的中国专利(公开号CN106243012A，公开日 2016-12-21，发明人洪伟、王昊、常喆、谭晓丽、杨浩、欧阳溢凡)，并通过计算机模拟计算推测出该类化合物可能有对TGF-β的抑制作用，本次课题组在后续的研究测试过程中意外发现CN106243012A申请中的实施例化合物20以及衍生的脂肪烷酯、水解后的羧酸以及对应的盐对多种TGF-β中的1、II型有特别好的抑制作用，并且经过实验初步证实了相关的抑制机理。

[0006] 并且进一步在相关模型细胞的测试中，发现该系列化合物对某些病变模型细胞有相当好的抑制作用。

[0007] 为此我们要求保护该化合物的制药用途和含有该系列化合物的药物。

[0008] 吲哚类化合物在制备抗纤维化药物中的应用，其特征在于，吲哚类化合物的结构式为

[0009]

[0010] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0011] 吲哚类化合物在制备抗人肺癌上皮细胞或人肺成纤维细胞或血管内壁细胞的纤维化药物中的应用，其特征在于，吲哚类化合物的结构式为：

[0012]

[0013] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0014] 吲哚类化合物在制备抑制肿瘤侵袭、转移药物中的应用，其特征在于，吲哚类化合物的结构式为

[0015]

[0016] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0017] 吲哚类化合物在制备抑制肿瘤生长或抗组织纤维化药物中的应用，其特征在于，吲哚类化合物的结构式为

[0018]

[0019] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0020] 上述的吲哚类化合物在制备抑制肿瘤生长或抗组织纤维化药物中的应用，其特征在于：其中，肿瘤为肺部肿瘤或血管肿瘤，抗组织纤维化中的组织为肺部组织或血管组织或含成纤维细胞的结缔组织。

[0021] 治疗细胞纤维化的药物，其特征在于：

[0022] 含有以下结构式的吲哚类化合物

[0023]

[0024] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0025] 上述的治疗细胞纤维化的药物，其特征在于：其中，细胞纤维化中的细胞为肺上皮细胞或血管内皮细胞或成纤维细胞。

[0026] 治疗组织或器官纤维化的药物，其特征在于：

[0027] 含有以下结构式的吲哚类化合物

[0028]

[0029] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基，组织纤维化中的组织为肺部组织或血管组织或含成纤维细胞的结缔组织，器官纤维化中的器官为肺或血管。

[0030] 治疗肿瘤或癌症的药物，其特征在于：

[0031] 含有以下结构式的吲哚类化合物

[0032]

[0033] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基，肿瘤为肺部肿瘤或血管肿瘤，癌症为肺癌或血管癌。

[0034] 吲哚类化合物在抑制转化生长因子-βI型受体(TGFBR1)和转化生长因子-βII型受体(TGFBR2)相互作用过程中的应用，其特征在于，吲哚类化合物的结构式为

[0035]

[0036] 其中，R为H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或碱金属、碱土金属或铵基。

[0037] 以上表述中，丁基、戊基包括直链和带有支链的丁基、戊基，碱金属是指锂、钠、钾，碱土金属是指镁、钙。

[0038] 发明的作用与效果

[0039] 本发明在体外条件下，用人非小细胞肺癌上皮细胞A549作为研究对象，采用免疫共沉淀等方法发现如下式CZ-293(内部代号)化合物能够抑制TGFBR1-TGFBR2的相互作用，并通过抑制TGF-β1诱导的细胞内信号通路，检测到其抑制TGF-β1诱导的上皮-间质转化 (EMT)过程中生物标志物的变化，而且CZ-293在人胚肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化模型中也能起到抑制成纤维细胞转分化过程的作用。具体方案如下：

[0040]

[0041] CZ-293预处理A549细胞1h，加入5ng/mL TGF-β1处理16h，用TGFBR1抗体进行免疫共沉淀，随后用Western Blot检测TGFBR1、 TGFBR2水平的变化。

[0042] CZ-293预处理A549细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理48h，用Western Blot检测上皮表征蛋白E-cadherin，间质表征蛋白Fibronectin、α-SMA、Vimentin和纤维化相关蛋白MMP-2的变化。

[0043] CZ-293预处理MRC-5细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理48h，用Western Blot检测转分化过程中Fibronectin、α-SMA的变化。

[0044] CZ-293预处理A549细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理0.5h，用Western Blot检测P-Smad2/3的变化，细胞免疫荧光检测P-Smad 2/3 入细胞核的情况。

[0045] CZ-293预处理A549细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理2h，用Western Blot检测Snail的变化。

[0046] 经过CZ-293预给药处理，对TGF-β1诱导的人非小细胞肺癌上皮细胞A549和人胚肺成纤维细胞MRC-5进行Western Blot检测，结果显示其可明显促进上皮表征蛋白E-cadherin表达，降低间质表征蛋白Fibronectin、α-SMA和Vimentin表达，并抑制纤维化相关蛋白 MMP-2表达。

[0047] CZ-293可通过抑制TGF-β诱导的Smad通路，进而抑制TGF-β1 诱导的肺上皮细胞EMT和成纤维细胞转分化过程。对于CZ-293抑制TGF-β1/Smad通路的机制，通过细胞免疫荧光进一步检测到其抑制P-Smad 2/3入核。

附图说明

[0048] 图1为A549细胞、MRC-5细胞、Vero细胞在加入不同浓度的CZ-293 后的24h和48h的成活率曲线图，图1A是A549细胞在在加入不同浓度的CZ-293后的24h和48h的成活率曲线图，图1B是MRC-5细胞在在加入不同浓度的CZ-293后的24h和48h的成活率曲线图，图1C是Vero细胞在在加入不同浓度的CZ-293后的24h和48h的成活率曲线图；

[0049] 图2为本发明CZ-293对A549细胞TGFBR1-TGFBR2相互作用的实验结果的照片；

[0050] 图3为本发明CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞上皮-间质转化 (EMT)过程生物标志物的影响实验结果的照片；

[0051] 图4为本发明CZ-293对TGF-β1诱导MRC-5细胞转分化过程生物标志物的影响实验结果；

[0052] 图5为本发明CZ-293对A549细胞TGF-β信号通路的影响实验结果，图5A是5ng/mLTGF-β1处理A549细胞30min后的实验结果，图5B是5ng/mL TGF-β1处理A549细胞2h后的实验结果；以及

[0053] 图6为本发明CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞P-Smad2/3入核的影响实验结果照片。

具体实施方式

[0054] 为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合具体实施例中的实验例对本发明的技术方案作具体阐述。

[0055] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段、英文缩写均为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

[0056] 名称缩写释义

[0057] SB-431542，转化生长因子β受体(TGF-βReceptor)抑制剂，作为实验的阳性对照，CAS号301836-41-9，结构式为：

[0058]

[0059] DMEM培养基，Dulbecco's Modified Eagle Medium，一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。

[0060] MEM培养液，Minimum Essential Medium是动物细胞培养中的常用的培养基。

[0061] FBS，Fetal Bovine Serum(FBS)胎牛血清。

[0062] PenStrep，Penicillin Streptomycin(Pen Strep)，青霉素链霉素混合物。

[0063] CCK-8，CCK-8试剂盒中的WST-8即化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。

[0064] RIPA裂解液，Radio-ImmunoprecipitationAssay(RIPA)，一种常用的细胞裂解液。

[0065] NP-40裂解液，Nonidet P 40的缩写，一种常用的细胞裂解液。

[0066] Agrose protean A+G，沉淀试剂，主要用于免疫沉淀 (Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。

[0067] E-cadherin，上皮细胞钙粘蛋白。

[0068] Fibronectin，纤粘蛋白。

[0069] α-SMA，α平滑肌肌动蛋白

[0070] Vimentin，波形蛋白。

[0071] MMP-2，Matrix metalloproteinase-2(MMP-2)，基质金属蛋白酶2。

[0072] P-Smad2/3，Phosphorylated-drosophila mothers against decapentaplegic protein，磷酸化的2型和3型果蝇抗成形素蛋白。

[0073] Snail，Human snail homolog 1(SNAI1)，人类蜗牛同源蛋白1。

[0074] 1.实验材料来源

[0075] 1.1实验药品:

[0076] CZ-293(发明人根据在先申请的专利公开CN106243012A中化合物20的合成方法自行合成)，

[0077] 柚皮素(Naringenin)和SB-431542(购自Sigma-Aldrich)。

[0078] 1.2实验细胞:

[0079] 人非小细胞肺癌上皮细胞A549，人胚肺成纤维细胞MRC-5(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。

[0080] 1.3实验试剂和耗材:

[0081] DMEM培养基、MEM培养液、FBS和PenStrep(购自Gbico)；

[0082] CCK-8(购自日本同仁)；

[0083] RIPA裂解液、NP-40裂解液、兔IgG、Agrose proteanA+G(购自碧云天)；

[0084] 抗体TGFBR1、TGFBR2、E-cadherin、Fibronectin、α-SMA、 Vimentin、MMP-2、P-Smad2/3、Snail(购自CST)。

[0085] 2.实验方法

[0086] 2.1CZ-293对A549细胞、MRC-5细胞、Vero细胞增殖的影响实验

[0087] 选取对数期A549细胞、MRC-5细胞和Vero细胞，取100μL (1×105个/mL)细胞接种于在96孔板中，在培养箱预培养24小时 (在37℃，5％CO2的条件下)；然后向培养板加入10μL不同浓度的CZ-293，将培养板在培养箱孵育，24h和48h后分别向每孔加入 10μL CCK-8溶液，将培养板在培养箱内孵育1小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

[0088] 2.2CZ-293对A549细胞TGFBR1-TGFBR2相互作用的影响实验

[0089] 选取对数期A549细胞，取20mL(5×105个/mL)细胞接种于 15cm直径细胞培养皿中。37℃，5％CO2培养过夜后，倾出培养液，加入含0.1％血清培养液20mL饥饿24h。CZ-293终浓度分别为20 μM、40μM和阳性药柚皮素Naringenin(40μM)预处理细胞1h，加入5ng/mL TGF-β1处理16h；倾出细胞培养液，用预冷的PBS清洗三次，加入350μLNP-40裂解液。用细胞刮刀将细胞刮下，收集至 1.5mL EP管(eppendorf管即离心管，以下称为EP管)中，4℃颠倒15min，让细胞充分裂解。12000rpm，4℃离心15min。吸取上清于新的EP管中，用BCA蛋白定量法对蛋白定量，然后各取25μl 于新的EP管中作输出Input用，然后加入1×Loading buffer(loading buffer即上样缓冲液)，沸水煮5min；剩余的蛋白取相同的体积加入1μgAnti-rabbit TGFBR1抗体，对照组加入1μgAnti-rabbit IgG，置于4℃缓慢摇晃过夜；加入40μL的Agrose proteanA+G 4℃缓慢摇 2-4h，约3500rpm离心5min，小心弃去上清，然后再用800μL的NP-40 裂解液洗涤沉淀，约3500rpm离心5min，重复洗涤5次，最后往沉淀里加入30μL 1×Loading buffer，沸水煮5min。然后用蛋白质印迹法westernblot实验进行检测，其中一抗用Anti-mouse TGFBR1抗体和Anti-mouse TGFBR2抗体孵育。

[0090] 2.3CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞上皮-间质转化(EMT)过程生物标志物的影响实验

[0091] 选取对数期A549细胞，取3mL(2×105个/mL)细胞接种于6cm 直径细胞培养皿中。37℃，5％CO2培养过夜后，倾出培养液，加入含0.1％血清培养液3mL饥饿24h。CZ-293终浓度分别为10μM、 20μM、40μM预处理细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理48h；倾出细胞培养液，用预冷的PBS清洗三次，加入120μL RIPA裂解液。用细胞刮刀将细胞刮下，收集至1.5mL EP管中，4℃颠倒15min，让细胞充分裂解。12000rpm，4℃离心15min。吸取上清于新的EP 管中，用BCA蛋白定量法对蛋白定量，然后加入5×Loading buffer，沸水煮5min，-80℃保存，用western blot实验检测E-cadherin、 Fibronectin、α-SMA、Vimentin、MMP-2的变化。

[0092] 2.4CZ-293对TGF-β1诱导的MRC-5细胞转分化过程生物标志物的影响实验[0093] 选取对数期MRC-5细胞，取3mL(2×105个/mL)细胞接种于 6cm直径细胞培养皿中。37℃，5％CO2培养过夜后，倾出培养液，加入含0.1％血清培养液3mL饥饿24h。CZ-293终浓度分别为10 μM、20μM、40μM预处理细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理48h；倾出细胞培养液，用预冷的PBS清洗三次，加入120μL RIPA裂解液。用细胞刮刀将细胞刮下，收集至1.5mL EP管中，4℃颠倒15min，让细胞充分裂解。12000rpm，4℃离心15min。吸取上清于新的EP 管中，用BCA蛋白定量法对蛋白定量，然后加入5×Loading buffer，沸水煮5min，-80℃保存，用westernblot实验检测Fibronectin、α-SMA 的变化。

[0094] 2.5CZ-293对A549细胞TGF-β信号通路的影响实验

[0095] 选取对数期A549细胞，取3mL(2×105个/mL)细胞接种于6cm 直径细胞培养皿中。37℃，5％CO2培养过夜后，倾出培养液，加入含0.1％血清培养液3mL饥饿24h。CZ-293终浓度分别为10μM、 20μM、40μM和阳性药SB-431542(10μM)预处理细胞2h，加入 5ng/mL TGF-β1处理0.5h或2h；倾出细胞培养液，用预冷的PBS 清洗三次，加入120μL RIPA裂解液。用细胞刮刀将细胞刮下，收集至1.5mL EP管中，4℃颠倒15min，让细胞充分裂解。12000rpm，4℃离心
15min。吸取上清于新的EP管中，用BCA蛋白定量法对蛋白定量，然后加入5×
Loadingbuffer，沸水煮5min，-80℃保存，处理 0.5h的蛋白用westernblot实验检测P-Smad2/3的变化，处理2h的蛋白用westernblot实验检测Snail的变化。

[0096] 2.6CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞P-Smad2/3入核的影响实验

[0097] 选取对数期A549细胞，取2mL(2×105个/mL)细胞接种于打孔皿中。37℃，5％CO2培养过夜后，倾出培养液，加入含0.1％血清培养液3mL饥饿24h。CZ-293终浓度分别为20μM、40μM和阳性药SB-431542(10μM)预处理细胞2h，加入5ng/mL TGF-β1处理0.5h。用PBS清洗细胞三次，用甲醇固定细胞15min，然后用0.5％ Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)通透细胞5min；用PBS清洗细胞三次，将打孔皿放于湿盒中，用2％山羊血清封闭，37℃孵育1h；按照说明书用山羊血清稀释P-Smad2/3一抗，加入打孔皿中，4℃缓慢摇晃过夜；用PBS清洗细胞三次，按照说明书用PBS稀释二抗，加入打孔皿中，将打孔皿置于湿盒中，37℃孵育30min；用PBS清洗细胞三次，滴1-2滴DAPI(即4',6-二脒基-2-苯基吲哚)于打孔皿中，避光；细胞置于激光共聚焦显微镜下成像，拍照并保存。

[0098] 3.实验结果

[0099] 3.1CZ-293对A549细胞、MRC-5细胞、Vero细胞增殖的影响实验结果

[0100] 如图1所示，CZ-293对A549细胞、MRC-5细胞、Vero细胞均有较好的抑制作用，在加入极少的量进行作用时，A549细胞、MRC-5 细胞、Vero细胞的活性均有明显的降低，特别是对MRC-5细胞、Vero 细胞，在50umol/L时几乎使得50％的细胞失去活性。

[0101] 3.2CZ-293对A549细胞TGFBR1-TGFBR2相互作用的影响实验结果

[0102] 如图2所示，Western Blot实验表明，5ng/mL TGF-β1处理A549 细胞30min，TGFBR1-TGFBR2的结合程度增加，但细胞经20μM、 40μM的CZ-293预处理1h后再加入5ng/mL TGF-β1处理16h后，较TGF-β1处理细胞，TGFBR1-TGFBR2的结合程度降低，与柚皮素Naringenin(40μM)类似，该实验结果显示CZ-293化合物能显著地抑制TGFBR1-TGFBR2的相互作用。

[0103] 3.3CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞上皮-间质转化(EMT)过程生物标志物的影响实验结果

[0104] 如图3所示，Western Blot实验表明，5ng/mL TGF-β1处理A549 细胞48h后，肺上皮细胞表征蛋白E-cadherin表达量显著降低，间质细胞表征蛋白Fibronectin、α-SMA、Vimentin表达量升高，降解胶原蛋白的主要酶MMP-2表达量也明显增加。但CZ-293预处理2h，再加入TGF-β1处理48h后，40μM时能使E-cadherin表达量升高，使 Fibronectin、α-SMA、Vimentin、MMP-2表达量受到抑制，该实验能够证明CZ-293能够抑制TGF-β1的活性。

[0105] 3.4CZ-293对TGF-β1诱导MRC-5细胞转分化过程生物标志物的影响实验结果[0106] 如图4所示，WesternBlot实验表明，5ng/mL TGF-β1处理MRC-5 细胞48h后，肌成纤维细胞表征蛋白表达量增加；但CZ-293预处理 2h，再加入TGF-β1处理48h后，40μM时能使Fibronectin和ɑ-SMA 表达量降低，该实验表明CZ-293能够抑制TGF-β1促进的肌成纤维细胞中蛋白的表达，从而可以抑制细胞纤维化。

[0107] 3.5CZ-293对A549细胞TGF-β信号通路的影响实验结果

[0108] 如图5A所示，5ng/mLTGF-β1处理A549细胞30min，Smad 2/3 的磷酸化水平明显升高。而细胞经10μM、20μM、40μM的CZ-293 预处理2h后再加入5ng/mLTGF-β1，可见30min时，较TGF-β1处理细胞，Smad 2/3磷酸化水平明显降低且成浓度依赖性。其中40μM 的CZ-293预处理细胞的Smad 2/3磷酸化水平与TGF-β受体抑制剂 SB-431542类似，该实验表明CZ-293化合物对TGF-β受体具有较 SB-431542等数量级的抑制作用，进而对癌细胞增殖进行抑制，而且本发明提供的吲哚类化合物的结构较SB-431542简单，更具有后续开发为癌症治疗药物的价值。

[0109] 如图5B所示，5ng/mLTGF-β1处理A549细胞2h，Snail水平明显升高。而细胞经10μM、20μM、40μM的CZ-293预处理2h后再加入5ng/mL TGF-β1处理2h，较TGF-β1处理细胞，Snail水平明显降低且成浓度依赖性。其中40μM的CZ-293预处理细胞的Snail水平与TGF-β受体抑制剂SB-431542类似。

[0110] 3.6CZ-293对TGF-β1诱导A549细胞P-Smad2/3入核的影响实验结果

[0111] 如图6所示，5ng/mL TGF-β1处理A549细胞30min，促使P-Smad 2/3转移到细胞核中，细胞质中几乎不存在。但是20μM、40μM的 CZ-293预处理2h，再加入TGF-β1(5ng/mL)处理30min，显著的抑制P-Smad 2/3在细胞核中的分布，其中40μM的CZ-293能够抑制 P-Smad2/3的水平与TGF-β受体抑制剂SB-431542类似。

[0112] 上述实验例中，使用的CZ-293化合物是苯甲酸甲酯的形式，根据潜药原理，将该甲酯中的甲基进行替换使用乙基、丙基、丁基、戊基也是完全可行的，对实验结果没有影响。同样的，该甲酯水解后得到的苯甲酸形式，使用其羧酸、羧酸盐(一价的锂盐、钠盐、钾盐、铵盐或二价的镁盐、钙盐)都是可以得到类似的实验结果的。

[0113] 实施例的作用与效果

[0114] 经过以上六组实验可以证实：

[0115] CZ-293化合物对TGFBR1-TGFBR2相互作用具有明显的抑制作用，而且能够抑制组织细胞上皮-间质转化(EMT)和成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程。

[0116] 具体地，该化合物能抑制TGF-β1诱导的肿瘤侵袭、转移和组织纤维化上皮-间质转化(EMT)的过程。

[0117] 具体地，该化合物能抑制TGF-β1诱导的组织纤维化成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化过程。

[0118] 该化合物能抑制肿瘤(肺癌)的生长和组织纤维化(肺纤维化) 的进一步恶化。

[0119] 根据现有的药理知识可知，该类化合物能够作为抗纤维化的治疗药物，治疗或预防细胞、组织、器官的纤维化疾病，特别是针对人肺癌上皮细胞、人肺成纤维细胞、血管内皮细胞的纤维化。

[0120] 根据现有的药理知识可知，该类化合物能够作为抑制肿瘤侵袭、转移、生长的治疗药物，可作为一种抗癌药，特别的是针对肺部肿瘤、血管肿瘤或者肺癌或血管癌。