一种分离自丹参的活性成分及其在治疗脑血管疾病中的应用

摘要

本发明涉及一种分离自丹参的活性成分及其在治疗脑血管疾病中的应用，具体涉及一种式I结构丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑血管疾病药物中的用途，式I结构如下：

权利要求

1.一种分离自丹参的活性成分、互变异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于所述分离自丹参的活性成分具有式I所示结构：

2.权利要求1所述的式I结构丹参活性成分的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)粉碎：取丹参，粉碎至20-100目，得细粉备用；

(2)提取：步骤(1)得到的细粉用二氯甲烷渗漉提取，提取液浓缩得浸膏，备用；

(3)纯化：步骤(2)得到的浸膏，依次经正相硅胶柱色谱分离、高效液相色谱分离得式I结构的丹参活性成分。

3.权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中渗漉提取的温度为室温，渗漉提取的时间为8-16小时，渗漉速度为每千克丹参流出速度为2～3ml/min。

4.权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中所述的正相硅胶柱色谱分离中固定相为200～300目硅胶，流动相为30％–40％的乙酸乙酯/石油醚混合溶剂，洗脱体积为2-3个柱体积；高效液相色谱分离中采用的色谱柱为半制备C18色谱柱，Kromasil,7μm,10×250mm，以40％的甲醇/水混合溶剂作为流动相；上述混合溶剂百分比均为体积百分比。

5.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以权利要求1所述的式I结构丹参活性成分、互变异构体或其药学上可接受的盐作为有效成分。

6.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括其他治疗脑血管疾病的药物。

7.权利要求5-6任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括药用辅料。

8.权利要求1所述的式I结构丹参活性成分、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑血管疾病药物中的用途。

9.权利要求1所述的式I结构丹参活性成分、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备CETP抑制剂中的应用。

10.权利要求1所述的式I结构丹参活性成分、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤药物中的用途。

说明书

一种分离自丹参的活性成分及其在治疗脑血管疾病中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种分离自丹参的活性成分及其在治疗脑血管疾病中的应用。

背景技术

[0002] 丹参，为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。

[0003] 脑血管病以高发病率、高致残率、高病死率及高复发率的“四高”特征，已经成为严重危害人类健康的第一大疾病。其中脑动脉粥样硬化、血栓形成是导致脑血管疾病的重要原因。研究表明，升高高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)，可以延缓动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)进展，可能与其促进胆固醇逆装运、抗氧化和抗炎作用有关。目前用于升高HDL-C的常用药物为烟酸类制剂和他汀类药物。但即使烟酸和他汀联合使用，亦仅能将HDL-C升高约30％。因此，寻找和开发能明显升高HDL-C的药物，可能为进一步预防和延缓AS所必需。近年研究表明，胆固醇酯转移蛋白(cholesterol ester transfer protein，CETP)是一种在HDL代谢中起核心作用的重要分子，将其抑制后HDL-C水平可以升高达50％，并可显著改变AS的病理过程。

[0004] 本发明从丹参中分离得到一个新的活性成分，其对CETP具有很好的抑制效果，并且对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。

发明内容

[0005] 本发明提供一种分离自丹参的活性成分、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于所述分离自丹参的活性成分具有式I所示结构：

[0006]

[0007] 本发明的另一实施方案提供上述式I结构丹参活性成分的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

[0008] (1)粉碎：取丹参，粉碎至20-100目，得细粉备用；

[0009] (2)提取：步骤(1)得到的细粉用二氯甲烷渗漉提取，提取液浓缩得浸膏，备用；

[0010] (3)纯化：步骤(2)得到的浸膏，依次经正相硅胶柱色谱分离、高效液相色谱分离得式I结构的丹参活性成分。

[0011] 步骤(2)中渗漉提取的温度为室温，渗漉提取的时间为8-16小时，渗漉速度为每千克丹参流出速度为2～3ml/min；步骤(3)中所述的正相硅胶柱色谱分离中固定相为200～300目硅胶，流动相为30％–40％的乙酸乙酯/石油醚混合溶剂，洗脱体积优选为2-3个柱体积；高效液相色谱分离中采用的色谱柱为半制备C18色谱柱，Kromasil,7μm,10×250mm，以
40％的甲醇/水混合溶剂作为流动相；上述混合溶剂百分比均为体积百分比。

[0012] 本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述式I结构的丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐作为有效成分。

[0013] 本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述式I结构的丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐作为有效成分；该药物组合物还包括其他治疗脑血管疾病的药物。进一步还包括药用辅料(例如药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂)。

[0014] 本发明的另一实施方案提供上述式I结构的丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑血管疾病药物中的用途。

[0015] 本发明的另一实施方案提供上述式I结构的丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备CETP抑制剂中的应用。

[0016] 本发明的另一实施方案提供上述式I结构的丹参活性成分、立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗局灶性脑缺血再灌注损伤药物中的用途。

[0017] 本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。

[0018] 本发明的优点在于：(1)首次从丹参中分离得到式I结构的丹参活性成分，本发明分离纯化方法简便、易行；(2)本发明分离得到的式I结构的丹参活性成分，对CETP具有很好的抑制效果，并且对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。

具体实施方式

[0019] 为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。本发明实施例中使用的丹参为丹参饮片。

[0020] 实施例1

[0021] (1)粉碎：取丹参(1kg)，粉碎至20-100目，得细粉备用；

[0022] (2)提取：将步骤(1)得到的细粉用二氯甲烷渗漉提取，得二氯甲烷提取液(0.96L)，提取液浓缩得浸膏，备用；其中，渗漉提取的温度为室温，渗漉提取的时间为8小时，渗漉速度为每千克粉剂流出速度为2ml/min；

[0023] (3)纯化：取步骤(2)得到的浸膏，先进行正相硅胶柱色谱分离，固定相：200～300目硅胶，流动相为30％的乙酸乙酯/石油醚混合溶剂，洗脱2个柱体积，洗脱液浓缩后进行高效液相色谱分离，固定相：半制备C18色谱柱(Kromasil,7μm,10×250mm)，以40％的甲醇/水混合溶剂作为流动相；上述混合溶剂百分比均为体积百分比，得式I结构的丹参活性成分(8.5mg，为黄色粉末)，HPLC纯度为98.5％。结构确证数据：

[0024]

[0025] 式I：1H NMR(CDCl3,400MHz)和13C NMR(CDCl3,100MHz),见表1；HRESIMS m/z 362.1502[M+H]+(calcd for C21H20N3O3,362.1499).

[0026] 表1

[0027]

[0028]

[0029] 实施例2

[0030] (1)粉碎：取丹参(1kg)，粉碎至20-100目，得细粉备用；

[0031] (2)提取：将步骤(1)得到的细粉用二氯甲烷渗漉提取，得二氯甲烷提取液(2.88L)，提取液浓缩得浸膏，备用；其中，渗漉提取的温度为室温，渗漉提取的时间为16小时，渗漉速度为每千克粉剂流出速度为3ml/min；

[0032] (3)纯化：取步骤(2)得到的浸膏，先进行正相硅胶柱色谱分离，固定相：200～300目硅胶，流动相为40％的乙酸乙酯/石油醚混合溶剂，洗脱3个柱体积，洗脱液浓缩后进行高效液相色谱分离，固定相：半制备C18色谱柱(Kromasil,7μm,10×250mm)，以40％的甲醇/水混合溶剂作为流动相；上述混合溶剂百分比均为体积百分比，得式I结构的丹参活性成分(10.2mg，为黄色粉末)，HPLC纯度为98.2％，结构确证数据与实施例1一致。

[0033] 实施例3

[0034] (1)本发明式Ⅰ结构的丹参活性成分对CETP的抑制活性测试，按照中国专利申请号201610102917.1中记载的方法测试式Ⅰ结构的丹参活性成分对CETP的IC50，结果显示，本发明式I结构丹参活性成分对CETP的IC50为0.125μM，阳性对照MK-0859对CETP的IC50为25nM。
上述结果表明，本发明式Ⅰ结构的丹参活性成分对CETP具有很强的抑制作用，可用于预防和/或治疗动脉粥样硬化等相关疾病。

[0035] (2)按照中国专利申请号201710371901.5中记载的方法测试式Ⅰ结构的丹参活性成分对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集率的影响，结果见下表2

[0036] 表2对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚率的影响(每组大鼠数n＝10)[0037]

[0038]

[0039] 与缺血模型组比较：*p＜0.01，**p＜0.001

[0040] 上述结果表明，本发明式Ⅰ结构的丹参活性成分对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，可用于预防和/或治疗脑血管相关疾病。