赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其合成和应用

摘要

本发明公开了一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂，所述的抑制剂选择性高，可用于对Sirtuin选择性强、高效低毒的Sirtuin机理型抑制剂类抗肿瘤药物，原料易得，成本低。

权利要求

1.一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂，其特征在于：所述抑制剂的结构式为：所述的R1：是苄氧羰基、叔丁氧碳基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、甲(乙)氧羰基、三氯乙氧羰基、邻苯二甲酰基、对甲苯磺酰基、取代苯磺酰基、三氟乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、三苯甲基、2,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苄基、苄基；

所述的R2：是烷氧基、不饱和烷氧基、芳烷氧基、苄氧基、取代苄氧基、二苯甲氧基、4-吡啶甲氧基、三氯乙氧基、甲基硫代乙氧基、对甲苯磺酰乙氧基、对硝基苯基硫代乙氧基、三甲(乙)基硅氧基、叔丁氧基、苯胺基、苄胺基、取代苄胺基；

所述的R3：氨基、1-13个碳的烷胺基、苯胺基、取代苯胺基、苄胺基、取代苄胺基、2-氨基乙磺酸基或2-硝基乙胺基；

所述的X：是S、O或NH；

所述的Y：是CH2或NH；

所述的Z：是S或O。

2.一种如权利要求1所述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成方法，其特征在于：按下述路线进行合成：所述的R1，R2,R3，X与权利要求1中的R1，R2,R3，X相同。

3.一种如权利要求1所述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成方法，其特征在于：按下述路线进行合成：所述的R1，R2,R3，X与权利要求1中的R1，R2,R3，X相同。

4.一种如权利要求1-3中任一项所述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的应用，其特征在于：作为Sirtuin抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

说明书

赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其合成和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其合成和应用，特别是一种具有抗肿瘤活性的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其合成和应用。

背景技术

[0002] 很早以来，人们就认识到组蛋白乙酰化修饰与染色质结构和基因转录调控密切相关。在细胞核内，组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化过程处于动态平衡，并由具有相反活性的组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferases，HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)共同调控。HAT的催化活性利用乙酰辅酶A为乙酰基供体，将乙酰基转移到组蛋白赖氨酸侧链的ε-氨基上，使染色质处于相对疏松的状态，种状态有利于转录因子、RNA聚合酶及其他效应蛋白的接近，从而促进基因转录及各种染色质动态变化参与的生命过程。HDACs使组蛋白去乙酰化后与带负电荷的DNA紧密结合，染色质致密卷曲，某些基因如肿瘤抑制因子的转录受到抑制，从而诱导肿瘤的发生。

[0003] 目前已发现18种人类HDACs亚型。根据与酵母Rpd3、Hda1和Sir2的同源性归为两大类：一是经典的HDACs家族，包括HDACsⅠ、Ⅱ、Ⅳ亚族，属于Zn2+依赖性酶；二是HDACsⅢ亚族即Sirtuin家族，与酵母的Sir2蛋白同源，属于NAD+依赖性酶。Sirtuin在人体内共有7个家族成员，分别是Sirtuin1～7。

[0004] 不同亚型的Sirtuin细胞定位和功能(如表1)也有所不同，例如：SIRT3、SIRT4和SIRT5位于线粒体，能够调节多种线粒体能量代谢通路和压力应答，SIRT2位于细胞质，SIRT1、SIRT6和SIRT7位于细胞核，能够影响染色质稳定性及基因转录。

[0005] SIRT1尽管位于细胞核，但也可以转移到细胞质中发挥作用，例如参与胰岛素信号通路的抑制过程。每个Sirtuin亚型均有其各自的酶促反应特点。SIRT1～3具有很强的去乙酰化酶活性，而SIRT4～7则只能检测到很弱的去乙酰化酶活性，后经研究发现，SIRT5还具有去琥珀酰基化和去丙二酰基化酶活性，而SIRT4和SIRT6还具有ADP核糖转移酶活性，SIRT6还具有较强的去长链脂肪酰基化酶活性。目前报道的Sirtuins抑制剂大多是通过高通量筛选后进行结构优化获得，其选择性都比较低，成本高。

[0006] 因此，现有技术中的Sirtuin抑制剂存在选择性都比较低，成本高，且不具有抗肿瘤活性的问题。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于，提供一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其合成和应用，所述的抑制剂选择性高，成本低，且具有抗肿瘤活性，可作为Sirtuin抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0008] 本发明的技术方案：一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂，所述抑制剂的结构式为：

[0009] 所述的R1：是苄氧羰基、叔丁氧碳基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、甲(乙)氧羰基、三氯乙氧羰基、邻苯二甲酰基、对甲苯磺酰基、取代苯磺酰基、三氟乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、三苯甲基、2,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苄基、苄基；

[0010] 所述的R2：是烷氧基、不饱和烷氧基、芳烷氧基、苄氧基、取代苄氧基、二苯甲氧基、4-吡啶甲氧基、三氯乙氧基、甲基硫代乙氧基、对甲苯磺酰乙氧基、对硝基苯基硫代乙氧基、三甲(乙)基硅氧基、叔丁氧基、苯胺基、苄胺基、取代苄胺基；

[0011] 所述的R3：氨基、1-13个碳的烷胺基、苯胺基、取代苯胺基、苄胺基、取代苄胺基、2-氨基乙磺酸基或2-硝基乙胺基；

[0012] 所述的X：是S、O或NH；

[0013] 所述的Y：是CH2或NH；

[0014] 所述的Z：是S或O。

[0015] 一种前述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成方法，按下述路线进行合成：

[0016]

[0017] 所述的R1，R2,R3，X与权利要求1中的R1，R2,R3，X相同。

[0018] 3.一种如权利要求1所述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成方法，按下述路线进行合成：

[0019]

[0020] 所述的R1，R2,R3，X与权利要求1中的R1，R2,R3，X相同。

[0021] 一种如权利要求1-3中任一项所述的赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的应用，作为Sirtuin抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0022] 与现有技术相比，本发明是利用酰化的赖氨酸或多肽，合成多种赖氨酸类似物作为与组蛋白去乙酰化酶相关疾病的抑制剂，所述的抑制剂对Sirtuin有抑制剂效果，而且，本发明合成原料便宜成本较低、选择性强，抗肿瘤活性明显，可用于对Sirtuin选择性强、高效低毒的Sirtuin抑制剂类抗肿瘤药物。

具体实施方式

[0023] 下面结合实施例对本实用新型作进一步的说明，但并不作为对发明限制的依据。

[0024] 实施例1：

[0025] 一种赖氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂：其通式为：

[0026]

[0027] 其合成方法为：

[0028] 合成方案1：

[0029] 通式(Ⅰ)中X为S或O或NH；Y为CH2；Z为S或O；R1为苄氧羰基、芴甲氧羰基；R2为甲氧基、苯胺基，具体合成路线为：

[0030]

[0031] 合成方案2：

[0032] 通式(Ⅰ)中X为S或O或NH；Y为NH；Z为S或O；R1为苄氧羰基、芴甲氧羰基；R2为甲氧基、苯胺基；具体合成路线为：

[0033]

[0034] 通式Ⅱ类化合物的具体合成步骤

[0035]

[0036] 其中，R的定义见表1。

[0037] 具体合成步骤和制备方法：

[0038] 1、化合物2的合成路线：

[0039]

[0040] 化合物2的制备方法：取250ml的茄形瓶，称取DMAP(5mg)，加入叔丁醇(25ml,273mmol)，吡啶(25ml)溶解；置冰浴中搅拌5min,缓慢滴加4-氯丁酰氯(8.3ml,74mmol)，冰浴中继续反应30min，去掉冰浴，室温下反应1h，将反应体系中溶剂减压蒸尽，用乙酸乙酯(500ml)萃取，分别用饱和碳酸氢钠(100ml,x2),饱和食盐水(100ml,x2)洗；收集有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得到棕色油状物产物，化合物2(20g,收率为95％)；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):3.58(t,2H)；2.40(t,2H)；2.06(m,2H)；1.45(s,9H).13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,81.1,44.8,33.1,28.6,28.4.

[0041] 2、化合物3的合成路线：

[0042]

[0043] 化合物3的制备方法：

[0044] 将上述得到的化合物2溶于THF(150ml)中，加入NaI(60g,400mmol),80℃条件下回流反应四天，TLC监测反应完全，将反应体系中溶剂减压蒸尽，用乙酸乙酯(400ml,x2)萃取，再用蒸馏水(100ml,x2)，饱和食盐水(100ml,x2)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到棕黑色油状化合物，即化合物3(17.8g,收率为89％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):3.23(t,2H)；2.34(t,2H)；2.07(m,2H)；1.40(s,9H)。13C-NMR(100MHz,CDCl3):173.2,81.0,44.6,
35.1,28.9,6.0.

[0045] 3、化合物4的合成路线：

[0046]

[0047] 化合物4的制备方法：取250ml茄形瓶烘干，加入半胱氨酸(6g,49mmol)，加入甲醇(40ml)，搅拌脱气(通氮气)10min，冰浴下加入NaOH(55ml,2mol)使半胱氨酸溶解完全；一次性加入上述得到的化合物3,反应过夜，然后加入2mol HCl(10ml)调节PH～7，将反应体系中溶剂减压蒸尽，浓缩回收后得到浅黄色油状物，用丙酮重结晶得到浅黄色固体化合物，即化合物4(17g,收率为95％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d)δ(ppm):2.97(dd,1H)；2.70(dd,1H)；2.51(t,2H)；2.29(t,2H)；1.72(m,2H)；1.38(s,9H).

[0048] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):175.2,172.6,80.2,53.9,34.0,33.2,30.6,28.1,24.7.[0049] 4、化合物5的合成路线：

[0050]

[0051] 化合物5的制备方法：取化合物4用10％Na2CO3(13ml)溶解完全，冰浴下加入Cbz-Cl(1.4ml,8.3mmol)与THF(7ml)的混合液，室温反应过夜。然后用10％柠檬酸(20ml)调节PH 4～5，将反应体系中溶剂减压蒸尽,然后用二氯甲烷(300,x2)萃取，用饱和食盐水溶液(100ml,x2)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后硅胶柱层析分离得到黄色油状1
化合物，即化合物5(0.2g,收率为10％)；H-NMR(400MHz,DMSO-d)δ(ppm):7.31～7.23(m,
5H),4.97(s,2H),4.03(m,2H),2.85～2.80(m,1H),2.67～2.61(m,1H),2.47～2.43(m,2H),
2.20(m,2H),1.67～1.62(m,2H),1.32～1.16(s,9H).

[0052] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):175.9,173.1,155.9,136.1,129.0,124.2,119.6,77.3,77.0,76.6,50.9,37.7,33.9,32.6,29.0,28.4,27.9,25.4.

[0053] HR-MS m/z 397.1559 C19H27NO6S,[M+Na]+420.1467

[0054] 5、化合物6的合成路线：

[0055]

[0056] 化合物6的制备方法：取上述得到的化合物5于茄形瓶中，加入THF(3.5ml)使其溶解，然后加入DIEA(673μl,4mmol),苯胺(367μl,4mmol)，搅拌5min，加入被THF溶解后的DCC(840mg,4mmol)反应过夜；然后减压除去溶剂，用乙酸乙酯(200ml,x2)萃取，用饱和食盐水溶液(100ml,x2)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压干燥回收，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物6(0.51g,收率为50％)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d)δ(ppm):7.52(d,J＝8Hz,2H),7.35～7.26(m,7H),7.13～7.19(m,1H),4.47(s,1H),2.97～2.93(m,2H),2.62(s,2H),2.36～2.29(m,2H),1.91～1.86(m,2H),1.43(s,9H).

[0057] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):172.7,168.6,156.2,137.3,135.9,128.9,128.5,128.2,128.1,124.6,120.0,80.8,67.3,54.6,34.2,33.9,31.2,29.7,28.1,24.6,24.5.[0058] HR-MS m/z 472.2032 C25H32N2O5S,[M+Na]+495.1945

[0059] 化合物7的合成路线：

[0060]

[0061] 化合物7的制备方法：取上述得到的化合物6于茄形瓶中，加入CH2Cl2(2ml)使其溶解，冰浴下缓慢加入TFA 2ml，反应8h,然后减压除去溶剂，反复用CH2Cl2溶解，旋干以除去多余的TFA,硅胶柱层析分离得白色固体，即得化合物7，(0.275g,收率为55％)；

[0062] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.63(d,J＝8Hz,2H),7.40～7.32(m,7H),7.11～7.07(m,2H),5.06(s,2H),4.38～4.32(m,1H),2.91～2.86(m,1H),2.76～2.71(m,1H),2.62～2.58(m,2H),2.34～2.3(t,2H),1.80～1.73(m,2H).

[0063] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):174.1,169.4,156.0,138.8,136.9,128.8,128.4,127.9,127.8,123.5,119.4,65.6,55.4,33.2,32.6,30.8,24.4.

[0064] HR-MS m/z 416.1406 C21H24N2O5S,[M+Na]+439.1304.

[0065] 化合物7的衍生物(化合物8-化合物20)的结构式为：

[0066]

[0067] 其中R的定义见表1：

[0068] 表1

[0069]

[0070] 7、化合物8的制备：

[0071] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入氨水(9.2μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物8；(收率40％)；

[0072] 1H-NMR(400MHz,DMSO-d)δ(ppm):7.60(d,J＝8Hz,2H),7.36～7.28(m,7H),7.04(m,4H),5.03(s,2H),4.30(m,1H),2.56(m,1H),2.54(m,1H),2.52(m,2H),2.11(m,2H),1.70(m,2H).

[0073] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):174.2,172.7,155.9,137.5,136.1,129.2,128.8,128.3,124.0,119.9,66.0,57.4,37.5,34.4,31.5,25.4.

[0074] HR-MS m/z 415.1566 C21H25N3O4S,[M+H]+416.1604

[0075] 8、化合物9的制备

[0076] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入甲胺(11.2μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物9；(收率30％)；

[0077] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(d,J＝8Hz,2H),7.34～7.27(m,7H),7.09(m,1H),5.12(s,2H),4.49(s,1H),3.04～2.99(m,1H),2.87～2.79(m,4H),2.71～2.43(m,2H),
2.34～2.22(m,2H),1.96(m,2H).

[0078] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.9,168.8,155.4,138.5,128.9,128.2,127.1,119.9,66.8,57.5,34.5,30.4,29.7,26.5,24.5.

[0079] HR-MS m/z 429.1722 C22H27N3O4S,[M+H]+430.1763.

[0080] 9、化合物10的制备

[0081] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入乙胺(15.5μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物10(收率33％)；

[0082] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(d,J＝8Hz,2H),7.36～7.24(m,7H),7.23～7.11(m,1H),5.11(s,2H),4.52(s,1H),3.28(m,2H),3.01(m,1H),2.82(m,1H),2.75～2.41(m,2H),2.25(m,2H),1.98(m,2H),1.11(m,3H).

[0083] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.4,168.8,156.2,137.8,128.9,128.1127.9,119.9,67.1,54.0,34.6,34.4,30.3,24.5,14.7

[0084] HR-MS m/z 443.1879 C23H29N3O4S,[M+H]+444.1916。

[0085] 10、化合物11合成

[0086] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入一正丁胺胺(10.1μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物11(收率60％)；

[0087] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(m,2H),7.33(m,7H),7.08(m,1H),5.10(s,2H),4.51(s,1H),3.24(m,2H),3.02(m,1H),2.82(m,1H),2.57(m,2H),2.34(m,2H),1.91(m,
2H),1.45(m,2H),1.29(m,2H),0.96～0.86(m,3H).

[0088] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,168.8,156.2,137.8,136.0,128.9,128.3,124.4,119.9,67.1,53.9,39.5,34.5,34.4,32.2,31.6,24.5,19.9,13.8

[0089] HR-MS m/z 471.2192 C25H33N3O4S,[M+H]+472.2251.

[0090] 11、化合物12合成

[0091] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入正己胺(31μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物12(收率16％)；

[0092] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.59(d,J＝8Hz,2H),7.33～7.24(m,7H),7.09(m,1H),5.14(s,2H),4.51(s,1H),3.24(m,2H),3.01(m,1H),2.83(m,1H),2.67～2.58(m,2H),
2.36～2.20(m,2H),2.15～1.82(m,2H),1.47(m,2H),1.23(m,6H),0.85(m,3H).[0093] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,168.8,156.3,137.8,136.1,128.9,128.5,128.2,
119.9,67.2,55.6,39.9,34.4,31.4,30.4,29.5,26.6,24.6,22.6,14.0.

[0094] HR-MS m/z 499.2505 C27H37N3O4S,[M+H]+500.2559

[0095] 12、化合物13合成

[0096] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入辛胺(40μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物13(收率90％)；

[0097] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.58(d,J＝8Hz,2H),7.50～7.24(m,7H),7.09(m,1H),5.10(s,2H),4.51(s,1H),3.23(m,2H),3.01(m,1H),2.82(m,1H),2.75～2.42(m,2H),
2.34～2.20(m,2H),1.90(m,2H),1.46(m,2H),1.24(m,10H),0.83(m,3H).13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,168.8,156.2,137.8,136.0,128.9,128.5,128.2,119.9,67.1,53.8,39.8,
34.5,31.8,30.2,29.5,29.1,26.9,24.4,22.6,14.1.

[0098] HR-MS m/z 527.2818 C29H41N3O4S,[M+Na]+550.2714

[0099] 13、化合物14合成

[0100] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入癸胺(48μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物14(收率76％)；

[0101] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.57(d,J＝8Hz,2H),7.33～7.24(m,7H),7.09(m,1H),5.08(s,2H),4.51(s,1H),3.25～3.20(m,2H),3.02(m,1H),2.83(m,1H),2.79～2.47(m,2H),2.40～2.21(m,2H),2.11～1.89(m,2H),1.45(s,2H),1.22(s,14H),0.87～0.83(m,
3H).

[0102] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,168.8,156.4,137.8,136.1,128.9,128.5,128.0,119.0,67.1,54.7,39.8,34.6,31.9,30.3,29.5,29.3,26.9,24.5,22.7,14.1.

[0103] 14、化合物15合成

[0104] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入十三胺(58μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物15(收率71％)；

[0105] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.60(d,J＝8Hz,2H),7.37～7.27(m,7H),7.11(m,1H),5.13(s,2H),4.53(s,1H),3.27(m,2H),3.04(m,1H),2.87(m,1H),2.80～2.51(m,2H),
2.48～2.12(m,2H),1.94(m,2H),1.45(m,2H),0.93～0.80(m,23H).

[0106] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):172.5,168.8,156.2,137.7,136.1,128.8,128.4,128.0,119.3,67.1,55.7,39.8,34.6,31.7,30.3,29.5,29.3,26.9,26.6,24.5,22.7,14.1.[0107] HR-MS m/z 597.3600 C34H51N3O4S,[M+H]+598.3495.

[0108] 15、化合物16合成

[0109] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中,加入THF(2ml)使其溶解，然后加入三乙胺(33μl,0.24mmol)，再滴加甘氨酸叔丁酯溶液(18μl,0.13mmol),最后滴加被乙腈溶解的卡特缩合剂BOP(79mg,0.18mmol)，室温反应2h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色晶体，即目标化合物(收率为92％)；

[0110] 取上述得到的化合物，加入CH2Cl2(1ml)使其溶解，然后加入等体积的TFA，反应1.5h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得黄色油状物，即化合物16(收率为46％)；

[0111] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.55(d,J＝8Hz,2H),7.38～7.23(m,7H),7.09(m,1H),5.08(m,2H),4.44(m,1H),3.90～3.87(m,2H),2.98～2.83(m,2H),2.62(m,2H),2.34(m,2H),1.88(m,2H).

[0112] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):177.9,174.5,172.7,155.9,138.1,136.5,128.5,128.1,127.5,120.2,66.5,57.5,42.8,35.3,33.6,30.9,25.2.

[0113] HR-MS m/z 473.1621 C23H27N3O6S,[M+H]+474.1610.

[0114] 16、化合物17合成

[0115] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中,加入THF(2ml)使其溶解，然后加入三乙胺(33μl,0.24mmol)，再加入氨基丙酸叔丁酯盐酸盐(23.6mg,0.13mmol),最后滴加被乙腈溶解的卡特缩合剂BOP(79mg,0.18mmol)，室温反应2h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色晶体，即目标化合物(收率为64％)；

[0116] 取上述得到的化合物，加入CH2Cl2(1ml)使其溶解，然后加入等体积的TFA，反应1.5h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得黄色油状物，即化合物17((收率为66％)；

[0117] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.60(d,J＝8Hz,2H),7.31～7.23(m,7H),7.09(m,1H),5.10(s,2H),4.47～4.42(m,1H),3.46(m,2H),3.04(m,1H),2.54(m,5H),2.33～2.20(m,2H),1.98～1.85(m,2H).

[0118] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.5,172.6,156.8,138.5,136.1,128.9,128.6,128.3,121.5,67.6,54.0,35.6,34.7,34.3,29.7,24.4.HR-MS m/z 487.1777C24H29N3O6S,[M+Na]+
510.1672

[0119] 17、化合物18合成

[0120] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中,加入THF(2ml)使其溶解，然后加入三乙胺(33μl,0.24mmol)，再加入氨基丁酸叔丁酯盐酸盐(25.4mg,0.13mmol),最后滴加被乙腈溶解的卡特缩合剂BOP(79mg,0.18mmol)，室温反应2h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色晶体，即目标化合物(收率为68％)；

[0121] 取上述得到的化合物，加入CH2Cl2(1ml)使其溶解，然后加入等体积的TFA，反应1.5h,TLC监测反应完全后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得黄色油状物，即化合物18(收率为55％)。

[0122] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.56～7.50(d,J＝8Hz,2H),7.25(m,7H),7.11(m,1H),5.10(s,2H),4.53(m,1H),3.24(m,2H),3.01～2.84(m,2H),2.55(m,2H),2.34(m,4H),
1.86～1.80(m,4H).

[0123] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):182.2,172.6,168.5,155.9,139.4,129.8,129.4,129.0,121.5,67.8,57.4,39.7,35.7,34.6,32.5,26.6,25.7.

[0124] HR-MS m/z 501.1034 C25H31N3O6S,[M+Na]+524.1815.

[0125] 18、化合物19合成

[0126] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入苯胺(21.8μl,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物19(收率33％)。

[0127] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.48(d,J＝8Hz,2H),7.32～7.24(m,9H),7.08(m,2H),5.13(s,2H),4.52(m,1H),3.01～291(m,2H),2.63(m,2H),2.45(m,2H),2.01(m,2H).[0128] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):179.7,171.0,168.6,156.3,136.0,129.0,128.6,128.2,
120.0,67.3,54.4,35.5,34.4,30.9,24.5.

[0129] HR-MS m/z 491.1879 C27H29N3O4S,[M+H]+492.1934

[0130] 19、化合物20合成

[0131] 取化合物7(50mg,0.12mmol)于茄型瓶中，加入2ml THF使其溶解完全，冰浴下缓慢滴加IBCF(45μl,0.36mmol),NMM(40μl,0.36mmol),冰浴中反应4h后加入对硝基苯胺(30.7mg,0.24mmol),在室温条件下反应过夜。然后减压除去溶剂，硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物20(收率86％)。

[0132] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.14(d,J＝8Hz,2H),7.70(d,J＝8Hz,2H),7.47(d,J＝8Hz,2H),7.35～7.27(m,7H),7.13(m,1H),5.16(s,2H),4.54(m,1H),3.02～2.99(m,2H),2.97(m,2H),2.69(m,2H),2.48(m,2H),2.06(m,2H).

[0133] 13C NMR(100MHz,CDCl3):178.9,172.6,168.6,156.7,143.9,143.2,136.8,135.6,129.1,128.7,128.5,124.9,120.4,118.9,67.6,54.9,35.9,33.9,31.6,24.6.

[0134] HR-MS m/z 536.1730 C27H28N4O6S,[M+H]+537.1794

[0135] 实验例2.

[0136] 通式Ⅲ类化合物的具体合成路线

[0137]

[0138] 其中，R的定义见表2。

[0139] 1、化合物21的合成路线：

[0140]

[0141] 化合物21的制备：取化合物4(2g,7.6mmol)用10％Na2CO3溶液15ml溶解，加入用THF溶解的Fmoc-Cl(2.94g,11.4mmol)，室温反应过夜，用10％柠檬酸调节PH4～5，减压除去THF，加入CH2Cl2萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗涤，减压干燥，得到产物棕黄色油状物21(200mg，收率为10％)；

[0142] 1H NMR(400MHz,DMSO-d)δ7.85(d,J＝7.5Hz,2H),7.77～7.61(m,3H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H),7.28(t,J＝7.4Hz,2H),4.32～4.14(m,3H),4.08(qd,J＝8.8,4.6Hz,1H),2.86(dt,J＝24.4,10.2Hz,1H),2.70(ddd,J＝15.2,9.6,5.6Hz,1H),2.55～2.41(m,2H),2.23(t,J＝7.3Hz,2H),1.68(dd,J＝8.4,6.1Hz,2H),1.33(s,9H).

[0143] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):175.9,173.1,155.9,143.6,142.6,126.7,126.2,125.2,120.5,82.1,67.3,58.1,47.2,33.4,33.1,32.328.7,24.4.

[0144] HR-MS m/z 485.1872 C26H31NO6S,[M+H]+486.1866

[0145] 2、化合物22的合成：

[0146]

[0147] 取化合物21(1.2g,2.47mml)于100ml茄型瓶中，加入甲醇20ml，

[0148] 冰浴中搅拌10min，缓慢滴加草酰氯(653μl,7.41mmol)，滴完继续冰浴反应5min，撤掉冰浴，室温反应2h，减压除去多余溶剂后依次用饱和Na2CO3，NaCl洗，干燥浓缩，得到白色絮状物，即化合物22(780mg，收率为65％)；

[0149] 1H NMR(400MHz,DMSO-d)δ7.85(d,J＝7.5Hz,2H),7.77～7.61(m,3H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H),7.28(t,J＝7.4Hz,2H),4.32～4.14(m,3H),4.08(qd,J＝8.8,4.6Hz,1H),3.68(s,3H),2.86(dt,J＝24.4,10.2Hz,1H),2.70(ddd,J＝15.2,9.6,5.6Hz,1H),2.55～2.41(m,2H),2.23(t,J＝7.3Hz,2H),1.68(dd,J＝8.4,6.1Hz,2H),1.33(s,9H).

[0150] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):173.1,171.5,155.9,143.6,142.6,126.7,126.2,125.2,120.5,82.1,67.3,58.2,51.9,47.1,33.4,32.3,28.7,24.4.

[0151] HR-MS m/z 499.2025 C27H33NO6S,[M+H]+500.2122.

[0152] 3、化合物23的合成

[0153]

[0154] 取化合物22于茄型瓶中，加入CH2Cl2，冰浴中搅拌10min，缓慢滴加TFA(CH2Cl2:TFA＝1:1)，滴完继续冰浴反应5min，撤掉冰浴，室温反应2h，减压除去CH2Cl2和TFA，得到浅黄色油状物(收率为90％)。

[0155] 1H NMR(400MHz,DMSO-d)δ12.07(s,1H),7.86(t,J＝6.6Hz,3H),7.68(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,1H),7.29(t,J＝7.4Hz,2H),4.31～4.24(m,2H),4.22～4.12(m,2H),3.60(s,3H),2.84(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.71(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.50(d,J＝7.3Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.73～1.63(m,2H).

[0156] 13C-NMR(100MHz,DMSO-d):178.4,171.5,155.9,143.6,142.6,126.7,126.2,125.2,120.5,67.3,58.2,51.9,47.1,35.2,33.4,32.3,24.1.

[0157] HR-MS m/z 443.1403 C23H25NO6S,[M+H]+444.1508.

[0158] 化合物23衍生物(即化合物24-化合物36)的结构式为：

[0159]

[0160] 其中R的定义见表2：

[0161] 表2

[0162]

[0163] 3、化合物24的合成

[0164] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入氨水(17.7μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为86％)；

[0165] 取上述化合物(50mg,0.113mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(8.1mg,0.339mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物24(收率为80％)。

[0166] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.01(s,1H),7.86(t,J＝6.6Hz,3H),7.55(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.29(t,J＝7.4Hz,2H),7.16(s,2H),4.28～4.20(m,3H),4.15～4.10(m,1H),2.74(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.68(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.48(d,J＝
7.3Hz,2H),2.20(t,J＝7.3Hz,2H),1.63～1.53(m,2H).

[0167] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):176.4,173.5,155.9,143.7,143.6,126.7,126.2,125.2,120.5,67.3,58.2,47.1,37.2,33.1,31.9,24.7.

[0168] HR-MS m/z 428.1406 C22H24N2O5S,[M+H]+429.1514.

[0169] 4、化合物25的合成

[0170] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入甲胺(17.8μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为78％)；

[0171] 取上述化合物(50mg,0.109mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(7.8mg,0.327mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物25(收率为81％)。

[0172] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.15(s,1H),8.13(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.11(s,3H),2.74(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(d,J＝7.3Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.71～1.53(m,2H).

[0173] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.5,173.4,155.8,143.5,142.7,126.5,126.4,125.3,120.6,67.3,58.2,47.3,36.5,34.2,33.1,26.2,15.1.

[0174] HR-MS m/z 442.1562 C23H26N2O5S,[M+H]+443.1566.

[0175] 5、化合物26的合成

[0176] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入乙胺(25.1μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为85％)；

[0177] 取上述化合物(50mg,0.106mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(7.6mg,0.319mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物26(收率为90％)；

[0178] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.05(s,1H),8.03(s,2H),7.87(t,J＝6.6Hz,2H),7.55(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.28(t,J＝7.4Hz,2H),4.28～4.20(m,3H),4.15～4.10(m,1H),3.05(s,3H),2.72(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.51(d,J＝7.3Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.70～1.55(m,2H),1.04(t,J＝7.2Hz,3H)

[0179] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.4,173.3,155.9,143.6,142.6,126.7,126.2,125.2,120.5,67.1,58.1,47.1,36.2,35.6,33.1,31.9,15.1.

[0180] HR-MS m/z 456.1719 C24H28N2O5S,[M+H]+456.1721.

[0181] 6、化合物27的合成

[0182] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入一正丁胺(18.9μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为85％)；

[0183] 取上述化合物(50mg,0.10mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(7.2mg,0.301mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物27(收率分别为80％、88％)；

[0184] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.10(s,1H),8.03(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.02～2.85(m,3H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(t,J＝7.4Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.71～1.53(m,2H).1.52(m,2H),1.31(m,2H),1.11(t,J＝7.4Hz,
3H)

[0185] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.9,172.6,155.8,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,67.3,58.1,47.1,38.9,,35.4,33.1,32.2,31.8,25.2,19.8,13.5.

[0186] HR-MS m/z 484.2032 C26H32N2O5S,[M+H]+484.2114.

[0187] 7、化合物28的合成

[0188] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入正己胺(60μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为84％)；

[0189] 取上述化合物(50mg,0.095mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.8mg,0.285mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物28(收率为92％)；

[0190] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.10(s,1H),8.03(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.02～2.85(m,3H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(t,J＝7.4Hz,2H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),1.81～1.53(m,2H).1.52(m,2H),1.29～1.31(m,6H),0.99(t,J＝
7.4Hz,3H)

[0191] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.9,172.6,155.8,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,67.3,58.1,47.1,38.9,35.4,33.1,31.9,31.5,30.1,26.4,25.1,22.7,14.1.[0192] HR-MS m/z 512.2345 C28H36N2O5S,[M+H]+513.2651.

[0193] 8、化合物29的合成

[0194] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入辛胺(74.6μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为79％)；

[0195] 取上述化合物(50mg,0.090mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.5mg,0.27mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物29(收率为89％)；

[0196] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.10(s,1H),8.03(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.02～2.85(m,3H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(t,J＝7.4Hz,2H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),1.81～1.53(m,2H).1.52(m,2H),1.29～1.31(m,10H),0.99(t,J＝
7.4Hz,3H)

[0197] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.9,172.6,155.8,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,67.3,58.1,47.1,39.1,35.4,33.1,31.9,30.1,29.3,26.4,25.1,22.7,14.1.[0198] HR-MS m/z 540.2658 C30H40N2O5S,[M+H]+541.3546.

[0199] 9、化合物30的合成

[0200] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入癸胺(90μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为80％)；

[0201] 取上述化合物(50mg,0.085mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.18mg,0.257mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物30(收率为91％)；

[0202] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.10(s,1H),8.03(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.02～2.85(m,3H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(t,J＝7.4Hz,2H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),1.81～1.53(m,2H).1.52(m,2H),1.29～1.31(m,14H),0.99(t,J＝
7.4Hz,3H)

[0203] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.9,172.6,155.8,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,67.3,58.1,47.1,39.1,35.4,33.1,31.9,30.1,29.3,29.6,26.4,25.1,22.7,14.1.[0204] HR-MS m/z 568.2971 C32H44N2O5S,[M+H]+569.4788.

[0205] 10、化合物31的合成

[0206] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入十三胺(109μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为87％)；

[0207] 取上述化合物(50mg,0.080mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(5.7mg,0.240mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物31(收率为90％)。

[0208] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.10(s,1H),8.03(s,2H),7.86(t,J＝6.6Hz,2H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),4.29～4.21(m,3H),4.21～4.11(m,1H),3.02～2.85(m,3H),2.60(dd,J＝13.7,9.3Hz,1H),2.51(t,J＝7.4Hz,2H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),1.81～1.53(m,2H).1.52(m,2H),1.29～1.31(m,20H),0.99(t,J＝
7.4Hz,3H).

[0209] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):175.9,172.6,155.8,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,67.3,58.1,47.1,39.1,35.4,33.1,31.9,30.1,29.3,29.6,26.4,25.1,22.7,14.1.[0210] HR-MS m/z 610.3440 C35H50N2O5S,[M+H]+610.3514.

[0211] 11、化合物32的合成

[0212] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入甘氨酸叔丁酯(61μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为75％)；

[0213] 取上述化合物(50mg,0.089mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.4mg,0.269mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物32(收率为86％)。

[0214] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(t,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),6.48(s,1H),5.90(d,J＝7.2Hz,1H),4.64(s,1H),4.35(d,J＝7.2Hz,2H),4.21(t,J＝7.4Hz,1H),4.07(s,2H),3.16～3.13(m,1H),3.01～
2.97(m,1H),2.61～2.52(m,2H),2.46～2.39(m,2H),2.02～1.84(m,2H),1.43(s,9H),[0215] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):177.9,175.6,169.7,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,
120.5,82.1,67.5,54.0,47.4,35.6,35.2,34.8,32.3,30.1,29.6,25.6.

[0216] HR-MS m/z 542.2087 C28H34N2O7S,[M+H]+543.4528。

[0217] 12、化合物33的合成

[0218] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入丙氨酸叔丁酯盐酸盐(81.9mg,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为78％)；

[0219] 取上述化合物(50mg,0.087mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.3mg,0.263mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物33(收率为82％)；

[0220] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(t,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),6.48(s,1H),5.90(d,J＝7.2Hz,1H),4.64(s,1H),4.35(d,J＝7.2Hz,2H),4.21(t,J＝7.4Hz,1H),3.53～3.40(m,2H),3.16～3.13(m,1H),
3.01～2.97(m,1H),2.61～2.52(m,2H),2.46～2.39(m,2H),2.21～2.15(m,2H),2.02～
1.84(m,2H),1.43(s,9H),

[0221] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):177.9,175.6,169.7,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,82.1,67.5,54.0,47.4,35.6,35.2,34.8,32.3,30.1,29.6,25.6.

[0222] HR-MS m/z 556.2243 C29H36N2O7S,[M+H]+557.5641

[0223] 13、化合物34的合成

[0224] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入氨基丁酸叔丁酯盐酸盐(88.2mg,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为77％)；

[0225] 取上述化合物(50mg,0.085mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.1mg,0.256mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物34(收率为79％)；

[0226] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(t,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),6.48(s,1H),5.90(d,J＝7.2Hz,1H),4.64(s,1H),4.35(d,J＝7.2Hz,2H),4.21(t,J＝7.4Hz,1H),3.53～3.40(m,2H),3.16～3.13(m,1H),
3.01～2.97(m,1H),2.61～2.52(m,2H),2.46～2.39(m,2H),2.34～2.25(m,2H),2.15～
2.04(m,2H),2.02～1.84(m,2H),1.43(s,9H),

[0227] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):177.9,175.6,169.7,143.6,142.7,126.7,126.4,125.3,120.5,82.1,67.5,54.0,47.4,39.7,35.6,35.2,34.8,32.3,30.1,29.6,25.6,23.7.[0228] HR-MS m/z 570.2400 C30H38N2O7S,[M+H]+570.3541.

[0229] 14、化合物35的合成

[0230] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入HBTU(128.5mg,0.339mmol)，搅拌10min后加入苯胺(41.1μl,0.451mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为65％)；

[0231] 取上述化合物(50mg,0.096mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(7mg,0.29mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物35(收率为81％)

[0232] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.01(s,1H),7.86(t,J＝6.6Hz,3H),7.61～7.55(m,4H),7.43～7.38(m,4H),7.29～7.19(m,3H),4.28～4.20(m,3H),4.15～4.10(m,1H),2.81(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H)2.74(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.68(t,J＝7.4Hz,2H),2.48(t,J＝
7.4Hz,2H),2.20(m,2H).

[0233] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):176.4,173.5,155.9,143.7,142.6,138.7,128.9,128.1,126.7,126.2,125.2,121.6,120.6,67.5,58.1,47.2,35.1,33.1,31.9,25.2.

[0234] HR-MS m/z 504.1719 C28H28N2O5S,[M+H]+504.2151。

[0235] 15、化合物36的合成

[0236] 取化合物23(100mg,0.226mmol)于茄型瓶中，加入干燥的CH2Cl2约4ml，溶解完全后加入DIEA(78.60μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入POCl3(41.4μl,0.451mmol)，搅拌10min后加入对硝基苯胺(32.8μl,0.339mmol)，室温反应3h。反应完全后加入约40ml的CH2Cl2，用10ml 1N HCl洗两次，再用饱和NaCl溶液洗两次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体(收率为30％)；

[0237] 取上述化合物(50mg,0.088mmol)于茄型瓶中，加入THF:H2O(3:1)溶液10ml，冰浴中反应约10min，加入THF:H2O(3:1)溶液溶解的LiOH(6.4mg,0.26mmol)，约10min反应完全后加入10％柠檬酸终止反应，用CH2Cl2萃取，用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na2SO4干燥浓缩后硅胶柱层析分离得白色固体，即化合物36(收率为78％)

[0238] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.01(s,1H),8.24(m,3H),7.87～7.82(m,4H),7.55(m,2H),7.38～7.28(m,5H),4.28～4.20(m,3H),4.15～4.10(m,1H),2.85(dd,J＝13.7,5.1Hz,
1H)2.71(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.68(t,J＝7.4Hz,2H),2.48(t,J＝7.4Hz,2H),2.14(m,
2H).

[0239] 13C-NMR(100MHz,CDCl3):176.4,173.5,155.9,144.7,143.6,143.5,142.6,126.7,126.2,125.2,120.6,119.8,67.5,58.1,47.2,35.1,33.1,31.9,25.2.

[0240] HR-MS m/z 549.1570 C28H27N3O7S,[M+H]+540.2344.

[0241] 由上海沐晋生物科技有限公司对化合物24至化合物36进行固相多肽合成，各化合物对应的多肽编号为

[0242] 24-1,25-1,26-1,27-1,28-1,29-1,30-1,31-1,32-1,33-1,34-1,35-1,36-1。合成的多肽为KQTARCSTGGK，K表示赖氨酸(lysine)、Q表示谷氨酰胺(glutamine)、T表示苏氨酸(threonine)、A表示丙氨酸(alanine)、R表示精氨酸(arginie)、C表示半胱氨酸(cysteine)、S表示丝氨酸(serine)、G表示甘氨酸(glycine)。

[0243] 合成多肽后的基本骨架如下：

[0244]

[0245] 其中，多肽的及基本结构中R的定义与表2中完全相同，编号见表3：

[0246]

[0247] 质谱数据：

[0248] 24-1理论值：1220.67实测值：[M+2H]2+611.65

[0249] 25-1理论值：1234.68实测值：[M+2H]2+618.70

[0250] 26-1理论值：1248.70实测值：[M+2H]2+625.70

[0251] 27-1理论值：1276.73实测值：[M+2H]2+639.70

[0252] 28-1理论值：1304.76实测值：[M+2H]2+653.60

[0253] 29-1理论值：1332.79实测值：[M+2H]2+667.75

[0254] 30-1理论值：1360.82实测值：[M+2H]2+681.80

[0255] 31-1理论值：1402.87实测值：[M+2H]2+702.90

[0256] 32-1理论值：1278.67实测值：[M+2H]2+640.65

[0257] 33-1理论值：1292.69实测值：[M+2H]2+647.65

[0258] 34-1理论值：1306.70实测值：[M+2H]2+654.45

[0259] 35-1理论值：1296.70实测值：[M+2H]2+649.75

[0260] 36-1理论值：1341.68实测值：[M+2H]2+671.84.

[0261] 实验例3：

[0262] 活性筛选

[0263] 已有的Sirtuins亚型为1、2、3、5、6，相对应的1、2、3亚型的底物多肽H3K9AcWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)；5的底物多肽H3K9SuWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)；6的底物多肽H3K9MyWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)。

[0264] 6.1SIRT1、2、3酶反应

[0265] 底物多肽H3K9AcWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)，与SIRT1、2、3(1μM)含有DTT(1mM)的TrispH7.4(20mM)溶液中37℃反应分别为45min、10min、30min。阳性组在反应过程中加入待测药物组分，初步筛选药物浓度用100μM。设两个阴性对照组，一组未加入筛选药物，一组未加入SIRT1、2、3蛋白。反应45min、10min、30min后所有组分均用盐酸/醋酸溶液进行淬灭反应。高速离心12000×g送HPLC待测。

[0266] 6.2SIRT5酶反应

[0267] 底物多肽H3K9SuWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)，与SIRT5(1μM)在含有DTT(1mM)的Tris pH 7.4(20mM)溶液中37℃反应15min。阳性组在反应过程中加入待测药物组分，初步筛选药物浓度选用100μM。设两个阴性对照组，一组未加入筛选药物，一组未加入SIRT5蛋白。反应15min后所有分组均用盐酸/醋酸溶液进行淬灭反应。高速离心12000×g送HPLC待测。

[0268] 6.3SIRT6酶反应

[0269] 底物多肽H3K9MyWW(200μM)及其辅酶NAD(1mM)，与SIRT6(1μM)含有DTT(1mM)的TrispH7.4(20mM)溶液中37℃反应分别为45min。阳性组在反应过程中加入待测药物组分，初步筛选药物浓度用100μM。设两个阴性对照组，一组未加入筛选药物，一组未加入SIRT6蛋白。反应45min后所有组分均用盐酸/醋酸溶液进行淬灭反应。高速离心12000×g送HPLC待测。

[0270] 当Sirtuin以H3K9AcWW为底物进行酶活反应后，再运用HPLC进行活性检测，去乙酰化的产物H3K9WW先于底物H3K9AcWW出峰，再比较两者的峰面积计算收率，评估Sirtuin在化合物作用下的酶活性，比较各化合物的抑制活性。

[0271] 6.4筛选结果

[0272] 选取小分子类抑制剂进行活性筛选，初筛浓度为100μM，初步筛选结果如表4所示：

[0273] 表4对Sirtuin各亚型的抑制率

[0274]

[0275]

[0276] 由此可知，在100μM浓度下，针对SIRT1蛋白，化合物9、10、11和12、有明显抑制作用，其中化合物10和11抑制率低于50％；对于SIRT2，化合物9～13有抑制作用，其中化合物10的抑制作用最好；对于SIRT3化合物10抑制率达到38％；对于SIRT5化合物16～20有抑制作用，其中16、17抑制效果最明显；对于SIRT6，具有长链的化合物13～15具有抑制作用。化合物10、11更加证实了SIRT1～SIRT3强烈的去乙酰化作用而SIRT5和SIRT6的微弱的去乙酰化作用；带有羧基结构的化合物16～18明显对SIRT5更具抑制作用，长链脂肪链酰胺对SIRT6的选择性也高于其他Sirtuin亚型，这说明该类化合物更具选择性。且对各蛋白具有抑制作用，可用于对Sirtuin选择性强、高效低毒的Sirtuin抑制剂类抗肿瘤药物。

[0277] 在浓度为100μM时，多肽类化合物的抑制率远远超过小分子类，所以逐步降低筛选浓度，最后选取最低抑制浓度5μM，抑制率见表5：

[0278] 表5 24-1～36-1号化合物对Sirtuin各亚型的抑制活性

[0279]

[0280] 由表4可知，在100μM浓度下，针对SIRT1～SIRT3蛋白，化合物10、11有明显抑制作用，抑制率高于50％，但与表5相比，在5μM浓度下，25-1、26-1、27-1就能达到近50的抑制率，多肽类化合物的抑制效果显而易见；对于SIRT5蛋白，它具有微弱的去乙酰化活性，相反具有很强的去琥珀酰和丙二酰化活性，所以，相对应的化合物16～18对其有抑制作用，其中16、17抑制效果较为明显，在表5中，5μM浓度下，化合物32-1～34-1对其抑制活性近60％；对于SIRT6蛋白，具有长链的化合物13～15具有抑制作用，在5μM浓度下29-1、30-1、31-1抑制效果更为明显。化合物10、11、25-1、26-1、27-1更加证实了SIRT1～SIRT3强烈的去乙酰化作用而SIRT5和SIRT6的微弱的去乙酰化作用；带有羧基结构的化合物16～18、32-1～34-1明显对SIRT5更具抑制作用，长链脂肪链酰胺对SIRT6的选择性也高于其他Sirtuin亚型，这说明所设计合成的化合物更具选择性，且对各蛋白具有抑制作用，可用于对Sirtuin选择性强、高效低毒的Sirtuin抑制剂类抗肿瘤药物。