一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法

摘要

本发明涉及种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，属于水产品加工及保健品技术领域。本发明中的方法包括如下步骤：对鱼油进行预处理，然后在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，所述鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:(200～1000):(0.5～2)，混匀后进行低温结晶，真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，然后除去未结晶液体中的有机溶剂和助晶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，设备简单，操作简便，单次处理量大，成本低，有效成分不易发生氧化、异构化、聚和等反应，能够较好的保持EPA、DHA的天然活性。

权利要求

1.一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：对鱼油进行预处理，然后在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，所述鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:(200～1000):(0.5～2)，混匀后进行低温结晶，真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，除去未结晶液体中的有机溶剂和助晶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。

2.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述鱼油为乙酯型鱼油。

3.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述预处理为将鱼油在30～50℃下加热5～30min。

4.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为甲醇、无水乙醇、丙酮和正己烷中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述有机溶剂中含有质量百分比为0.8～1.2％的柠檬酸。

6.根据权利要求1、4或5所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述有机溶剂为体积比为(6～12):1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，所述有机溶剂中还含有质量百分比为0.9～1.1％的柠檬酸。

7.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述助晶剂为硅藻土、白土中的一种或两种。

8.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述低温结晶在超声波搅拌中进行，所述超声波搅拌的超声功率300～500w，搅拌速率n＝15～30r/min。

9.根据权利要求1所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述低温结晶包括第一阶段和第二阶段，第一阶段降温至-10～5℃，保温结晶3～4h，第二阶段降温至-

30～-50℃，保温结晶2.5～3.5h。

10.根据权利要求9所述的低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，其特征在于，所述第一阶段的降温速率为1.0～1.5℃/min，所述第二阶段的降温速率为1.3～1.8℃/min。

说明书

一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法

技术领域

[0001] 本发明属于水产品加工及保健品技术领域，涉及一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法。

背景技术

[0002] 如今，中国已经成长为全球第三大EPA和DHA油市场，DHA+EPA已经取得新资源食品认证，且即将纳入DRI，将有利于进一步提高消费者的认知度。随着我国消费者收入、受教育程度以及健康意识逐年提高，对EPA、DHA预防动脉粥样硬化和心血管疾病、防癌抗癌、改善大脑机能、提高记忆力、促进婴幼儿智力发育等生理功能有了普遍的认识，尤其是近几年我国老龄化人口的增加，势必将给EPA和DHA产品带来新的市场机遇。

[0003] EPA和DHA属于n-3系列多不饱和脂肪酸，对人体具有重要的保健作用，鱼油因富含n-3系列多不饱和脂肪酸尤其是EPA和DHA多年来一直是国内外研究的热点之一。

[0004] 目前，分离富集鱼油中多不饱和脂肪酸的方法主要有低温溶剂结晶法、尿素包合、超临界CO2萃取、分子蒸馏、酶浓缩法等。其中，低温结晶法具有操作简便，对仪器设备的要求低，且在低温环境下能够较好的保持不饱和脂肪酸的天然活性，分离效果较好等优点。袁晓艳等将混合脂肪酸以1：3(酸∶溶剂)溶解在石油醚中，冷却至5～7℃，结晶出饱和脂肪酸，再经抽滤、蒸馏得到不饱和脂肪酸，产率可达80％，可见低温结晶法具有一定的富集效果(袁晓艳，等.亚麻油中分离不饱和脂肪酸方法的研究[J].辽宁科技学院学报，2005，7(4)：12-13)。

[0005] 到目前为止，关于富集鱼油多不饱和脂肪酸的报道很多，工业化生产乙酯化鱼油绝大多采用尿素包合与分子蒸馏联合的方法，几十年来没有突破。尿素包合法具有设备简单，条件温和，成本低，能比较完全的保留有效成分生理活性等优点，但是需耗费大量溶剂，存在溶剂回收和环境污染问题，不能将EPA和DHA分离。为提高产率，一般采用多次尿素包合法或与分子蒸馏技术结合使用。分子蒸馏技术分离纯化工艺相对繁琐，比如需要多级纯化，如何实现连续进料，固体进料高温加热时对物料降解的影响等。超临界萃取技术具有低温、高压、隔绝空气的特点，特别适用于热敏物质和易氧化物质的分离，它可以充分保护鱼油的品质不受破坏，产品品质较好，但此方法对设备要求高，能耗大，

[0006] 而关于低温结晶法富集鱼油EPA/DHA的具体工艺研究未见报道，更难以找到相关条件参数作为参考，因此探索更多的富集方法，寻求更多的可能性，对于未来鱼油行业的升级改革十分重要。

发明内容

[0007] 本发明的目的是针对现有技术存在的上述问题，提出了一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，设备简单，操作简便，单次处理量大，成本低，有效成分不易发生氧化、异构化、聚和等反应，能够较好的保持EPA、DHA的天然活性。

[0008] 本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，所述方法包括如下步骤：

[0009] 对鱼油进行预处理，然后在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，所述鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:(200～1000):(0.5～2)，混匀后进行低温结晶，真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，然后除去未结晶液体中的有机溶剂和助晶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。

[0010] 本发明通过低温结晶法对鱼油中的EPA、DHA进行富集，操作简便，对仪器设备的要求低，单次处理量大，分离效果较好，且在低温环境下能够较好的保持EPA、DHA的天然活性。在低温结晶过程中，有机溶剂的加入提高了液相比例和结晶体的自由度，使得后期从未结晶液体中过滤分离结晶体容易进行。助晶剂的加入促进了结晶的进行，减小了结晶需要的过冷度，提高了结晶温度，减少了结晶时间。有机溶剂的用量与原料油中饱和脂肪酸的含量有关，用量过少，就不能全部结晶析出，用量过多，则可能导致原料油过分稀释影响结晶体的粒度和分布，使形成的结晶体粒度过小，过小的晶粒会吸附较多的EPA、DHA，降低分离效率，同时还造成溶剂的浪费，因此将鱼油与有机溶剂的比例限定在上述范围内。冷冻形成的饱和脂肪酸结晶结构强度有限，真空抽滤分离结晶体和未结晶液体可尽量避免絮流剪切，减少对结晶体的破坏。

[0011] 作为优选，所述鱼油为乙酯型鱼油。

[0012] 作为优选，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为50～70％。

[0013] 作为优选，所述预处理为将鱼油在30～50℃下加热5～30min。

[0014] 在鱼油的加工、储藏和运输等加工过程中，往往会形成不匀晶核，不利于低温结晶过程中晶核的形成，因此在低温结晶前必须将不均匀晶核破坏。在30～50℃下加热处理5～30min能将鱼油完全融化从而破坏其中的不匀晶核。

[0015] 作为优选，所述的有机溶剂为甲醇、无水乙醇、丙酮和正己烷中的一种或几种。

[0016] 在低温结晶分离时，要求鱼油脂肪酸中的饱和酸和一烯酸、二烯酸等低不饱和度脂肪酸以晶体形式析出，而EPA与DHA仍留在溶液中，上述有机溶剂在较低温度时，仍对EPA和DHA有较好的溶解性，确保EPA和DHA尽量多地保留在溶液中。

[0017] 作为优选，所述有机溶剂中含有质量百分比为0.8～1.2％的柠檬酸。

[0018] 少量柠檬酸的添加能促进在低温条件下EPA与DHA的快速结晶和晶粒的细化，提高结晶效率。

[0019] 作为优选，所述有机溶剂为体积比为(6～12):1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，所述有机溶剂中还含有质量百分比为0.9～1.1％的柠檬酸。

[0020] 甲醇去除饱和脂肪酸的效果即对EPA和DHA的富集效果最好，无水乙醇次之，无水乙醇对低不饱和脂肪酸的去除效果较好，乙醇无毒，并具有价格便宜、挥发性小、闪点高等优点，但是黏度相对较大，结晶所需温度低。综合考虑，选择复配甲醇和无水乙醇作为低温结晶处理的溶剂。

[0021] 作为优选，所述助晶剂为硅藻土、白土中的一种或两种。

[0022] 硅藻土、白土具有巨大的表面积，本发明在低温结晶过程中添加少量的硅藻土、白土，可以为鱼油中饱和脂肪酸成核提供较大的活化表面，降低成核自由能，使结晶体形成紧密有序的结构，加速后续晶体在其表面上生长。且硅藻土和白土在后续过程中通过离心处理即可除去，安全无毒。助晶剂添加量过少，生成的晶核数目少，结晶速率小，促进结晶的作用不明显；添加量过多，会因为过多异相杂质的存在影响饱和脂肪酸分子的运动，使得饱和脂肪酸分子向结晶前沿的扩散能力减弱，降低结晶速率。

[0023] 作为优选，所述低温结晶在超声波搅拌中进行，所述超声波搅拌的超声功率300～500w，搅拌速率n＝15～30r/min

[0024] 用超声波处理过冷条件下的鱼油，会因超声波的絮凝作用形成大量晶核，超声波的空化作用又将形成的晶核击碎形成新的结晶中心，促进第二次成核，加速饱和脂肪酸结晶，缩短结晶诱导时间，改变晶体形态，使得结晶颗粒细小均匀，硬度增加。搅拌力度不够，会产生局部晶核，搅拌太剧烈，会使结晶撕碎，因此应控制适当的搅拌速度。结晶养晶过程中应保持持续慢速搅拌，有利于提高传热效率和结晶体的成长。

[0025] 作为优选，所述低温结晶包括第一阶段和第二阶段，第一阶段降温至-10～5℃，保温结晶3～4h，第二阶段降温至-30～-50℃，保温结晶2.5～3.5h。

[0026] 温度是脂肪酸结晶形成和分离的关键因素之一，温度太高，难以将热量从溶剂和鱼油与的混合物中传递环境中去，无法形成良好的过冷度，结晶核的形成受到限制，低温结晶后的未结晶液体中除了EPA、DHA外，仍含有大量其他组分，导致EPA、DHA比例降低。适当的结晶温度，有利于饱和脂肪酸形成结晶。但温度过低，会使EPA、DHA迁移至晶核，最终以结晶析出，降低EPA、DHA的富集率，且可能会导致形成的结晶较大而难以过滤，同时温度的降低会增加能耗，因此本发明将结晶温度控制在上述范围内。

[0027] 结晶的过程分两步进行，晶核的生长和晶体增长，一旦形成晶核，晶体即开始增长。只要系统未达到饱和，温度未过冷，脂肪酸分子还具有较高流动性形成晶体，晶体将持续形成直到系统达到平衡。晶体的生长需要一定时间，因此结晶时间是一个很重要的因素。结晶时间不足，结晶不完全，一些饱和脂肪酸成分仍然存在于有机溶剂中，降低最终产品中EPA、DHA的比例；而结晶时间过长，可能导致部分EPA、DHA成分趋于结晶，导致EPA、DHA含量的降低。因此本发明将结晶时间控制在上述范围内。

[0028] 本发明低温结晶的过程分两阶段进行，在结晶温度逐渐降低的过程中，降低到-10～5℃时，鱼油中饱和脂肪酸的结晶率增加迅速，温度再降低时，结晶率增速放缓，直到降低到-30～-50℃时，结晶率的增速再次加快，说明在-10～5℃和-30～-50℃时，鱼油中饱和脂肪酸结晶率较高。因此，本发明采用分段式结晶的方法，先在-10～5℃进行第一阶段的结晶，使此阶段内能够结晶的饱和脂肪酸充分结晶，再在-30～-50℃进行第二阶段的结晶，第一阶段的结晶降低了第二阶段结晶的压力，有助于能耗的降低，并且第一阶段的结晶可以作为第二阶段结晶的晶核，有助于第二阶段结晶的进行。

[0029] 作为优选，所述第一阶段的降温速率为1～1.5℃/min，所述第二阶段的降温速率为1.3～1.8℃/min。

[0030] 结晶体和为结晶液体的分离过程中，结晶体的晶型影响分离效果、最稳定晶型的获得由冷却速率和结晶温度决定。温差较大的急剧冷却易形成无法分离的玻璃质结晶体，采用合适的冷却速率缓慢冷却至结晶温度，才能获得相应的晶型。本发明在第一阶段采用较低的降温速率，有助于晶核的形成的晶体的初步生长，在第二阶段采用较快的降温速率有助于晶体的快速形成，从而提高结晶效率。

[0031] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明以乙酯型鱼油为原料，通过低温结晶法富集EPA、DHA，合理选择有机溶剂和助晶剂，并优化其工艺参数，分离富集得到高含量EPA、DHA的鱼油；操作简便，对仪器设备的要求低，单次处理量大，分离效果较好，且在低温环境下能够较好的保持EPA、DHA的天然活性，对鱼油的深加工利用和多不饱和脂肪酸系列保健品的开发有重要的参考意义。

具体实施方式

[0032] 以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

[0033] 下面通过具体实施例1～12对本发明中的富集鱼油EPA、DHA的方法作进一步解释。

[0034] 实施例1

[0035] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0036] 将乙酯型鱼油在30℃下加热30min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为50％；

[0037] 在鱼油中加入甲醇和硅藻土，鱼油、甲醇和硅藻土的质量比为100:200:0.5，混匀形成混合物；

[0038] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.0℃/min的速率降温至5℃，保温结晶3h，再以1.3℃/min的速率降温至-30℃，保温结晶2.5h，超声功率300w，搅拌速率n＝15r/min；

[0039] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为87.53％。

[0040] 实施例2

[0041] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0042] 将乙酯型鱼油在35℃下加热25min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为55％；

[0043] 在鱼油中加入无水乙醇和白土，鱼油、无水乙醇和白土的质量比为100:400:1，混匀形成混合物；

[0044] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.3℃/min的速率降温至0℃，保温结晶3.5h，再以1.5℃/min的速率降温至-35℃，保温结晶3h，超声功率350w，搅拌速率n＝20r/min；

[0045] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为87.62％。

[0046] 实施例3

[0047] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0048] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％；

[0049] 在鱼油中加入丙酮和硅藻土，鱼油、丙酮和硅藻土的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物；

[0050] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.5℃/min的速率降温至-3℃，保温结晶4h，再以1.8℃/min的速率降温至-40℃，保温结晶3.5h，超声功率400w，搅拌速率n＝25r/min；

[0051] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为88.87％。

[0052] 实施例4

[0053] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0054] 将乙酯型鱼油在40℃下加热10min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为70％；

[0055] 在鱼油中加入正己烷和白土，鱼油、正己烷和白土的质量比为100:800:2，混匀形成混合物；

[0056] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.4℃/min的速率降温至-5℃，保温结晶3.5h，再以1.7℃/min的速率降温至-45℃，保温结晶3h，超声功率450w，搅拌速率n＝30r/min；

[0057] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为89.71％。

[0058] 实施例5

[0059] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0060] 将乙酯型鱼油在50℃下加热5min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为65％；

[0061] 在鱼油中加入有机溶剂和硅藻土，鱼油、有机溶剂和硅藻土的质量比为100:1000:2，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为6:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂；

[0062] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.3℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.6℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率500w，搅拌速率n＝25r/min；

[0063] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为89.63％。

[0064] 实施例6

[0065] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0066] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％；

[0067] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0068] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.3℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.7℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0069] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为89.20％。

[0070] 实施例7

[0071] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤：

[0072] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％；

[0073] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为12:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，助晶剂为质量比为1:1的硅藻土和白土的混合物；

[0074] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.2℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.6℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0075] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为89.21％。

[0076] 实施例8

[0077] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％：

[0078] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min；

[0079] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，有机溶剂中含有质量百分比为0.8％的柠檬酸，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0080] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.2℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.6℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0081] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为90.02％。

[0082] 实施例9

[0083] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％：

[0084] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min；

[0085] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，有机溶剂中含有质量百分比为0.9％的柠檬酸，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0086] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.3℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.8℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0087] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为90.11％。

[0088] 实施例10

[0089] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％：

[0090] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min；

[0091] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，有机溶剂中含有质量百分比为1.0％的柠檬酸，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0092] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.1℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.6℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0093] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为92.00％。

[0094] 实施例11

[0095] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％：

[0096] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min；

[0097] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，有机溶剂中含有质量百分比为1.1％的柠檬酸，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0098] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.3℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.7℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0099] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为91.65％。

[0100] 实施例12

[0101] 本发明中低温结晶富集鱼油EPA、DHA的方法，包括如下步骤，乙酯化鱼油中的EPA、DHA质量百分比含量为60％：

[0102] 将乙酯型鱼油在40℃下加热20min；

[0103] 在鱼油中加入有机溶剂和助晶剂，鱼油、有机溶剂和助晶剂的质量比为100:600:1.5，混匀形成混合物，有机溶剂为体积比为9:1的甲醇和无水乙醇的混合溶剂，有机溶剂中含有质量百分比为1.2％的柠檬酸，助晶剂为质量比为2:1的硅藻土和白土的混合物；

[0104] 将混合物放置低温设备中，在超声波搅拌的同时先以1.2℃/min的速率降温至-10℃，保温结晶3.5h，再以1.5℃/min的速率降温至-50℃，保温结晶3h，超声功率400w，搅拌速率n＝20r/min；

[0105] 低温结晶后真空抽滤分离结晶体和未结晶液体，离心除去未结晶液体中的助晶剂，分子蒸馏除去未结晶液体中的有机溶剂，即得富集后的鱼油EPA、DHA。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为91.86％。

[0106] 对比例1

[0107] 富集过程中未添加助晶剂，其他与实施例10相同。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为83.16％。

[0108] 对比例2

[0109] 低温冷冻过程中，在超声波搅拌的同时以18℃/min的速率降温至-30℃，保温结晶5.5h，其他与实施例10相同。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为
83.93％。

[0110] 对比例3

[0111] 低温冷冻过程中，未使用超声波，其他与实施例10相同。经检测，富集后的鱼油EPA、DHA中EPA和DHA的总含量为86.19％。

[0112] 综上所述，本发明以乙酯型鱼油为原料，通过低温结晶法富集EPA、DHA，在富集的过程中，合理优化其工艺参数；添加有硅藻土和白土作为助晶剂，增加异相成核的比例，降低过冷度，提高结晶温度；并辅以超声波搅拌，增加结晶效率；结晶过程中采用两段式结晶方法，降低结晶能耗，增加结晶效率；该方法操作简便，对仪器设备的要求低，单次处理量大，分离效果较好，且在低温环境下能够较好的保持EPA、DHA的天然活性。

[0113] 本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。