含有异吲哚啉片段的3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物及其制备方法

摘要

本发明涉及式(I)所示含有异吲哚啉片段的3，5‑二硝基苯甲酰胺类化合物，其制备方法和医药用途以及以其为有效成分的抗结核药物组合物。更具体地讲，本发明涉及N‑(异吲哚啉‑5‑基甲基)‑3，5‑二硝基苯甲酰胺类化合物，其异吲哚啉片段中的2‑位N原子直接与芳香(杂)环片段相连或通过次甲基与芳香(杂)环片段相连，其中，式(I)中n代表0、1；W代表芳香(杂)环片段。

权利要求

1.式(I)所示化合物，

其中：

n代表0、1；

W选自以下芳香(杂)环片段：

其中，R代表H、F、Cl、Br、CF3、OCF3、OCH3、CN、NO2。

2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物，其特征在于，其化合物为：

3，5-二硝基-N-[(2-苄基异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(2-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(3-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-氯苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-溴苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-氰基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(2，3-二氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(2-溴-4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(3-溴-4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(3，5-二(三氟甲基)苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苯基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(噁唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(噻唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-3-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-4-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

3，5-二硝基-N-[(2-(嘧啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺。

3.一种制备权利要求1或2所述式(I)化合物的方法，其特征在于，其包括如下步骤：将式(Ⅱ)化合物与式(III)化合物，在非极性溶剂存在下并加入缩合剂双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯，用过量的式(III)化合物来满足需要，在-5℃～40℃，有或无压力条件下搅拌反应2.5～30小时，得式(I)化合物，其中：

n和W的定义同权利要求1。

4.根据权利要求3所述式(I)化合物的制备方法，其特征在于，所述的非极性溶剂选自:二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、或环己烷中一种或多种。

5.权利要求1或2所述式(I)所示化合物在制备治疗结核病的药物中的应用。

6.含有权利要求1或2所述化合物的组合物在制备治疗结核病的药物中的应用。

7.权利要求5或6的应用，其特征在于，所述结核病选自：活动性结核病、单耐药结核病、多耐药结核病以及广泛耐多药结核病。

8.权利要求5或6的应用，其特征在于，所述结核病包括肺结核、肺外结核。

9.一种药物组合物，以权利要求1或2所述化合物为活性成分。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物制备成任何可药用的剂型，剂型选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉针剂、注射剂。

说明书

含有异吲哚啉片段的3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物及其制备

方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药化学领域，涉及具有抗结核活性的含有异吲哚啉片段的3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物及其制备方法，以及含有它们的抗结核药物组合物；更具体地讲，本发明涉及的一类N-(异吲哚啉-5-基甲基)-3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物，其异吲哚啉片段中的2-位N原子直接与芳香(杂)环片段相连或通过次甲基与芳香(杂)环片段相连。

背景技术

[0002] 结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)引起的严重危害人类健康的重大传染病之一。从20世纪80年代开始，耐药TB，尤其是耐多药TB(MDR-TB)的发病率不断上升以及TB与HIV/AIDS相结合使TB疫情再度上升，成为全球关注的重大公共卫生问题和社会问题。据统计，全球每年有800万新增TB患者，近300万人死于结核，近1/3人口携带潜伏态结核杆菌，具有潜在的发病危险。传统的抗TB药物，如链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺等联合用药可使85％以上的初治肺结核患者痊愈，但存在治疗周期长(大于6个月)且对MDR-TB无效的缺点，同时对潜伏态MTB的作用不强，因此研发抗TB新药，实现对TB的有效治疗与控制迫在眉睫(国外医药-抗生素分册2009，30(1)：19-24)。

[0003] 值得庆幸的是，作为近40年来第1个具有全新作用机制的抗TB新药贝达喹啉(Bedaquiline,ATP合成酶抑制剂)先后被美国FDA(2012年12月)和欧洲药监局(EMA,2014年3月)批准用于临床治疗MDR-TB。另一个具有全新作用机制的抗TB新药-德拉曼尼(Delamanid，干扰MTB细胞壁的新陈代谢)于2014年4月被EMA批准与优化的背景方案联合治疗MDR-TB。受此鼓舞，近年来全球多个大制药公司及研究单位加大了对抗结核新药的研发力度，并已公开报道若干具有不同作用机制的抗结核候选化合物。这些候选化合物目前或处于临床试验阶段或处于临床前研究阶段。

[0004]

[0005] 2013年，韩国科学家Pethe等公开了N-(苄基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-酰胺类化合物及其候选物Q203的合成与抗结核活性(Nat Med,2013,19(9):1157-1161)。Q203于2016年8月进入临床I期研究阶段。

[0006]

[0007] 2011年，瑞士科学家马卡洛瓦等公开了一类2-位取代基为哌嗪-1-基的4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮类化合物的合成与抗结核活性(CN 201180055813.5)。其代表物PBTZ169具有优秀的体内外广谱抗结核活性(EMBO Mol Med，2014，6：372–383)。PBTZ169于2017年进入II期临床研究。

[0008]

[0009] 2014年，中国学者刘明亮等公开了一类N-苄基苯甲酰胺类化合物(IMB)及其制备方法(CN 201610968986.0)。尽管其中部分化合物显示良好的体外抗结核活性，但进一步研究发现，这类化合物的水溶性很差，并由此导致其药代动力学性质不尽如人意，故没有深入研究价值。

[0010]

[0011] 本发明人进行了广泛的研究，将IMB中与酰胺N原子相连的苄基用异吲哚啉-5-基甲基替代，设计合成了N-(异吲哚啉-5-基甲基)-3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物，并测定了它们的抗结核活性及水溶性。最终发现，不同于以往文献报道的异吲哚啉片段中的2-位N原子直接与芳香(杂)环片段相连或通过次甲基与芳香(杂)环片段相连的化合物具有意想不到的强抗结核活性，与结构近似的IMB以及一线抗结核药异烟肼和利福平相比，具有更加优越的抗结核活性。更为重要的是，其水溶性显著大于结构近似的IMB化合物。

发明内容

[0012] 本发明的目的是提供一类由通式(I)表示的N-(异吲哚啉-5-基甲基)-3，5-二硝基苯甲酰胺类化合物，

[0013]

[0014] 其中：

[0015] n代表0、1；

[0016] W选自以下芳香(杂)环片段：

[0017]

[0018] 其中，R代表H、F、Cl、Br、CF3、OCF3、OCH3、CN、NO2。

[0019] 本发明具体包括以下化合物：

[0020] 3，5-二硝基-N-[(2-苄基异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0021] 3，5-二硝基-N-[(2-(2-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0022] 3，5-二硝基-N-[(2-(3-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0023] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0024] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氯苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0025] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-溴苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0026] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0027] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0028] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0029] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氰基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0030] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0031] 3，5-二硝基-N-[(2-(2，3-二氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0032] 3，5-二硝基-N-[(2-(2-溴-4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0033] 3，5-二硝基-N-[(2-(3-溴-4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0034] 3，5-二硝基-N-[(2-(3，5-二(三氟甲基)苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0035] 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苯基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0036] 3，5-二硝基-N-[(2-(噁唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0037] 3，5-二硝基-N-[(2-(噻唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0038] 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0039] 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-3-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0040] 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-4-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺；

[0041] 3，5-二硝基-N-[(2-(嘧啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺。

[0042] 本发明还涉及式(I)化合物的制备方法，如反应路线1所示。

[0043] 反应路线1：

[0044]

[0045] 将式(Ⅱ)化合物与式(III)化合物，在非极性溶剂存在下并加入缩合剂双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)，用过量的式(III)化合物来满足需要，在-5℃～40℃，有或无压力条件下搅拌反应2.5～30小时，得式(I)化合物，

[0046] 在反应路线1中，n和W如前述的定义。

[0047] 在非极性溶剂中加入缩合剂，使式(II)化合物与式(III)化合物通过缩合反应来制备式(I)化合物。

[0048] 用于本反应的非极性溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环或环己烷，所述的缩合剂选自双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)。

[0049] 在本发明中用作起始物的式(II)化合物为已知化合物,国内有商品供应。式(III)化合物也为已知化合物,并参考现有出版物中已知的方法可容易地实现，例如Niphakis M J等，Bioorganic and Medicinal Chemistry,2012,20,5893-5900；Rosa A等，ChemSusChem.,(2017),10,842-846；Kai Lv等,ACS Med.Chem.Lett.,2017,8(6):636-641。

[0050] 本发明还提供含有如上所定义的式(I)化合物作为活性成分的抗结核组合物。药物组合物含有的本发明化合物在组合物中的重量比为0.1～99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1～99.9％。药物组合物以适合药用的制剂形式存在。本发明的药物组合物可以制备成任何可药用的剂型。优选的，药用的制剂为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、散剂。

[0051] 本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的本发明化合物的有效量为0.1～1000mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。

[0052] 本发明的药物组合物在制备成粉剂、片剂、可分散粉剂、胶囊、扁囊剂形式的固体药物制剂时，可使用固体载体。可使用的固体载体优选为选自稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、膨胀剂等中的一种或多种物质，或可为包封物质。适宜的固体载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、可可脂等。由于它们易于给药，片剂，粉剂、扁囊剂和胶囊等代表最有利的口服固体制剂。

[0053] 为了易于给药及剂量均一，将上述药物制剂配制成剂量单位形式是特别有利的。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂。

[0054] 虽然剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内。

[0055] 当本发明的式(I)活性化合物用作治疗结核分枝杆菌感染的药物时，优选在第一阶段给以6～14mg/kg体重的量。但给药剂量可随着病人的需要、欲治疗的感染的严重性、所选化合物等而变化。

[0056] 本领域技术人员可按常规方法确定适于某种情况的优选剂量。一般，开始治疗的量低于活性成分的最佳剂量，然后逐渐增加给药剂量，直到达到最佳治疗效果。为方便起见，总的日剂量可分为几部分，分数次给药。

[0057] 本发明还提供式(I)所示化合物或含有该化合物的药物组合物在制备治疗结核病的药物中的应用。

[0058] 本发明所述结核病包括活动性结核病、单耐药结核病、多耐药结核病以及广泛耐多药结核病。

[0059] 本发明所述结核病包括肺结核、肺外结核。

[0060] 如上所述，与CN 201610968986.0中描述的结构近似的化合物相比，本发明化合物的水溶性显著改善，对结核分枝杆菌的体外活性相当于或优于一线抗结核药异烟肼和利福平。例如，实施例4、7、8、9、15、16化合物的水溶性是CN201610968986.0中描述的结构近似的化合物A的40倍以上，对结核分枝杆菌标准株H37Rv ATCC 27294的体外活性相当于或略优于化合物A、异烟肼和利福平,对MDR-MTB 12525(对利福平和异烟肼耐药)的活性是化合物A的1.4->2.8倍。

具体实施方式

[0061] 在以下实施例中，将更加具体地解释本发明。但应理解，下列实施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。

[0062] 实施例1 3，5二硝基-N-[(2-苄基异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺

[0063] 氩气保护下，3,5-二硝基苯甲酸(100mg，0.47mmol)、双(2-氧代-3-恶唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl，144mg，0.56mmol)溶于无水二氯甲烷(DCM，5mL)，向反应液中加入异吲哚-5-基甲胺(84mg,0.56mmol)、三乙胺(130mmL，0.94mmol)，温下搅拌8h。反应结束，水洗(10mLx3),然后有机层用饱和氯化钠溶液洗涤。无水硫酸钠干燥有机层后，过滤、减压浓缩。残余物经柱层析后分离得到白色固体84mg(收率52％)，mp：103-105℃。

[0064] 1H NMR(500MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),9.07(s,2H),7.46-7.39(m,5H),6.95-7.02(m,3H),4.65(s,2H),4.60(brs,4H),3.65(s,2H)。

[0065] MS-ESI(m/z):343.4(M+H)+。

[0066] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C16H14N4O5(M+H)+:343.30616；Found 343.30583。

[0067] 实施例2 3，5-二硝基-N-[(2-(2-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0068] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(2-氟苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率42％)，mp：112-114℃。

[0069] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.95(s,2H),7.35(s,2H),7.18-7.15(m,3H),7.02(s,2H),6.76(brs,1H),4.55(d,J＝5.28Hz,2H),4.91(brs,4H),3.88(s,2H)。

[0070] MS-ESI(m/z):451.4(M+H)+。

[0071] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19FN4O5(M+H)+:451.41916；Found 451.41882。

[0072] 实施例3 3，5-二硝基-N-[(2-(3-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0073] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(3-氟苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率58.1％)，mp：114-116℃。

[0074] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.97(s,2H),7.35(s,1H),7.18-7.15(m,5H),7.02(s,1H),6.76(brs,1H),4.58(d,J＝5.28Hz,2H),4.92(brs,4H),3.88(s,2H)。

[0075] MS-ESI(m/z):451.4(M+H)+。

[0076] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19FN4O5(M+H)+:451.41916；Found 451.41982。

[0077] 实施例4 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0078] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-氟苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率63.1％)，mp：109-111℃。

[0079] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.95(s,2H),7.37(t,J＝6.48Hz,2H),7.18-7.15(m,3H),7.02(d,J＝8.19Hz,2H),6.76(brs,1H),4.55(d,J＝5.30Hz,2H),4.91(brs,
4H),3.88(s,2H)。

[0080] MS-ESI(m/z):451.4(M+H)+。

[0081] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19FN4O5(M+H)+:451.41916；Found 451.41866。

[0082] 实施例5 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氯苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0083] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-氯苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率78.1％)，mp：103-105℃。

[0084] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H),8.97(s,2H),7.38(t,J＝7.21Hz,2H),7.21-7.17(m,3H),7.31(d,J＝7.29Hz,2H),6.86(brs,1H),4.61(d,J＝4.870Hz,2H),4.89(brs,
4H),3.83(s,2H)。

[0085] MS-ESI(m/z):467.4(M+H)+。

[0086] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19ClN4O5(M+H)+:467.87376；Found 467.87426。

[0087] 实施例6 3，5-二硝基-N-[(2-(4-溴苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0088] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-溴苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率68.1％)，mp：121-123℃。

[0089] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.94(s,2H),7.32(t,J＝7.06Hz,2H),7.31-7.22(m,3H),7.41(d,J＝7.31Hz,2H),6.76(brs,1H),4.73(d,J＝4.70Hz,2H),4.83(brs,
4H),3.65(s,2H)。

[0090] MS-ESI(m/z):512.4(M+H)+。

[0091] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19BrN4O5(M+H)+:512.32476；Found 512.32476。

[0092] 实施例7 3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0093] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-三氟甲基苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率62.1％)，mp：172-174℃。

[0094] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.95(s,2H),7.61-7.53(m,4H),7.20-7.17(m,3H),6.72(brs,1H),4.65(d,J＝5.40Hz,2H),3.98-3.95(m,6H)。

[0095] MS-ESI(m/z):501.4(M+H)+。

[0096] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C24H19F3N4O5(M+H)+:501.42667；Found 501.42728。

[0097] 实施例8 3，5-二硝基-N-[(2-(4-三氟甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺

[0098] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-三氟甲基苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率78.1％)，mp：172-174℃。

[0099] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.95(s,2H),7.43(d,J＝7.83Hz,4H),7.19-7.18(m,5H),6.70(brs,1H),4.65(d,J＝5.04Hz,2H),3.92(m,6H)。

[0100] MS-ESI(m/z):517.4(M+H)+。

[0101] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C24H19F3N4O6(M+H)+:517.42607；Found 517.42677。

[0102] 实施例9 3，5-二硝基-N-[(2-(4-甲氧基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0103] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-甲氧基苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率74.1％)，mp：168-170℃。

[0104] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.93(s,2H),7.29(d,J＝8.34Hz,2H),7.16(s,3H),6.87(d,J＝8.36Hz,2H),6.69(brs,1H),4.64(d,J＝5.42Hz,2H),3.88(brs,4H),3.83(s,2H),3.80(s,3H)。

[0105] MS-ESI(m/z):463.4(M+H)+。

[0106] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C24H22N4O6(M+H)+:463.45468；Found 463.45528。

[0107] 实施例10 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氰基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0108] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-氰基苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率68.2％)，mp：168-170℃。

[0109] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.94(s,2H),7.28(d,J＝8.56Hz,2H),7.26(s,3H),6.89(d,J＝8.87Hz,2H),6.72(brs,1H),4.66(d,J＝5.58Hz,2H),3.42(brs,4H),3.85(s,2H)。

[0110] MS-ESI(m/z):458.4(M+H)+。

[0111] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C24H19N5O5(M+H)+:458.43816；Found 458.43747。

[0112] 实施例11 3，5-二硝基-N-[(2-(4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0113] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-硝基苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率66.4％)，mp：158-160℃。

[0114] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.94(s,2H),7.19(d,J＝7.42Hz,2H),7.11(s,3H),6.85(d,J＝8.65Hz,2H),6.62(brs,1H),4.58(d,J＝5.78Hz,2H),3.42(brs,4H),3.95(s,2H)。

[0115] MS-ESI(m/z):478.4(M+H)+。

[0116] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H19N5O7(M+H)+:478.42626；Found 478.423456。

[0117] 实施例12 3，5-二硝基-N-[(2-(2，3-二氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0118] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(2，3-二氟苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率67.4％)，mp：179-181℃。

[0119] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.13(s,1H),8.98(s,2H),7.24(s,1H),7.12(m,2H),6.98(m,2H),6.78(brs,1H),6.71(s,1H),4.61(d,J＝5.28Hz,2H),3.64-3.54(m,4H),2.89(m,2H)。

[0120] MS-ESI(m/z):469.4(M+H)+。

[0121] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H18F2N4O5(M+H)+:469.40963；Found469.40987。

[0122] 实施例13 3，5-二硝基-N-[(2-(2-溴-4-氟苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0123] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(2-溴-4-氟苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率65.4％)，mp：156-158℃。

[0124] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.96(s,2H),7.26(s,1H),7.12(m,2H),6.95(m,2H),6.68(s,1H),6.65(brs,1H),4.58(d,J＝5.42Hz,2H),3.67-3.64(m,4H),2.78(m,2H)。

[0125] MS-ESI(m/z):530.4(M+H)+。

[0126] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H18BrFN4O5(M+H)+:530.31522；Found530.31553。

[0127] 实施例14 3，5-二硝基-N-[(2-(3-溴-4-硝基苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺

[0128] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(3-溴-4-硝基基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到淡黄色固体(收率45.5％)，mp：176-178℃。

[0129] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.96(s,2H),7.27(s,1H),7.22(m,2H),6.90(m,2H),6.72(s,1H),6.68(brs,1H),4.58(d,J＝5.83Hz,2H),3.72-3.66(m,4H),2.78(m,2H)。

[0130] MS-ESI(m/z):557.4(M+H)+。

[0131] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H18BrN5O7(M+H)+:557.32232；Found557.32263。

[0132] 实施例15 3，5-二硝基-N-[(2-(3，5-二(三氟甲基)苄基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺

[0133] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(3，5-二(三氟甲基)苄基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到白色固体(收率62.7％)，mp：158-160℃。

[0134] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,2H),9.07(s,1H),8.02(s,1H),7.56(s,2H),7.21-6.98(m,3H),6.84(brs,1H),4.32(s,2H),3.83(s,4H),3.66(s,2H)。

[0135] MS-ESI(m/z):569.4(M+H)+。

[0136] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C25H18F6N4O5(M+H)+:569.42464；Found569.42452。

[0137] 实施例16 3，5-二硝基-N-[(2-(4-氟苯基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0138] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(4-氟苯基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到白色固体(收率72.3％)，mp：142-144℃。

[0139] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.73(t,J＝7.20Hz,1H),9.07(d,J＝2.60Hz,2H),8.92(t,J＝2.12Hz,1H),7.34-7.32(m,2H),7.28-7.26(m,1H),7.04(t,J＝9.08Hz,2H),6.84(brs,1H),4.55-4.50(m,6H)。

[0140] MS-ESI(m/z):437.4(M+H)+。

[0141] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C22H17FN4O5(M+H)+:437.39258；Found437.39263。

[0142] 实施例17 3，5-二硝基-N-[(2-(噁唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0143] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(噁唑-2-基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到白色固体(收率67.5％)，mp：119-121℃。

[0144] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.13(s,2H),8.98(s,1H),7.68(s,1H),7.12(s,1H),6.98(m,2H),6.71(s,1H),6.64(brs,1H),4.61(d,J＝5.28Hz,2H),3.64-3.54(m,4H)。

[0145] MS-ESI(m/z):410.4(M+H)+。

[0146] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C19H15N5O6(M+H)+:410.35230；Found 410.3525。

[0147] 实施例18 3，5-二硝基-N-[(2-(噻唑-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0148] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(噻唑-2-基)异吲哚-5-基)甲胺反应得到白色固体(收率57.3％)，mp：133-135℃。

[0149] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,2H),8.97(s,1H),8.10(s,1H),7.67(s,1H),7.21(s,1H),6.88(m,2H),6.78(s,1H),4.56(d,J＝5.34Hz,2H),3.68(s,4H)。

[0150] MS-ESI(m/z):426.4(M+H)+。

[0151] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C19H15N5O5S(M+H)+:426.41790；Found426.41734。

[0152] 实施例19 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0153] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(吡啶-2-基)异吲)甲胺反应得到白色固体(收率63.5％)，mp：142-144℃。

[0154] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,2H),8.97(s,1H),8.10(s,1H),7.67(s,1H),7.21(s,1H),6.88(m,2H),6.78(s,1H),6.63(brs,1H),4.62(d,J＝6.03Hz,2H),4.28(s,4H)。

[0155] MS-ESI(m/z):420.4(M+H)+。

[0156] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C21H17N5O5(M+H)+:420.39018；Found 420.39027。

[0157] 实施例20 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-3-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0158] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(吡啶-3-基)异吲)甲胺反应得到白色固体(收率63.5％)，mp：138-140℃。

[0159] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,2H),8.97(s,1H),8.10(s,2H),7.67(s,1H),7.21(s,1H),6.98-6.88(m,3H),6.68(brs,1H),4.56(d,J＝5.34Hz,2H),3.92(s,4H)。

[0160] MS-ESI(m/z):420.4(M+H)+。

[0161] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C21H17N5O5(M+H)+:420.39018；Found 420.39046。

[0162] 实施例21 3，5-二硝基-N-[(2-(吡啶-4-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0163] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(吡啶-4-基)异吲)甲胺反应得到白色固体(收率53.5％)，mp：152-154℃。

[0164] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.14(s,2H),8.97(s,1H),8.10(s,2H),8.07(s,1H),7.21(s,2H),6.94-6.89(m,3H),6.67(brs,1H),4.76(d,J＝5.54Hz,2H),4.43(s,4H)。

[0165] MS-ESI(m/z):420.4(M+H)+。

[0166] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C21H17N5O5(M+H)+:420.39018；Found 420.39066。

[0167] 实施例22 3，5-二硝基-N-[(2-(嘧啶-2-基)异吲哚啉-5-基)甲基]苯甲酰胺[0168] 同实施例1化合物的制备方法，3,5-二硝基苯甲酸与2-(嘧啶-2-基)异吲)甲胺反应得到白色固体(收率47.3％)，mp：172-174℃。

[0169] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.12(s,2H),9.02(s,1H),8.43(s,2H),7.08(s,1H),6.98-6.88(m,3H),6.73(brs,1H),4.32(s,2H),4.27(s,4H)。

[0170] MS-ESI(m/z):421.4(M+H)+。

[0171] HRMS-ESI:m/z Calcd.for C20H16N6O5(M+H)+:421.37824；Found 421.37864。

[0172] 生物实施例1

[0173] 体外抗分枝杆菌活性试验

[0174] 本发明化合物的抗结核活性是通过测定其对结核分枝杆菌标准株MTB H37Rv ATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 12525(对利福平和异烟肼耐药)的最小抑菌浓度(MIC,μg/mL)来表示的。在该试验中，以一线抗结核药异烟肼和利福平作对照药。最小抑菌浓度按如下方法测定：无菌48孔板(结核菌快速药敏专用微量培养板)，按药敏试验设计要求，各孔分别加入用2倍浓度培养基(改良米氏7H9液体培养基)稀释的药物。各化合物制成适当浓度的的初溶液，用培养基(2×)稀释成各所用化合物的二倍浓度，每种化合物各10个梯度，加入48孔板每孔100μL，试验药的终浓度分别为8、4、2……0.015μg/mL。标准株H37Rv ATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 12525，每孔接种100μl，每孔菌量为4×10-3mg。每板均设2个不含抗菌药的生长阳性对照孔和两个以蒸馏水替代培养基的生长阴性对照孔，将48孔板加盖后周围用透明胶带密封，置于湿盒37℃孵育。第3天后观察阳性生长对照孔和阴性生长对照孔，观察到两者有明确差别时，对各个试验孔细菌生长的数量和形态进行观察，判定抑制或耐药并记录结果，第7天后再观察记录一次进行确认。无菌生长的对照孔中所含药物最小的浓度即为最小抑菌浓度(MIC)。

[0175] 表1列出了本申请的式(Ⅰ)化合物中的若干化合物的水溶性及对MTB H37Rv ATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 12525的体外活性，并与CN 201610968986.0中描述的结构近似的代表化合物A(实施例10化合物)进行比较。

[0176] 表1部分实施例化合物的水溶性及对2株结核分枝杆菌的体外活性

[0177]

[0178]

[0179] *平衡溶解度(参考Antimicrob.Agents.Chemother.2004,48,791–798.测定)[0180] **化合物A为CN 201610968986.0中描述的实施例10化合物，即3，5-二硝基-N-[4-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)苄基]苯甲酰胺

[0181] 由表1可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例4、7、8、9、15、16化合物的水溶性(0.87-1.58mg/mL)显著大于CN 201610968986.0中描述的结构近似的化合物A(0.02mg/mL)。另一方面，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例4、7、8、9、15、16化合物对MTB H37Rv ATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 12525均敏感，其对MTB H37Rv ATCC 27294的活性(MIC：
0.0315-0.0625μg/mL)相当于或略优于化合物A、异烟肼和利福平(MIC：0.0625-0.0781μg/mL)，而对MDR-MTB 12525的活性(MIC：<0.016-0.032μg/mL)则优于化合物A(MIC：0.046μg/mL)。

[0182] 上述表中仅列举本发明部分化合物的水溶性及体外活性，本发明其他化合物结构相似，也具有和上述化合物相同或者相近的水溶性及体外活性效果，在此不一一列举。

[0183] 口服急性毒性试验

[0184] 为测定本发明化合物的口服急性毒性，对实施例1化合物和实施例21化合物进行了急性毒性实验，将含不同浓度的这两个化合物的溶液口服给于雄性小鼠，剂量为0.1ml/10g体重，7日后分别记数死鼠量，用Bliss程序计算各化合物的半数致死量(LD50)。结果列于表2中。

[0185] 表2实施例1和21化合物的小鼠口服急性毒性

[0186]实验化合物 LD50(mg/kg)
实施例1 >2000
实施例21 >2000

[0187] 实验结果表明，这些化合物毒性很低，非常适合药用。

[0188] 组合物实施例

[0189] 实施例1、包衣片

[0190] 片芯处方：

[0191]

[0192] 取上述成分混合均匀，制粒后过筛整粒，干燥、压片制成100片片芯。

[0193] 包衣液处方：欧巴代(Opadry)5g，80％乙醇适量包衣。

[0194] 实施例2、胶囊

[0195] 处方：

[0196]

[0197]

[0198] 制备方法：

[0199] 取处方量原辅料，分别过筛，加入5％聚乙烯吡咯烷酮醇液和吐温80制软材，用20目筛制粒，在室温15℃下晾干，加入十二烷基硫酸钠，混合均匀，按0.27g/S装入0号胃溶胶囊，取样化验，溶出限度为Q＝80％，含量应为标示量的90～110％。

[0200] 实施例3、颗粒剂

[0201] 取实施例7的化合物100g，加入适量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分装，即得。

[0202] 实施例4、注射剂

[0203] 取实施例9的化合物150g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值5-7。注射用水稀释至1000ml,用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

[0204] 实施例5、冻干粉针

[0205] 取实施例15的化合物150g加水溶解，另加甘露醇500g加热水溶解，混匀，注射用水稀释至5000ml,用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，冻干即得冻干粉针。

[0206] 实施例6、滴丸

[0207] 取实施例16的化合物20g作为原料药备用；称取滴丸基质200g，加热至80℃融化，搅拌均匀；边搅拌边将原料加入辅料基质中，搅拌30min使之均匀，保持药液温度不低于60℃；将配制好的药液注入滴丸机中，滴成滴丸，即可。

[0208] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。