肺癌检测试纸条、试剂盒及其使用方法转让专利
申请号 : CN201710742812.7
文献号 : CN107688093B
文献日 : 2020-04-07
发明人 : 李红俊 , 韩冀皖 , 陆易仕·阿尔坚德·穆尔
申请人 : 李红俊 , 韩冀皖 , 陆易仕·阿尔坚德·穆尔
摘要 :
本发明涉及生物医疗领域，具体而言，涉及一种肺癌检测试纸条、试剂盒及其使用方法。所述试纸条包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；所述样品吸收垫包被有GM1捕获抗体，所述GM1捕获抗体标有用于显示信号强度的指示剂；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有GM1检测剂，所述GM1检测剂为GM1检测抗体或氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的GM‑TAG蛋白；所述质检区固定包被有GM1捕获抗体对应的二抗。本发明所提供的检测工具适合大规模制造，使用方便，适合广泛普及；有早期发现肺癌的能力，且诊查可靠性强。
权利要求 :
1.试纸条在制备肺癌检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述试纸条包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；
所述样品吸收垫包被有GM1捕获抗体，所述GM1捕获抗体标有用于显示信号强度的指示剂；
所述反应膜上设置有检测区和质检区；
所述检测区固定包被有GM1检测剂，所述GM1检测剂为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的GM-TAG蛋白；
所述质检区固定包被有GM1捕获抗体对应的二抗。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、地高辛标记探针、生物素、电子致密物质、胶体金或酶中的任一种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光物质包括Alexa 350、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 555、Alexa 647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY
650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基罗丹明、6- 羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、6-FAM、丹磺酰氯、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green 488、Oregon Green 500、Oregon Green514、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、双花青苷、La Jolla蓝染料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明异硫氰酸酯、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的任一种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光物质还包括罗丹明绿或罗丹明红。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述显示信号强度的指示剂选自放射性同位素，所述放射性同位素包括110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、
89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、
52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb 和83Sr中的任一种。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
7.根据权利要求1 6任一项所述的应用，其特征在于，所述试纸条外部设置有试纸托。
~
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括风险指示条；
所述风险指示条上记载有检测区所显示的不同信号强度与肺癌风险之间的关系。
说明书 :
肺癌检测试纸条、试剂盒及其使用方法
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医疗领域，具体而言，涉及一种肺癌检测试纸条、试剂盒及其使用方法。
背景技术
[0002] 肺癌(Lung cancer，LC)是世界上最主要的癌症，每年大约有130万人死于肺癌。全国肿瘤登记中心的陈万青等于2016年1月25日在CA Cancer J Clin杂志上发表了2015中国
癌症统计数据。据报告，中国2015年有429.2万例癌症新发病例，281.4万例癌症死亡。肺癌
成为最常见的癌症，也是癌症死亡的首要原因。
癌症统计数据。据报告，中国2015年有429.2万例癌症新发病例，281.4万例癌症死亡。肺癌
成为最常见的癌症，也是癌症死亡的首要原因。
[0003] 由于多种环境变化，包括老龄化，与肺癌相关的健康威胁和死亡可能还会增加。根据细胞学和细胞起源，肺癌可以被划分为多个亚种类。主要类型包括非小细胞癌(NSCLC)和
小细胞癌(SCLC)。
小细胞癌(SCLC)。
[0004] 尽管放射学、外科、以及化学疗法获得了进步，过去30年肺癌的5年生存率基本没有变化，只有15％的病人在最初的诊断后生存5年或者5年以上。这些低的生存率主要是由
于一些同时存在的病症妨碍了早期的诊断，限制了治疗干预的效果。
于一些同时存在的病症妨碍了早期的诊断，限制了治疗干预的效果。
[0005] 目前的低通量诊断方法包括痰涂片、胸部X光以及CT扫描。这些方法只有当病人有特殊症状，例如长期的咳嗽，吐痰，咳血，不适，疼痛或者减重，并前往医院看医生时才使用，因而这些方法并不适合对大量人群进行高通量筛查。另外，这些方法具有较高的假阳性，必
须配合随后的侵入性手段，例如支气管镜或者组织活检，进行确诊。细胞学检测基于细胞形
态，结构和解剖学，可以使用苏木精和曙红染色进行处理。该手段被广泛应用于医疗诊断，
并被作为癌症筛查活检的黄金标准。苏木精给细胞核染色，然后用曙红Y的溶液复染色，曙
红Y给细胞质组分染色，通常包括细胞内和细胞外蛋白质。该染色方法可以用于关键致癌蛋
白的原位测定；例如上皮生长因子受体(EGFR)，细胞周期蛋白D或K-Kas。与这些针对抗癌蛋
白的抗体相关的连接酶，如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)或荧光染料如荧光素
可用于发现在活检中任何癌基因的量或细胞位置。类似地，使用肿瘤抑制物抗体，例如p53
或视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)，可用于发现弱的迹象或改变的细胞位置；这类方法都可以提
示癌变的可能性在增加。虽然这类方法比较成熟，但是速度较慢，不能用于大规模高通量筛
查。
须配合随后的侵入性手段，例如支气管镜或者组织活检，进行确诊。细胞学检测基于细胞形
态，结构和解剖学，可以使用苏木精和曙红染色进行处理。该手段被广泛应用于医疗诊断，
并被作为癌症筛查活检的黄金标准。苏木精给细胞核染色，然后用曙红Y的溶液复染色，曙
红Y给细胞质组分染色，通常包括细胞内和细胞外蛋白质。该染色方法可以用于关键致癌蛋
白的原位测定；例如上皮生长因子受体(EGFR)，细胞周期蛋白D或K-Kas。与这些针对抗癌蛋
白的抗体相关的连接酶，如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)或荧光染料如荧光素
可用于发现在活检中任何癌基因的量或细胞位置。类似地，使用肿瘤抑制物抗体，例如p53
或视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)，可用于发现弱的迹象或改变的细胞位置；这类方法都可以提
示癌变的可能性在增加。虽然这类方法比较成熟，但是速度较慢，不能用于大规模高通量筛
查。
[0006] 许多方法希望能更有效地诊断肺癌。例如，针对可以编码蛋白的核酸，使用特定的引物或者探针来诊断肺癌，其数值被认为可以指示肺癌的状态(即磷脂酰肌醇-聚糖特异性
磷脂酶D；GPLD1)。然而，这种使用蛋白作为肺癌诊断生物标志物的方法还没有商业化的先
例。由于早期肺癌分散于肺的不同位置，任何使用血液进行检测的方法很难检测出早期的
肺癌，因为血液通常反映的是整个循环系统的状况。因此，需要研发一种低成本和有效的方
法用于快速诊断，并且易于经常使用。
磷脂酶D；GPLD1)。然而，这种使用蛋白作为肺癌诊断生物标志物的方法还没有商业化的先
例。由于早期肺癌分散于肺的不同位置，任何使用血液进行检测的方法很难检测出早期的
肺癌，因为血液通常反映的是整个循环系统的状况。因此，需要研发一种低成本和有效的方
法用于快速诊断，并且易于经常使用。
[0007] 有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
[0008] 本发明的目的在于提供一种肺癌检测试纸条、包含该试纸条的试剂盒及其使用方法。
[0009] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0010] 本发明涉及一种肺癌检测试纸条，所述试纸条包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；
[0011] 所述样品吸收垫包被有GM1捕获抗体，所述GM1捕获抗体标有用于显示信号强度的指示剂；
[0012] 所述反应膜上设置有检测区和质检区；
[0013] 所述检测区固定包被有GM1检测剂，所述GM1检测剂为GM1检测抗体或氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的GM-TAG蛋白；
[0014] 所述质检区固定包被有GM1捕获抗体对应的二抗。
[0015] 本发明提供的试纸条用于快速方便地诊断肺癌。基于申请人之前的科学研究，申请人使用痰(从底部呼吸道，特别是气管和支气管咳出的粘液)来进行诊断。这使得检测变
得简单和容易。申请人之前的中英国际研究已经确认了一些化学生物标志物，这使得本发
明提供的方法相对于其他方法可以更快更经济地诊断肺癌，同时病人也不会有不适感。基
于这些生物标志物，申请人开发了用于诊断的工具。
得简单和容易。申请人之前的中英国际研究已经确认了一些化学生物标志物，这使得本发
明提供的方法相对于其他方法可以更快更经济地诊断肺癌，同时病人也不会有不适感。基
于这些生物标志物，申请人开发了用于诊断的工具。
[0016] 在申请人之前的研究中，质谱仪平台可以很容易地从痰样中建立数据库，对这些数据的分析，可以发现临床相关的数据。使用主成分分析和高内涵分析方法，可以将健康的
对照组从那些需要进行进一步肺癌检查的病人们区分出来。虽然随后并不是所有的这些病
人都被确认为肺癌患者，那些疑似肺癌患者具有那些被医生认为与癌症相关的症状，应该
被划分为“非健康”。为了进一步确认区分癌症与非癌症的生物标志物，需要更复杂的数据
挖掘工具。ROC曲线是一个广泛使用的判断生物标志物作用的工具。ROC曲线显示真阳性与
假阳性之间的关系，从而可以决定一个代谢物的使用效果。ROC曲线下的面积可以代表一个
参数的分类性能：肺癌与非肺癌。通过使用ROCCET分析，申请人确定了一系列的LTQ-MS-代
谢物，这些代谢物的AUC值大于0.8，这是一个确认该物质是否有用的临界值。这些代谢物在
癌症痰样中浓度相对较高。
对照组从那些需要进行进一步肺癌检查的病人们区分出来。虽然随后并不是所有的这些病
人都被确认为肺癌患者，那些疑似肺癌患者具有那些被医生认为与癌症相关的症状，应该
被划分为“非健康”。为了进一步确认区分癌症与非癌症的生物标志物，需要更复杂的数据
挖掘工具。ROC曲线是一个广泛使用的判断生物标志物作用的工具。ROC曲线显示真阳性与
假阳性之间的关系，从而可以决定一个代谢物的使用效果。ROC曲线下的面积可以代表一个
参数的分类性能：肺癌与非肺癌。通过使用ROCCET分析，申请人确定了一系列的LTQ-MS-代
谢物，这些代谢物的AUC值大于0.8，这是一个确认该物质是否有用的临界值。这些代谢物在
癌症痰样中浓度相对较高。
[0017] GM1(monosialoganglioside)是含一个唾液酸的神经节苷脂，亦称单唾液酸四已糖神经节苷脂，又称唾液酸糖鞘脂，分子量为1574。GM1主要用于神经组织研究，但是可以在
大多数细胞类型中发现他们参与细胞-细胞识别，细胞-基质附着，细胞生长和细胞分化。申
请人已经发现糖鞘脂在痰中的浓度增加是肺癌早期检测的一个关键生物标志物，准确率在
80％以上。其他有类似的应用，例如与血蓝蛋白相融合在病人组织活检中检测小细胞癌。
大多数细胞类型中发现他们参与细胞-细胞识别，细胞-基质附着，细胞生长和细胞分化。申
请人已经发现糖鞘脂在痰中的浓度增加是肺癌早期检测的一个关键生物标志物，准确率在
80％以上。其他有类似的应用，例如与血蓝蛋白相融合在病人组织活检中检测小细胞癌。
[0018] 糖鞘脂的一个重要特征是它会与某些细菌病原体产生的某些毒素内的基序结合，例如霍乱毒素的B亚基。这与霍乱的致病性相关联，但是GM1结合位点可以与B亚单位蛋白的
其余部分分离，并且丧失致病作用。类似的还有全世界发病率和死亡率的重要因素的肠毒
素性大肠杆菌(ETEC)。ETEC释放的主要毒力因子是热不稳定肠毒素LT，其在结构和功能上
类似于霍乱毒素。LTB结合糖鞘脂，毒素的宿主受体，但与A型血糖和大肠杆菌脂多糖的相互
作用也已经在过去十年中被确认了。
其余部分分离，并且丧失致病作用。类似的还有全世界发病率和死亡率的重要因素的肠毒
素性大肠杆菌(ETEC)。ETEC释放的主要毒力因子是热不稳定肠毒素LT，其在结构和功能上
类似于霍乱毒素。LTB结合糖鞘脂，毒素的宿主受体，但与A型血糖和大肠杆菌脂多糖的相互
作用也已经在过去十年中被确认了。
[0019] 申请人经研究发现了能够与GM1高亲和性结合的蛋白GM-TAG，应当注意，该蛋白质在C-末端具有组氨酸标签(SEQ ID NO:1所示)，这意味着它的分离是经济的。
[0020] 多组氨酸标记的重组蛋白可以在大肠杆菌中方便地表达。可通过离心获取细菌，并将所得细胞沉淀物裂解以释放细胞蛋白质。在含有钴离子的亲和树脂中培育后，将标记
的蛋白质分离，多组氨酸标签以高亲和力与其结合。然后洗涤树脂以除去没有相互作用的
蛋白质。然后可以如下所述进一步应用GM-TAG。
的蛋白质分离，多组氨酸标签以高亲和力与其结合。然后洗涤树脂以除去没有相互作用的
蛋白质。然后可以如下所述进一步应用GM-TAG。
[0021] 优选的，如上所述的肺癌检测试纸条，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、量子点、地高辛标记探针、生物素、放射性同位素、电子致密物质、胶体金或酶中的任一种。
[0022] 优选的，如上所述的肺癌检测试纸条，所述荧光物质包括Alexa 350、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 555、Alexa 647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY
650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、丹磺酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green 488、Oregon Green 500、
Oregon Green514、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、La Jolla蓝染
料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫
醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的任一种。
650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、丹磺酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green 488、Oregon Green 500、
Oregon Green514、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、La Jolla蓝染
料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫
醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的任一种。
[0023] 优选的，如上所述的肺癌检测试纸条，所述放射性同位素包括110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb和83Sr中的任一种。
[0024] 优选的，如上所述的肺癌检测试纸条，所述酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
[0025] 优选的，如上所述的肺癌检测试纸条，所述试纸条外部设置有试纸托。
[0026] 更优选的，所述试纸托包括上壳体和下壳体，所述上壳体与所述下壳体以嵌合的方式在四边密闭形成内部空间，在所述下壳体的上设有定位块，所述定位块依次排列在所
述下壳体的中部，所述定位块的数量为所述试纸条数量加1，相邻两个所述定位块间的距离
与所述试纸条的宽度相同，每一个相邻两个定位块之间的空隙内均设置一个所述试纸条，
在所述上壳体上设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应所有所述试纸条的样品垫，所述观
察窗对应所有所述试纸条的检测线和质控线。
述下壳体的中部，所述定位块的数量为所述试纸条数量加1，相邻两个所述定位块间的距离
与所述试纸条的宽度相同，每一个相邻两个定位块之间的空隙内均设置一个所述试纸条，
在所述上壳体上设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应所有所述试纸条的样品垫，所述观
察窗对应所有所述试纸条的检测线和质控线。
[0027] 根据本发明的一方面，本发明还涉及一种含有如上所述的试纸条的试剂盒。
[0028] 优选的，如上所述的试剂盒，所述试剂盒还包括风险指示条；
[0029] 所述风险指示条上记载有检测区所显示的不同信号强度与肺癌风险之间的关系。
[0030] 所述风险指示条具有与检测区相同的信号类型，例如，当GM1捕获抗体标有辣根过氧化物酶时，检测区和质检区的反应膜处可同时包被辣根过氧化物酶的底物TMB，由于TMB
是辣根过氧化物酶的色原底物，因此当反应为阳性时，检测区和质检区便会出现显色反应，
随之待检测样本中GM1的浓度不同，颜色浓度也随之不同，此时风险指示条可采用比色卡的
形式来提示检测样本中GM1的含量。
是辣根过氧化物酶的色原底物，因此当反应为阳性时，检测区和质检区便会出现显色反应，
随之待检测样本中GM1的浓度不同，颜色浓度也随之不同，此时风险指示条可采用比色卡的
形式来提示检测样本中GM1的含量。
[0031] 根据本发明的一方面，本发明还涉及一种使用如上所述的试纸条或如上所述的试剂盒检测GM1蛋白的方法，包括：
[0032] 将待检测样本滴加在所述样品吸收垫上，待所述样品吸收垫、反应膜与待检测样本反应完全后，在所述质检区具有反应信号的前提下，检测所述检测区的信号强度，并根据
GM1蛋白浓度与信号强度之间的信号关系进行定量。
GM1蛋白浓度与信号强度之间的信号关系进行定量。
[0033] 优选的，如上所述的方法，所述待检测样本为痰或唾液。
[0034] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0035] 1)、本发明所提供的检测工具适合大规模制造；
[0036] 2)、本发明所提供的检测工具易于使用，可以作为日常筛查手段，可以大规模普及使用；
[0037] 3)、本发明所提供的检测工具具有早期发现肺癌的能力；
[0038] 4)、本发明所提供的检测工具具有超过80％以上的较高的诊查可靠性。
附图说明
[0039] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的
附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前
提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前
提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0040] 图1为实施例1的实施方式示意图；GM1在中被简写为GM；
[0041] 图2为实施例2的实施方式示意图；GM1在中被简写为GM。
具体实施方式
[0042] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体
条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为
可以通过市售购买获得的常规产品。
条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为
可以通过市售购买获得的常规产品。
[0043] 实施例1
[0044] 该工具检测唾液或者痰液。它使用附着了抗体(“游离”GM1捕获抗体，图1中左起第一个深色色块)的吸附条。该抗体可以捕获GM1并且标记有相关的酶可以用于检测，典型相
关的酶是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，这些检测会引起颜色变化。吸附条左侧末端附着
干燥的“游离”GM1捕获抗体，添加被测物溶液可以使抗体通过毛细管作用在吸附条上扩散。
关的酶是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，这些检测会引起颜色变化。吸附条左侧末端附着
干燥的“游离”GM1捕获抗体，添加被测物溶液可以使抗体通过毛细管作用在吸附条上扩散。
[0045] 在一个设定的区域，这些抗体与检测区(图1中左起第二个深色色块)接触，这些GM1捕获抗体被固定到试纸条上。检测区的抗体没有相关的酶，且它识别与GM1捕获抗体不
同的抗原表位，因此它将与GM1结合，形成一个三明治区域，包含被固定的GM1检测抗体-
GM1-“游离”的GM1捕获抗体，以及可检测的酶。这样可以有效地将“游离”GM1捕获抗体酶复
合物集中到吸附条的该部分。
同的抗原表位，因此它将与GM1结合，形成一个三明治区域，包含被固定的GM1检测抗体-
GM1-“游离”的GM1捕获抗体，以及可检测的酶。这样可以有效地将“游离”GM1捕获抗体酶复
合物集中到吸附条的该部分。
[0046] 可以通过外源施加测定底物以色彩显示的方式来代表酶活性浓度。或者这些测定底物可以附着到吸附条上，当有样本溶液接触时，这些底物可以溶解释放从而产生作用。
[0047] 检测过程中有一个阳性对照很重要，这已经包含在检测中。一个附加的抗体，即GM1捕获抗体对应的二抗会被附着在吸附条的一个分割开的区域，即质检区(图1中的左起
第三个深色区域)。这个抗体会与GM1捕获抗体结合，不管这个GM1捕获抗体是否已经与GM1
结合。因此，如果这个GM1捕获抗体是在兔子身上培养的，那么在老鼠，山羊或者猪身上培养
的任何与兔子抗体结合的抗体都可以被使用。这样，会将游离的GM1捕获抗体集中到吸附条
的又一个区域。至关重要的是，不管GM1是否存在，酶活性都会在这个绿色区域显现，这样就
可以按照先前的方法检测。
第三个深色区域)。这个抗体会与GM1捕获抗体结合，不管这个GM1捕获抗体是否已经与GM1
结合。因此，如果这个GM1捕获抗体是在兔子身上培养的，那么在老鼠，山羊或者猪身上培养
的任何与兔子抗体结合的抗体都可以被使用。这样，会将游离的GM1捕获抗体集中到吸附条
的又一个区域。至关重要的是，不管GM1是否存在，酶活性都会在这个绿色区域显现，这样就
可以按照先前的方法检测。
[0048] 因此，根据图1，如果检测区和质检区显示颜色，则是阳性结果，如果仅仅质检区显示颜色，则是阴性。检测区的染色深度与GM1数量相关，因此也与肺癌的风险相关。这种相关
性可根据与实现制备的风险指示条进行比对得知，风险指示条上记载有检测区所显示的不
同颜色深度与肺癌风险之间的关系。
性可根据与实现制备的风险指示条进行比对得知，风险指示条上记载有检测区所显示的不
同颜色深度与肺癌风险之间的关系。
[0049] 实施例2
[0050] 在本实施例中，提供了针对实施例1进行改进的一种新型的试纸条。附着的GM1检测抗体被附着的GM-TAG蛋白代替。GM-TAG与GM1分子的结合位置与“游离”的GM1捕获抗体的
不同。因此，对于GM1的捕获位置不存在竞争。这将增强GM-TAG，GM1-GM1捕获抗体三明治区
域的敏感性。其他方面，这两个工具完全相同，包括阳性对照以及颜色强度与GM1含量和肺
癌风险的相关性。
不同。因此，对于GM1的捕获位置不存在竞争。这将增强GM-TAG，GM1-GM1捕获抗体三明治区
域的敏感性。其他方面，这两个工具完全相同，包括阳性对照以及颜色强度与GM1含量和肺
癌风险的相关性。
[0051] 实验例
[0052] 目前该技术已经分别使用英国和中国的样本进行了测试。其中英国样本共67人，其中包括33名健康对照样本。剩下34人中包括肺癌与非肺癌病人。使用我们的方法，对肺
癌/非肺癌的诊断准确率整体达到了80％。中国样本共50人，其中包括15名健康对照样本。
使用我们的方法，通过与确认的标志物进行对比，对肺癌/非肺癌的诊断准确率同样达到了
80％的水平。值得注意的是，在这些样本中，对小细胞癌的诊断准确率达到了100％。
癌/非肺癌的诊断准确率整体达到了80％。中国样本共50人，其中包括15名健康对照样本。
使用我们的方法，通过与确认的标志物进行对比，对肺癌/非肺癌的诊断准确率同样达到了
80％的水平。值得注意的是，在这些样本中，对小细胞癌的诊断准确率达到了100％。
[0053] 案例1：一位45岁的男性病人告诉医生说他严重咳嗽，气短以及发烧。医生发现他平均一天吸20支香烟，并且要求他提供痰样，使用该发明的方法进行检测。医生可以对该病
人进行确诊。使用该技术，整个诊断周期小于24小时。
人进行确诊。使用该技术，整个诊断周期小于24小时。
[0054] 案例2：一位55岁的病人由于胸痛，咳嗽，吐痰以及吸烟史而住院。医生要求她提供了痰样，并使用我们的方法进行检测。该方法将病人痰样中的化合物与我们发现的标志物
相对照。根据对比结果，该检测认为病人患有2期肺癌。医生随后通过其他方法，包括胸部X
光透视等，确认该诊断结果并提供相应的治疗。
相对照。根据对比结果，该检测认为病人患有2期肺癌。医生随后通过其他方法，包括胸部X
光透视等，确认该诊断结果并提供相应的治疗。
[0055] 案例3：一位72岁男性，有吸烟史，由于未知原因的体重减少，持续的咳嗽，以及上楼梯时比较困难，前往社区医院检查。医生要求他提供了痰样。使用我们的方法进行检测，
通过与标志物的对比，发现该病人肺癌阳性。根据该检测结果，社区医生将该病人送往专门
医院进行进一步检查，确认了检查结果。
通过与标志物的对比，发现该病人肺癌阳性。根据该检测结果，社区医生将该病人送往专门
医院进行进一步检查，确认了检查结果。
[0056] 案例4：一位79岁女性，有吸烟史，由于持续的咳嗽，吐痰，以及气喘，咨询医生。社区医生要求她提供了痰样。该样本使用我们的方法与标志物进行对比。结果显示肺癌阴性。
社区医生为了确保不误诊，将该病人送往专门的医院呼吸科，证明是其他呼吸系统问题，并
进行了相应的治疗。
社区医生为了确保不误诊，将该病人送往专门的医院呼吸科，证明是其他呼吸系统问题，并
进行了相应的治疗。
[0057] 案例5：一位84岁的病人，曾经被诊断为肺癌。由于有复发的症状，需要进行诊断。但是传统诊断手段对具有这些严重症状的病人可能造成的伤害及由此带来的发病率及死
亡率，已经不能进行这些诊断。为了监控病情发展，该病人被要求提供痰样。使用我们的方
法，我们可以快速提供准确的检测结果，供医生参考，并制定相应的治疗方法。
亡率，已经不能进行这些诊断。为了监控病情发展，该病人被要求提供痰样。使用我们的方
法，我们可以快速提供准确的检测结果，供医生参考，并制定相应的治疗方法。
[0058] 案例6：一位77岁的女性病人，有吸烟史，未知原因的体重减轻，气喘，以及无法长距离步行前往社区医院诊断。社区医生采集了痰样，并使用我们的方法进行检测，发现该病
人肺癌阳性，因此将该病人提交专门医院进行针对性治疗。
人肺癌阳性，因此将该病人提交专门医院进行针对性治疗。
[0059] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其
依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征
进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技
术方案的范围。
依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征
进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技
术方案的范围。