一种检测噻呋酰胺残留量的方法及其应用

摘要

本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种检测噻呋酰胺残留量的方法，并进一步公开其用于检测粮谷中噻呋酰胺残留量的用途。本发明所述检测噻呋酰胺的方法，采用气相色谱‑火焰光度检测器进行检测，可有效检测粮谷样品中噻呋酰胺的残留量，且该方法操作简便、快速、分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、准确等优点。

权利要求

1.一种检测噻呋酰胺残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取：取待测样品粉碎，加水浸泡后，加入乙腈溶剂均质处理，随后加入氯化钠混匀，得到混合样液；

（2）净化：将上述混合样液离心，并取上层乙腈相置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中，离心并取上清液过膜，以氮气吹干后，加入体积比为1：1的石油醚-丙酮溶剂定容，得供试品液；

所述基质分散固相萃取剂包括乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸镁；且每1mL乙腈加入量相对应的乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸镁的添加量分别为50mg和140mg；

（3）定性或/和定量测定：采用气相色谱-火焰光度检测器对供试品液进行定性或/和定量测定，检测样品中噻呋酰胺的残留量；

所述气相色谱仪为Agilent 7890B，USA，色谱柱为DB-1701，柱长30m，内径250µm，膜厚

0.25µm；所述气相色谱-火焰光度检测器中，滤光片为S滤光片；

所述气相色谱条件为：

进样量：2µL；

进样口温度：220℃；

检测器温度：250℃；

氢气流速：60mL/min；

空气流速：60mL/min；

氮气流速：2mL/min；

柱温：程序升温；

所述程序升温过程为：80℃保持1min，随后以30℃/min升到170℃，再以10℃/min升到

220℃，并以20℃/min升到260℃，并保持10min；

所述定性测定是指在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的峰与噻呋酰胺标准品的峰的保留时间一致，且空白样品在保留时间处无峰，则可判断样品中存在噻呋酰胺；

所述定量测定是指采用GC-FPD检测器对样品液进行检测，测得样品液中噻呋酰胺色谱峰面积，代入二次曲线，得到样品液中噻呋酰胺含量，然后根据样品液所代表样品的质量计算得到待检测的粮谷样品中噻呋酰胺残留量。

2.根据权利要求1所述的检测噻呋酰胺残留量的方法，其特征在于，所述步骤（1）中：所述水的加入比例为：每1重量份样品加入2体积份的水；

所述乙腈的加入比例为：每1重量份样品加入2体积份的乙腈；

所述氯化钠的加入比例为：每1重量份样品加入1重量份的氯化钠；

所述重量份与体积份的关系为g/ml的关系。

3.根据权利要求1所述的检测噻呋酰胺残留量的方法，其特征在于，所述待测样品为残留噻呋酰胺的粮谷样品。

4.权利要求1-3任一项所述的检测噻呋酰胺残留量的方法在检测粮谷中噻呋酰胺残留量领域中的应用。

说明书

一种检测噻呋酰胺残留量的方法及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种检测噻呋酰胺残留量的方法，并进一步公开其用于检测粮谷中噻呋酰胺残留量的用途。

背景技术

[0002] 噻呋酰胺，又叫噻氟菌胺，英文通用名thifluzamide，商品名满穗，化学名称为N-[2,6-二溴-4-(三氟甲氧基)苯基]-2-甲基-4-三氟甲基-5-噻唑甲酰胺，纯品为白色粉状固体，是由美国孟山都公司研制的噻唑酰胺类杀菌剂，于2010年开始在全球销售。

[0003] 噻呋酰胺的作用机理是通过抑制病菌三羧酸循环中的琥珀酸脱氢酶，而导致菌体死亡，具有很强的内吸传导性和长持效性。噻呋酰胺对黑粉菌属、柄锈菌属、丝核菌属、腥黑粉菌属、伏革菌属、核腔菌属等致病真菌均有活性，尤其对担子菌纲真菌引起的病害如纹枯病、立枯病等有特效。而噻呋酰胺与咪鲜胺、烯肟菌胺、戊唑醇等药剂混配后增效显著，广泛应用于水稻、麦类、花生、甜菜、马铃薯、草坪等。

[0004]

[0005] 目前，噻呋酰胺在粮食作物的生产中被广泛使用，不可避免的在粮谷中产生残留，对人类的健康和生活质量构成了潜在的影响。目前CAC、美国、欧盟尚未制定关于噻呋酰胺在食品中的残留限量及标准，而中国、韩国、日本也仅制定了噻呋酰胺在糙米等少量粮谷作物上的残留限量及标准，尚不足以解决噻呋酰胺的食品安全问题。

[0006] 目前已知的噻呋酰胺的检测方法主要包括：高效液相色谱法-紫外检测器、高效液相色谱-质谱/质谱法，气相色谱-氢火焰离子化检测器、气相色谱-电子捕获检测器和气相色谱-质谱法。而上述方法中，质谱法设备价格昂贵，且对样品的前处理要求严格，导致应用并不普及，并且在仪器响应上存在基质效应，也会对样品的定量测定产生一定的影响；而电子捕获检测器虽然灵敏度较高，但却存在严重的杂质干扰，以及前处理净化较为复杂等问题。这些都使得对于噻呋酰胺残留量的检测受到限制。

[0007] 火焰光度检测器是一种灵敏度高、选择性高的气相色谱仪检测器，具有良好的抗干扰能力。因此，建立气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)分析粮谷中噻呋酰胺残留量的检测方法具有重要意义。

发明内容

[0008] 为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测噻呋酰胺残留量的方法。

[0009] 本发明所要解决的第二个问题是提供一种检测粮谷中噻呋酰胺残留量的方法。

[0010] 为解决上述技术问题，本发明所述的一种气相色谱-FPD检测器用于定性或/和定量检测噻呋酰胺残留量的用途。

[0011] 具体的，所述噻呋酰胺为检测粮谷中噻呋酰胺的残留量。

[0012] 本发明还公开了一种检测噻呋酰胺残留量的方法，包括如下步骤：

[0013] (1)提取：取待测样品粉碎，加水浸泡后，加入乙腈溶剂均质处理，随后加入氯化钠混匀，得到样品液；

[0014] (2)净化：将上述混合样液离心，并取上层乙腈相置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中，离心并取上清液过膜，以氮气吹干后，加入石油醚-丙酮溶剂定容，得供试品液；

[0015] (3)定性或/和定量测定：采用气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)对供试品液进行定性或/和定量测定，检测样品中噻呋酰胺的残留量。

[0016] 本发明中所述定性测定是指在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的峰与噻呋酰胺标准品的峰的保留时间一致，且空白样品在保留时间处无峰，则可判断样品中存在噻呋酰胺。

[0017] 本发明中所述定量测定是指采用GC-FPD检测器对样品液进行检测，测得样品液中噻呋酰胺色谱峰面积，代入二次曲线，得到样品液中噻呋酰胺含量，然后根据样品液所代表样品的质量计算得到待检测的粮谷样品中噻呋酰胺残留量。

[0018] 所述定量测定时，所述二次曲线是通过以下方法得到的：配制系列浓度的噻呋酰胺标准工作液，在与样品液的检测条件相同的条件下进行GC-FPD测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行校正分析，得到二次曲线。

[0019] 所述步骤(3)中，所述气相色谱仪为Agilent 7890B，USA，色谱柱为DB-1701，柱长30m，内径250μm，膜厚0.25μm；所述气相色谱-火焰光度检测器中，滤光片为S滤光片。

[0020] 所述气相色谱条件为：

[0021] 进样量：2μL；

[0022] 进样口温度：220℃；

[0023] 检测器温度：250℃；

[0024] 氢气流速：60mL/min；

[0025] 空气流速：60mL/min；

[0026] 氮气流速：2mL/min；

[0027] 柱温：程序升温。

[0028] 所述程序升温过程为：80℃保持1min，随后以30℃/min升到170℃，再以10℃/min升到220℃，并以20℃/min升到260℃，并保持10min。

[0029] 所述步骤(2)中，所述基质分散固相萃取剂包括乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸镁；且每1mL乙腈加入量相对应的乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸镁的添加量分别为50mg和140mg。

[0030] 所述步骤(2)中，所述石油醚和丙酮的体积比为1：1。

[0031] 所述步骤(1)中：

[0032] 所述水的加入比例为：每1重量份样品加入2体积份的水；

[0033] 所述乙腈的加入比例为：每1重量份样品加入2体积份的乙腈；

[0034] 所述氯化钠的加入比例为：每1重量份样品加入1重量份的氯化钠；

[0035] 所述重量份与体积份的关系为g/ml的关系。

[0036] 所述步骤(2)中，所述离心步骤为5000-8000r/min离心处理5min。

[0037] 本发明还公开了所述的检测噻呋酰胺残留量的方法在检测粮谷中噻呋酰胺残留量领域中的应用。

[0038] 本发明所述检测噻呋酰胺的方法，采用气相色谱-火焰光度检测器进行检测，可有效检测粮谷样品中噻呋酰胺的残留量，且该方法操作简便、快速、分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、准确等优点。

[0039] 本发明所述检测噻呋酰胺残留量的方法，利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速的样品前处理方法，将此前处理方法结合气相色谱-火焰光度检测器应用于粮谷中噻呋酰胺残留量检测，噻呋酰胺的平均回收率为84.1％-91.4％，相对标准偏差(RSD)为2.0％-6.3％，检出限为0.01mg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点，能满足我国、CAC、美国、欧盟等对噻呋酰胺在粮谷中安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。

附图说明

[0040] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

[0041] 图1为所述噻呋酰胺标准品(0.1μg/mL)的色谱图；

[0042] 图2为不含噻呋酰胺的大米空白样品的色谱图；

[0043] 图3为本发明噻呋酰胺二次曲线示意图。

具体实施方式

[0044] 本发明下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。

[0045] 本发明的实施例中使用的仪器与试剂包括：

[0046] Agilent 7890B气相色谱仪(Agilent，USA)；

[0047] VORTEX4基本型旋涡混合器(IKA，Germany)；

[0048] Heraeus Multifuge X1R离心机(ThermoFisher，USA)；

[0049] 乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)吸附剂(40-60μm)购于天津博纳艾杰尔科技有限公司；

[0050] 乙腈(HPLC级，Merck，Germany)、氯化钠、无水硫酸镁为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；

[0051] 噻呋酰胺(纯度98.6％)购自上海安谱科学仪器有限公司。

[0052] 实施例1：大米中噻呋酰胺残留量的检测

[0053] (1)样品前处理

[0054] 称取经粉碎机粉碎过20目筛且混匀的大米5g于50mL离心管中，加入10mL双蒸水浸泡20min，并加入10mL乙腈，涡旋处理1min，并加入5g氯化钠混匀，得到样品液；

[0055] 将所述样品液涡旋处理1min，并于8000r/min离心5min，取7mL上层乙腈相上清液至预先装有0.35gPSA和0.98g无水硫酸镁的50mL离心管中，于5000r/min离心处理5min；随后取4mL上清液过0.22μm滤膜于50mL鸡心瓶中，以氮气吹干，并加入2mL石油醚-丙酮溶剂(1：1，V/V)混匀，得到供试品液，随后移入进样瓶中待GC-FPD测定。

[0056] (2)标准工作溶液和空白样的配制

[0057] 标准工作溶液：准确称取100±0.1mg噻呋酰胺标准品于100mL容量瓶中，用石油醚-丙酮(1：1，V/V)溶解，定容得1000.0μg/mL标准储备液；移取1.0mL标准储备液置于10mL容量瓶中，用石油醚-丙酮(1：1，V/V)定容得到100.0μg/mL标准中间液；将标准中间液用石油醚-丙酮(1：1，V/V)逐步稀释配成浓度分别为0.01、0.1、0.5、1、5μg/mL的标准溶液；

[0058] 空白样品：所述空白样品是指不含噻呋酰胺的样品经上述步骤(1)处理后得到的样品液。

[0059] (3)气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)测定

[0060] 将上述配制的不同浓度梯度的标准工作液和空白样分别注入GC-FPD，以外标法进行噻呋酰胺含量的定量分析，即以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行校正分析，得到二次曲线；并在相同条件下将所得供试品液注入GC-FPD进行测定，测得样品液中噻呋酰胺的色谱峰面积，代入二次曲线，得到样品液中噻呋酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中噻呋酰胺残留量。

[0061] 具体色谱参数为：所述气相色谱仪为Agilent 7890B，色谱柱为DB-1701，柱长30m，内径250μm，膜厚0.25μm；所述气相色谱-火焰光度检测器中，滤光片为S滤光片。

[0062] 具体色谱条件为：柱温80℃保持1min--以30℃/min升到170℃--以10℃/min升到220℃--以20℃/min升到260℃，并保持10min；进样口温度220℃；检测器温度250℃；氢气流速60mL/min；空气流速60mL/min；氮气流速2mL/min；进样量2μL。

[0063] 所述噻呋酰胺标准品(0.1μg/mL)的色谱图见图1(6.724min，峰面积548.463)，不含噻呋酰胺的空白样品的色谱图见图2所示。

[0064] 以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行校正分析，得到二次曲线方程如表1所示，其曲线如图3所示。

[0065] 表1噻呋酰胺二次曲线方程

[0066]名称 保留时间(min) 二次曲线方程 相关系数
噻呋酰胺 6.7 Y＝5077x2+4774x+20 1.0

[0067] (4)加标回收率和重复性

[0068] 在不含噻呋酰胺的大米中分别加入0.01、3和5mg/kg3个浓度水平的噻呋酰胺标准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。

[0069] 将测定浓度与农药理论添加浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定5次，得其相对标准偏差，测定结果见表2。

[0070] 从表2中数据可以看出，在3个加标水平上，噻呋酰胺的平均回收率为85.8％-89.9％，平均相对标准偏差(RSD)为3.2％-6.3％，说明本发明方法的回收率较高，重复性好。

[0071] 表2噻呋酰胺在大米中的回收率和重复性(n＝5)

[0072]

[0073] (5)灵敏度

[0074] 以实际添加样品的最低检测浓度为检出限，本实施例噻呋酰胺在大米的检出限为0.01mg/kg。

[0075] 实施例2小麦中噻呋酰胺残留量的检测

[0076] (1)样品前处理

[0077] 称取经粉碎机粉碎过20目筛且混匀的小麦5g于50mL离心管中，加入10mL双蒸水浸泡20min，并加入10mL乙腈，涡旋处理1min后，加入5g氯化钠，得到样品液；

[0078] 将所得样品液涡旋处理1min，并于8000r/min离心处理5min，随后取7mL上层乙腈相上清液至预先装有0.35gPSA和0.98g无水硫酸镁的50mL离心管中，并于5000r/min离心处理5min，随后取4mL上清液过0.22μm滤膜并置于50mL鸡心瓶中，以氮气吹干，并加入2mL石油醚-丙酮(1：1，V/V)混匀，得到供试品液，并移入进样瓶中待GC-FPD测定。

[0079] (2)标准工作溶液的配制

[0080] 按照实施例1中方法将100μg/mL标准溶液用石油醚/丙酮(1：1，V/V)逐步稀释配成0.01、0.1、0.5、1、5μg/mL的标准工作溶液。

[0081] 按照实施例1中方法配制空白样品。

[0082] (3)气相色谱-火焰光度检测器测定

[0083] 操作步骤、色谱条件与上述实施例1中步骤(3)的测定方法一致。

[0084] (4)加标回收率和重复性

[0085] 在不含噻呋酰胺的小麦中加入0.01、3和5mg/kg3个浓度水平的噻呋酰胺标准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。

[0086] 将测定浓度与农药理论添加浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定5次，得其相对标准偏差，测定结果见表3。

[0087] 从表3中可以看出，在3个加标水平上，噻呋酰胺的平均回收率为84.1％-91.4％，相对标准偏差(RSD)为2.0％-5.1％，说明本发明方法的回收率较高，重复性好。

[0088] 表3小麦中噻呋酰胺的回收率和重复性(n＝5)

[0089]

[0090]

[0091] (5)灵敏度

[0092] 以实际添加样品的最低检测浓度为检出限，本实施例噻呋酰胺在小麦的检出限为0.01mg/kg。

[0093] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。