非达霉素在制备治疗寨卡病毒感染引起的相关疾病和/或症状的药物中的应用

摘要

本发明公开了非达霉素在制备治疗寨卡病毒感染引起的相关疾病和/或症状的药物中的应用，非达霉素作为已经被临床批准使用的抗艰难梭菌感染药物，安全性高，且非达霉素抑制寨卡病毒活性高，与寨卡病毒非结构蛋白NS5有较强的结合能力，有望成为新的有效的抗寨卡病毒感染药物。

权利要求

1.非达霉素在制备抑制寨卡病毒药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，非达霉素作为寨卡病毒非结构蛋白NS5抑制剂。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括药学上可接受的盐或载体。

说明书

非达霉素在制备治疗寨卡病毒感染引起的相关疾病和/或症

状的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，更具体地，涉及非达霉素在制备治疗寨卡病毒感染引起的相关疾病和/或症状的药物中的应用。

背景技术

[0002] 非达霉素（Fidaxomicin）（商品名为Dificid，亦称difimicin，lipiarmycin，tiacumicin B，曾用名：PAR-101，OPT-80）是一种细菌的DNA依赖性的RNA酶抑制剂。由Optimer公司研制用于初始治疗艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection，CDI）及预防CDI复发，2011年1月，美国食品和药物管理局（FDA）通过了非达霉素用于治疗小儿CDI的资格申请，2011年5月，FDA批准了非达霉素用于成人CDI治疗。

[0003] 非达霉素的结构如下： 。

[0004] 寨卡病毒属于黄病毒科黄病毒属，是RNA正链病毒，通过蚊虫传播，可通过性传播。感染者可出现全身性发热、出疹、关节炎和脑炎等症状。令人关注的，寨卡病毒会引起格林-巴利综合征、新生儿小头症。

[0005] ZIKV-NS5是一种RNA依赖性的RNA聚合酶，行使病毒基因组复制功能，对病毒复制起到至关重要作用，抑制该种酶活性可以达到杀灭寨卡病毒的效果。

[0006] 目前针对寨卡病毒，缺少临床批准的有效药物。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于根据现有技术中的不足，提供了非达霉素在制备抑制寨卡病毒药物中的应用。

[0008] 本发明通过以下技术方案实现上述技术目的：

[0009] 本发明提供了非达霉素在制备抑制寨卡病毒药物中的应用。

[0010] 进一步地，非达霉素是在制备治疗寨卡病毒感染引起的相关疾病和/或症状的药物中的应用。

[0011] 进一步地，非达霉素是作为寨卡病毒非结构蛋白NS5（DENV-NS5）抑制剂，发挥抑制寨卡病毒的作用。

[0012] 更进一步地，非达霉素作为RNA依赖性的RNA酶（DENV-NS5 RdRp）抑制剂。

[0013] 所述药物还包括药学上可接受的盐或载体。

[0014] 本发明在体内外验证了非达霉素对于寨卡病毒的抑制活性，结果显示，非达霉素在体内外均具备显著的抑制寨卡病毒活性效果，且高浓度的剂量没有明显毒副作用。

[0015] 与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：

[0016] 本发明提供了非达霉素作为抑制寨卡病毒上的新应用，非达霉素作为已经被临床批准使用的抗艰难梭菌感染药物，安全性高，且非达霉素在细胞水平上抑制寨卡病毒活性高，与DENV2-NS5蛋白有较强的结合能力，有望成为新的有效的抗寨卡病毒感染药物。

附图说明

[0017] 图1为非达霉素在A549细胞中抑制ZIKV NS3蛋白。

[0018] 图2为非达霉素抑制小鼠脾脏ZIKV的复制。

[0019] 图3为非达霉素50μM浓度下对ZIKV RdRp酶活性的抑制。

具体实施方式

[0020] 以下结合具体实施例和附图来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

[0021] 除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。

[0022] 实施例1：非达霉素在细胞水平上的抑制ZIKV活性

[0023] 病毒株：寨卡病毒ZIKV（Z16019）

[0024] 细胞系：A549

[0025] 检测方法：

[0026] 非达霉素抗病毒半数有效剂量（50% Effective Concentration，EC50）：DMSO，6、9、12、18、24μM非达霉素提前1h饱和细胞，病毒感染2h后，换含对应浓度药物的无病毒培养基维持48h；收集细胞上清，用空斑实验检测病毒感染后非达霉素不同剂量组相对溶剂组（DMSO）的空斑形成抑制率。

[0027] 抑制率（%） = （1-给药组病毒空斑形成数/溶剂对照组空斑形成数）100%，用EXCEL 2013的Forcast公式计算，当抑制率等于50%时，对应非达霉素的浓度，作为EC50。三次重复实验取平均值。

[0028] 非达霉素细胞毒半数细胞活性抑制剂量（50% Cytotoxcitive Concentration，CC50）：MTT法，非达霉素梯度剂量加入到A549细胞上清中，维持48h后加入MTT孵育4h，吸出培养基，加入DMSO检测490nm出吸光度值与DMSO溶剂对照组进行比较，计算抑制剂率（%）=（1-给药组490nm吸光度值/溶剂对照组490nm吸光度值）100%，用EXCEL 2013的Forcast公式计算，当抑制率等于50%时，对应非达霉素的浓度，作为CC50。三次重复实验取平均值。得出结果表1：

[0029] 表1：非达霉素在A549细胞中抑制ZIKV EC50及CC50

[0030]   antiviral EC50（μM） CC50（μM）  ZIKV（Z16019） A549
Fidaxomicin 18.91±1.62 70.84±4.72

[0031] 实施例2非达霉素在A549细胞系中对ZIKV-NS3蛋白的抑制活性

[0032] 病毒株：寨卡病毒ZIKV（Z16019）

[0033] 细胞系：A549

[0034] 检测方法：

[0035] DMSO，10、50、100μM非达霉素提前1h饱和细胞，病毒感染2h后，换含对应浓度药物的无病毒培养基维持48h；收集细胞沉淀，用蛋白质免疫印迹电泳检测不同处理下细胞内ZIKV-NS3蛋白的相对表达量，以GAPDH作为内参蛋白。如图1所示，非达霉素在10 50μM即可~有效抑制ZIKV NS3蛋白表达，进而阻止ZIKV的繁殖。

[0036] 实施例3非达霉素在小鼠体内的抗ZIKV活性

[0037] 小鼠品系：C57BL/6J WT

[0038] 模型：anti-IFNAR1抗体封闭法

[0039] 实验方法：5 6W小鼠提前一天腹腔注射抗体，当天腹腔感染ZIKV 1×105PFU病毒~4h后腹腔给药，设置Mock组、溶剂对照组、非达霉素剂量30、75、150mg/kg剂量组，连续给药7天，第8天处死小鼠解剖取脾脏，qRT-PCR方法检测脾脏中ZIKV病毒RNA拷贝数。结果如图2，在小鼠体内，75mg/kg、150mg/kg剂量下具有明显抗ZIKV效果（p＜0.01）。对应在150mg/kg剂量连续7天给药没有死亡，75mg/kg剂量没有明显毒副作用。

[0040] 实施例4非达霉素在50μM浓度下对ZIKV-NS5酶的抑制活性

[0041] 体外合成带有Cy5标记的20nt的RNA primer和无标记的28nt的RNA Template，在纯化出ZIKV-NS5蛋白作用下，可以进行RNA聚合反应，产生28nt带Cy5标记的RNA产物，用尿素胶进行电泳分离，化学发光并记录Cy5标记条带的位置。结果显示非达霉素在50μM浓度完全抑制不同浓度的ZIKV-NS5的RNA复制活性，也即抑制了寨卡病毒RNA依赖性RNA聚合酶活性。结果如图3。