一种提纯棘白菌素 B 母核的方法

摘要

本发明公开了一种提纯棘白菌素B母核的方法，包括以下步骤：1)转化液固液分离；2)浓缩，将步骤1)所得液体去除水分；3)结晶；4)晶体分离。本方法使用的结晶法，操作简便，节省时间，成本低，适合于各种规模的连续生产；结晶得到的产品纯度高；采用的非极性溶剂易于回收重新利用，节约成本。

权利要求

1.一种提纯棘白菌素B母核的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

1)转化液固液分离；

2)浓缩，将步骤1)所得液体去除水分；

3)结晶；

4)晶体分离；

具体包括如下步骤：

1)转化液固液分离：将含棘白菌素B母核的转化液用微滤法实现固液分离；固液分离后，通过水洗将附着于固体上的棘白菌素B母核清洗至水相中，水洗至液体电导率小于100μs；

2)浓缩：将步骤1)所得液体用纳滤法除去多余的水分，至可以结晶的浓度，所述浓缩后棘白菌素B母核的浓度达到30-35g/L；

3)结晶：在步骤2)所得浓缩液用乙酸调节pH值至3.5后加入丙酮，使棘白菌素B母核析出结晶；

4)晶体分离：将步骤3)的混悬体系用离心机离心，除去液相，得到棘白菌素B母核，通风橱中空气吹干得到干燥晶体。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤4)，使用三足式离心机和滤布在离心分离后除去附着的液体。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤4)，离心转速为3000rpm，滤布为120目，离心15min，分离后，使用无菌过滤空气吹干晶体。

说明书

一种提纯棘白菌素 B 母核的方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物合成领域，具体涉及一种提纯棘白菌素B母核的方法。

背景技术

[0002] 真菌感染是一种广泛存在的威胁人类健康的疾病，多为浅表性感染，发生于粘膜上皮组织。深度真菌感染则一般发生于免疫抑制人群，随着器官移植手术及免疫抑制剂的使用、开放式外科手术及抗生素的滥用、人获得性免疫缺陷病的传播等，其发病率和致死率都不断上升。抗真菌药物的研究也成为了药物研究的热点之一，获得了越来越多的关注。

[0003] 棘白菌素是一类天然的抗真菌物质，是20世纪70年代发现的一组天然产物，由环状多肽核心和脂肪酸侧链组成。其作用机制是通过抑制β-(1，3)-D-葡聚糖的合成，导致细胞壁的不稳定和真菌细胞内容物外流发挥其抗真菌作用。由于动物细胞没有细胞壁，棘白菌素类的作用机制决定了其不良发应率低，具有抗菌谱广、活性强的特点，是治疗真菌感染的重要选择药物。棘白菌素类抗生素主要有B，C和D三种类型，其中棘白菌素B(Echinocandin B，简称为ECB)是最主要的类型，但是由于酰基侧链的存在具有一定的溶血毒性。将ECB侧链替换后可以获得多种药物，包括卡帕芬净、米卡芬净、阿尼芬净等。

[0004] 阿尼芬净是ECB经犹他游动菌的酰化酶脱去侧链得到棘白菌素B母核(Echinocandin B Nucleus，简称为ECBN)，然后添加侧链后得到。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种提纯棘白菌素B母核的方法，其工艺简单、便于操作、产品纯度高，特别适合于连续化的大规模工业生产，具有良好的商业应用价值。

[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：

[0007] 一种提纯棘白菌素B母核的方法，具体包括如下步骤：

[0008] 1)转化液固液分离；

[0009] 2)浓缩，将步骤1)所得液体去除水分；

[0010] 3)结晶；

[0011] 4)晶体分离。

[0012] 优选地，包括如下步骤：

[0013] 1)转化液分离：将含棘白菌素B母核的转化液用微滤法实现固液分离；固液分离后，通过水洗将附着于固体上的棘白菌素B母核清洗至水相中；

[0014] 2)浓缩：将步骤1)所得液体用纳滤法除去多余的水分，至可以结晶的浓度；

[0015] 3)结晶：在步骤2)所得浓缩液调节pH值后加入非极性的有机溶剂，使棘白菌素B母核析出结晶；

[0016] 4)晶体分离：将步骤3)的混悬体系用离心机离心，除去液相，得到棘白菌素B母核，通风橱中空气吹干得到干燥晶体。

[0017] 优选地，所述步骤1)，水洗至液体电导率小于100μs。

[0018] 优选地，所述步骤2)，浓缩除去多余水分，使棘白菌素B母核的浓度达到≥20g/L。

[0019] 优选地，所述步骤2)，浓缩后棘白菌素B母核的浓度应达到30-35g/L。

[0020] 优选地，所述步骤3)，结晶所用有机溶剂为丙酮、四氢呋喃、乙腈、正丁醇、二氯甲烷中的一种或几种。

[0021] 优选地，所述步骤3)，结晶调整浓缩液pH值所用酸为乙酸、盐酸或者磷酸。

[0022] 优选地，所述步骤3)，结晶调节pH值至3.5。

[0023] 优选地，所述步骤3)，结晶所用有机溶剂为丙酮，调pH值所用酸为乙酸。

[0024] 优选地，所述步骤4)，离心使用三足式离心机和滤布在分离后除去附着的液体。

[0025] 优选地，所述步骤4)，离心转速为3000rpm，滤布为120目，离心15min，分离后，使用无菌过滤空气吹干晶体。

[0026] 本发明的方法操作简便，节省时间，成本低，适合于各种规模的连续生产；结晶得到的产品纯度高；采用的非极性溶剂易于回收重新利用，节约成本。

具体实施方式

[0027] 现通过以下实施例来进一步描述本发明的有益效果，实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围，同时本领域普通技术人员根据本发明所做的显而易见的改变和修饰也包含在本发明范围之内。

[0028] 实施例1

[0029] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度20g/L。

[0030] 用盐酸调节pH值至3.5，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0031] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为98.3％，收率为72％。

[0032] 实施例2

[0033] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度35g/L。

[0034] 用盐酸调节pH值至4.0，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0035] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为98.2％，收率为82％。

[0036] 实施例3

[0037] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体260L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0038] 用盐酸调节pH值至3.0，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0039] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为97.9％，收率为75％。

[0040] 实施例4

[0041] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0042] 用盐酸调节pH值至4.0，加入四氢呋喃使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0043] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为97.9％，收率为77％。

[0044] 实施例5

[0045] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0046] 用盐酸调节pH值至4.0，加入正丁醇使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气 吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0047] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为97.8％，收率为62％。

[0048] 实施例6

[0049] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度20g/L。

[0050] 用磷酸调节pH值至3.0，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0051] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为97.8％，收率为81％。

[0052] 实施例7

[0053] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0054] 用醋酸调节pH值至4.0，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0055] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为98.6％，收率为88％。

[0056] 实施例8

[0057] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0058] 用醋酸调节pH值至3.0，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0059] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为98.6％，收率为90％。

[0060] 实施例9

[0061] 取棘白菌素B母核转化液100L，微滤获得液相，水洗固相至流出液电导率小于100μs，得到液体250L。微滤浓缩至棘白菌素B母核浓度30g/L。

[0062] 用醋酸调节pH值至3.5，加入丙酮使棘白菌素B母核结晶析出。用120目滤布3000rpm离心15min。从滤布上收集棘白菌素B母核的晶体，放入通风橱中，用无菌空气吹过夜，得到干燥的固体粉末。

[0063] 经高压液相检测，棘白菌素B母核的纯度为99.6％，收率为93％。